本實用新型涉及循環(huán)腫瘤細胞全自動檢測設(shè)備領(lǐng)域，尤其涉及一種全自動循環(huán)腫瘤細胞陽性富集裝置。

背景技術(shù)：

循環(huán)腫瘤細胞(Circulating Tumor Cell，CTC)是存在于外周血中的各類腫瘤細胞的統(tǒng)稱，其可自發(fā)或通過診療操作從實體腫瘤病灶(原發(fā)灶或轉(zhuǎn)移灶)脫落，進入體循環(huán)系統(tǒng)(如外周血)。大部分CTC進入外周血后會發(fā)生凋亡或被吞噬，少數(shù)能夠逃逸并錨著病灶以外的組織或器官上，進而發(fā)展成為轉(zhuǎn)移灶，增加惡性腫瘤患者死亡風險。因此，CTC檢測可有效地應(yīng)用于體外早期診斷、預(yù)后評價、個體化治療(包括快速臨床化療藥物篩選和耐藥性的檢測)、腫瘤復(fù)發(fā)監(jiān)測及新的腫瘤藥物開發(fā)等。

常規(guī)的CTC檢測分為兩個步驟，即CTC富集(或捕獲)步驟和CTC檢測分析步驟。常用的CTC捕獲技術(shù)有流式細胞技術(shù)、微流控芯片技術(shù)和免疫磁珠技術(shù)。其中，免疫磁珠技術(shù)適合在大體積上樣條件下對少量的特殊細胞進行分離，對于CTC檢測應(yīng)用尤其有利，其操作步驟相對簡單，易于實現(xiàn)自動化。

目前，市場上已出現(xiàn)的CTC富集和檢測的產(chǎn)品或服務(wù)，大多需要手動操作；已有的自動化設(shè)備多為進口設(shè)備、且控制機構(gòu)多、系統(tǒng)運轉(zhuǎn)效率(耗時長)和通量相對較低。例如，強生公司的CellSearch系統(tǒng)基于免疫磁珠分選原理，只實現(xiàn)了檢測操作的部分自動化，其中的細胞富集(或捕獲)操作需要手工進行，自動化程度低，導(dǎo)致整個CTC檢測程序的效率低下。具體而言，強生公司的CellSearch系統(tǒng)中具有以下不足：(1)試劑管路混用，需要清洗管路，有交叉污染風險；(2)在富集過程中，需要反復(fù)的轉(zhuǎn)移CTC；(3)孵化過程是靜態(tài)的；(4)需要對生物樣本進行預(yù)處理；(5)通量低。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本實用新型旨在提供一種全自動循環(huán)腫瘤細胞陽性富集裝置，包括磁富集單元、離心單元、轉(zhuǎn)移單元、染色單元和儲料單元；所述磁富集單元用于富集連有磁性顆粒的循環(huán)腫瘤細胞，所述離心單元用于液體的離心，所述轉(zhuǎn)移單元用于樣本、試劑和材料的轉(zhuǎn)移，所述染色單元用于對目標細胞染色，所述儲料單元用于試劑和材料的儲存。

進一步，所述離心單元和所述染色單元分別被設(shè)置于所述裝置操作面上的兩側(cè)，所述轉(zhuǎn)移單元被設(shè)置于所述裝置操作面的上方，其可在離心單元、染色單元和儲料單元之間運送樣本、試劑和材料，所述磁富集單元和所述儲料單元設(shè)置于裝置操作面上合適的位置，以使該裝置的結(jié)構(gòu)盡可能緊湊。

優(yōu)選地，本實用新型處理的樣本為血液樣本。

進一步，所述磁富集單元包括多個磁棒或磁塊，可以為電磁體或永磁體；所述磁棒用于在樣本液體中直接吸附并富集連有磁性顆粒的CTC，所述磁塊被設(shè)置于樣本液體外，并在樣本液體內(nèi)產(chǎn)生磁場，使連有磁性顆粒的CTC富集于一處。優(yōu)選地，本實用新型采用磁性免疫捕獲試劑，如磁珠偶聯(lián)抗體，來特異性識別和結(jié)合循環(huán)腫瘤細胞表面抗原從而實現(xiàn)CTC的捕獲和富集。

在本實用新型的一種優(yōu)選實施方式中，所述磁富集單元包括多個帶有無磁外套的磁棒，每個磁棒對應(yīng)一個樣本，當磁棒插入樣本液體中富集磁性顆粒時，該無磁外套套于所述磁棒的外部，磁性顆粒會被富集在所述無磁外套的表面，當富集的磁性顆粒需要被釋放時只需將磁棒從外套中抽出即可實現(xiàn)去磁的效果。優(yōu)選地，所述磁棒只有底面具有磁性，這樣可使被捕獲的CTC富集在磁棒的底面。優(yōu)選地，所述無磁外套的材質(zhì)為塑料。

進一步，所述離心單元采用的離心機為步進式離心機，可根據(jù)需要任意移動樣本的通道位置；進一步，所述步進式移動樣本通道位置即：在操作者上機時在離心機上放置離心管或轉(zhuǎn)移單元添加和吸取液體時，離心機可以緩慢順時針或逆時針旋轉(zhuǎn)移動，將已操作通道移走，并將相鄰?fù)ǖ擂D(zhuǎn)至操作位。采用所述步進式移動樣本通道位置，便于上機放置樣本管，同時可以便于配合轉(zhuǎn)移單元工作，使轉(zhuǎn)移單元與樣本通道通過最短路徑配合，能夠節(jié)約轉(zhuǎn)移單元反復(fù)移動位置所消耗的時間，加快整個流程的進度。

優(yōu)選地，所述離心單元能夠?qū)崟r記憶和記錄每個樣本通道的位置，便于將樣本初始編號和提取物/分析物樣本編號的對應(yīng)，并且每一個生物樣本在離心過程中的任意位置是有路徑記憶以及動態(tài)與靜態(tài)位置可設(shè)定和控制的。

更優(yōu)選地，所述離心機為數(shù)字化離心機，在離心過程中，操作者可根據(jù)樣本的離心要求設(shè)定加速與減速曲線，采用的減速曲線是智能可控的有剎車減速，在不擾動樣本分層的基礎(chǔ)上，能夠快速剎車，節(jié)省了時間，而現(xiàn)有的離心機減速，為了避免樣本的分層擾動，都是采取無剎車減速，減速時間非常長。

進一步，本實用新型所述離心單元還具有混勻機構(gòu)，所述混勻機構(gòu)被設(shè)置在離心機的每個樣本通道底部，該機構(gòu)可帶動離心試管進行自旋和/或搖晃運動。

進一步優(yōu)選地，所述離心單元還包括視覺識別系統(tǒng)，用于對離心液體分層的成像、各層吸取液體量和高度的計算。

優(yōu)選地，所述視覺識別系統(tǒng)的計算方法分為兩部分，均是根據(jù)視覺識別照片(上下層以光電傳感器對顏色加以區(qū)分)來計算的：

1)計算需抽掉的上層液體高度值：根據(jù)樣本所在高度減去照片中上層與下層相接處的高度的差，加上調(diào)整的高度(防止抽液過多對下層造成擾動)；

2)計算需添加的液體高度值：用設(shè)定的最終高度減去現(xiàn)有液面的高度，必要時還要減去添加目標液體之前所需添加的小劑量試劑的高度。

進一步，所述轉(zhuǎn)移單元由一個或多個機械臂組成，所述機械臂能夠進行上下、左右和/或轉(zhuǎn)軸運動；優(yōu)選地，所述機械臂可兼容hamilton的移動系統(tǒng)；在本實用新型的一種優(yōu)選實施方式中，所述多個機械臂分別用于轉(zhuǎn)移樣本、廢棄液、試劑和固體材料；在本實用新型的另一種優(yōu)選實施例中，所述機械臂具有“一臂多用”的特點，可用于移取液體或固體材料。

在本實用新型的一種優(yōu)選實施方式中，所述全自動循環(huán)腫瘤細胞陽性富集裝置還包括攪拌棒。優(yōu)選地，所述磁棒和/或所述攪拌棒通過電磁場被所述機械臂抓取而實現(xiàn)轉(zhuǎn)移。

進一步優(yōu)選地，所述攪拌棒為螺旋槳狀。

優(yōu)選地，所述機械臂能帶動所述攪拌棒或所述磁棒進行自轉(zhuǎn)運動，從而實現(xiàn)攪拌和混勻的動作。

進一步，所述染色單元包括染色平臺和清洗平臺，所述染色平臺提供免疫熒光染色試劑，用于為CTC染色，所述清洗平臺提供清洗液，用于清洗雜質(zhì)和多余的染色劑。

優(yōu)選地，當所述磁富集單元為磁棒時，所述染色單元包括染色平臺、清洗平臺和磁棒支撐架，所述染色平臺和所述清洗平臺為裝有染色液和清洗液的試管架，染色或清洗時只需將磁棒富集部位插入試管中即可。

進一步，所述儲料單元包括試劑儲料倉、耗材儲料倉、磁棒儲料倉和廢棄物儲料倉，更進一步還可包括攪拌棒儲料倉。

優(yōu)選地，所述試劑包括循環(huán)腫瘤細胞免疫捕獲試劑、免疫熒光染色試劑、細胞固定試劑、緩沖液；其中，所述循環(huán)腫瘤細胞免疫捕獲試劑含有可特異性識別和結(jié)合循環(huán)腫瘤細胞表面抗原的磁珠偶聯(lián)抗體；所述細胞染色劑優(yōu)選為可特異性識別和結(jié)合循環(huán)腫瘤細胞表面抗原的熒光抗體。進一步，所述試劑還可以包括核酸染色劑、捕獲增強試劑、通透試劑中的一種或多種。

優(yōu)選地，所述耗材包括一次性移液槍頭。

在本實用新型的一種優(yōu)選實施方式中，所述染色單元由可以上下左右移動的試管架和磁棒支撐架組成，該試管架中放置有染色試管和清洗試管，當磁棒上富集的CTC需要被清洗時，只需將清洗試管移動至對應(yīng)的磁棒下方并使磁棒浸入清洗液中即可，當磁棒上富集的CTC需要被染色時，只需將染色試管移動至對應(yīng)的磁棒下方并使磁棒浸入染色液中即可?？梢苿拥牟粌H可以是試管架，在另一種實施方式中也可以是磁棒支撐架可移動。

進一步，本實用新型所述全自動循環(huán)腫瘤細胞陽性富集裝置還包括收集分析單元，磁性富集獲得的循環(huán)腫瘤細胞被收集于此單元內(nèi)，并可被進一步進行計數(shù)或分析。

優(yōu)選地，所述收集分析單元也具有吸附磁場，當磁棒攜帶富集的CTC置入收集分析單元內(nèi)后，將磁棒從無磁外套中抽出，同時開啟收集分析單元的吸附磁場，這樣連接有磁性顆粒的CTC更易被收集分析單元的磁場發(fā)生面所吸附，并平鋪在該面上，有利于后續(xù)的細胞計數(shù)和分析工作。

更進一步，本實用新型所述離心單元還包括外磁系統(tǒng)，所述外磁系統(tǒng)包括永磁體或電磁體，用于對離心機內(nèi)離心試管中的樣本液體產(chǎn)生外加磁場，當免疫捕獲試劑被加入樣本中時，需要孵育一段時間才能促使免疫捕獲試劑與CTC完全結(jié)合，在孵育的過程中可通過外加磁場來強化免疫磁捕獲試劑對CTC的捕獲，如通過改變外加磁場的方向來控制免疫磁捕獲試劑發(fā)生定向的運動，從而從各個方向上與樣本中的CTC更全面地結(jié)合。

在本實用新型的一種優(yōu)選實施方式中，所述外磁系統(tǒng)是設(shè)置在離心試管周圍不同方向的多塊磁體，這些磁體可產(chǎn)生周期性變化的磁場來強化捕獲效果。在本實用新型的另一種優(yōu)選實施方式中，所述外磁系統(tǒng)是設(shè)置在離心機圓周上特定位置處的磁體，通過低速旋轉(zhuǎn)離心機使離心試管與所述外磁系統(tǒng)之間的距離發(fā)生改變，從而對離心試管產(chǎn)生周期性變化的磁場，在磁場的作用下試管內(nèi)的免疫捕獲試劑會進行各個方向的定向運動，從而使免疫捕獲試劑與CTC更好地結(jié)合。

此外，本實用新型還提供一種全自動循環(huán)腫瘤細胞陽性富集方法，包括以下步驟：

1)在離心單元中，將全血樣本離心后，進行視覺識別與計算；棄去上清液，加入緩沖液，混勻，加入免疫捕獲試劑，在外磁系統(tǒng)作用下孵育，然后用磁棒捕獲循環(huán)腫瘤細胞；

2)在染色單元中，進行磁棒轉(zhuǎn)移和清洗，加入免疫熒光染色試劑進行染色孵育，再進行清洗；

3)在收集分析單元中，進行磁棒轉(zhuǎn)移，退磁，進行循環(huán)腫瘤細胞的磁轉(zhuǎn)移，并進行計數(shù)或分析。

優(yōu)選地，上述操作均由機械臂完成。

本實用新型具有以下有益效果：

(1)本實用新型的裝置所采用的捕獲原理與CellSearch系統(tǒng)相似(免疫磁捕獲和免疫熒光染色)，但與已上市的循環(huán)腫瘤細胞陽性富集系統(tǒng)(例如，CellSearch)相比，其主要特點是兼容了樣本前處理過程(即對血樣品進行稀釋，而CellSearch系統(tǒng)需要在上機前人工配合臺式離心機對樣本進行稀釋處理)。

(2)本實用新型的離心單元采用步進式移動樣本通道位置，便于配合機械臂工作，使機械臂與樣本通道通過最短路徑配合，能夠節(jié)約機械臂反復(fù)移動所需時間，加快整個流程的進度；所述離心平臺所用離心機的減速曲線采用智能可控的有剎車減速，與傳統(tǒng)的離心機自由停車相比，即避免了離心停車對液體的擾動，又節(jié)約了離心時間。

(3)與CellSearch相比，本實用新型所述裝置或方法的優(yōu)點有：a.每個通道的樣本和試劑操作是獨立的，樣本和試劑沒有交叉污染，而CellSearch是交叉的需要清洗管道；b.CellSearch在富集過程中，需要反復(fù)的轉(zhuǎn)移CTC，本實用新型在富集過程中是一次捕獲，并不需要轉(zhuǎn)移；c.孵化過程，CellSearch是靜態(tài)的，本實用新型是動態(tài)的，有攪拌、混勻和外磁強化；d.CellSearch需要對生物樣本進行預(yù)處理，本實用新型是全自動的；e.本實用新型的通道更多，更高效。

附圖說明

圖1是本實用新型的一個較佳實施例的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2是本實用新型中機械臂的另一個較佳實施例的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖3是本實用新型中磁棒的一個較佳實施例的結(jié)構(gòu)示意圖。

具體實施方式

下面結(jié)合附圖與實施例對本實用新型作進一步詳細描述，但本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)以下實施例中具體方案的替換、轉(zhuǎn)用或組合均包含于本實用新型的保護范圍之內(nèi)。采用與本實用新型裝置類似設(shè)計流程樣本處理的液體工作站形式，或者采用與本實用新型方法類似的富集方法，均在本實用新型的構(gòu)思范圍之內(nèi)。

實施例1

本實施例提供了一種全自動循環(huán)腫瘤細胞陽性富集裝置(圖1)，包括磁富集單元、離心單元、轉(zhuǎn)移單元、染色單元和儲料單元；其中磁富集單元由12支磁棒1組成；離心單元的主要部件為可同時處理12個樣本的數(shù)字化離心機2；轉(zhuǎn)移單元由具有橫向(X)和縱向(Y)軌道的兩個轉(zhuǎn)移機械頭3-1、3-2組成，該兩個轉(zhuǎn)移機械頭還可在垂直操作面的方向上(Z，圖中未示出)移動；染色單元包括具有滑動軌道的試管架4和可垂直操作面移動的磁棒支撐架5，在該試管架中按需設(shè)置裝有染色試劑或清洗液的試管；儲料單元包括試劑儲料倉6、移液槍頭儲料倉7、廢液儲料倉8、磁棒儲料倉9和攪拌棒儲料倉10。此外，本實施例還包括收集分析單元，該收集分析單元包括可對12個樣本進行收集分析的讀數(shù)盒11，在該讀數(shù)盒的上方也設(shè)置有磁棒支撐架12。

本實施例將離心單元和染色單元分別設(shè)置在操作平面的左右兩側(cè)，在其中間設(shè)置儲料單元，轉(zhuǎn)移單元被設(shè)置在操作面的上方，其移動范圍可覆蓋整個操作面，這種設(shè)計可優(yōu)化物料的轉(zhuǎn)移距離，縮短運行時間。

進一步，離心平臺的離心機2為步進式離心機，可根據(jù)需要任意移動樣本的通道位置，在一種優(yōu)選的實施方式中，如圖1所示的a和b位為機械臂的操作位，每次需要移液操作時，將樣本離心管轉(zhuǎn)至a和b位，兩個轉(zhuǎn)移機械頭3-1、3-2同時移動至此位進行添加或吸取液體，固定操作位后，由于機械臂的移動路徑被縮短，且機械臂和離心機同時參與位移，使總的運行流程縮短。此外該數(shù)字化離心機可根據(jù)樣本的離心要求設(shè)定加速與減速曲線，采用的減速曲線是智能可控的有剎車減速，在不擾動樣本分層的基礎(chǔ)上，能夠快速剎車，可進一步節(jié)省時間。該離心機還能夠?qū)崟r記憶和記錄每個樣本通道的位置，便于將樣本初始編號和提取物/分析物樣本編號的對應(yīng)，并且每一個生物樣本在離心過程中的任意位置是有路徑記憶，以及動態(tài)與靜態(tài)位置可設(shè)定和控制。

所述轉(zhuǎn)移單元的機械臂連有兩個轉(zhuǎn)移機械頭3-1和3-2，可以插取和釋放移液槍頭，吸取和吹出液體，此外還可以通過電磁場抓取、轉(zhuǎn)移和旋轉(zhuǎn)磁棒和攪拌棒，所述磁棒和攪拌棒的上端都設(shè)置有鐵磁性物質(zhì)，可被轉(zhuǎn)移機械頭抓取。

在本實用新型的另一種實施方式中，機械臂除了可以設(shè)置直線軌道外，還可以設(shè)置成繞軸旋轉(zhuǎn)的形式，如圖2所示，該離心單元有兩個旋轉(zhuǎn)式機械臂3-3和3-4，它們從左側(cè)的儲料倉13中移取槍頭、試劑等，為離心機2提供液體轉(zhuǎn)移。

本實施例中的磁棒結(jié)構(gòu)如圖3所示，除了上端帶有鐵磁性物質(zhì)11以外，其底面14可釋放磁場，該磁場是由磁棒內(nèi)部的磁芯12釋放而出的，其外部還具有無磁外套13，工作時磁性顆粒會被富集在該無磁外套13的底面，富集完成后只需將磁棒從外套中抽出即可釋放磁性顆粒，此外其上部還設(shè)置有卡位部件15，用于將磁棒懸掛在磁棒支撐架上。

本實施例的離心單元還包括視覺識別系統(tǒng)，能夠?qū)﹄x心液體分層的成像、各層吸取液體量和高度進行計算。

本實施例中的染色單元包括染色平臺、清洗平臺和磁棒支撐架5，所述染色平臺提供免疫熒光染色試劑，所述清洗平臺提供清洗液，它們被合并設(shè)置在同一可沿軌道滑動的試管架4上，磁棒支撐架可垂直操作面上下移動，因此要染色時只需將染色試劑移至磁棒下方，將磁棒支撐架下移使磁棒浸入染色試劑內(nèi)即可，需要清洗時則將清洗試劑移至磁棒下方，即可將磁棒浸入清洗試劑進行清洗。

本實施例還包括收集分析單元，由讀數(shù)盒11和磁棒支撐架12組成，通過將富集后的磁棒插入對應(yīng)的讀數(shù)盒內(nèi)，抽出磁棒僅保留無磁外套，同時開啟讀數(shù)盒底面的吸附磁場，連接有磁性顆粒的CTC會被底面所吸附，并平鋪在該面上，為后續(xù)的細胞計數(shù)和分析提供有利的條件。

進一步，本實施例所述離心單元還包括外磁系統(tǒng)(圖中未示出)，所述外磁系統(tǒng)包括永磁體或電磁體，用于對離心機內(nèi)離心試管中的樣本液體產(chǎn)生外加磁場，當免疫捕獲試劑被加入樣本中時，需要孵育一段時間才能促使免疫捕獲試劑與CTC完全結(jié)合，在孵育的過程中可通過外加磁場來強化免疫磁捕獲試劑對CTC的捕獲，如通過改變外加磁場的方向來控制免疫磁捕獲試劑發(fā)生定向的運動，從而從各個方向上與樣本中的CTC更全面地結(jié)合。

在本實用新型的一種優(yōu)選實施方式中，所述外磁系統(tǒng)是設(shè)置在離心試管周圍不同方向的多塊磁體，這些磁體可產(chǎn)生周期性變化的磁場來強化捕獲效果。在本實用新型的另一種優(yōu)選實施方式中，所述外磁系統(tǒng)是設(shè)置在離心機圓周上特定位置處的磁體，通過低速旋轉(zhuǎn)離心機使離心試管與所述外磁系統(tǒng)之間的距離發(fā)生改變，從而對離心試管產(chǎn)生周期性變化的磁場，在磁場的作用下試管內(nèi)的免疫捕獲試劑會進行各個方向的定向運動，從而使免疫捕獲試劑與CTC更好地結(jié)合。

本實施例中的全自動循環(huán)腫瘤細胞陽性富集裝置可同時處理12個樣本，且兼容了樣本前處理過程，運行時間短(滿載全流程運行耗時約為2小時40分)，實現(xiàn)了樣本的高效處理。

實施例2

本實用新型所述的視覺識別系統(tǒng)的一種優(yōu)選實施例的具體計算方法包括兩部分，分別是吸取液體高度的計算和需要添加液體高度的計算，都是根據(jù)視覺識別系統(tǒng)所拍攝的照片進行計算。

計算需抽掉的上層液體高度值：根據(jù)樣本所在高度減去照片中上層與下層相接處的高度的差，加上調(diào)整的高度(防止抽液過多對下層造成擾動)；

計算需添加的液體高度值：用設(shè)定的最終高度減去現(xiàn)有液面的高度，必要時還要減去添加目標液體之前所需添加的小劑量試劑的高度。

例如，默認全血樣本體積為10mL，離心后樣本分為上層血漿和下層血細胞，吸取上層血漿后，需添加0.2mL的免疫捕獲試劑和捕獲增強試劑，然后添加稀釋緩沖液至5mL，其中調(diào)整的高度為0.8mL液體對應(yīng)的高度，則其計算的總步驟為兩步：

1)計算需抽掉的上層血漿的高度值：10mL樣本所在高度減去照片中上層血漿與下層血細胞相接處的高度的差，加上7mm的高度(0.8mL液體對應(yīng)的高度)；

2)計算需添加的稀釋緩沖液高度值：所需稀釋緩沖液為5mL所在高度值減去抽取血漿后的液面高度與需在稀釋緩沖液之前添加的0.2mL的小劑量試劑之和；

例：10mL樣本中共有7mL的上層血漿，則抽取值為6.2mL(7-0.8)，需添加的稀釋緩沖液為1mL(5-3.8-0.2)。

實施例3

一種全自動循環(huán)腫瘤細胞的陽性富集方法，主要包括以下步驟：

1)在離心平臺，將全血樣本離心后，進行視覺識別與計算；棄去上清液，加入緩沖液，混勻，加入免疫捕獲試劑，在外磁系統(tǒng)作用下孵育，然后用磁棒捕獲循環(huán)腫瘤細胞；

2)在染色平臺，進行磁棒轉(zhuǎn)移和清洗，加入免疫熒光染色試劑進行染色孵育，再進行清洗；

3)在收集分析單元中，進行磁棒轉(zhuǎn)移，退磁，進行循環(huán)腫瘤細胞的磁轉(zhuǎn)移，以便后續(xù)進一步對其進行計數(shù)和分析。。

上述操作均由機械臂完成。

具體地，所述陽性富集方法的自動化操作步驟可參見表1。

表1 CTC陽性富集自動化操作步驟

以上詳細描述了本實用新型的較佳具體實施例。應(yīng)當理解，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員無需創(chuàng)造性勞動就可以根據(jù)本實用新型的構(gòu)思作出諸多修改和變化。因此，凡本技術(shù)領(lǐng)域中技術(shù)人員依本實用新型的構(gòu)思在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)上通過邏輯分析、推理或者有限的實驗可以得到的技術(shù)方案，皆應(yīng)在由權(quán)利要求書所確定的保護范圍內(nèi)。