1.一種基于納米NiCo2O4@AD雙功能催化劑的電化學(xué)發(fā)光免疫傳感器的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:
玻碳電極(GCE)首先在鋪有氧化鋁粉末的麂皮上機(jī)械打磨拋光,用二次水洗去表面殘留粉末,再移入超聲水浴中清洗,直至清洗干凈,最后依序用乙醇,稀酸和水徹底洗滌;
滴加3μL 濃度為 0.5 mg/mL 的NiCo2O4@AD懸浮液于干凈的玻碳電極表面,紅外燈下烘干,冷卻至室溫,制得NiCo2O4@AD修飾玻碳電極;
滴加30 μL 濃度為 2.0 wt%的戊二醛溶液于NiCo2O4@AD修飾電極表面活化1 h;
滴加30 μL前列腺素E1抗體(anti-PGE1)溶液于修飾電極表面并在4°C冰箱中孵育40 min,用去離子水洗去物理吸附的anti-PGE1,制得NiCo2O4@AD/ anti-PGE1修飾玻碳電極;
取40μL 濃度為1.0 wt.%的BSA 滴加到修飾電極表面4°C冰箱中孵育1 h,以封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn),用去離子水沖洗電極表面洗去物理吸附,并保存在4°C冰箱中;
取30 μL濃度為0.1 fg/ml–1.0 ng/ml的前列腺素E1標(biāo)準(zhǔn)溶液滴于NiCo2O4@AD/ anti-PGE1修飾電極表面并在4°C冰箱中孵育40 min,用pH7.5的 PBS緩沖溶液沖洗電極表面,制得一種基于納米NiCo2O4@AD雙功能催化劑的PGE1電化學(xué)發(fā)光免疫傳感器。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述的NiCo2O4@AD材料的由下述方法制備的:1.0 mL 濃度為1.0 mg/mL 的NiCo2O4與1.0 mL 濃度為1.0 wt%的3-氨丙基三乙氧基硅烷 (APTES) 混合振蕩12h,離心收集氨基功能化的NiCo2O4產(chǎn)物并重新分散在2.0 mL的去離子水中;然后將(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽)(EDC)及N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化的1-金剛烷甲酸與氨基功能化的NiCo2O4產(chǎn)物混合振蕩2h,制得金剛烷修飾的NiCo2O4 (NiCo2O4@AD), 離心收集NiCo2O4@AD產(chǎn)物并重新分散在2.0 mL的去離子水中。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述的NiCo2O4材料的由下述方法制備的:用20 mL 乙醇及40 mL 去離子水配制濃度為1 mmol 的 Ni(NO3)2·6H2O溶液, 濃度為2 mmol的Co(NO3)2·6H2O 溶液及濃度為4.5 mmol 的六亞甲基四胺的混合溶液,將混合溶液轉(zhuǎn)移到 100 mL 聚四氟乙烯反應(yīng)釜內(nèi)襯中,90 oC下磁力攪拌24 h后冷卻至室溫,通過離心收集沉淀物并用去離子水及乙醇洗滌數(shù)次,在烘箱中60 oC下烘干12 h,最后,在空氣中350 oC 煅燒2 h 獲得介孔NiCo2O4 納米片。
4.權(quán)利要求1-3任一所述的方法制備的一種基于納米NiCo2O4@AD雙功能催化劑的電化學(xué)發(fā)光免疫傳感器。
5.權(quán)利要求4所述的一種基于納米NiCo2O4@AD雙功能催化劑的電化學(xué)發(fā)光免疫傳感器,其特征在于,用于前列腺素E1的檢測(cè),檢測(cè)步驟如下:
(1)使用電化學(xué)工作站采用三電極體系進(jìn)行測(cè)定,以權(quán)利要求4所述的一種基于納米NiCo2O4@AD雙功能催化劑的電化學(xué)發(fā)光免疫傳感器為工作電極,Ag/AgCl為參比電極,鉑絲電極為對(duì)電極,在0.1mol/ml K2S2O8的pH 8.0的 PBS緩沖溶液中進(jìn)行測(cè)試;
(2)采用循環(huán)伏安電壓對(duì)不同濃度的前列腺素E1標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測(cè),掃描電壓范圍為0.8V–-1.8 V,掃描速率為100 mV/s,通過電致化學(xué)發(fā)光設(shè)備采集電致化學(xué)發(fā)光信號(hào),光電倍增管電壓為900V,通過所得的電致化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度與前列腺素E1標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度之間的關(guān)系,繪制工作曲線;
(3)待測(cè)樣品溶液代替前列腺素E1標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測(cè),檢測(cè)的結(jié)果可通過工作曲線查得。