本發(fā)明涉及臨床醫(yī)學診斷技術領域，具體是一種用于檢測肝纖四項的快速定量免疫試紙條。

背景技術：

肝纖四項即肝纖維化四項檢查，包括PCⅢ(III型前膠原)、IV-C(IV型膠原)、LN(層粘連蛋白)和HA(透明質酸酶)，主要用來檢查診斷慢性肝病患者病情發(fā)展狀況和治療效果，是衡量炎癥活動度、纖維化程度的重要依據；傳統(tǒng)的檢測方法包括肝穿刺病理活檢法、血清免疫化學發(fā)光法、血清酶聯免疫吸附法；肝穿刺病理活檢雖然視為“金標準”，但取樣過程復雜、病人比較痛苦，需要必要的護理和抗感染措施，檢查后需要3-5天時間才能出結果；血清免疫化學發(fā)光法敏感度、特異性及重復性均很好，但操作過程繁雜、價格昂貴；血清酶聯免疫吸附法操作過程繁雜、不易規(guī)范、速度慢；基于上述原因，迫切需要一種快速、準確的用于檢測肝纖四項的技術，以改善現有技術的缺點。

技術實現要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種使用便捷、靈敏度高、特異性高、成本低廉、檢測快速的用于檢測肝纖四項的快速定量免疫試紙條，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案：

一種用于檢測肝纖四項的快速定量免疫試紙條，包括吸水紙、NC膜、底板、金標墊、濾血膜和樣品墊；所述底板上沿層析方向依次設置有樣品墊、濾血膜、金標墊、NC膜和用于吸收檢測樣品中多余液體的吸水紙，所述金標墊上噴涂有采用膠體金或者熒光微球對PCⅢ、IV-C、LN、HA第一抗體進行標記的標記物涂層；所述NC膜上包被固定有PCⅢ、IV-C、LN、HA第二抗體。

作為本發(fā)明進一步的方案：所述樣品墊上粘附標有指示線的膠帶。

作為本發(fā)明再進一步的方案：所述標記物涂層在金標墊上通過烘干固定。

作為本發(fā)明再進一步的方案：所述PCⅢ、IV-C、LN、HA第二抗體包被在NC膜上烘干固定。

作為本發(fā)明再進一步的方案：所述樣品墊上設置有加樣孔。

作為本發(fā)明再進一步的方案：所述NC膜上設置有質控線C，質控線C上固化包被有二抗抗體；所述第二抗體作為檢測線T。

作為本發(fā)明再進一步的方案：所述用于檢測肝纖四項的快速定量免疫試紙條的使用方法，包括以下步驟：

1)采集樣本，樣本為全血、血清或血漿，稀釋樣本，并取60-80μl稀釋后的樣本加樣到樣品墊的加樣孔內，放入儀器檢測區(qū)內；

2)稀釋的樣本經過濾血膜過濾后流至金標墊，干燥的標記物被溶解，樣本中的抗原與第一抗體反應，形成“膠體金或熒光微球-第一抗體-抗原”復合物；

3)復合物層析到NC膜上，與NC膜上包被的第二抗體反應，形成“膠體金或熒光微球-第一抗體-抗原-第二抗體”復合物，過量的未反應標記物層析到用二抗抗體包被的質控線而被捕捉，從而，在NC膜上，形成被特異性捕捉的檢測線T和被二抗捕捉形成的質控線C；

4)儀器對檢測線T、質控線C的光反射進行測試，其比值與樣本中的抗原濃度成正相關，按照樣本濃度與T/C比值建立的函數關系，形成條形碼；

5)儀器根據檢測到的T/C比值以及條形碼中的函數換算關系，計算出樣本中抗原的濃度。

與現有技術相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明使用便捷、靈敏度高、特異性高、成本低廉、檢測快速；樣本采用全血、血清、血漿均可，因此提高了臨床使用科室的便利程度；樣本被稀釋后，加樣到樣品墊的加樣孔，再放入儀器檢測區(qū)內即可，操作便捷，操作人員無需特別培訓；從加樣到出結果僅需15分鐘，檢驗快速，是目前最快的檢測和定量方法；靈敏度可達到1ng/ml的水平，可以與目前最靈敏的化學發(fā)光法媲美；特異性高，在研究階段，篩選出的四種抗原各自的第一抗體和第二抗體，均互不干擾，也不與血液中的其它成份如類風濕因子、膽紅素、CRP、抗凝劑反應；肝纖檢測的四個項目可以組合在1—4根試紙條上，方便臨床對某些項目的跟蹤和連續(xù)檢測；于4—30℃條件下可保存一年，干燥后的抗體穩(wěn)定性、保質期均明顯高于化學發(fā)光和酶聯免疫法中的液體試劑；生產成本很低，極大的降低臨床檢驗成本，具有廣闊的臨床應用前景。

附圖說明

圖1為本發(fā)明的結構示意圖。

其中，1-吸水紙；2-NC膜；3-底板；4-金標墊；5-濾血膜；6-樣品墊。

具體實施方式

下面結合具體實施方式對本專利的技術方案作進一步詳細地說明。

請參閱圖1，一種用于檢測肝纖四項的快速定量免疫試紙條，包括吸水紙1、NC膜2、底板3、金標墊4、濾血膜5和樣品墊6；所述底板3上沿層析方向依次設置有樣品墊6、濾血膜5、金標墊4、NC膜2和用于吸收檢測樣品中多余液體的吸水紙1，所述樣品墊6上粘附標有指示線的膠帶，樣品墊6上還設置有加樣孔；所述金標墊4上噴涂有采用膠體金或者熒光微球對PCⅢ、IV-C、LN、HA第一抗體進行標記的標記物涂層，標記物涂層在金標墊4上通過烘干固定；所述NC膜2上包被固定有PCⅢ、IV-C、LN、HA第二抗體，PCⅢ、IV-C、LN、HA第二抗體包被在NC膜2上烘干固定作為檢測線T；所述NC膜2上設置有質控線C，質控線C上固化包被有二抗抗體。

所述用于檢測肝纖四項的快速定量免疫試紙條的使用方法，包括以下步驟：

1)采集樣本，樣本為全血、血清或血漿，稀釋樣本，并取60-80μl稀釋后的樣本加樣到樣品墊6的加樣孔內，放入儀器檢測區(qū)內，樣本多元化，擴大了臨床使用科室的便利，操作便捷，操作人員不需要特別培訓；

2)稀釋的樣本經過濾血膜5過濾后流至金標墊4，干燥的標記物被溶解，樣本中的抗原與第一抗體反應，形成“膠體金或熒光微球-第一抗體-抗原”復合物；

3)復合物層析到NC膜2上，與NC膜2上包被的第二抗體反應，形成“膠體金或熒光微球-第一抗體-抗原-第二抗體”復合物，過量的未反應標記物層析到用二抗抗體包被的質控線而被捕捉，從而，在NC膜上，形成被特異性捕捉的檢測線T和被二抗捕捉形成的質控線C；

4)儀器對檢測線T、質控線C的光反射進行測試，其比值與樣本中的抗原濃度成正相關，按照樣本濃度與T/C比值建立的函數關系，形成條形碼；

5)儀器根據檢測到的T/C比值以及條形碼中的函數換算關系，計算出樣本中抗原的濃度。

在臨床檢測中，采用本發(fā)明的免疫試紙條，從樣本滴加到樣品墊的加樣孔內進行層析，到儀器根據檢測到的T/C比值以及條碼中的函數換算關系，計算出樣本中抗原的濃度，僅需要15min，檢測和定量快速準確，靈敏度可達到1ng/ml，篩選出的四種抗原的各自的第一和第二抗體，均互不干擾，也不與血液中的其它成份如類風濕因子、膽紅素、CRP、抗凝劑反應，特異性高，四個肝纖項目可以組合在1—4根試紙條上，方便臨床對某些項目的跟蹤和連續(xù)檢測；本發(fā)明的免疫試紙條在4—30℃溫度條件下保存時間可達一年，干燥后的抗體穩(wěn)定性、保質期均明顯高于化學發(fā)光和酶聯免疫法中的液體試劑。

上面對本專利的較佳實施方式作了詳細說明，但是本專利并不限于上述實施方式，在本領域的普通技術人員所具備的知識范圍內，還可以在不脫離本專利宗旨的前提下做出各種變化。