本發(fā)明屬于生物傳感器技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及癌胚抗原(cea)濃度的檢測(cè)領(lǐng)域，尤其涉及一種cea濃度檢測(cè)探針及其制備方法與應(yīng)用、一種cea濃度檢測(cè)生物傳感器及其制備方法。

背景技術(shù)：

癌胚抗原(cea)是一個(gè)廣譜性腫瘤標(biāo)志物，它能向人們反映出多種腫瘤的存在，對(duì)大腸癌、乳腺癌和肺癌的療效判斷、病情發(fā)展、監(jiān)測(cè)和預(yù)后估計(jì)是一個(gè)較好的腫瘤標(biāo)志物。97％的健康成人血清cea濃度在2.5μg/l以下，45％～80％的原發(fā)性結(jié)腸癌患者血清cea濃度會(huì)升高。除原發(fā)性結(jié)腸癌以外，50％～70％的胰腺癌、膽管癌、胃癌、食管癌、腺癌、肺癌、乳腺癌和泌尿系統(tǒng)腫瘤患者的血清cea濃度也會(huì)升高。因此，人體血清中cea濃度指標(biāo)可被用于間接表征和預(yù)示某種癌癥疾病，通過(guò)獲取人體血清中cea濃度指標(biāo)可與其它參數(shù)指標(biāo)結(jié)合間接用于針對(duì)某些癌癥疾病，不一定與診斷結(jié)果構(gòu)成一一對(duì)應(yīng)的關(guān)系。

傳統(tǒng)的測(cè)定cea的方法有熒光免疫分析、放射免疫法，酶聯(lián)免疫檢測(cè)法等。這些檢測(cè)方法雖然在一定程度上靈敏有效，但對(duì)技術(shù)要求高，耗時(shí)耗力，且對(duì)儀器有一定的要求，各自具有一定的局限性。相比以上方法，電化學(xué)檢測(cè)法具有儀器簡(jiǎn)單、操作方便以及靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。但是，現(xiàn)有的電化學(xué)檢測(cè)法主要采用單重信號(hào)檢測(cè)方式，仍存在靈敏度檢測(cè)較低、檢測(cè)限較高，檢測(cè)范圍窄等問(wèn)題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)采用傳統(tǒng)方法檢測(cè)cea濃度存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種選擇性好、靈敏度高、檢測(cè)限低、檢測(cè)范圍寬的cea濃度的檢測(cè)電極的制備方法及該cea濃度檢測(cè)電極在檢測(cè)cea濃度時(shí)的應(yīng)用。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提出的技術(shù)方案為：

一種cea濃度檢測(cè)探針，所述cea濃度檢測(cè)探針包括cea適配體與羥基磷灰石納米粒子，所述cea適配體與羥基磷灰石納米粒子通過(guò)交聯(lián)劑復(fù)合在一起，所述cea適配體含有5’-ataccagcttattcaatt-3’的核苷酸序列，且5’端修飾了5’-nh2，所述羥基磷灰石納米粒子為表面覆蓋有殼聚糖膜的羥基磷灰石納米粒子。

進(jìn)一步的，所述交聯(lián)劑為戊二醛。

羥基磷灰石納米粒子，具有比表面積大的優(yōu)點(diǎn)，能結(jié)合大量適配體分子，促進(jìn)信號(hào)放大，增強(qiáng)了靈敏度，降低檢測(cè)限。制備的cea濃度檢測(cè)探針?biāo)牧u基磷灰石和適配體能分別與鉬酸鈉反應(yīng)產(chǎn)生電化學(xué)信號(hào)，實(shí)現(xiàn)雙重信號(hào)放大，提高檢測(cè)的靈敏度。

所述交聯(lián)劑分別與殼聚糖膜中的氨基和cea適配體中5’-nh2發(fā)生反應(yīng)，使cea適配體與表面覆蓋有殼聚糖膜的羥基磷灰石納米粒子復(fù)合在一起。

為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明還提供一種cea濃度檢測(cè)探針的制備方法，包括如下步驟：將表面覆蓋有殼聚糖膜的羥基磷灰石納米粒子加入交聯(lián)劑中，在室溫下，反應(yīng)0.5h～1h，經(jīng)離心洗滌后，將得到的羥基磷灰石納米粒子與cea適配體溶液混合，在室溫條件下，反應(yīng)2h～3h，經(jīng)離心洗滌去除未反應(yīng)的cea適配體后，即得所述cea濃度檢測(cè)探針。按cea適配體與羥基磷灰石納米粒子的質(zhì)量比為0.12:1～1.2:1(m/m)將羥基磷灰石納米粒子與cea適配體溶液混合，使用的cea適配體應(yīng)適當(dāng)過(guò)量，確保羥基磷灰石納米粒子表面負(fù)載滿(mǎn)cea適配體。優(yōu)選的，所述交聯(lián)劑為體積百分比為0.25％～1％的戊二醛溶液。

進(jìn)一步的，所述表面覆蓋有殼聚糖膜的羥基磷灰石納米粒子是通過(guò)如下方法制備得到的：將羥基磷灰石納米粒子分散在殼聚糖溶液中，在室溫條件下，反應(yīng)2～4h，經(jīng)離心洗滌，得到所述表面覆蓋有殼聚糖膜的羥基磷灰石納米粒子。殼聚糖通過(guò)物理吸附到羥基磷灰石表面，殼聚糖容易在粒子表面形成一層膜。

為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明還提供一種cea濃度檢測(cè)生物傳感器，所述cea濃度檢測(cè)生物傳感器包括本發(fā)明所述的cea濃度檢測(cè)探針和與所述cea濃度檢測(cè)探針配套使用的cea濃度檢測(cè)用電極，所述cea濃度檢測(cè)用電極是通過(guò)如下方法制備得到的：將cea抗體修飾的氧化石墨烯溶液直接滴加到玻碳電極表面后，采用牛血清白蛋白中對(duì)所述玻碳電極進(jìn)行封閉，得到所述cea濃度檢測(cè)電極。

進(jìn)一步的，所述cea抗體修飾的氧化石墨烯溶液是通過(guò)如下方法制備得到的，將1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和n-羥基琥珀酰亞胺的混合溶液與氧化石墨烯溶液混合，在室溫條件下，活化反應(yīng)1～3h，經(jīng)離心分離后，將經(jīng)活化的氧化石墨烯分散在水中，配置得到活化氧化石墨烯溶液，將cea抗體溶液與活化氧化石墨烯溶液混合，反應(yīng)2～4小時(shí)后，將未反應(yīng)的cea抗體分離后，配置得到所述cea抗體修飾的氧化石墨烯溶液。反應(yīng)中，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和n-羥基琥珀酰亞胺可以活化氧化石墨烯中的羧基，羧基使氧化石墨烯與cea抗體上的氨基發(fā)生共價(jià)交聯(lián)。作為優(yōu)選的舉例，本發(fā)明的cea抗體購(gòu)自abcam公司的ab4451。

進(jìn)一步的，將玻碳電極浸泡在質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5％～1％牛血清白蛋白中0.5～1h對(duì)所述玻碳電極進(jìn)行封閉，得到cea濃度檢測(cè)用電極。

為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明還提供一種本發(fā)明所述cea濃度檢測(cè)探針在制備用于檢測(cè)cea濃度的生物傳感器中的應(yīng)用，包括：(1)將1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和n-羥基琥珀酰亞胺的混合溶液與氧化石墨烯溶液混合，在室溫條件下，活化反應(yīng)1～3h，經(jīng)離心分離后，將經(jīng)活化的氧化石墨烯分散在水中，配置得到活化氧化石墨烯溶液，將cea抗體溶液與活化氧化石墨烯溶液混合，將未反應(yīng)的cea抗體分離后，配置得到cea抗體修飾的氧化石墨烯溶液；(2)將cea抗體修飾的氧化石墨烯溶液直接滴加到玻碳電極表面后，采用牛血清白蛋白中對(duì)所述玻碳電極進(jìn)行封閉，得到cea濃度檢測(cè)用電極；(3)取不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)cea溶液分別滴加至所述步驟(2)得到的各個(gè)cea濃度檢測(cè)用電極表面，制備得到結(jié)合了cea的電極；(4)將所述cea濃度檢測(cè)探針配置得到cea濃度檢測(cè)探針溶液，將所述cea濃度檢測(cè)探針溶液滴加至步驟(3)得到的各個(gè)結(jié)合了cea的電極的表面，得到電極表面從里至外依次為cea抗體、cea、cea適配體-羥基磷灰石的三層夾心式結(jié)構(gòu)電極；(5)向步驟(4)得到的各個(gè)三層夾心式結(jié)構(gòu)電極表面滴加鉬酸鈉溶液，得到cea濃度檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)電極；(6)用方波伏安法分別對(duì)步驟(5)得到的各個(gè)cea濃度檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)電極進(jìn)行檢測(cè)，得到cea濃度檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)電極的方波伏安曲線(xiàn)，將方波伏安曲線(xiàn)中的峰電流與對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)cea濃度繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；(7)取待測(cè)cea溶液替換標(biāo)準(zhǔn)cea溶液，按所述步驟(1)至(5)，得到待測(cè)cea濃度檢測(cè)電極，采用方波伏安法進(jìn)行測(cè)定，得到待測(cè)cea濃度待測(cè)電極的方波伏安曲線(xiàn)，并依據(jù)步驟(6)得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，即得待測(cè)cea溶液的濃度。

進(jìn)一步的，所述步驟(3)中，將cea溶液加到cea濃度檢測(cè)用電極表面，在25℃～37℃溫度條件下，水浴反應(yīng)1～2h，使cea與cea抗體之間發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，采用緩沖溶液沖洗電極表面除去未結(jié)合上的cea，得到結(jié)合了cea的電極。所述緩沖溶液為磷酸鹽緩沖溶液。

進(jìn)一步的，所述步驟(3)中，將所述cea濃度檢測(cè)探針溶液滴加到電極表面，在25℃～37℃溫度條件下，水浴反應(yīng)1～2h，使cea與cea適配體之間發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，用緩沖溶液沖洗電極表面未反應(yīng)結(jié)合的適配體-羥基磷灰石復(fù)合物，得到電極表面從內(nèi)至外依次為cea抗體、cea、cea適配體-羥基磷灰石的三層夾心式結(jié)構(gòu)電極。所述緩沖溶液為磷酸鹽緩沖溶液。

進(jìn)一步的，所述步驟(4)中，所述標(biāo)準(zhǔn)cea溶液的濃度分別可以為1pg/ml、5pg/ml、10pg/ml、100pg/ml、1ng/ml、和10ng/ml。

進(jìn)一步的，所述步驟(4)中，將所述cea濃度檢測(cè)探針配置成濃度為0.5mg/ml～1.5mg/ml的cea濃度檢測(cè)探針溶液。

進(jìn)一步的，所述步驟(5)中，在溫度為25℃～37℃條件下，將濃度為1mmol/l～5mmol/l的鉬酸鈉溶液滴加到所述三層夾心式結(jié)構(gòu)電極表面，反應(yīng)時(shí)間為20～30min。所述羥基磷灰石納米粒子與所述cea適配體中的磷酸根將與鉬酸鈉反應(yīng)生成有電化學(xué)活性的磷鉬酸鈉鹽沉淀，在采用方波伏安法進(jìn)行測(cè)定時(shí)，將產(chǎn)生雙重氧化還原電流，實(shí)現(xiàn)信號(hào)的雙重放大，提高檢測(cè)的靈敏度。

進(jìn)一步的，所述步驟(6)和(7)中，所述方波伏安法的具體測(cè)定條件為：以0.5mol/l～1mol/l的硫酸溶液為電解液，在0v～0.5v電壓范圍內(nèi)，以15hz～25hz的頻率進(jìn)行測(cè)定。

本發(fā)明的制備得到的cea濃度檢測(cè)電極，以羥基磷灰石納米粒子為構(gòu)建了電極表面從內(nèi)之外依次為cea抗體、cea、cea適配體-羥基磷灰石復(fù)合物的三層夾心式結(jié)構(gòu)，將所述cea濃度檢測(cè)電極用于檢測(cè)cea濃度，具有選擇性好、靈敏度高、檢測(cè)限低，且檢測(cè)范圍寬等優(yōu)點(diǎn)。

采用本發(fā)明的cea濃度檢測(cè)電極對(duì)cea濃度進(jìn)行檢測(cè)，首先，采用殼聚糖對(duì)羥基磷灰石表面進(jìn)行修飾，將5’端修飾了5’-nh2的cea適配體通過(guò)戊二醛交聯(lián)結(jié)合到殼聚糖修飾的羥基磷灰石表面，制備得到電化學(xué)探針；將cea抗體修飾的氧化石墨烯固定到電極表面，用牛血清白蛋白對(duì)電極表面進(jìn)行封閉，防止在電極表面發(fā)生非特異性吸附；然后在電極表面滴加cea，使電極上cea抗體能與cea進(jìn)行特異性識(shí)別并結(jié)合；進(jìn)一步在電極上加入cea適配體-羥基磷灰石復(fù)合物電化學(xué)探針，被cea抗體捕獲的cea能與羥基磷灰石上的適配體發(fā)生特異性結(jié)合；繼續(xù)在電極上滴加鉬酸鈉，在電極表面反應(yīng)生成磷鉬酸鈉鹽沉淀；以0.5mol/l的硫酸溶液為電解液，在0v～0.5v電壓范圍內(nèi)，進(jìn)行測(cè)定方波伏安曲線(xiàn)，曲線(xiàn)峰電流與cea濃度在一定范圍內(nèi)呈線(xiàn)性關(guān)系，從而實(shí)現(xiàn)cea溶液濃度的檢測(cè)。

本發(fā)明的cea適配體作為cea捕獲分子和信號(hào)分子，通過(guò)羥基磷灰石納米粒子與cea適配體結(jié)合，實(shí)現(xiàn)雙重信號(hào)放大方式，提高了檢測(cè)靈敏度。通過(guò)加入不同濃度cea經(jīng)電化學(xué)測(cè)量處理后得到標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，該標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)為一條直線(xiàn)，cea濃度越大電流值越大；再加入未知濃度cea測(cè)得電流值，將該電流值與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行比較得到未知濃度cea的濃度。本發(fā)明的技術(shù)方案利用羥基磷灰石納米粒子大的比表面積，能結(jié)合大量適配體分子，促進(jìn)信號(hào)放大，增強(qiáng)了靈敏度，降低了檢測(cè)限。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明技術(shù)方案的優(yōu)點(diǎn)在于：

(1)本發(fā)明的cea適配體與羥基磷灰石復(fù)合的cea濃度檢測(cè)探針，在應(yīng)用過(guò)程中，形成了cea抗體、cea、cea適配體-羥基磷灰石的三層結(jié)構(gòu)，羥基磷灰石納米粒子比表面積大，增加了適配體負(fù)載量，且與cea適配體結(jié)合使用，cea適配體可促進(jìn)信號(hào)放大，實(shí)現(xiàn)雙重信號(hào)，進(jìn)而提高檢測(cè)靈敏度，降低檢測(cè)限，檢測(cè)范圍廣。

(2)本發(fā)明的技術(shù)方案可測(cè)濃度為0.1pg/ml-10ng/ml的cea，而人類(lèi)正常血清中cea的濃度為2.5ng/ml，當(dāng)患者可能患有相關(guān)腫瘤時(shí)，cea濃度可能異常增高，因此，通過(guò)本發(fā)明的技術(shù)方案對(duì)經(jīng)過(guò)稀釋后患者血清具有足夠高的檢測(cè)靈敏度。當(dāng)然，這種異常增高只是其中一個(gè)指標(biāo)參數(shù)的反應(yīng)，并不表示有嚴(yán)格、直接的一一對(duì)應(yīng)關(guān)系，應(yīng)當(dāng)說(shuō)cea濃度增高也可能是其他身體條件的反應(yīng)。

(3)本發(fā)明同時(shí)采用cea適配體作為捕獲分子和信號(hào)分子，大大簡(jiǎn)化了傳感器制備方法和檢測(cè)步驟。相比于傳統(tǒng)的抗體，適配體具有價(jià)格便宜，合成方便等優(yōu)點(diǎn)。傳統(tǒng)的傳感器制備中，適配體只是作為捕獲分子，并不能產(chǎn)生信號(hào)。本發(fā)明技術(shù)方法檢測(cè)范圍寬，無(wú)需借助精密儀器設(shè)備，并且可推廣至其他傳感器，用于對(duì)不同蛋白或小分子的濃度進(jìn)行檢測(cè)。

附圖說(shuō)明

為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見(jiàn)地，下面描述中的附圖是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。

圖1為本發(fā)明的cea濃度檢測(cè)探針應(yīng)用原理圖。

圖2為羥基磷灰石納米粒子原料的tem圖。

圖3為本發(fā)明的cea濃度檢測(cè)探針微觀結(jié)構(gòu)示意圖。

圖4為本發(fā)明的cea適配體在電極表面與鉬酸鈉反應(yīng)后的循環(huán)伏安圖。

圖5為羥基磷灰石納米粒子在電極表面與鉬酸鈉反應(yīng)后的循環(huán)伏安圖。

圖6為實(shí)施例1中各不同標(biāo)準(zhǔn)濃度cea對(duì)應(yīng)的方波伏安曲線(xiàn)圖。

圖7為實(shí)施例1中各不同標(biāo)準(zhǔn)濃度cea的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖。

圖8為實(shí)施例1中待測(cè)血清溶液cea濃度檢測(cè)結(jié)果與elisa檢測(cè)濃度對(duì)照?qǐng)D。

附圖標(biāo)記：cea適配體1、羥基磷灰石納米粒子2。

具體實(shí)施方式

為了便于理解本發(fā)明，下文將結(jié)合說(shuō)明書(shū)附圖和較佳的實(shí)施例對(duì)本文發(fā)明做更全面、細(xì)致地描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于以下具體實(shí)施例。

除非另有定義，下文中所使用的所有專(zhuān)業(yè)術(shù)語(yǔ)與本領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解含義相同。本文中所使用的專(zhuān)業(yè)術(shù)語(yǔ)只是為了描述具體實(shí)施例的目的，并不是旨在限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。

除非另有特別說(shuō)明，本發(fā)明中用到的各種原材料、試劑、儀器和設(shè)備等均可通過(guò)市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)得到或者可通過(guò)現(xiàn)有方法制備得到。

實(shí)施例1

本實(shí)施例的cea濃度檢測(cè)探針的制備方法包括：將1mg羥基磷灰石納米粒子分散在0.1％的殼聚糖溶液中，在室溫下反應(yīng)2h；離心洗滌后，將獲得的羥基磷灰石納米粒子分散于0.25％的戊二醛溶液中反應(yīng)1h；離心洗滌后，得到將羥基磷灰石納米粒子與10μm適配體溶液反應(yīng)1h；離心洗滌去掉未反應(yīng)的適配體后，得到本發(fā)明的cea濃度檢測(cè)探針。其中，圖2為羥基磷灰石納米粒子原料的tem圖。圖3為cea濃度檢測(cè)探針的微觀結(jié)構(gòu)示意圖，cea濃度檢測(cè)探針包括cea適配體1、羥基磷灰石納米粒子2。

本實(shí)施例的cea濃度檢測(cè)傳感器包括cea濃度檢測(cè)探針和cea濃度檢測(cè)用電極。其中，cea濃度檢測(cè)用電極是通過(guò)如下方法制備得到的：將1ml濃度為1mg/ml氧化石墨烯溶液與100μl包含的100mm/l(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽)和100mm/l的n-羥基琥珀酰亞胺溶液混合，在25℃～37℃條件下，活化反應(yīng)2h，經(jīng)離心分離后，配置得到活化氧化石墨烯溶液，將cea抗體溶液與活化氧化石墨烯溶液混合，將未反應(yīng)的cea抗體分離后，配置得到cea抗體修飾的氧化石墨烯溶液；將得到的5μl抗體修飾氧化石墨烯直接滴加到玻碳電極表面得到抗體修飾電極；將玻碳電極浸泡在1％牛血清白蛋白中0.5h對(duì)所述玻碳電極進(jìn)行封閉，得到cea濃度檢測(cè)用電極。依此方法，共制備得到10個(gè)cea濃度檢測(cè)用電極。

本實(shí)施例的cea濃度檢測(cè)探針在制備用于檢測(cè)cea濃度的生物傳感器中的應(yīng)用，其技術(shù)原理圖如圖1所示；圖2羥基磷灰石納米粒子原料的tem圖；分別將本發(fā)明的cea適配體和羥基磷灰石納米粒子在玻碳電極表面與鉬酸鈉反應(yīng)后進(jìn)行測(cè)定，圖4為cea適配體在電極表面與鉬酸鈉反應(yīng)后的循環(huán)伏安圖，圖5為羥基磷灰石納米粒子在電極表面與鉬酸鈉反應(yīng)后的循環(huán)伏安圖，圖4和圖5說(shuō)明羥基磷灰石納米粒子和cea適配體配合可以實(shí)現(xiàn)雙重信號(hào)放大。

包括如下步驟：

(1)將濃度分別為5pg/ml、10pg/ml、50pg/ml、100pg/ml、500pg/ml、1ng/ml、5ng/ml和10ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)cea溶液分別滴加到本實(shí)施例的8個(gè)cea濃度檢測(cè)用電極表面，在37℃水浴條件下，反應(yīng)1h，采用磷酸鹽緩沖溶液沖洗電極表面3次，除去未結(jié)合上的cea，得到結(jié)合了8個(gè)不同標(biāo)準(zhǔn)濃度的cea的電極；

(2)將本實(shí)施例的cea濃度檢測(cè)探針配置得到的5μl濃度為1mg/ml的cea濃度檢測(cè)探針溶液滴加到8個(gè)結(jié)合了不同cea標(biāo)準(zhǔn)濃度的電極表面，在37℃水浴條件下反應(yīng)1h，用磷酸鹽緩沖溶液沖洗電極表面3次，除去未反應(yīng)掉的cea濃度檢測(cè)探針，得到8個(gè)從里至外依次為cea抗體、cea、cea適配體-羥基磷灰石的三層夾心式結(jié)構(gòu)電極；

(3)向8個(gè)三層夾心式結(jié)構(gòu)的電極表面滴加1mm鉬酸鈉溶液，在25℃條件，反應(yīng)20min，得到cea濃度檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)電極；

(4)以0.5mol/l的硫酸溶液為電解液，在0-0.5v電壓范圍內(nèi)，以15hz的頻率進(jìn)行測(cè)定，得到各cea濃度檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)電極的峰電流值，然后將各cea濃度檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)電極的峰電流值與對(duì)應(yīng)的cea濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，如圖6、圖7所示；

(5)取cea濃度未知的血清溶液，滴加剩余4個(gè)cea濃度檢測(cè)用電極表面，在37℃水浴條件下，反應(yīng)1h，用磷酸鹽緩沖溶液沖洗電極表面3次，將本實(shí)施例的cea濃度檢測(cè)探針配置得到的5μl濃度為1mg/ml的cea濃度檢測(cè)探針溶液滴加到4個(gè)結(jié)合不同待測(cè)濃度的cea的電極表面，在37℃水浴條件下反應(yīng)1h，用緩沖溶液沖洗電極表面3次除去未結(jié)合上的cea，得到4個(gè)從里至外依次為cea抗體、cea、cea適配體-羥基磷灰石的三層夾心式結(jié)構(gòu)電極；向4個(gè)三層夾心式結(jié)構(gòu)的電極表面滴加1mm鉬酸鈉溶液，在25℃條件，反應(yīng)20min；用方波伏安法測(cè)峰電流值，與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)比對(duì)得到測(cè)量濃度值，測(cè)量濃度值與elisa分析結(jié)果相比有很好的一致性，相關(guān)系數(shù)為0.993，如圖8所示。

以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。