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分析甲萘威殘留的ELISA檢測試劑盒及其應(yīng)用的制作方法

文檔序號:11913374閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.抗甲萘威納米抗體,其特征在于,所述抗體的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示,或該序列經(jīng)替換、缺失或添加一個或幾個氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

2.分析甲萘威殘留的ELISA檢測試劑盒,包括盒體、設(shè)在盒體內(nèi)可拆卸的酶標(biāo)板以及設(shè)在盒體內(nèi)的試劑,其特征在于,所述酶標(biāo)板的每個孔包被有甲萘威包被抗原,所述試劑包括權(quán)利要求1所述納米抗體、甲萘威標(biāo)準(zhǔn)溶液、酶標(biāo)記的二抗、緩沖液PBS、洗滌液PBST、顯色液和反應(yīng)終止液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒,其特征在于,所述甲萘威包被抗原為半抗原N-(1-萘氧羰基)-6-氨基己酸與牛血清蛋白的偶聯(lián)復(fù)合物,所述包被抗原的制備方法如下:

(1)將30.2mg N-(1-萘氧羰基)-6-氨基己酸、13.9mg N-羥基琥珀酰亞胺和24.3mg N,N'-二環(huán)己基碳二亞胺,溶于1mL無水二甲基甲酰胺中,室溫下攪拌過夜反應(yīng);將反應(yīng)液離心,棄沉淀,收集上清液;

(2)將牛血清蛋白20mg溶于0.05M,pH 9.6的碳酸鹽緩沖液2mL中,攪拌下逐滴加入所述上清液,加完后室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)4h;

(3)反應(yīng)結(jié)束后,將反應(yīng)液裝入透析袋內(nèi)用PBS液透析;每6h換液一次,共換液5-6次;透析后離心,棄沉淀,收上清液,作為抗原包被液。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒,其特征在于,所述酶標(biāo)板為96孔酶標(biāo)板,包被抗原的包被濃度為100ng/mL。

5.根據(jù)權(quán)利要求2-4任一項所述的試劑盒,其特征在于,所述納米抗體的濃度為0.535ng/mL。

6.根據(jù)權(quán)利要求2-5任一項所述的試劑盒,其特征在于,所述酶標(biāo)記的二抗為辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗HA標(biāo)簽抗體,濃度為0.1μg/mL。

7.根據(jù)權(quán)利要求2-6任一項所述的試劑盒,其特征在于,所述顯色液包括A液和B液,A液由過氧化脲1g、檸檬酸10.3g、Na2HPO4·12H2O 35.8g、吐溫-20 100μL和蒸餾水1000mL配制而成,pH值5;B液由四甲基聯(lián)苯胺700mg、DMSO 40mL、檸檬酸10.3g和蒸餾水1000mL配制而成,pH值2.4。

8.根據(jù)權(quán)利要求2-7任一項所述的試劑盒,其特征在于,所述反應(yīng)終止液為2M的硫酸液。

9.權(quán)利要求2-8任一項所述試劑盒在ELISA法檢測樣品中甲萘威殘留的應(yīng)用。

10.甲萘威ELISA檢測試劑,其有效成分為權(quán)利要求1所述抗體。

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