本發(fā)明涉及一種β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器定量分析生物試樣中布洛芬的方法，屬于藥物分析檢測技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

藥物分析涉及血漿或尿液等生物體液中藥物的定性和定量分析，對于獲取和評價藥物利用率、等效性和藥代動力學(xué)數(shù)據(jù)具有重要的意義。布洛芬(2-(4-異丁基苯基)丙酸)是一種常用的解熱鎮(zhèn)痛非甾體類抗炎藥，具有緩解急性和慢性疼痛、風(fēng)濕及肌肉疼痛等療效。盡管它具有顯著的藥效，但不合理或過量服用可能會產(chǎn)生各種不良反應(yīng)，主要表現(xiàn)為胃腸道反應(yīng)、腎損害、肝損害、心血管事件等。而且，它屬于非處方藥，價廉易得，具有過量服用導(dǎo)致自殺或謀殺等犯罪行為的風(fēng)險。研究表明，布洛芬在血漿中的有效用藥質(zhì)量濃度為10～50μg/ml，當(dāng)其質(zhì)量濃度超過200μg/ml時，毒副作用明顯。同時，藥代動力學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，60％的布洛芬將在用藥后24h內(nèi)排出，其中66％經(jīng)尿液排出，剩余的經(jīng)糞便排出。

目前，已報道的傳統(tǒng)布洛芬的主要檢測方法有固相萃取和液相萃取等，這些傳統(tǒng)的檢測方法存在檢測靈敏度不夠、操作復(fù)雜耗時、依賴精密貴重儀器、需專業(yè)人員進(jìn)行操作等缺點，常常不能滿足研究分析和臨床檢測的要求。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對上述現(xiàn)有技術(shù)存在的不足而提供一種β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器定量分析生物試樣中布洛芬的方法，簡單快速、操作靈活多樣，能實現(xiàn)即時檢測。.

本發(fā)明為解決上述提出的問題所采用的技術(shù)方案為：

β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器定量分析生物試樣中布洛芬的方法，主要步驟如下：

(1)對載玻片表面進(jìn)行硅烷化修飾；

(2)以羥乙基甲基丙烯酸酯為聚合物單體在交聯(lián)劑、引發(fā)劑的作用下，在步驟(1)所得硅烷化修飾后的載玻片表面原位合成羥乙基甲基丙烯酸酯聚合物；

(3)將金納米顆粒負(fù)載于步驟(2)所述載玻片表面的聚合物中，然后利用倍頻nd:yag激光對其進(jìn)行照射，得到反射全息傳感器；

(4)將β-環(huán)糊精修飾于步驟(3)所得反射全息傳感器中，得到β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器；

(5)將步驟(4)所得β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器分別放入配制好的一系列不同質(zhì)量濃度的布洛芬標(biāo)準(zhǔn)溶液中，采用反射分光光度儀照射該β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器記錄反射波長；然后以反射波長λ作為縱坐標(biāo)，以對應(yīng)布洛芬標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度c為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(6)將步驟(4)所得β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器放入待測溶液中，采用反射分光光度儀照射后，將所得反射波長代入步驟(5)所得標(biāo)準(zhǔn)曲線中，計算得到待測樣品中布洛芬的質(zhì)量濃度。

按上述方案，所述步驟(1)中硅烷化修飾方法為：將載玻片浸于含硅烷試劑的有機(jī)溶劑中進(jìn)行表面修飾，從而得到硅烷化修飾后的載玻片。優(yōu)選地，有機(jī)溶劑為對硅烷試劑具有良好的分散能力且本身具有一定的揮發(fā)性，如丙酮等；硅烷試劑通常選擇3-(三甲氧基甲硅烷基)丙基丙烯酸酯，配制質(zhì)量濃度范圍為1～5％。其中，硅烷化修飾的反應(yīng)時間為9～12h，反應(yīng)溫度為20～30℃。

按上述方案，所述步驟(2)中：單體為羥乙基甲基丙烯酸酯(hema)，交聯(lián)劑為乙二醇二甲基丙烯酸酯(edma)，引發(fā)劑為2,2-二甲氧基-2-苯基苯乙酮(dmpa)，引發(fā)劑溶于異丙醇溶劑中，交聯(lián)劑的摩爾用量占交聯(lián)劑和單體摩爾總量的1～3％，引發(fā)劑的質(zhì)量濃度為1～1.5％。其中，原位合成的反應(yīng)條件為光聚合，選用的光波長為350～370nm，聚合時間為20～60min。

按上述方案，所述步驟(3)中金納米顆粒的負(fù)載方法為：將氯金酸鈉溶液充分?jǐn)U散至步驟(2)所述載玻片表面的聚合物中，然后將分散在聚合物中的金鹽還原為金納米顆粒，并洗滌除去未反應(yīng)的試劑和殘留的金鹽。其中，氯金酸鈉溶液的質(zhì)量濃度為2～4％，溶劑為水和/或異丙醇；擴(kuò)散采用浸潤的方式，浸潤時間為3～6min；優(yōu)選采用抗壞血酸鈉水溶液作為還原劑；負(fù)載結(jié)束的終點為：金納米顆粒大小在50～90nm范圍內(nèi)，聚合物呈紫色，采用體積濃度為3～7％的乙酸水溶液終止負(fù)載反應(yīng)；洗滌依次采用水和質(zhì)量濃度為8～12％的五水硫代硫酸鈉水溶液。

按上述方案，所述步驟(3)中具體照射條件為：將載玻片的負(fù)載有金納米顆粒的聚合物面朝下，以傾斜角為6～8°完全浸沒于水中，保持靜置狀態(tài)30～50min，用能量為258mj，波長為532nm的倍頻nd:yag激光q-開關(guān)模式(q-switching)對其進(jìn)行照射。

按上述方案，所述步驟(4)中修飾方法為：將步驟(3)所得反射全息傳感器浸入單六位取代的巰基化β-環(huán)糊精(β-cd-sh)水溶液中30～50min，利用au-s鍵，將β-環(huán)糊精引入反射全息傳感器中。其中，β-cd-sh水溶液的質(zhì)量濃度為5～10％。

按上述方案，所述步驟(5)中一系列不同質(zhì)量濃度的布洛芬標(biāo)準(zhǔn)溶液，線性范圍為5～350μg/ml，ph范圍為4.5～8.5，離子強(qiáng)度范圍為10～250mm。其中，ph可以通過酸性緩沖溶液調(diào)節(jié)，利用dmso輔助布洛芬溶解到酸性緩沖溶液中。

按上述方案，所述步驟(5)、步驟(6)記錄反射波長的方法優(yōu)選為：采用反射分光光度計記錄反射波長。

按上述方案，當(dāng)對布洛芬濃度的精確度要求不是非常嚴(yán)格時，所述步驟(5)、步驟(6)中，可以利用高分辨數(shù)碼相機(jī)對β-環(huán)糊精修飾全息傳感器在不同濃度的布洛芬標(biāo)準(zhǔn)溶液中進(jìn)行拍照、記錄，然后，同樣對β-環(huán)糊精修飾全息傳感器在待測樣品中拍照，根據(jù)照片的顏色判斷待測樣品中布洛芬的大致濃度范圍。因此，利用高分辨數(shù)碼相機(jī)拍攝的β-環(huán)糊精修飾全息傳感器的顏色，可以直觀、快速、“試紙式”地指示布洛芬濃度。

按上述方案，所述待測樣品為生物樣品如血漿和尿液等，需簡單的過濾，并利用與生物試樣相同ph和相同離子強(qiáng)度的磷酸鹽緩沖溶液稀釋和離心處理，即可進(jìn)行檢測。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

1.本發(fā)明利用β-環(huán)糊精和布洛芬之間具有強(qiáng)的相互作用和大的結(jié)合常數(shù)，將β-環(huán)糊精通過化學(xué)鍵穩(wěn)定地修飾到全息傳感器中，得到了一種可以對布洛芬具有良好響應(yīng)的全息傳感器，準(zhǔn)確定量分析生物試樣中布洛芬，方法簡單且靈活，同時避免了復(fù)雜的待測樣品前處理過程，生物樣品如血漿和尿液僅需簡單的過濾、稀釋和離心處理，即可進(jìn)行檢測。

2.方法學(xué)結(jié)果表明，本發(fā)明所提供的方法對布洛芬進(jìn)行檢測時，得到了良好的線性關(guān)系(相關(guān)系數(shù)大于0.9990)，高的加標(biāo)回收率(93.1～105.4％)和良好的日內(nèi)、日間精密度(rsds為7.53～10.35％)，對生物試樣中布洛芬進(jìn)行檢測時，得到相對回收率為76.1～108.7％，表明樣品溶液的基質(zhì)對其干擾較小，可以應(yīng)用于較為復(fù)雜的基質(zhì)。

3.本發(fā)明利用反射分光光度計或者數(shù)碼相機(jī)對β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器在不同布洛芬濃度中(正常、毒性、高毒性)的反射光進(jìn)行記錄，可以得到明顯的顏色變化，表明該方法可以用于臨床即時檢測；同時，全息傳感器的裝置結(jié)構(gòu)靈活多樣，可以制成直讀型和便攜型，醫(yī)療工作者不需要進(jìn)行復(fù)雜的樣品分析即可得到第一手的醫(yī)療信息，甚至患者自己可以根據(jù)全息傳感器的響應(yīng)給出及時的應(yīng)對措施，降低風(fēng)險。

4.本發(fā)明用于定量分析布洛芬的β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器的波長在15min可以回到小于初始點±1nm處，可逆性好，可以重復(fù)使用。

附圖說明

圖1為反射分光光度計(avespec2008)的構(gòu)造圖。其中，(a)控制光束b的光強(qiáng)度；(b)用于給出一定強(qiáng)度的可見光，型號為avalight-hal-s；(c)規(guī)格為600μm直徑、1m長，sma終端的電纜，用于將可見光聚集照射全息傳感器識別元件；(d)樣品池(盛放比色皿)；(e)接收反射光；(f)樣品池角度調(diào)節(jié)旋鈕；avasoft(version7.2)用于記錄和分析反射光的波長和強(qiáng)度。

圖2為反射全息傳感器的制備裝置圖。

圖3為實施例中β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器對ph為7.5的磷酸鹽緩沖溶液(a)和ph為7.5的血漿(b)中布洛芬的響應(yīng)曲線，樣品溶液和空白溶液所得反射波長的差值即為樣品溶液的波長遷移值。

圖4為β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器對血漿布洛芬響應(yīng)的動力學(xué)考察結(jié)果。其中，布洛芬的加標(biāo)質(zhì)量濃度為350μg/ml。

圖5為實施例中β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器對ph為6.5的磷酸鹽緩沖溶液(a)和ph為6.5的尿液(b)中布洛芬的響應(yīng)曲線，樣品溶液和空白溶液所得反射波長的差值即為樣品溶液的波長遷移值。

圖6為β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器對尿液中布洛芬響應(yīng)的動力學(xué)曲線。其中，布洛芬的加標(biāo)質(zhì)量濃度為350μg/ml。

圖7為利用數(shù)碼相機(jī)拍攝的β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器對含布洛芬正常濃度、毒性濃度和高毒性濃度的血漿和尿液樣品的圖片。

具體實施方式

為了更好地理解本發(fā)明，下面結(jié)合實施例進(jìn)一步闡明本發(fā)明的內(nèi)容，但本發(fā)明不僅僅局限于下面的實施例。

下述實施例中所采用的具體試劑、實驗儀器等如下所述。

1、試劑

聚合物單體羥乙基甲基丙烯酸酯(hema)、交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙烯酸酯(edma)、引發(fā)劑2,2-二甲氧基-2-苯基苯乙酮(dmpa)、硅烷試劑3-(三甲氧基甲硅烷基)丙基丙烯酸酯、四氯金酸鈉二水合物、五水硫代硫酸鈉(hypo)均購自aldrich化學(xué)試劑公司，異丙醇購自fisher科技公司，抗壞血酸鈉購自bdh公司。

2、實驗儀器

顯微鏡載玻片(規(guī)格為：長76mm，寬26mm，厚度為1～1.2mm)；鍍鋁聚酯薄膜(厚度為100μm)；紫外照射裝置(350～370nm,型號為555-279)；ph計(hi213ph/mv/℃，帶有玻璃電極和溫度探針)，使用前用三個矯正溶液(ph4.01,ph7.01,ph9.18)矯正；倍頻nd:yag激光(350mj,532nm,寬泰)用于反射全息傳感器的制備；尼康數(shù)碼相機(jī)(d800)。

3、布洛芬標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液的配制

3.1質(zhì)量濃度范圍為5～350μg/ml布洛芬標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

布洛芬為一種酸類化合物，其pka約為4.5左右，因此，在ph為3.5～4.5范圍內(nèi)，大部分布洛芬呈分子狀態(tài)，疏水性強(qiáng)(logp＝3.7)，在水中溶解度小，因此，本發(fā)明中利用10％dmso輔助布洛芬溶解到酸性緩沖溶液中。

具體操作如下：準(zhǔn)確稱取相應(yīng)質(zhì)量的布洛芬溶于dmso中，配制質(zhì)量濃度分別為50μg/ml、100μg/ml、300μg/ml、500μg/ml、1000μg/ml、1500μg/ml、2000μg/ml、2500μg/ml、3000μg/ml、3500μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液。分別準(zhǔn)確移取1.00ml的上述溶液于9.00ml的離子強(qiáng)度為111mm，ph為3.5的磷酸鹽緩沖溶液中，得到離子強(qiáng)度為100mm，ph為3.5，質(zhì)量濃度為5μg/ml、10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml、200μg/ml、250μg/ml、300μg/ml、350μg/ml的布洛芬標(biāo)準(zhǔn)溶液。離子強(qiáng)度為100mm，ph為3.5，10％dmso(v/v，體積分?jǐn)?shù))的磷酸鹽緩沖溶液作為空白樣品溶液。

按照相同的操作，配制相同質(zhì)量濃度范圍，ph分別為4.5，5.5，6.5，7.5和8.5的10％dmso(v/v，體積分?jǐn)?shù))布洛芬標(biāo)準(zhǔn)溶液和空白樣品溶液，離子強(qiáng)度均為100mm。

3.2加標(biāo)血漿樣品的制備

將購買的血漿(h4522-100ml,sigma-aldrich)在冰浴下緩慢解凍，用經(jīng)0.22μm的濾膜過濾后，用離子強(qiáng)度為100mm，ph為7.5的磷酸鹽緩沖溶液稀釋一倍后，渦旋混勻后，在3600rcf，4℃下離心10min，小心地將上層清液取出，作為血漿樣品。

為保證樣品溶液的ph和離子強(qiáng)度相同，向血漿樣品中加入相同體積、不同質(zhì)量濃度的布洛芬標(biāo)準(zhǔn)溶液(離子強(qiáng)度為100mm，ph為7.5)，得到不同加標(biāo)濃度的血漿樣品。

血漿樣品和離子強(qiáng)度為100mm，ph為7.5的磷酸鹽緩沖溶液等比例混合液作為空白樣品溶液。

3.3加標(biāo)尿液樣品的制備

由于人體尿液的ph為5.5～7，平均值為6.2。因此，按照人工尿液中各成分的比例，配制ph為6.5的尿液樣品。

為保證樣品溶液的ph和離子強(qiáng)度相同，向尿液樣品中加入相同體積、不同質(zhì)量濃度的布洛芬標(biāo)準(zhǔn)溶液(離子強(qiáng)度為100mm，ph為6.5)，得到不同加標(biāo)濃度的尿液樣品。

尿液樣品和離子強(qiáng)度為100mm，ph為6.5的磷酸鹽緩沖溶液等比例混合液作為空白樣品溶液。

實施例

1、硅烷試劑修飾的載玻片的制備

將載玻片平鋪于托盤中，倒入適量的2％(v/v)硅烷試劑的丙酮溶液，均勻晃動托盤，使載玻片完全浸于丙酮溶液，稍傾斜，將丙酮吸出后，將托盤室溫下放于暗室中。過夜后，用去離子水清洗后，擦干，放于載玻片小盒中備用。

2、聚合物的制備

準(zhǔn)確用移液槍將體積比為99:1的聚合物單體hema和交聯(lián)劑edma移入1.5ml的道夫管中，加入等體積的2％dmpa異丙醇溶液(w/v，質(zhì)量體積比)，用渦流器混合均勻。準(zhǔn)確用移液槍吸出100μl，滴加在鍍鋁聚酯薄膜表面上，將硅烷化的玻片小心壓在上述溶液表面，盡量避免氣泡的產(chǎn)生，溶液在載玻片壓力的作用下，均勻擴(kuò)散至整個玻片，小心移至紫外照射裝置下，在350nm下光聚合40min。聚合完成后，將載有聚合物的載玻片從薄膜上取下來，置于室溫中，揮發(fā)至干燥，用去離子水和乙醇清洗，除去殘留的溶劑，室溫中揮發(fā)至干燥，備用。

3、金納米顆粒聚合物的制備

將300μl的2％naauclo4·2h2o(w/v)水溶液準(zhǔn)確移至干凈的、表面平整的玻璃片上，將上述制備的載有聚合物的載玻片小心壓于上述溶液表面，小心輕壓，使金鹽溶液擴(kuò)散至整個聚合物。4min后，移開載玻片，用無屑紙擦掉表面粘附的溶液，并用溫風(fēng)吹干。將載玻片聚合物表面朝上浸入2％(w/v)抗壞血酸鈉水溶液中，抗壞血酸鈉將分散在聚合物中的金鹽還原為金納米顆粒，金納米顆粒大小約為70nm，聚合物呈紫色。當(dāng)聚合物的顏色不再加深時，取出，放入5％(v/v)乙酸水溶液中約1min，乙酸水溶液作為停止劑，防止金納米顆粒的繼續(xù)增大。取出載有聚合物的載玻片，用去離子水沖洗干凈后，放入10％(w/v)五水硫代硫酸鈉水溶液中均勻晃動2min，將未反應(yīng)的試劑和殘留的金鹽清洗掉，取出載玻片，用大量的去離子水清洗。

4、反射全息傳感器的制備

將上述載玻片聚合物表面朝下，放入圖2所示反射全息傳感器的制備裝置中，傾斜角約為6°，調(diào)節(jié)位置，使該裝置能夠在激光照射的范圍內(nèi)，輕輕加入適量的去離子水，完全浸沒載玻片，保持該狀態(tài)靜置30min。用能量為258mj，波長為532nm的倍頻nd:yag激光q-switching模式對上述所制備的金納米顆粒聚合物進(jìn)行單次照射，均勻移動裝置的位置，靜置2min后，再次用相同能量的激光單次照射，重復(fù)至整個載玻片均勻地被激光照射，得到反射全息傳感器。在暗室中白熾燈下觀察反射全息傳感器的反射光為明亮的單一綠色。

5、β-環(huán)糊精修飾反射全息傳感器的制備

準(zhǔn)確稱取0.1g的單六位取代的巰基化β-環(huán)糊精(β-cd-sh)溶于1ml去離子水中，得到質(zhì)量濃度為10％(w/v)的β-cd-sh水溶液。準(zhǔn)確移取100μlβ-cd-sh水溶液滴于干凈平整的玻璃片表面，將反射全息傳感器的聚合物面朝下壓于β-cd-sh水溶液表面，使金納米顆粒和β-cd-sh發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，形成au-s鍵，40min后，移開玻璃片，從而把β-環(huán)糊精修飾到反射全息傳感器中，得到β-環(huán)糊精修飾反射全息傳感器。

6、β-環(huán)糊精修飾反射全息傳感器信息的記錄

采用反射分光光度儀照射全息傳感器記錄反射波長。反射分光光度儀結(jié)構(gòu)如圖1所示。具體操作步驟為：用玻璃割刀切下上述制備的寬約為6mm的β-環(huán)糊精修飾反射全息傳感器，將其玻片面擦干后，緊貼垂直放入紫外比色皿中，下端應(yīng)緊貼比色皿底部，玻片和緊貼的比色皿間保證沒有氣泡，而且樣品溶液不會進(jìn)入，減少對入射光的干擾。向比色皿中準(zhǔn)確移入1.5ml的去離子水，調(diào)節(jié)入射電纜、樣品池和接收光纜的位置，找到傳感器的反射峰。固定三者的位置，檢測過程中用水循環(huán)儀維持樣品溶液的溫度為30℃，平衡采集β-環(huán)糊精修飾反射全息傳感器的信號(即將β-環(huán)糊精修飾反射全息傳感器置于比色皿中)15min，取最后2min波長和強(qiáng)度的平均值作為該組的光譜數(shù)據(jù)，記錄數(shù)據(jù)。

采用相同的方法，向比色皿中加入待測樣品進(jìn)行檢測。

7、β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器對血漿中布洛芬的測定

7.1方法學(xué)考察

如圖3，β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器對加標(biāo)血漿樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液中的布洛芬響應(yīng)值和目標(biāo)物的質(zhì)量濃度呈現(xiàn)出良好的關(guān)系，方程式分別為：λ＝-0.0002c²+0.155c，相關(guān)系數(shù)為0.9990；λ＝-0.0003c²+0.185c，相關(guān)系數(shù)r為0.9991。

接下來，對β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器測定血漿中的布洛芬的方法學(xué)進(jìn)行了考察。選擇三個質(zhì)量濃度(30μg/ml、100μg/ml和300μg/ml)布洛芬標(biāo)準(zhǔn)溶液分別代表低、中和高濃度，通過一天內(nèi)連續(xù)三次測定和連續(xù)三天分別測定對方法的日內(nèi)和日間精密度進(jìn)行考察，實驗獲得的日內(nèi)精密度的rsds小于7.69％，日間精密度的rsds小于10.35％。

分別將三個不同質(zhì)量濃度的布洛芬標(biāo)準(zhǔn)溶液加入空白血漿樣品中，利用β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器對其進(jìn)行測定，得到波長的遷移值，代入上述方程式，得到布洛芬的理論質(zhì)量濃度，根據(jù)布洛芬的加標(biāo)和理論質(zhì)量濃度，計算相應(yīng)的回收率，每個質(zhì)量濃度水平平行三次。實驗得到，該方法對血漿中布洛芬檢測的回收率為94.63～104.26％，rsd小于8.63％。

接下來，通過相對回收率考察基質(zhì)對β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器檢測效果的影響，即利用該傳感器對含有相同布洛芬質(zhì)量濃度的血漿和緩沖溶液進(jìn)行測定，通過獲得的波長遷移量和方程，分別得到其理論質(zhì)量濃度，根據(jù)兩者的理論質(zhì)量濃度的比值得相對回收率。結(jié)果表明，該方法對血漿中布洛芬測定的相對回收率為76.12～90.87％，因此，β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器可以應(yīng)用于血漿中藥物的檢測。

為了考察布洛芬在血漿樣品中的穩(wěn)定性，將上述加入三個不同布洛芬質(zhì)量濃度的血漿樣品在-20℃下冷凍24h，冰浴下緩慢解凍，取出部分樣品進(jìn)行測定。剩余樣品再于-20℃下冷凍24h，解凍后測定，如此，重復(fù)三次，得到的波長遷移值的rsds小于11.64％，因此，布洛芬在血漿藥品中經(jīng)過三次的冷凍-解凍仍能穩(wěn)定存在。

7.2可逆性考察

通過連續(xù)三次測定布洛芬加標(biāo)量為350μg/ml的血漿樣品溶液，對β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器的響應(yīng)速度和可逆性進(jìn)行考察，實驗結(jié)果如圖4所示?？芍害?環(huán)糊精修飾的全息傳感器對布洛芬的響應(yīng)速度很快，約5min內(nèi)即可完成響應(yīng)；加入空白樣品溶液，由于測定在ph為7.5條件下，布洛芬呈離子狀態(tài)，在緩沖溶液中溶解度較高，且聚合物的交聯(lián)程度低，光柵間距大，溶脹度高，因此，β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器的波長在15min可以回到小于初始點+1nm處，可逆性好，可以重復(fù)使用。

8、β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器對尿液中布洛芬的測定

8.1方法學(xué)考察

如圖5所示，β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器對加標(biāo)尿液樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液中的布洛芬的響應(yīng)值和目標(biāo)物的質(zhì)量濃度呈現(xiàn)出良好的關(guān)系，方程式和相關(guān)系數(shù)分別為：λ＝-0.0002c²+0.137c，相關(guān)系數(shù)r為0.9991；λ＝-0.0002c²+0.140c，相關(guān)系數(shù)r為0.9991。

接下來，對β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器測定尿液中的布洛芬的方法學(xué)進(jìn)行了考察。同樣選擇了三個質(zhì)量濃度為30μg/ml、100μg/ml和300μg/ml布洛芬標(biāo)準(zhǔn)溶液分別代表低、中和高質(zhì)量濃度，通過一天內(nèi)連續(xù)三次測定和連續(xù)三天分別測定對方法的日內(nèi)和日間精密度進(jìn)行考察，實驗獲得的日內(nèi)精密度的rsds小于7.53％，日間精密度的rsds小于9.66％。

分別將三個不同質(zhì)量濃度的布洛芬標(biāo)準(zhǔn)溶液加入空白尿液樣品中，利用β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器對其進(jìn)行測定，均水平平行三次，根據(jù)得到的波長的遷移值，分別計算其回收率，結(jié)果表明，該方法對尿液中布洛芬檢測的回收率為93.12～105.35％，rsd小于9.12％。

向尿液和磷酸鹽緩沖溶液中加入相同體積、相同質(zhì)量濃度的布洛芬標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后進(jìn)行測定，通過獲得的波長遷移量和方程，分別得到其理論質(zhì)量濃度，兩者的理論質(zhì)量濃度的比值得相對回收率。實驗結(jié)果表明，該方法對尿液中布洛芬測定的相對回收率為77.27～108.74％，因此，β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器可以應(yīng)用于尿液中藥物的檢測。

8.2可逆性考察

通過連續(xù)三次測定布洛芬加標(biāo)量為350μg/ml的樣品溶液，對β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器的響應(yīng)速度和可逆性進(jìn)行考察，實驗結(jié)果如圖6所示，可知：β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器對布洛芬的響應(yīng)速度很快，約7min內(nèi)即可完成響應(yīng)；加入空白樣品溶液，β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器的波長在15min可以回到小于初始點+1nm處，可逆性好，可以重復(fù)使用。

綜上所述，本發(fā)明提供了一種快速、簡單且靈活的布洛芬即時檢測方法，利用激光制備了一種可以對布洛芬具有良好響應(yīng)的β-環(huán)糊精修飾反射全息傳感器，通過控制檢測條件將其應(yīng)用于血漿和尿液中布洛芬的檢測時，得到了良好的線性關(guān)系，高的加標(biāo)回收率和良好的日內(nèi)、日間精密度。并且，通過對其加標(biāo)回收率的測定可知，生物樣品溶液的基質(zhì)對其干擾較小，可以應(yīng)用于較為復(fù)雜的基質(zhì)。

9、數(shù)碼相機(jī)記錄β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器對血漿和尿液中布洛芬的響應(yīng)

配制含有正常濃度(50ug/ml)、毒性濃度(200ug/ml)和高毒性濃度(350ug/ml)布洛芬的加標(biāo)血漿樣品和加標(biāo)尿液樣品，其中，加標(biāo)血漿樣品的ph為7.5，離子強(qiáng)度為100mm，加標(biāo)尿液樣品的ph為6.5，離子強(qiáng)度為100mm。采用數(shù)碼相機(jī)記錄β-環(huán)糊精修飾的全息傳感器對加標(biāo)血漿樣品和加標(biāo)尿液樣品中布洛芬的響應(yīng)。具體操作步驟為：用玻璃割刀切下上述制備的寬約為6mm的β-環(huán)糊精修飾反射全息傳感器，緊貼紫外比色皿壁，垂直放入；然后，向比色皿中準(zhǔn)確移入1.5ml配制好的加標(biāo)血漿樣品或加標(biāo)尿液樣品，調(diào)節(jié)入射電纜、樣品池和接收光纜的位置，找到傳感器的反射峰；接著，固定入射電纜和樣品池的位置，在接收光纜位置，固定好數(shù)碼相機(jī)，用水循環(huán)儀維持樣品溶液的溫度為30℃，15min后按下快門進(jìn)行拍攝、記錄，結(jié)果如圖7所示。

如圖7所示，在血漿和尿液樣品中，布洛芬的濃度處于正常濃度時為拍攝圖片的顏色為綠色，處于毒性濃度時為拍攝圖片的顏色為橙色，處于高毒性濃度時為拍攝圖片的顏色為橙紅色，布洛芬濃度越高，拍攝圖片的顏色波長增加。所以，根據(jù)拍攝圖片的顏色，可以直觀、快速、“試紙式”地指示布洛芬大致濃度。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明創(chuàng)造構(gòu)思的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和變換，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。