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一種定量檢測(cè)sST2的時(shí)間分辨熒光免疫試紙條及其制備方法與流程

文檔序號(hào):12453837閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種定量檢測(cè)可溶性生長(zhǎng)刺激表達(dá)基因2蛋白(sST2)的時(shí)間分辨熒光免疫分析試紙條,其特征在于,包括:底板以及底板上依次相互交錯(cuò)排列的樣品墊、結(jié)合墊、包被膜和吸水紙,所述包被膜貼合在底板中部上,所述結(jié)合墊貼合在底板上,一側(cè)壓覆在包被膜一側(cè)邊緣上,所述樣品墊貼合在底板上,一側(cè)壓覆在結(jié)合墊邊緣上,所述吸水紙一側(cè)壓覆在包被膜另一側(cè)邊緣上;

所述結(jié)合墊上包被有稀土粒子微球標(biāo)記的sST2單克隆抗體I,所述包被膜上包被有檢測(cè)線和質(zhì)控線,所述檢測(cè)線固定有識(shí)別不同抗原表位的sST2單克隆抗體II,所述質(zhì)控線固定有兔抗鼠IgG抗體;

所述包被膜上檢測(cè)線和質(zhì)控線相互平行,所述檢測(cè)線靠近所述結(jié)合墊,所述質(zhì)控線靠近所述吸水紙。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述定量檢測(cè)sST2的時(shí)間分辨熒光免疫分析試紙條,其特征在于,所述結(jié)合墊為聚酯膜;所包被膜為硝酸纖維素膜。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述定量檢測(cè)sST2的時(shí)間分辨熒光免疫分析試紙條,其特征在于,所述稀土離子微球?yàn)橛糜跇?biāo)記的任何鑭系金屬元素微球。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述定量檢測(cè)sST2的時(shí)間分辨熒光免疫分析試紙條,其特征在于,所述稀土離子微球表面帶有活性基團(tuán)。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述定量檢測(cè)sST2的時(shí)間分辨熒光免疫分析試紙條,其特征在于,稀土離子微球的直徑為100nm-300nm。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述定量檢測(cè)sST2的時(shí)間分辨熒光免疫分析試紙條,其特征在于,所述試紙條還包括一卡殼,所述試紙條裝入在卡殼內(nèi),露出樣品墊、結(jié)合墊、包被膜上的檢測(cè)線和質(zhì)控線、以及吸水墊。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述定量檢測(cè)sST2的時(shí)間分辨熒光免疫分析試紙條,其特征在于,所述卡殼為塑料卡殼。

8.一種根據(jù)權(quán)利要求6或7所述定量檢測(cè)sST2的時(shí)間分辨熒光免疫分析試紙條的制備方法,包括如下步驟:

(1)在包被膜的不同位置分別固定識(shí)別不同抗原表位的sST2單克隆抗體II和兔抗鼠IgG抗體,形成檢測(cè)線和質(zhì)控線;

(2)制備稀土離子微球標(biāo)記的sST2單克隆抗體I,并噴涂在結(jié)合墊上;

(3)在底板上依次相互交錯(cuò)的黏貼上樣品墊、結(jié)合墊、包被膜和吸水紙,然后切割成寬度為0.4~0.6cm大小,裝入卡殼。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述制備方法,其特征在于,所述步驟(1)中包被膜的制備方法為:使用含有1%-10%蔗糖的0.01-0.05mol/L的pH為7.2-7.6的磷酸鹽緩沖液,分別將識(shí)別不同抗原表位的sST2單克隆抗體II和兔抗鼠IgG抗體稀釋到0.5mg/mL-2.0mg/mL的濃度,使用定量噴膜儀以1μL/cm-2μL/cm的量將二者以0.5cm-1.0cm的間隔噴于包被膜上,35-38℃烘干0.5-2.0h,加入干燥劑封存?zhèn)溆谩?/p>

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述制備方法,其特征在于,步驟(2)中所述稀土離子微球標(biāo)記的sST2單克隆抗體I的制備方法為:將sST2單克隆抗體I用0.01mol/L-0.05mol/L的pH為7.2-7.6的磷酸緩沖液在2~4℃溫度下透析過(guò)夜,之后調(diào)整濃度為1mol/L-1.5mol/L;使用0.02mol/L-0.05mol/L的pH為7.2-7.6的MES活化緩沖液洗滌微球,加入碳二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS),終濃度為10mmol/L,室溫反應(yīng)10-20分鐘,充分洗滌稀土離子微球,用0.02mol/L-0.05mol/L的pH為7.2-7.6的磷酸鹽緩沖液復(fù)溶后加入透析后的sST2單克隆抗體I,使sST2單克隆抗體I與稀土離子微球的質(zhì)量比為1:50-4:50,室溫反應(yīng)1.5~2.5小時(shí),加入含有1%-10%BSA的0.01-0.05mol/L的pH7.2-7.6的磷酸鹽緩沖液,室溫反應(yīng)25~35分鐘,洗滌稀土離子微球,用含有0.05%-1%BSA,0.05%-0.1%Tween-20,0.01-0.05mol/L的pH7.2-7.6的磷酸鹽緩沖液保存液復(fù)溶至原體積,使用定量噴膜儀以3μL/cm-5μL/cm噴涂于結(jié)合墊上,避光,在35-38℃烘干0.5~1.5小時(shí),加入干燥劑封存?zhèn)溆谩?/p>

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