本發(fā)明涉及用于預(yù)測(cè)患者中的慢性腎臟疾病的進(jìn)展的方法。更具體地，本發(fā)明涉及使用患者尿樣品中的特異性生物標(biāo)志物標(biāo)記對(duì)慢性腎臟疾病的快速進(jìn)展進(jìn)行早期預(yù)測(cè)。
背景技術(shù)：
：：慢性腎臟疾病(chronickidneydisease，ckd)目前影響約10％的西方人群，且認(rèn)為發(fā)病率在世界上逐漸增加。低腎小球?yàn)V過(guò)率(gfr)與增加的心血管病死亡風(fēng)險(xiǎn)以及年齡標(biāo)準(zhǔn)化的所有原因死亡有關(guān)1，2。這種增加的死亡風(fēng)險(xiǎn)甚至發(fā)生在患者達(dá)到終末期腎病(esrd)之前1。因而ckd是一個(gè)顯著的公共衛(wèi)生問(wèn)題。有些具有ckd的患者將快速地進(jìn)展至終末期腎病(endstagerenaldisease，esrd)且因此處于較高的風(fēng)險(xiǎn)中，而在其它患者中，ckd可能保持穩(wěn)定或甚至改善3。鑒別可能進(jìn)展的那些患者是分級(jí)的首要。白蛋白尿是ckd進(jìn)展的一種良好預(yù)測(cè)指標(biāo)4。但是，盡管有進(jìn)行中的ckd，白蛋白尿可以退化5。存在許多可以在ckd進(jìn)展中起作用且可以成為腎進(jìn)展生物標(biāo)志物的潛在候選物的效應(yīng)物。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(ttransforminggrowthfactor-β，tgf-β)6途徑和它的下游效應(yīng)物結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connectivetissuegrowthfactor，ctgf)7，8是基質(zhì)合成的已知重要驅(qū)動(dòng)因子和纖維化發(fā)展的潛在因子。細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ecm)積聚物(它是纖維化的結(jié)構(gòu)單元)由分子(諸如膠原iii)組成，所以我們研究了前膠原iii氨基端前肽(procollageniiiaminoterminalpropeptide，piiinp)9，10(合成的膠原的量的間接指標(biāo))以及纖連蛋白1(fibronectin1，fn1)11和骨膜蛋白12-兩種其它的重要ecm分子。如它們的名稱暗示的，供研究的參與ecm重塑的其它分子是基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrixmetalloprotease9，mmp9)和組織金屬蛋白酶抑制劑1(inhibitorofmetalloprotease1，timp1)，它們分別分解ecm和抑制該分解作用13。認(rèn)為炎癥過(guò)程在驅(qū)動(dòng)最終的纖維化中起重要作用。從炎癥觀點(diǎn)看，可能涉及許多炎癥性的趨化因子和細(xì)胞因子：?jiǎn)魏思?xì)胞趨化蛋白1(monocytechemoattractantprotein1，mcp1)14、骨橋蛋白15、白介素18(il18)16、il617和白細(xì)胞抑制因子(lif)18以及生長(zhǎng)和分化因子15(gdf15)19。生長(zhǎng)因子(諸如表皮生長(zhǎng)因子(egf)受體(egfr)的配體)在細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖中起作用。配體諸如egf和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(tgf-α)在病理生理學(xué)中可能在ckd中起作用20。除了它的許多其它作用以外，嗜中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)的脂質(zhì)運(yùn)載蛋白可以在egfr的下游起作用21。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子a(vascularendothelialgrowthfactorsa，vegfa)22和c(vegfc)23是在血管生成和淋巴管生成中涉及的生長(zhǎng)因子，它們二者還在ckd進(jìn)展中具有經(jīng)鑒別的作用。其它分子對(duì)腎結(jié)構(gòu)和功能是更特異性的，且根據(jù)腎損傷程度以不同水平表達(dá)。脂肪酸結(jié)合蛋白1(fattyacidbindingprotein1，fabp1)24-26主要在近端小管中表達(dá)。腎損傷分子1(kidneyinjurymolecule1，kim1)也在腎小管上表達(dá)，但是僅在疾病狀態(tài)27。egf也在遠(yuǎn)端小管中表達(dá)28。半胱氨酸蛋白酶抑制劑c是一種13.4kda半胱氨酸蛋白酶抑制劑，在腎小球中自由濾過(guò)并重新吸收進(jìn)腎小管中29，且因而升高的尿水平可能提示小管損傷。尿調(diào)制蛋白在享勒袢中表達(dá)且分泌進(jìn)尿中30。盡管存在該生理病理學(xué)信息，但是不存在用于預(yù)測(cè)快速進(jìn)展的可靠生物標(biāo)志物標(biāo)記。在tangri等人的大研究(涉及共8391位處于3-5期ckd的患者)中，證實(shí)了使用常規(guī)地測(cè)量的指標(biāo)(諸如血漿白蛋白、鈣、磷酸鹽、碳酸氫鹽、白蛋白尿)并考慮年齡、性別和基線估計(jì)的腎小球?yàn)V過(guò)率(estimatedglomerularfilgrationrate，egfr)的ckd進(jìn)展預(yù)測(cè)模型會(huì)預(yù)測(cè)向腎衰竭進(jìn)展的ckd33。這里的主要結(jié)果量度是對(duì)腎替代療法的要求。其它研究組已經(jīng)尋找通常采用不如測(cè)量的腎小球?yàn)V過(guò)率(measuredglomerularfiltrationrate，mgfr)黃金標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)確的egfr的其它模型來(lái)預(yù)測(cè)ckd進(jìn)展。egfr顯然是更容易的和更廉價(jià)的測(cè)量，但是不足令人驚奇的事實(shí)是，使用egfr方程式不會(huì)完全再現(xiàn)發(fā)現(xiàn)。由于egfr的靈敏度的缺乏，已經(jīng)報(bào)道了egfr在mgfr面前的不準(zhǔn)確性43。當(dāng)尋找其中必須考慮兩種或更多種gfr的進(jìn)展時(shí)，所述誤差會(huì)被進(jìn)一步放大。但是，白蛋白尿(albuminuria)的檢測(cè)以及人口統(tǒng)計(jì)風(fēng)險(xiǎn)因素仍然是標(biāo)準(zhǔn)方案。通過(guò)加入可靠生物標(biāo)志物(特別是尿生物標(biāo)志物)來(lái)增加預(yù)測(cè)準(zhǔn)確度因而將是有用的。具體地，本領(lǐng)域中越來(lái)越需要處于慢性腎臟疾病的快速進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)中的患者的體外早期檢測(cè)方法。因此，本發(fā)明滿足了該需要，公開了與ckd進(jìn)展有關(guān)的尿生物標(biāo)志物的特殊組合并提供了ckd進(jìn)展的新預(yù)測(cè)方法和它們的試劑盒。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明涉及用于預(yù)測(cè)受試者中的慢性腎臟疾病的快速進(jìn)展的體外方法，所述方法包括下述步驟：評(píng)價(jià)得自所述受試者的生物樣品中的一種或多種生物標(biāo)志物的表達(dá)，其中所述一種或多種生物標(biāo)志物選自轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(transforminggrowthfactoralpha，tgf-α)、表皮生長(zhǎng)因子(epidermalgrowthfactor，egf)和單核細(xì)胞趨化蛋白1(monocytechemoattractantprotein1，mcp1)。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的預(yù)測(cè)方法包括：至少評(píng)價(jià)egf、mcp1和tgf-α的表達(dá)，和任選地，評(píng)價(jià)嗜中性粒細(xì)胞明膠酶-相關(guān)的脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin，ngal)的表達(dá)。在可以與前述實(shí)施方案組合的其它具體實(shí)施方案中，所述評(píng)價(jià)步驟包括(a)定量得自所述受試者的生物樣品中的一種或多種選定生物標(biāo)志物的表達(dá)以得到每種定量生物標(biāo)志物的表達(dá)值，和(b)將在步驟(a)處得到的所述表達(dá)值與對(duì)應(yīng)對(duì)照值進(jìn)行對(duì)比，其中低于對(duì)照值的egf的表達(dá)值和/或高于在對(duì)照值的mcp1的表達(dá)值和/或高于在對(duì)照值的tgfα的表達(dá)值和/或高于在對(duì)照值的ngal的表達(dá)值指示，所述人受試者處于增加的快速進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)中。在可以與前述實(shí)施方案組合的其它具體實(shí)施方案中，進(jìn)一步評(píng)價(jià)選自生長(zhǎng)和分化因子15(growthanddifferentiationfactor15，gdf15)、嗜中性粒細(xì)胞明膠酶-相關(guān)的脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(ngal)、半胱氨酸蛋白酶抑制劑c、脂肪酸結(jié)合蛋白(fattyacidbindingprotein，fabp)、纖連蛋白、腎損傷分子1(kim1)、骨橋蛋白、組織金屬蛋白酶抑制劑1(timp1)、尿調(diào)制蛋白和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子a(vegfa)、白介素-6(il6)、白血病抑制因子(lif)、基質(zhì)金屬肽酶9(mmp9)的一種或多種生物標(biāo)志物的表達(dá)。在可以與前述實(shí)施方案組合的其它具體實(shí)施方案中，用在所述方法中的所述生物樣品是尿或血清樣品。在可以與前述實(shí)施方案組合的其它具體實(shí)施方案中，在生物樣品中評(píng)價(jià)每種生物標(biāo)志物的蛋白表達(dá)，例如如在免疫測(cè)定中所定量的。在可以與前述實(shí)施方案組合的其它具體實(shí)施方案中，然后選擇所述被預(yù)測(cè)為快速進(jìn)展的受試者用治療慢性腎臟疾病的治療劑進(jìn)行治療。本發(fā)明還涉及用于監(jiān)測(cè)治療慢性腎臟疾病的治療劑在受試者中的效力的體外方法，所述方法包括評(píng)價(jià)所述受試者的生物樣品中的生物標(biāo)志物的表達(dá)，其中所述生物標(biāo)志物是egf、mcp1和tgf-α，和任選地，評(píng)價(jià)ngal的表達(dá)。在可以與前述實(shí)施方案組合的其它具體實(shí)施方案中，進(jìn)行在治療慢性腎臟疾病之前的第一個(gè)評(píng)價(jià)步驟，并然后在所述治療步驟過(guò)程中或之后重復(fù)，其中所述生物標(biāo)志物的表達(dá)的變化指示對(duì)所述治療的應(yīng)答。本發(fā)明還涉及用于實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的以上方法中的任一種的試劑盒，所述試劑盒包含用于定量至少下述生物標(biāo)志物的蛋白表達(dá)的裝置：egf、mcp1和tgf-α，和任選地，用于定量ngal的蛋白表達(dá)的裝置。在可以與前述實(shí)施方案組合的其它具體實(shí)施方案中，所述用于定量蛋白表達(dá)的裝置包括每種生物標(biāo)志物的特異性的未標(biāo)記抗體，和任選地，用于在免疫測(cè)定中檢測(cè)所述生物標(biāo)志物/未標(biāo)記抗體的第二標(biāo)記抗體。例如，在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，用在免疫測(cè)定中的本發(fā)明的試劑盒包含：(i)egf的特異性抗體；(ii)mcp1的特異性抗體；和，(iii)tgf-α的特異性抗體，(iv)任選的ngal的特異性抗體。在具體實(shí)施方案中，在所述試劑盒中包含的所述抗體被固定在支持物上。在其它具體實(shí)施方案中，在所述試劑盒中包含的所述抗體綴合至報(bào)告分子。附圖說(shuō)明圖1：組合尿生物標(biāo)志物以預(yù)測(cè)ckd進(jìn)展中的‘快速進(jìn)展者’狀態(tài)的最佳模型.(a)：顯示模型中表皮生長(zhǎng)因子(egf)、單核細(xì)胞趨化蛋白(mcp1)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α(tgf-α)和白蛋白尿的比值比or(95％置信區(qū)間，ci)的森林圖；(b)：將三種bm表皮生長(zhǎng)因子(egf)、單核細(xì)胞趨化蛋白(mcp1)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α(tgf-α)和白蛋白尿的最佳模型的曲線下面積(auc)與沒(méi)有生物標(biāo)志物(bm)、但是僅有白蛋白尿的模型的auc進(jìn)行對(duì)比的受試者操作特征(roc)曲線。針對(duì)白蛋白尿、募集中心、糖尿病歷史和平均mgfr來(lái)調(diào)節(jié)模型。圖2：根據(jù)測(cè)量的gfr(mgfr)和估計(jì)的gfr*(egfr)每年的腎小球?yàn)V過(guò)率(gfr)的變化百分比.正方形代表使用任一種方法其中存在進(jìn)展速率的一致性的患者：實(shí)心正方形是快速進(jìn)展者(n＝38)，且空心正方形是緩慢進(jìn)展者(n＝131)。圓圈代表其中在兩種方法之間存在差異的患者：實(shí)心圓圈是通過(guò)mgfr、但是沒(méi)有通過(guò)egfr鑒別的快速進(jìn)展者(n＝30)，且空心圓圈是通過(guò)egfr、但是沒(méi)有通過(guò)mgfr鑒別的快速進(jìn)展者(n＝30)?；疑€顯示了回歸線(皮爾森氏相關(guān)系數(shù)r＝0.5)。這里沒(méi)有表示5個(gè)離群值(每年>50％和＜-50％的基線mgfr變化)。*使用腎病飲食改進(jìn)(mdrd)方程式估計(jì)egfr。圖3：標(biāo)記中的生物標(biāo)志物的生物標(biāo)志物三分位數(shù).在模型5中在尿生物標(biāo)志物的每個(gè)三分位數(shù)的快速進(jìn)展者(>10％的每年測(cè)量的腎小球?yàn)V過(guò)率(mgfr)的減小)的百分比.白蛋白三分位數(shù)t1：＜3.58；t2：3.58-33.02；和t3：≥33.02mg/mmol。表皮生長(zhǎng)因子(egf)三分位數(shù)t1：＜0.46；t2：0.46-0.81；和t3：≥0.81μg/mmol；單核細(xì)胞趨化蛋白(mcp1)三分位數(shù)t1：＜17.7；t2：17.7-35.6；和t3：≥32.6ng/mmol；嗜中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)的脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(ngal)三分位數(shù)t1：＜0.26；t2：0.26-0.76；和t3：≥0.76μg/mmol；和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α(tgf-α)三分位數(shù)t1：＜0.30；t2：0.30-0.47；和t3：≥0.47ng/mmol。對(duì)于ngal可以觀察到三分位數(shù)的j-形分布。具體實(shí)施方式本發(fā)明提供了允許在患者中早期預(yù)測(cè)慢性腎臟疾病的快速進(jìn)展的可能性的方法。具體地，本文中提供了預(yù)后方法和試劑盒，其允許預(yù)測(cè)患者中ckd的快速進(jìn)展并從而預(yù)測(cè)向終末期腎病的進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)。根據(jù)本發(fā)明，已經(jīng)鑒別出非?？煽康哪蛏飳W(xué)標(biāo)志物集合，其指示增加的慢性腎臟疾病的快速進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)。因而，本發(fā)明的一個(gè)目的由用于預(yù)測(cè)受試者中的慢性腎臟疾病的快速進(jìn)展的體外方法組成，所述方法包括下述步驟：評(píng)價(jià)得自所述受試者的生物樣品中的一種或多種生物標(biāo)志物的表達(dá)，其中所述一種或多種生物標(biāo)志物選自表皮生長(zhǎng)因子(egf)、單核細(xì)胞趨化蛋白1(mcp1)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(tgf-α)、生長(zhǎng)和分化因子15(gdf15)、嗜中性粒細(xì)胞明膠酶-相關(guān)的脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(ngal)、半胱氨酸蛋白酶抑制劑c、脂肪酸結(jié)合蛋白(fabp)、纖連蛋白、腎損傷分子1(kim1)、骨橋蛋白、組織金屬蛋白酶抑制劑1(timp1)、尿調(diào)制蛋白白介素-6(il6)、白血病抑制因子(lif)、基質(zhì)金屬肽酶9(mmp9)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子a(vegfa)。在具體實(shí)施方案中，評(píng)價(jià)了上面列出的所述生物標(biāo)志物中的2、3、4或5種的表達(dá)。根據(jù)本發(fā)明的預(yù)測(cè)方法中的所述一種或多種生物標(biāo)志物更具體地選自egf、mcp1和tgf-α。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的預(yù)測(cè)方法包括至少評(píng)價(jià)egf、mcp1和tgf-α的表達(dá)，例如，它們的蛋白表達(dá)，和任選地，評(píng)價(jià)ngal的表達(dá)。如在下面的實(shí)施例中證實(shí)的，當(dāng)在ckd的緩慢進(jìn)展者和快速進(jìn)展者之間對(duì)比尿樣品中的候選生物標(biāo)志物的表達(dá)值時(shí)，發(fā)明人已經(jīng)鑒別出相對(duì)于緩慢進(jìn)展者或健康受試者在快速進(jìn)展者中具有統(tǒng)計(jì)上不同的表達(dá)的特異性生物標(biāo)志物和它們的組合，這樣的生物標(biāo)志物在下文中被稱作“預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物”并列出在下面的表1中。某些定義在本文中可互換地使用的術(shù)語(yǔ)“患者”或”受試者”表示人類，包括例如具有或疑似具有慢性腎臟疾病或處于ckd的早期階段的男性或女性，或處于發(fā)展慢性腎臟疾病的風(fēng)險(xiǎn)中的受試者(考慮ckd的人口統(tǒng)計(jì)風(fēng)險(xiǎn)因素)。術(shù)語(yǔ)“慢性腎臟疾病”或“ckd”在本文中互換地用于表示被定義為腎結(jié)構(gòu)或功能的異常的病癥，其存在超過(guò)3個(gè)月，這暗示著對(duì)于健康人而言其可以突然發(fā)生，且消退或變成慢性的(關(guān)于慢性腎臟疾病指南的評(píng)價(jià)和管理的臨床實(shí)踐指南(clinicalpracticeguidelineforthe評(píng)價(jià)ionandmanagementofchronickidneydiseaseguidelines，kdigo2012)。ckd是具有可變臨床表現(xiàn)的、影響腎結(jié)構(gòu)和功能的異質(zhì)障礙的一般術(shù)語(yǔ)，部分地與原因、嚴(yán)重程度和進(jìn)展速率有關(guān)(kidneyinternationalsupplements(2013)3，vii)。具體地，可以用下述標(biāo)準(zhǔn)限定ckd的定義和鑒別：1.對(duì)于處于較高進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)中的個(gè)體，和/或在測(cè)量會(huì)影響治療決策的情況下，2.認(rèn)識(shí)到gfr的小波動(dòng)是常見的且不一定指示進(jìn)展。3.基于以下的一項(xiàng)或多項(xiàng)(未分級(jí))限定ckd進(jìn)展：a.gfr種類(z90[g1]、60-89[g2]、45-59[g3a]、30-44[g3b]、15-29[g4]、o15[g5]ml/min/1.73m2)的下降。egfr的某種下降被定義為gfr種類的下降，伴有egfr從基線或終末期腎病(esrd，egfr＜15ml/min/1.73m2，腎替代療法(renalreplacementtherapy)或死亡或以上參數(shù)的復(fù)合體)的50％或更大下降。b.快速進(jìn)展被定義為每年超過(guò)-3.3％的egfr的持續(xù)下降。c.評(píng)估進(jìn)展的置信度隨著血清肌酸酐測(cè)量結(jié)果數(shù)目和隨訪持續(xù)時(shí)間增加而增加術(shù)語(yǔ)“生物樣品”意圖表示從受試者分離的生物流體及其分離物。它可以包括但不限于，血液樣品，例如，全血、血漿和血清樣品、唾液或尿樣品。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，生物樣品是尿樣品。術(shù)語(yǔ)“預(yù)后”在本文中用于表示患者的結(jié)果的預(yù)測(cè)，所述結(jié)果是關(guān)于他們的gfr是否以快速或緩慢的速率下降。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“快速進(jìn)展的預(yù)測(cè)”不一定由絕對(duì)應(yīng)答組成。它可以允許確定受試者中的慢性腎臟疾病的快速進(jìn)展的概率(風(fēng)險(xiǎn))，或者，它可以由這樣的應(yīng)答組成：所述應(yīng)答允許確定受試者中增加的快速進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)(與人群中ckd的快速進(jìn)展的平均風(fēng)險(xiǎn)相比)，而不是給出風(fēng)險(xiǎn)的精確概率。換而言之，根據(jù)本發(fā)明的方法被預(yù)測(cè)為快速進(jìn)展者的患者是處于增加的快速進(jìn)展者風(fēng)險(xiǎn)中的受試者。在某些實(shí)施方案中，所述預(yù)測(cè)被表達(dá)為統(tǒng)計(jì)值，包括p值，如從關(guān)于已經(jīng)評(píng)價(jià)的一種或多種生物標(biāo)志物中的每一種得到的表達(dá)值所計(jì)算出的。術(shù)語(yǔ)“快速進(jìn)展”特別地表示ckd的演化，如通過(guò)在遭受ckd的受試者(在本文中也稱為“快速進(jìn)展者”)中每年超過(guò)10％的基線測(cè)量腎小球?yàn)V過(guò)率(mgfr)的減小所測(cè)量的?？焖龠M(jìn)展者更可能進(jìn)展至終末期腎病(esrd)，該階段與顯著的發(fā)病率和死亡率風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)。因此，在本發(fā)明的方法的一個(gè)具體實(shí)施方案中，被預(yù)測(cè)為快速進(jìn)展的受試者是被預(yù)測(cè)每年減小超過(guò)10％的基線測(cè)量腎小球?yàn)V過(guò)率(mgfr)的受試者，例如如從初步測(cè)量結(jié)果所測(cè)得的(直到隨后約一年以后的時(shí)間)。相反，“緩慢進(jìn)展者”是每年減小小于10％的基線測(cè)量腎小球?yàn)V過(guò)率(mgfr)的受試者。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“早期預(yù)測(cè)”表示在ckd的早期階段在受試者中進(jìn)行的預(yù)測(cè)，例如在階段1或2(具有g(shù)fr>60ml/mn/1，73m233)、階段3，或甚至其尚未被診斷為具有ckd，例如根據(jù)白蛋白尿、蛋白尿或肌酸酐濃度常規(guī)診斷方法。本發(fā)明的預(yù)后方法對(duì)于受試者中ckd的快速進(jìn)展的早期預(yù)測(cè)而言是特別適當(dāng)?shù)?。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“生物學(xué)標(biāo)志物”或“生物標(biāo)志物”表示例如患者的病理學(xué)狀態(tài)的指示劑，其可以在患者的生物樣品中檢測(cè)到。生物標(biāo)志物包括、但不限于基于dna、rna、蛋白、碳水化合物或糖脂的分子標(biāo)志物。術(shù)語(yǔ)“蛋白”與術(shù)語(yǔ)“多肽”互換使用，且以它的最寬含義表示兩個(gè)或更多個(gè)亞基氨基酸的化合物。所述亞基可以通過(guò)肽鍵連接。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“試劑盒”表示可以單獨(dú)地或在單個(gè)容器內(nèi)提供的前述組分的集合。所述容器還包含用于實(shí)現(xiàn)本公開內(nèi)容的方法的說(shuō)明書。這些說(shuō)明書可以呈手冊(cè)的形式，或可以由計(jì)算機(jī)程序代碼提供，所述計(jì)算機(jī)程序代碼當(dāng)在計(jì)算機(jī)或數(shù)據(jù)處理裝置上執(zhí)行時(shí)能夠進(jìn)行在本公開內(nèi)容的方法中提及的對(duì)比并相應(yīng)地建立診斷。所述計(jì)算機(jī)程序代碼可以提供在數(shù)據(jù)存儲(chǔ)介質(zhì)或裝置諸如光存儲(chǔ)介質(zhì)(例如，光盤)上或直接提供在計(jì)算機(jī)或數(shù)據(jù)處理裝置上。用在本發(fā)明的方法中的預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物在下文中通過(guò)它們的首字母簡(jiǎn)略詞、全名和uniprotkb/swissprote命名法和seqidno來(lái)描述預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物。表1：預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物的列表1http://www.uniprot.org/在本發(fā)明中，當(dāng)提及生物標(biāo)志物時(shí)，它特別表示所述生物標(biāo)志物的蛋白和/或它的翻譯后修飾。根據(jù)如在表1中所示的對(duì)應(yīng)參考或seqidno1-16，可以在http://www.uniprot.org找到對(duì)應(yīng)生物標(biāo)志物的蛋白序列。當(dāng)然，在用于本發(fā)明中的所述生物標(biāo)志物的定義中包括所述蛋白序列的任何天然變異。定量預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物的表達(dá)本發(fā)明的預(yù)測(cè)方法包括評(píng)價(jià)生物樣品中的一種或多種預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物的表達(dá)的步驟。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“評(píng)價(jià)”通常包括以下步驟：(a)定量得自所述受試者的生物樣品中的每種選定預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物的表達(dá)以得到表達(dá)值，和(b)將所述預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物的得到的表達(dá)值與對(duì)應(yīng)對(duì)照值進(jìn)行對(duì)比，其中所述表達(dá)值相對(duì)于各個(gè)對(duì)照值的差異指示所述受試者處于增加的快速進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)中。通過(guò)確定受試者的生物樣品(例如血清或尿樣品)中的預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物的基因或蛋白表達(dá)，可以定量生物標(biāo)志物的表達(dá)。所述定量可以是相對(duì)的(通過(guò)將生物標(biāo)志物的量與例如含有已知量的生物標(biāo)志物的對(duì)照進(jìn)行對(duì)比，并檢測(cè)相對(duì)于該對(duì)照而言“更高”或“更低”的量)或更精確的，至少確定相對(duì)于已知對(duì)照量的比例量。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，通過(guò)檢查受試者的生物樣品(例如尿樣品)中的至少一種或多種預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物的蛋白表達(dá)，可以定量生物標(biāo)志物的表達(dá)。在具體實(shí)施方案中，在受試者的生物樣品(例如尿樣品)中定量至少egf、mcp1和tgfα的蛋白表達(dá)，和任選地，ngal的蛋白表達(dá)。多種用于檢測(cè)這樣的生物樣品中的蛋白表達(dá)水平的方法是本領(lǐng)域已知的，包括多種免疫測(cè)定方法。它們包括、但不限于：放射免疫測(cè)定、elisa(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定)、“夾心”免疫測(cè)定、免疫放射測(cè)定、原位免疫測(cè)定(使用例如膠體金、酶或放射性同位素標(biāo)記)、蛋白質(zhì)印跡分析、免疫沉淀測(cè)定、免疫熒光測(cè)定、流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)、免疫組織化學(xué)、共焦顯微術(shù)、酶測(cè)定、表面等離子體共振和page-sds。確定蛋白水平涉及例如測(cè)量在抗體和得自患者的樣品中的生物標(biāo)志物的多肽之間發(fā)生的任何免疫特異性結(jié)合的量，所述抗體選擇性地識(shí)別和結(jié)合所述多肽。這些測(cè)定還可以包括標(biāo)記的抗體與靶生物標(biāo)志物的直接結(jié)合。夾心測(cè)定屬于最有用的且常用的測(cè)定。存在夾心測(cè)定技術(shù)的許多變化，且都意圖被本發(fā)明包括。簡(jiǎn)而言之，在一種典型的正向測(cè)定中，將未標(biāo)記的抗體固定在固體基底上，并使要試驗(yàn)的樣品與結(jié)合的分子接觸。合適的溫育時(shí)段以后，對(duì)于足以允許形成抗體-抗原復(fù)合物的時(shí)間段，然后加入第二抗體(其對(duì)抗原是特異性的，但是用能夠產(chǎn)生可檢測(cè)信號(hào)的報(bào)告分子標(biāo)記)并溫育，從而允許足以形成抗體-抗原-經(jīng)標(biāo)記的抗體的另一種復(fù)合物的時(shí)間。將任何未反應(yīng)的材料洗掉，并通過(guò)觀察由報(bào)告分子產(chǎn)生的信號(hào)來(lái)確定抗原的存在。結(jié)果可以是定性的(通過(guò)可視信號(hào)的簡(jiǎn)單觀察)，或者可以通過(guò)與含有已知量的生物標(biāo)志物的對(duì)照樣品對(duì)比來(lái)定量。對(duì)正向測(cè)定的變化包括同時(shí)測(cè)定，其中將樣品和經(jīng)標(biāo)記的抗體同時(shí)加給結(jié)合的抗體。這些技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的，包括將容易明白的任何微小變化。在一種典型的正向夾心測(cè)定中，將對(duì)生物標(biāo)志物具有特異性的第一抗體共價(jià)地或被動(dòng)地結(jié)合至固體表面。所述結(jié)合過(guò)程是本領(lǐng)域眾所周知的，且一般由交聯(lián)、共價(jià)結(jié)合或物理吸附組成，在試驗(yàn)樣品的制品中洗滌聚合物-抗體復(fù)合物。然后向固相復(fù)合物添加要試驗(yàn)的樣品的等分試樣，并在合適的條件(例如從室溫到40℃，諸如在25℃和32℃之間，包含端點(diǎn))下溫育足夠的時(shí)間段(例如2-40分鐘或者如果更方便的話，過(guò)夜)，所述條件和時(shí)間段允許存在于抗體中的任何亞基的結(jié)合。在該溫育時(shí)段以后，將抗體亞基固相洗滌并干燥，并與對(duì)生物標(biāo)志物的一部分特異性的第二抗體一起溫育。所述第二抗體與報(bào)告分子連接，所述報(bào)告分子用于指示第二抗體與分子標(biāo)志物的結(jié)合。一種替代方法涉及固定樣品中的預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物，并然后將固定的生物標(biāo)志物暴露于特異性抗體，所述特異性抗體可能用或未用報(bào)告分子標(biāo)記。取決于生物標(biāo)志物靶標(biāo)的量和報(bào)告分子信號(hào)的強(qiáng)度，結(jié)合的生物標(biāo)志物靶標(biāo)可以通過(guò)用抗體直接標(biāo)記來(lái)檢測(cè)。可替換地，將對(duì)第一抗體特異性的第二標(biāo)記抗體暴露于靶標(biāo)-第一抗體復(fù)合物以形成靶標(biāo)-第一抗體-第二抗體三元復(fù)合物。通過(guò)報(bào)告分子發(fā)射的信號(hào)來(lái)檢測(cè)復(fù)合物。在本說(shuō)明書中使用的“報(bào)告分子”是指這樣的分子，其通過(guò)它的化學(xué)性質(zhì)提供分析上可鑒別的信號(hào)，所述信號(hào)允許檢測(cè)抗原結(jié)合的抗體。在這類測(cè)定中最常用的報(bào)告分子是酶、熒光團(tuán)或含有放射性核素的分子(即放射性同位素)和化學(xué)發(fā)光分子。在酶免疫測(cè)定或elisa測(cè)定的情況下，酶通?？梢跃Y合至第二抗體，通常借助于戊二醛或高碘酸鹽。但是，如容易明白的，存在多種不同的綴合技術(shù)，它們是技術(shù)人員容易得到的。常用的酶尤其包括辣根過(guò)氧化物酶、葡萄糖氧化酶、-半乳糖苷酶和堿性磷酸酶。通常選擇要與特異性酶一起使用的底物，用于通過(guò)對(duì)應(yīng)酶水解后產(chǎn)生可檢測(cè)的顏色變化。合適的酶的例子包括堿性磷酸酶和過(guò)氧化物酶。也可能采用發(fā)熒光的底物(其產(chǎn)生熒光產(chǎn)物)而不是上述的生色底物。在所有情況下，將酶-標(biāo)記的抗體加給第一抗體-分子標(biāo)志物復(fù)合物，允許結(jié)合，然后將多余的試劑洗掉。然后將含有適當(dāng)?shù)孜锏娜芤杭咏o抗體-抗原-抗體的復(fù)合物。所述底物將與連接至第二抗體的酶反應(yīng)，從而產(chǎn)生定性的可視信號(hào)，其可以進(jìn)一步定量(經(jīng)常通過(guò)分光光度計(jì)法)以給出存在于樣品中的生物標(biāo)志物的量的指示。可替代地，可以將熒光化合物(諸如熒光素和羅丹明)與抗體化學(xué)偶聯(lián)而不改變它們的結(jié)合能力。當(dāng)通過(guò)用特定波長(zhǎng)的光照射來(lái)活化時(shí)，熒光染料-標(biāo)記的抗體會(huì)吸收光能，誘導(dǎo)分子中的狀態(tài)至興奮性，隨后在用光學(xué)顯微鏡可視地檢測(cè)的特征性顏色發(fā)射光。如在eia中一樣，允許熒光標(biāo)記的抗體結(jié)合第一抗體-分子標(biāo)志物復(fù)合物。洗掉未結(jié)合的試劑以后，然后將剩余的三元復(fù)合物暴露于適當(dāng)波長(zhǎng)的光，觀察到的熒光指示目標(biāo)分子標(biāo)志物的存在。免疫熒光和eia技術(shù)都在本領(lǐng)域中非常好地確立。但是，也可以采用其它報(bào)告分子，諸如放射性同位素、化學(xué)發(fā)光的或生物發(fā)光的分子。在本發(fā)明的預(yù)測(cè)方法的具體實(shí)施方案中，所述定量步驟因而允許得到在生物樣品中試驗(yàn)的每種生物標(biāo)志物的“表達(dá)值”用于用在對(duì)比步驟中。為了容易用在對(duì)比步驟中，所述表達(dá)值可以由將絕對(duì)表達(dá)水平值與參考值對(duì)比以后得到的標(biāo)準(zhǔn)化(相對(duì))值組成，所述參考值由例如生物樣品中的參考蛋白的表達(dá)水平值組成。例如，在一個(gè)具體實(shí)施方案中，可以使用肌酸酐水平將表達(dá)值調(diào)節(jié)至標(biāo)準(zhǔn)化的表達(dá)值。經(jīng)?？梢酝ㄟ^(guò)尿中的酶促或比色試驗(yàn)系統(tǒng)來(lái)確定肌酸酐。將每種生物標(biāo)志物的表達(dá)值與對(duì)應(yīng)對(duì)照值進(jìn)行對(duì)比本發(fā)明的方法是基于：定量受試者的生物樣品中的一種或多種預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物的表達(dá)，如上所述，和將所述生物標(biāo)志物的每個(gè)表達(dá)值與對(duì)應(yīng)對(duì)照值進(jìn)行對(duì)比。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“對(duì)比”表示對(duì)應(yīng)參數(shù)或值的對(duì)比，例如將絕對(duì)水平值與絕對(duì)對(duì)照水平值進(jìn)行對(duì)比，其中將濃度與對(duì)照濃度進(jìn)行對(duì)比，并將標(biāo)準(zhǔn)化的值與對(duì)應(yīng)的對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)化的值進(jìn)行對(duì)比。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“對(duì)照值”表示對(duì)照受試者或?qū)φ帐茉囌呒现械纳飿?biāo)志物的表達(dá)值，其允許評(píng)估個(gè)體是否被預(yù)測(cè)出ckd快速進(jìn)展。根據(jù)一些實(shí)施方案，基于來(lái)自對(duì)照受試者或?qū)φ帐茉囌呒系纳飿?biāo)志物表達(dá)來(lái)確定對(duì)照值，所述對(duì)照受試者已經(jīng)被表征為快速進(jìn)展者、緩慢進(jìn)展者或健康受試者。適用于特定受試者的對(duì)照值可以隨多種生理學(xué)參數(shù)(諸如年齡、性別或亞群)、以及用于定量本文中提及的生物標(biāo)志物的試驗(yàn)形式、樣品和配體而變化。這些因素和在確定對(duì)照值時(shí)考慮它們的方式通常是本領(lǐng)域中已知的。在某些實(shí)施方案中，通過(guò)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)方法，基于生物標(biāo)志物的平均值(average或mean)或中位值，可以為受試者組群(如在實(shí)施例中說(shuō)明的)計(jì)算對(duì)照值。相應(yīng)地，要用于本發(fā)明的前述方法的對(duì)照值(即允許鑒別處于較高快速進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)中的個(gè)體的閾值)可以是如在對(duì)照受試者組中定量的生物標(biāo)志物蛋白表達(dá)的平均/中位表達(dá)值(或標(biāo)準(zhǔn)化的(相對(duì))平均/中位值)。在男性和女性中的每種預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物的這樣的標(biāo)準(zhǔn)化的中位值的例子在下面實(shí)施例中給出在表3中(所述值已經(jīng)用尿肌酸酐濃度調(diào)節(jié)至標(biāo)準(zhǔn)化值)。取決于將用于本發(fā)明的方法的定量方法和預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物，還可以通過(guò)例行實(shí)驗(yàn)確定所述對(duì)照值。例如，所述對(duì)照值對(duì)應(yīng)于針對(duì)患者的緩慢進(jìn)展者組觀察到的表達(dá)(任選地標(biāo)準(zhǔn)化的)平均/中位值，且當(dāng)表達(dá)(任選地標(biāo)準(zhǔn)化的)值在統(tǒng)計(jì)上不同于對(duì)照值(例如相對(duì)于對(duì)照值增加，或相對(duì)于對(duì)照值下降)時(shí)，預(yù)測(cè)患者是快速進(jìn)展者?？商鎿Q地，所述對(duì)照值對(duì)應(yīng)于針對(duì)快速進(jìn)展者患者觀察到的表達(dá)水平值，且當(dāng)表達(dá)水平值在統(tǒng)計(jì)上沒(méi)有不同于對(duì)照值時(shí)，預(yù)測(cè)患者是快速進(jìn)展者。例如，在本發(fā)明的一個(gè)具體預(yù)測(cè)方法中，所述評(píng)價(jià)步驟包括(a)定量得自所述受試者的生物樣品中的一種或多種選定生物標(biāo)志物的表達(dá)以得到每種生物標(biāo)志物的表達(dá)值，和(b)將在步驟(a)處得到的所述每種生物標(biāo)志物的表達(dá)值與對(duì)應(yīng)對(duì)照值進(jìn)行對(duì)比，其中低于對(duì)照值的egf的表達(dá)值和/或高于在對(duì)照值的mcp1的表達(dá)值和/或高于在對(duì)照值的tgfα的表達(dá)值和/或高于在對(duì)照值的ngal的表達(dá)值指示，所述受試者處于增加的ckd的快速進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)中。在本發(fā)明的方法的步驟(b)中提及的對(duì)比可以手工地或在計(jì)算機(jī)輔助下進(jìn)行。對(duì)于計(jì)算機(jī)輔助的對(duì)比，可以通過(guò)計(jì)算機(jī)程序?qū)⒈磉_(dá)值與存儲(chǔ)在數(shù)據(jù)庫(kù)中的對(duì)照值進(jìn)行對(duì)比。所述計(jì)算機(jī)程序可以進(jìn)一步評(píng)價(jià)對(duì)比的結(jié)果，即自動(dòng)地以合適的輸出形式提供期望的評(píng)估。如在實(shí)施例中和更具體地在下面實(shí)施例的表5中所示，對(duì)于預(yù)測(cè)患者的ckd的快速進(jìn)展，根據(jù)本發(fā)明的2、3、4或5種預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物的組合可以是統(tǒng)計(jì)上相關(guān)的。本發(fā)明的方法包括本發(fā)明的2、3、4、5種或更多種預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物的任意組合。所述對(duì)比步驟可以不一定包括每種生物標(biāo)志物的表達(dá)值與它們的對(duì)應(yīng)對(duì)照值的單獨(dú)對(duì)比。在具體實(shí)施方案中，可以如下得到多生物標(biāo)志物評(píng)分值：將表達(dá)值或它們的標(biāo)準(zhǔn)化值組合在一起，和與對(duì)應(yīng)的多生物標(biāo)志物評(píng)分對(duì)照值進(jìn)行對(duì)比。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，至少為患者中的三種下述生物標(biāo)志物得到表達(dá)值：表皮生長(zhǎng)因子(egf)、單核細(xì)胞趨化蛋白1(mcp1)和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(tgf-α)，和任選地，得到ngal的表達(dá)值。為了改善根據(jù)本發(fā)明的方法的統(tǒng)計(jì)預(yù)測(cè)，對(duì)于慢性腎疾病進(jìn)展，人們還可以包括白蛋白尿、蛋白尿、血漿或血清肌酸酐濃度和/或人口統(tǒng)計(jì)風(fēng)險(xiǎn)因素。如本文中使用的，所述人口統(tǒng)計(jì)風(fēng)險(xiǎn)因素包括年齡、身體質(zhì)量指數(shù)、平均動(dòng)脈壓、性別、黑人/非洲人種族劃分、糖尿病、心血管疾病史、吸煙者、狀態(tài)、血管緊張素途徑阻斷的未使用、泌尿系感染史、血尿、腎臟疾病的家族史。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種用于預(yù)測(cè)受試者中的慢性腎臟疾病的快速進(jìn)展的方法，所述方法包括至少評(píng)價(jià)egf、mcp1和tgf-α的表達(dá)，和任選地評(píng)價(jià)ngal的表達(dá)，且其中從所述受試者進(jìn)一步確定白蛋白尿或蛋白尿。根據(jù)本領(lǐng)域中眾所周知的方法，可以從相同生物樣品或在不同的生物樣品中確定白蛋白尿或蛋白尿。在具體實(shí)施方案中，所述預(yù)測(cè)方法包括評(píng)價(jià)至少表皮生長(zhǎng)因子(egf)、單核細(xì)胞趨化蛋白1(mcp1)和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(tgf-α)和至少一種或多種下述生物標(biāo)志物的表達(dá)：gdf15、fabp1、半胱氨酸蛋白酶抑制劑c、纖連蛋白、kim1、ngal、timp1、尿調(diào)制蛋白、骨橋蛋白、il6、mmp9、lif和vegf-a。在具體實(shí)施方案中，所述預(yù)測(cè)方法包括評(píng)價(jià)尿樣品中egf、tgf-α和mcp1的特定生物標(biāo)志物組合的表達(dá)。在其它具體實(shí)施方案中，所述預(yù)測(cè)方法包括評(píng)價(jià)尿樣品中egf、tgf-α、mcp1和ngal的特定生物標(biāo)志物組合的表達(dá)。在其它具體實(shí)施方案中，所述預(yù)測(cè)方法包括評(píng)價(jià)尿樣品中egf、tgf-α、mcp1和ngal的特定生物標(biāo)志物組合的表達(dá)。在其它具體實(shí)施方案中，所述預(yù)測(cè)方法包括評(píng)價(jià)尿樣品中egf、tgf-α、mcp1和fabp1的特定生物標(biāo)志物組合的表達(dá)。在其它具體實(shí)施方案中，所述預(yù)測(cè)方法包括評(píng)價(jià)尿樣品中egf、tgf-α、mcp1和半胱氨酸蛋白酶抑制劑c的特定生物標(biāo)志物組合的表達(dá)。在其它具體實(shí)施方案中，所述預(yù)測(cè)方法包括評(píng)價(jià)尿樣品中egf、tgf-α、mcp1和纖連蛋白的特定生物標(biāo)志物組合的表達(dá)。在其它具體實(shí)施方案中，所述預(yù)測(cè)方法包括評(píng)價(jià)尿樣品中egf、tgf-α、mcp1和kim1的特定生物標(biāo)志物組合的表達(dá)。在其它具體實(shí)施方案中，所述預(yù)測(cè)方法包括評(píng)價(jià)尿樣品中egf、tgf-α和timp1的特定生物標(biāo)志物組合的表達(dá)。在與以上具體實(shí)施方案組合的其它具體實(shí)施方案中，所述預(yù)測(cè)方法還包括評(píng)價(jià)尿樣品中的白蛋白，無(wú)論是與其它預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物(來(lái)自相同生物樣品)一起還是單獨(dú)地(來(lái)自不同樣品)。測(cè)定生物標(biāo)志物表達(dá)和ckd的治療本發(fā)明還涉及患者分級(jí)方法。具體地，根據(jù)本發(fā)明的方法可以選擇在增加的ckd的快速進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)下鑒別出的患者用于ckd的治療性處理。因此，本發(fā)明還包括包含以下步驟的方法：(i)根據(jù)上面定義的預(yù)測(cè)方法鑒別患者是否處于增加的ckd的快速進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)中，和，(ii)用適合用于治療ckd的治療劑治療在步驟(i)中鑒別出的所述快速進(jìn)展者患者。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“治療”或表示措施，其中目的是阻止或減慢(減輕)靶向的病理性病癥或障礙、或減慢或解除所述障礙的一種或多種征狀。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，如果在接受治療劑以后，患者顯示出以下一種或多種的可觀察的和/或可測(cè)量的從基線的下降或變化和/或可測(cè)量的隨時(shí)間從基線的變化速率(例如經(jīng)歷3個(gè)月[12周]或6個(gè)月[24周]或9個(gè)月[36周]或12個(gè)月[1年、52周]，那么受試者被“成功地治療”慢性腎臟疾?。簃gfr，在1年中mgfr的減小百分比，egfr，egfr的減小百分比。根據(jù)以上方法用于治療慢性腎臟疾病的快速進(jìn)展者的治療劑可以包括、但不限于(i)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(angiotensinconvertingenzymeinhibitor，acei)例如，卡托普利(capoten)、佐芬普利、依那普利(vasotec/renitec)、雷米普利(altace/prilace/ramace/ramiwin/triatec/tritace)、喹那普利(accupril)、培哚普利(coversyl/aceon/perindo)、賴諾普利(listril/lopril/novatec/prinivil/zestril)、貝那普利(lotensin)、咪達(dá)普利(tanatril)、群多普利(mavik/odrik/gopten)、西拉普利(inhibace)和含有膦酸酯的藥劑諸如福辛普利(fositen/monopril)或(ii)血管緊張素受體阻滯劑(arb)諸如氯沙坦(cozaar)、坎地沙坦(atacand)、纈沙坦(diovan)、厄貝沙坦(avapro)、替米沙坦(micardis)、依普羅沙坦(teveten)、奧美沙坦(benicar/olmetes)和阿齊沙坦(edarbi)。用于治療慢性腎臟疾病的合適治療劑向所述患者的施用可以在療程中連續(xù)地或間歇地在一個(gè)劑量中實(shí)現(xiàn)。確定治療的最有效施用方式和劑量的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的，且將隨用于治療的組合物、治療的目的和正在治療的受試者而變化。可以進(jìn)行單次或多次施用，劑量水平和模式由治療醫(yī)師選擇。可以根據(jù)經(jīng)驗(yàn)調(diào)整合適的劑量制劑和施用所述藥劑的方法。如果患者被預(yù)測(cè)為緩慢進(jìn)展者，替代療法可以是優(yōu)選的。在施用合適的治療劑之前，可以應(yīng)用其它診斷方法來(lái)進(jìn)一步驗(yàn)證所述患者中的快速進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)。本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及監(jiān)測(cè)用于治療慢性腎臟疾病的治療在患者中的效力的體外方法，所述方法包括評(píng)價(jià)在上面表1中定義的一種或多種預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物的表達(dá)。具體地，可以用在本發(fā)明的監(jiān)測(cè)方法中的所述預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物選自表皮生長(zhǎng)因子(egf)、單核細(xì)胞趨化蛋白1(mcp1)和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(tgf-α)，和任選地，ngal。在這樣的監(jiān)測(cè)方法中，所述評(píng)價(jià)步驟基本上與上面關(guān)于本發(fā)明的預(yù)測(cè)方法所述相同地進(jìn)行，但是所述受試者是需要治療ckd的受試者，且所述預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物現(xiàn)在用作替代標(biāo)志物，即用作疾病階段或mgfr參數(shù)的預(yù)測(cè)劑。所述評(píng)價(jià)步驟可以例如在治療之前、和在治療過(guò)程中或結(jié)束時(shí)執(zhí)行，且每種生物標(biāo)志物的表達(dá)水平的演化/變化指示對(duì)所述治療的好或差應(yīng)答。這樣的方法可以用于例如監(jiān)測(cè)管理機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)的ckd治療在患者中的效力，和/或調(diào)整治療的劑量或長(zhǎng)度?？商鎿Q地，這樣的方法可以用于監(jiān)測(cè)候選治療在臨床研究中的效力。本發(fā)明的試劑盒本發(fā)明還涉及用于本發(fā)明的預(yù)測(cè)或監(jiān)測(cè)方法的試劑盒。具體地，本發(fā)明的一個(gè)目的由用于預(yù)測(cè)受試者中(例如在生物樣品中，更具體地在受試者的尿樣品中)的慢性腎臟疾病的快速進(jìn)展的試劑盒組成，所述試劑盒包含用于定量至少下述生物標(biāo)志物的蛋白表達(dá)的裝置：表皮生長(zhǎng)因子(egf)、單核細(xì)胞趨化蛋白1(mcp1)和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(tgf-α)。本發(fā)明的另一個(gè)目的由用于監(jiān)測(cè)治療慢性腎臟疾病的治療的效力的試劑盒組成，所述監(jiān)測(cè)試劑盒包含用于定量至少下述預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物的蛋白表達(dá)的裝置：表皮生長(zhǎng)因子(egf)、單核細(xì)胞趨化蛋白1(mcp1)和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(tgf-α)。在所述試劑盒的某些實(shí)施方案中，它們包含用于檢測(cè)和/或定量下述預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物中的2種、3種或全部的裝置：egf、mcp1、tgf-α和ngal。本發(fā)明的監(jiān)測(cè)或預(yù)測(cè)試劑盒因而可以包括多種試劑，其中每一種能夠特異性地結(jié)合預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物之一的蛋白。用于與蛋白生物標(biāo)志物特異性地結(jié)合的合適試劑包括、但不限于抗體。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“抗體”以較寬含義使用，且包括完整抗體和任何抗原結(jié)合片段或衍生物(即，“抗原結(jié)合部分”)。它可以具體地涵蓋單克隆抗體、多克隆抗體、多特異性抗體、它們的單鏈?？乖Y(jié)合片段也包括fab、fab’、(fab’)2和它們的衍生物，包括vh和vl片段的組合或fv抗體，fv是含有完全抗原識(shí)別和結(jié)合部位的最小抗體片段。它還包括嵌合抗體、人源化抗體或人抗體。天然存在的“抗體”是至少包含通過(guò)二硫鍵互聯(lián)的兩個(gè)重(h)鏈和兩個(gè)輕(l)鏈的糖蛋白。每個(gè)重鏈包含重鏈可變區(qū)(在本文中縮寫為vh)和重鏈恒定區(qū)。所述重鏈恒定區(qū)包含三個(gè)結(jié)構(gòu)域ch1、ch2和ch3。每個(gè)輕鏈包含輕鏈可變區(qū)(在本文中縮寫為vl)和輕鏈恒定區(qū)。所述輕鏈恒定區(qū)包含一個(gè)結(jié)構(gòu)域cl。所述vh和vl區(qū)域可以進(jìn)一步細(xì)分成被稱作互補(bǔ)性決定區(qū)(cdr)的高變異性區(qū)域，其散布有被稱作框架區(qū)(fr)的更保守的區(qū)域。每個(gè)vh和vl由按照以下順序從氨基端至羧基端排列的三個(gè)cdr和四個(gè)fr組成：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、fr4。重鏈和輕鏈的可變區(qū)含有與抗原相互作用的結(jié)合結(jié)構(gòu)域。本文中使用的“分離的抗體”表示基本上不含有具有不同抗原特異性的其它抗體的抗體。此外，分離的抗體可以基本上不含有其它細(xì)胞物質(zhì)和/或化學(xué)物質(zhì)。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“單克隆抗體”和“單克隆抗體組合物”表示單一分子組成的抗體分子的制品。單克隆抗體組合物表現(xiàn)出對(duì)特定表位的單一結(jié)合特異性和親和力。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“重組人抗體”包括通過(guò)重組方式制備、表達(dá)、建立或分離的所有人抗體，諸如從轉(zhuǎn)基因的或轉(zhuǎn)染色體的(對(duì)于人免疫球蛋白基因而言)動(dòng)物(例如，小鼠)或從其制備的雜交瘤分離的抗體，從被轉(zhuǎn)化成表達(dá)人抗體的宿主細(xì)胞(例如，從轉(zhuǎn)染瘤)分離的抗體，從重組的組合人抗體文庫(kù)分離的抗體，和通過(guò)涉及將人免疫球蛋白基因序列的全部或部分剪接至其它dna序列的任意其它方式制備、表達(dá)、建立或分離的抗體。這樣的重組人抗體具有可變區(qū)，其中框架和cdr區(qū)域源自人種系免疫球蛋白序列。但是，在某些實(shí)施方案中，可以對(duì)這樣的重組人抗體進(jìn)行體外誘變(或當(dāng)使用人ig序列的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物時(shí)，體內(nèi)體細(xì)胞誘變)，且因而重組抗體的vh和vl區(qū)域的氨基酸序列是這樣的序列：其盡管源自人種系vh和vl序列和與人種系vh和vl序列有關(guān)，但是不可能天然存在于體內(nèi)人抗體種系譜系內(nèi)。本文中使用的“同種型”表示由重鏈恒定區(qū)基因提供的抗體類別(例如，igm、ige、igg諸如igg1或igg4)。短語(yǔ)“識(shí)別抗原的抗體”和“對(duì)抗原特異性的抗體”和“與抗原特異性地反應(yīng)的抗體”在本文中與術(shù)語(yǔ)“特異性地結(jié)合抗原的抗體”可互換地使用。本文中使用的“特異性地結(jié)合蛋白生物標(biāo)志物”的抗體或蛋白意圖表示以100nm或更小、10nm或更小、1nm或更小、100pm或更小或10pm或更小的kd結(jié)合所述蛋白生物標(biāo)志物的抗體或蛋白。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“kassoc”或“ka”意圖表示特定抗體-抗原相互作用的結(jié)合速率，而本文中使用的術(shù)語(yǔ)“kdis”或“kd”意圖表示特定抗體-抗原相互作用的解離速率。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“kd”意圖表示解離常數(shù)，其得自kd與ka的比率(即kd/ka)，且表達(dá)為摩爾濃度(m)。使用本領(lǐng)域中充分確立的方法可以確定抗體的kd值。一種用于確定抗體的kd的方法是通過(guò)使用表面等離子體共振或使用生物傳感器系統(tǒng)諸如系統(tǒng)。本發(fā)明的預(yù)測(cè)或監(jiān)測(cè)試劑盒還可以包括用于在免疫測(cè)定中檢測(cè)或定量捕獲抗體的抗體。例如，本發(fā)明的監(jiān)測(cè)或預(yù)測(cè)試劑盒可以包括用于在免疫測(cè)定中檢測(cè)或定量生物標(biāo)志物蛋白/抗體復(fù)合物的第二抗體。因此，所述監(jiān)測(cè)或預(yù)測(cè)試劑盒包含(i)一組未標(biāo)記的抗體，其各自結(jié)合一種或多種具體地選自表皮生長(zhǎng)因子(egf)、單核細(xì)胞趨化蛋白1(mcp1)和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(tgf-α)的預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物，和/或(ii)一組標(biāo)記的抗體，其各自結(jié)合一種或多種具體地選自表皮生長(zhǎng)因子(egf)、單核細(xì)胞趨化蛋白1(mcp1)和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(tgf-α)的預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物，可替換地，所述試劑盒可以包含：(i)第一組未標(biāo)記的抗體，其各自結(jié)合一種或多種具體地選自表皮生長(zhǎng)因子(egf)、單核細(xì)胞趨化蛋白1(mcp1)和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(tgf-α)的預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物，(ii)第二組標(biāo)記的抗體，其結(jié)合所述第一組標(biāo)記的抗體以形成生物標(biāo)志物/第一抗體/第二抗體復(fù)合物。在本發(fā)明的試劑盒中使用的標(biāo)記的抗體通常可以包含與報(bào)告分子綴合的抗體。在如上定義的試劑盒的具體實(shí)施方案中，所述標(biāo)記的抗體是與酶綴合的抗體，所述酶是例如用于elisa測(cè)定的酶，諸如尤其是辣根過(guò)氧化物酶、葡萄糖氧化酶、-半乳糖苷酶和堿性磷酸酶。所述試劑盒還可以包括這樣的酶的對(duì)應(yīng)底物?？商鎿Q地，所述標(biāo)記的抗體是與熒光化合物(例如，氟化熒光素或羅丹明)綴合的抗體。如上定義的試劑盒還可以包括結(jié)合ngal的抗體(未標(biāo)記的和/或標(biāo)記的)。任選地，本發(fā)明的所述監(jiān)測(cè)或預(yù)測(cè)試劑盒還可以包含用于檢測(cè)和/或定量一種或多種參考(對(duì)照)標(biāo)志物的裝置，所述參考(對(duì)照)標(biāo)志物是例如與無(wú)所不在地表達(dá)的蛋白對(duì)應(yīng)的標(biāo)志物或ckd的其它生物標(biāo)志物(諸如肌酸酐或白蛋白)。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，用在免疫測(cè)定中的本發(fā)明的試劑盒至少包含：(i)對(duì)表皮生長(zhǎng)因子(egf)特異性的抗體；(ii)對(duì)單核細(xì)胞趨化蛋白1(mcp1)特異性的抗體；和，(iii)對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(tgf-α)特異性的抗體。用在本發(fā)明的試劑盒中的所述抗體可以固定在支持物上，所述支持物是例如玻璃或聚合物，更具體地是選自纖維素、聚丙烯酰胺、尼龍、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯的聚合物。所述固體支持物可以呈試管、珠子、微量培養(yǎng)板的圓盤或適合用于進(jìn)行免疫測(cè)定的任意其它表面的形式。本發(fā)明的預(yù)測(cè)試劑盒和監(jiān)測(cè)試劑盒可以任選地包含可用于執(zhí)行本發(fā)明的方法的另外組分。作為例子，所述試劑盒可以包含適合于抗體與蛋白(所述抗體與它特性地結(jié)合)的結(jié)合的流體(例如緩沖液)、一個(gè)或多個(gè)樣品隔室、洗滌反應(yīng)物以除去非特異性結(jié)合和描述本發(fā)明的預(yù)測(cè)或監(jiān)測(cè)方法的性能的指導(dǎo)材料等。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供了適合用于進(jìn)行本發(fā)明的預(yù)測(cè)或監(jiān)測(cè)方法的裝置，所述裝置包含：a)分析單元，其包含特異性地結(jié)合生物標(biāo)志物(例如如上面在試劑盒中描述的抗體)的檢測(cè)裝置的組合，所述分析單元適合用于在體外使來(lái)自受試者的樣品與檢測(cè)劑接觸；b)評(píng)價(jià)單元，其包括計(jì)算裝置，所述計(jì)算裝置具有數(shù)據(jù)庫(kù)和在所述數(shù)據(jù)庫(kù)上的計(jì)算機(jī)執(zhí)行的算法，所述計(jì)算機(jī)執(zhí)行的算法當(dāng)由所述計(jì)算裝置執(zhí)行時(shí)確定來(lái)自受試者的樣品(例如，尿樣品)中的一種或多種預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物的量，并將確定的所述一種或多種預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物的量與對(duì)應(yīng)對(duì)照值進(jìn)行對(duì)比，并且如果所述一種或多種預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物的量顯著不同于(例如顯著大于或低于)對(duì)照值，則提供快速進(jìn)展的預(yù)測(cè)。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述數(shù)據(jù)庫(kù)還包括每種預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物的對(duì)照值。實(shí)施例方法nephrotest組群方案從nephrotest組群募集患者，所述nephrotest組群自它在2000年開始以來(lái)迄今為止包括1825位用血漿和/或尿樣品測(cè)量mgfr的患者。所述nephrotest組群由來(lái)自巴黎的三個(gè)大腎臟病學(xué)中心européengeorgespompidou、bichat和tenon的患者組成。所述組群的包括標(biāo)準(zhǔn)是具有任何階段的ckd的同意成年患者。排除標(biāo)準(zhǔn)是已經(jīng)處于任何形式的腎替代療法的患者和懷孕患者。所述方案中的尿收集生物庫(kù)開始于2009年。我們分析了來(lái)自229位患者的數(shù)據(jù)，在他們中存在儲(chǔ)存的尿r收集和2次或更多次隨時(shí)間的并行mgfr以便評(píng)估疾病進(jìn)展。組群中的這些患者從第一次尿收集的時(shí)間開始的中值隨訪時(shí)間是21.6(iqr，13.6-24.7)個(gè)月，且這些患者中的57位從第一次尿收集時(shí)間具有至多3次連續(xù)mgfr。分析了來(lái)自這229位患者的第一次尿收集。從患者收集的臨床和生物學(xué)數(shù)據(jù)如前面所述31。nephrotest組群研究得到法國(guó)健康和醫(yī)學(xué)研究協(xié)會(huì)(frenchinstituteofhealthandmedicalresearch，inserm)批準(zhǔn)和資助。所有患者提供關(guān)于冷凍生物樣品的長(zhǎng)期處理和用于研究使用的預(yù)先規(guī)定的臨床和生物學(xué)數(shù)據(jù)的書面知情同意書。根據(jù)良好臨床試驗(yàn)規(guī)范指南進(jìn)行研究。技術(shù)方法(尿生物標(biāo)志物測(cè)量)收集尿并在4℃的最多4小時(shí)時(shí)段以后在-80℃儲(chǔ)存。在含有抗蛋白酶(complete；proteaseinhibitorcocktailtablets，rocheappliedscience)的試管中在1000g初步離心10分鐘以后儲(chǔ)存尿上清液。使用的生物標(biāo)志物elisa試劑盒是：r&d系統(tǒng)，其針對(duì)半胱氨酸蛋白酶抑制劑c、表皮生長(zhǎng)因子(egf)、生長(zhǎng)和分化因子15(gdf15)、白介素6(il6)、單核細(xì)胞趨化蛋白1(mcp1)、基質(zhì)金屬蛋白酶9(mmp9)、骨橋蛋白、腎損傷分子1(kim1)、組織金屬蛋白酶抑制劑1(timp1)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(tgf-α)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子a(vegfa)；ebioscience，其針對(duì)纖連蛋白和白血病抑制因子(lif)；bioporto，其針對(duì)嗜中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)的脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(ngal)；cmic，其針對(duì)脂肪酸結(jié)合蛋白1(fabp1)；和mdbiproduct，其針對(duì)尿調(diào)制蛋白。在使用之前按照嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)正式地驗(yàn)證所有elisa試劑盒[未發(fā)表的資料]。使用針對(duì)同位素稀釋質(zhì)譜法(idms)標(biāo)準(zhǔn)化的酶促方法，在neckerenfants-malades在生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室中測(cè)量尿肌酸酐。在醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室中通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)量尿蛋白和白蛋白。ckd進(jìn)展的測(cè)量和定義如在別處報(bào)道的，nephrotest組群中的所有患者具有通過(guò)鉻-51標(biāo)記的乙二胺四乙酸(edta)清除率測(cè)量的gfr31。使用平常的線性回歸估計(jì)以ml/min/年為單位的各個(gè)斜率。我們?nèi)缓笥?jì)算相對(duì)mgfr斜率(以每年的百分比為單位)并將患者分類成兩組基線mgfr的下降速率：每年≤10％相對(duì)于>10％。還使用腎病公式的改進(jìn)32計(jì)算估計(jì)的gfr(egfr)，并然后針對(duì)體表面積(bsa)未調(diào)節(jié)得到的值以允許egfr與對(duì)應(yīng)的mgfr值的直接對(duì)比。統(tǒng)計(jì)分析在適當(dāng)時(shí)，將臨床和實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)表達(dá)為百分比、平均值(±標(biāo)準(zhǔn)差，sd)或中值(四分位距，iqr)。生物標(biāo)志物、白蛋白尿和蛋白尿與肌酸酐比率具有不對(duì)稱的分布，且因而隨后進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換。ngal和半胱氨酸蛋白酶抑制劑c需要兩次連續(xù)對(duì)數(shù)變換才能達(dá)到正態(tài)分布。然后使用性別特異性的平均值和sd將對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換的值標(biāo)準(zhǔn)化至0的平均值和1的sd，即(測(cè)量值-平均值)/sd，以解釋性別相關(guān)的差異。我們?cè)诰徛涂焖龠M(jìn)展者之間對(duì)比了基線臨床和實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)和ckd風(fēng)險(xiǎn)因素(使用mgfr的每年下降的10％的截止)。將連續(xù)變量與wilcoxon檢驗(yàn)進(jìn)行對(duì)比，并將類別變量與卡方或fisher氏精確檢驗(yàn)進(jìn)行對(duì)比。類似地試驗(yàn)了關(guān)于生物標(biāo)志物和mgfr斜率的性別差異。首先使用pearsons關(guān)聯(lián)評(píng)估了在第一次就診時(shí)在生物標(biāo)志物和并行mgfr之間以及在生物標(biāo)志物和mgfr的變化百分比之間的關(guān)聯(lián)。然后使用邏輯回歸估計(jì)每種生物標(biāo)志物的快速進(jìn)展的原始的和經(jīng)調(diào)節(jié)的比值比(or)。針對(duì)隨時(shí)間的平均mgfr和基線協(xié)變量依次調(diào)節(jié)or：年齡、性別、非洲黑人起源、bmi、平均血壓、糖尿病、心血管疾病史、吸煙、腎素血管緊張素醛固酮系統(tǒng)(raas)阻斷諸如血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(acei)或血管緊張素受體阻滯劑(arb)治療，和最后的白蛋白尿。將平均mgfr(而不是基線mgfr)用作分析中的協(xié)變量以減輕‘向平均值回歸’的現(xiàn)象3。為了確定生物標(biāo)志物的最佳組合以預(yù)測(cè)ckd進(jìn)展，基本上從病理生理學(xué)假設(shè)推測(cè)地構(gòu)建了幾個(gè)組合生物標(biāo)志物和白蛋白尿的邏輯回歸模型。與ckd進(jìn)展單個(gè)地相關(guān)的生物標(biāo)志物在所述模型中是有利的，但是我們避免了一起加入以超過(guò)0.55(pearson關(guān)聯(lián))彼此相關(guān)或與白蛋白尿相關(guān)的生物標(biāo)志物。另外針對(duì)平均gfr和其它顯著相關(guān)的因素(諸如募集中心和糖尿病)調(diào)節(jié)這些模型以限制協(xié)變量的數(shù)目。將6個(gè)如此構(gòu)建的模型與僅含有白蛋白尿和相同調(diào)節(jié)協(xié)變量、但是不含生物標(biāo)志物的嵌套最低模型進(jìn)行對(duì)比。我們計(jì)算了受試者操作特征(roc)曲線下面積(auc)、似然比檢驗(yàn)(lrt)、比例尺brier評(píng)分(sbs)和積分鑒別指數(shù)(idi)以評(píng)估這些預(yù)測(cè)模型用于ckd進(jìn)展的性能。通過(guò)將這些模型的auc與最小參考模型進(jìn)行對(duì)比，估計(jì)預(yù)測(cè)值的改善。用sas9.2(sasinstituteinc.，cary，ncusa)、r2.3(rfoundationforstatisticalcomputing，vienna，奧地利，2014)和prismgraphpad5.0執(zhí)行動(dòng)物數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果患者表征和ckd進(jìn)展我們用重復(fù)的mgfr和并行尿收集在229位患者中進(jìn)行了分析。存在152位(66.4％)男性，且在基線時(shí)(即在執(zhí)行第一次尿收集時(shí))的平均年齡是60.8±13.3歲。中值基線mgfr是38.3(iqr，26.4-49.6)ml/min。在21.6(iqr，13.6-24.7)個(gè)月的中值隨訪時(shí)間以后在最后一次就診時(shí)的中值mgfr是34.7(iqr，24.7-47.5)ml/min。mgfr的變化是-1.46(iqr，-4.28，1.08)ml/min/年，相當(dāng)于從基線每年-4.0(iqr，-12，2.7)％(負(fù)值代表減少)。68位(30％)患者被定義為‘快速進(jìn)展者’(每年它們的mgfr減少大于10％)。緩慢和快速進(jìn)展者的基線特征顯示在表2中。白蛋白尿在快速進(jìn)展者中顯著更高，且糖尿病更頻繁。盡管大多數(shù)患者(89％)接受acei或arb治療，較高比例的快速進(jìn)展者接受治療(96％相對(duì)于86％，p＜0.04)。如預(yù)期的，在隨訪過(guò)程中快速進(jìn)展者的中值mgfr低于緩慢進(jìn)展者(中值iqr：29.3(20.0，37.5)相對(duì)于40.9(30.1，52.3)ml/min，p＜0.0001)，且基線mgfr在快速進(jìn)展者中明顯更低(p＝0.06)。重要的是，用于估計(jì)進(jìn)展速率的mgfr測(cè)量的數(shù)目在兩個(gè)組之間沒(méi)有顯著不同(超過(guò)2次就診，47％相對(duì)于38％，p＝0.2)。表2：nephrotest患者的基線特征.acei：血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑；arb：血管緊張素受體阻滯劑；mgfr：通過(guò)鉻標(biāo)記的edta測(cè)量的腎小球?yàn)V過(guò)率；pkd：多囊性腎病。將數(shù)據(jù)表達(dá)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(sd)、中值(四分位距(iqr))或百分比(患者的數(shù)目(n))。生物標(biāo)志物表征和性別分布在生物標(biāo)志物timp1、vegfa、kim1和骨橋蛋白中，其中僅小于5％的患者具有落在檢測(cè)下限(lld)以下的值，為每位患者輸入lld的值的一半(在每種情況下輸入不超過(guò)5個(gè)值)。在生物標(biāo)志物(蛋白尿、白蛋白尿和fabp1)中，5-10％的患者受到影響，輸入0-1之間的隨機(jī)值乘以lld值。最后，描述了生物標(biāo)志物mmp9、il6和lif，其中超過(guò)20％的患者具有低于lld的值，但是沒(méi)有被包括在我們的隨后分析中。組群中的生物標(biāo)志物分布詳述在表3中。五種生物標(biāo)志物的分布被性別改變(沒(méi)有包括mmp9和lif)。我們?cè)诨€處在女性中發(fā)現(xiàn)了顯著更高的ngal、tgf-α和尿調(diào)制蛋白的水平。相反，我們還在男性中觀察到較高的timp1和vegfa水平。在男性和女性之間不存在關(guān)于體表面積(bsa)標(biāo)準(zhǔn)化的基線mgfr的差異(36.8相對(duì)于34.6ml/min/1.73m2，p＝0.3)?！焖龠M(jìn)展者’男性的比例沒(méi)有顯著不同于‘緩慢進(jìn)展者’男性(68％相對(duì)于66％，p＝0.8，表1)。表3.通過(guò)性別的尿生物標(biāo)志物分布給出的值針對(duì)尿肌酸酐濃度進(jìn)行了調(diào)節(jié)。n，患者的數(shù)目；iqr，四分位距；min：記錄的最小值；max：記錄的最大值；egf，表皮生長(zhǎng)因子；fabp1，脂肪酸結(jié)合蛋白1；gdf15，生長(zhǎng)分化因子15；il6，白介素6；kim1，腎損傷分子1；lif，白血病抑制因子；mmp9，基質(zhì)金屬蛋白酶9；mcp1，單核細(xì)胞趨化蛋白1；ngal，嗜中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)的脂質(zhì)運(yùn)載蛋白；timp1，組織金屬蛋白酶抑制劑1；tgf-α，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α；vegfa血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子a。與ckd進(jìn)展有關(guān)的單一生物標(biāo)志物我們沒(méi)有觀察到基線mgfr和進(jìn)展的變化百分比之間的關(guān)聯(lián)(r＝-0.06，p＝0.4)。我們?nèi)缓笱芯苛四虻鞍姿胶统蔀椤焖龠M(jìn)展者’的風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)聯(lián)。我們最初單個(gè)地研究了每種生物標(biāo)志物，并然后隨后針對(duì)ckd進(jìn)展的已知重要風(fēng)險(xiǎn)因素依次調(diào)節(jié)每種生物標(biāo)志物，包括在多變量邏輯回歸分析中的白蛋白尿(表4)。如預(yù)期的，處于‘快速進(jìn)展者’狀態(tài)的風(fēng)險(xiǎn)被白蛋白尿和/或蛋白尿增加。它也被半胱氨酸蛋白酶抑制劑c、fabp1、纖連蛋白、gdf15、kim1、mcp1、ngal、timp1、tgf-α和vegfa的水平的升高增加。但是，所述風(fēng)險(xiǎn)被egf的增加降低。當(dāng)將ckd進(jìn)展的傳統(tǒng)風(fēng)險(xiǎn)因素加入回歸模型時(shí)，所述風(fēng)險(xiǎn)減弱，且通過(guò)針對(duì)白蛋白尿進(jìn)行調(diào)節(jié)會(huì)進(jìn)一步減弱(表4)。但是，在考慮所有這些因素的作用以后，纖連蛋白、mcp1、timp1和tgf-α保持與所述風(fēng)險(xiǎn)顯著相關(guān)。令人感興趣的是，tgf-α(or2.34)對(duì)進(jìn)展影響大小高于白蛋白尿(or1.72)。表4：生物標(biāo)志物與‘快速進(jìn)展者’(每年>10％的mgfr下降)狀態(tài)的風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián).縮寫：mgfr，測(cè)量的腎小球?yàn)V過(guò)率；or，比值比；ci，置信區(qū)間；egf，表皮生長(zhǎng)因子；fabp1，脂肪酸結(jié)合蛋白；gdf15，生長(zhǎng)和分化因子15；kim1，腎損傷分子1；mcp1，單核細(xì)胞趨化蛋白1；ngal，嗜中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)的脂質(zhì)運(yùn)載蛋白；timp1，組織金屬蛋白酶抑制劑1，tgf-α，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α，vegfa，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子a。呈現(xiàn)的or是按照性別-特異性的標(biāo)準(zhǔn)差(sd)單位增加(對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換以后)。*協(xié)變量：年齡、身體質(zhì)量指數(shù)、平均動(dòng)脈壓、性別、非洲黑人種族劃分、糖尿病、心血管疾病史、吸煙者、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑或血管緊張素受體阻滯劑和募集中心。組合尿生物標(biāo)志物以預(yù)測(cè)ckd進(jìn)展將6個(gè)組合4-6種生物標(biāo)志物的不同模型與使用白蛋白尿的參考模型進(jìn)行了對(duì)比(表5)。表5：給出與快速進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)的6種不同模型的生物標(biāo)志物組合：*‘快速進(jìn)展者’狀態(tài)的比值比(95％ci)(每年>10％的mgfr下降).縮寫：ci，置信區(qū)間；sd，標(biāo)準(zhǔn)差；egf，表皮生長(zhǎng)因子；gdf15，生長(zhǎng)和分化因子15；tgf-α，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α；mcp1，單核細(xì)胞趨化蛋白1；fabp1，脂肪酸結(jié)合蛋白；kim1，腎損傷分子1；ngal，嗜中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)的脂質(zhì)運(yùn)載蛋白；timp1，組織金屬蛋白酶抑制劑1；lrt，似然比檢驗(yàn)；df，自由度；ref，參考模型；auc，曲線下面積；sbs，比例尺brier評(píng)分；idi，積分的鑒別指數(shù)；ridi，相對(duì)idi。*呈現(xiàn)的比值比是按照性別-特異性的sd單位增加(對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換以后)。針對(duì)就診、糖尿病和募集中心之間的平均mgfr調(diào)節(jié)模型。模型是基于具有反映每個(gè)模型內(nèi)＜0.55的不同病理生理學(xué)過(guò)程和生物標(biāo)志物間關(guān)聯(lián)的生物標(biāo)志物。僅針對(duì)平均mgfr和針對(duì)顯著相關(guān)的因子即糖尿病和(nephrotest)募集中心調(diào)節(jié)這些模型。所有使用生物標(biāo)志物的模型比沒(méi)有生物標(biāo)志物的參考模型更好地執(zhí)行(表5，似然比檢驗(yàn))，但是根據(jù)所有采用的性能標(biāo)準(zhǔn)，含有egf、gdf15、mcp1、ngal和tgf-α的模型(模型5)是最佳模型。具體地，模型5中的生物標(biāo)志物使受試者操作特征(roc)曲線的曲線下面積(auc)從0.77顯著增加至來(lái)自參考模型(含有白蛋白且沒(méi)有其它生物標(biāo)志物)的0.85(p＝0.006)。支持這些結(jié)果的是，我們還進(jìn)行了逐步回歸分析，沒(méi)有關(guān)于生物標(biāo)志物的功能作用或生物標(biāo)志物間關(guān)聯(lián)的推測(cè)假設(shè)，并且有趣地剛好得到相同的生物標(biāo)志物組合。因?yàn)闆](méi)有發(fā)現(xiàn)gdf15與模型中的進(jìn)展相關(guān)(or0.99(0.63-1.54))，我們?cè)囼?yàn)了并觀察到，當(dāng)從模型除去時(shí)，該新模型的性能標(biāo)準(zhǔn)未受影響(數(shù)據(jù)未顯示)。令人驚奇的是，我們還觀察到在我們的模型中與egf類似的ngal似乎會(huì)賦予保護(hù)作用(表5)。這似乎與它對(duì)疾病進(jìn)展的單獨(dú)作用相反，在后者中它與增加的成為‘快速進(jìn)展者’的風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)。針對(duì)其它生物標(biāo)志物調(diào)節(jié)以后以三分位數(shù)(而不是連續(xù)地)分析ngal會(huì)揭示它與進(jìn)展的復(fù)雜關(guān)聯(lián)(j-形模式)(圖3)。因?yàn)檫@些原因，通過(guò)除去gdf15和ngal可以簡(jiǎn)化模型5，并且我們提供了預(yù)測(cè)快速進(jìn)展的最終模型，其除了白蛋白尿以外還含有egf、mcpl和tgf-α，具有0.84的c-統(tǒng)計(jì)值，仍然優(yōu)于白蛋白和其它風(fēng)險(xiǎn)因素的c-統(tǒng)計(jì)值(參見圖1)。對(duì)比mgfr和egfr在我們的最終模型中使用egfr替代mgfr來(lái)定義ckd進(jìn)展會(huì)給我們提供不同的結(jié)果。僅tgf-α和白蛋白在簡(jiǎn)化的模型5中保持與進(jìn)展顯著相關(guān)，分別具有1.51(1.07-2.12)和1.55(1.05-2.27))的or(95％ci)，但是egf和mcp1都沒(méi)有保持相關(guān)，分別具有0.72(0.45-1.15)和1.21(0.86-1.69)。如預(yù)期的，egfr和mgfr之間的關(guān)聯(lián)較高(r＝0.87)，且用所述式與黃金標(biāo)準(zhǔn)相比高估了gfr(中值偏差iqr2.60(1.46，3.76))。使用mgfr或egfr，快速進(jìn)展者(每年>10％的gfr下降)的比例保持相同(29.69％)。但是，我們觀察到，在由mgfr定義的組群的68位‘快速進(jìn)展者’中，使用egfr僅將38位(56％)正確地分類為‘快速進(jìn)展者’，從而給出egfr關(guān)于鑒別‘快速進(jìn)展者’的非常低的靈敏度(圖2)。討論我們使用該模型在我們的組群中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)預(yù)測(cè)性的改善，因?yàn)槲覀兊慕Y(jié)果量度是不同的。但是，有趣的是，觀察該新生物標(biāo)志物標(biāo)記的添加是否會(huì)改善預(yù)測(cè)。應(yīng)當(dāng)承認(rèn)，raas阻斷會(huì)減慢ckd進(jìn)展。這里觀察到更多的快速進(jìn)展者是在接受acei和arb藥物，這最可能反映臨床醫(yī)師對(duì)‘快速速進(jìn)展者’組中的更高白蛋白尿水平(與該組中raas阻斷的相反效應(yīng)相比)的應(yīng)答42。這從我們的對(duì)比兩種技術(shù)的結(jié)果特別容易看出，因?yàn)槲覀冊(cè)谶@里證實(shí)了egfr在檢測(cè)疾病進(jìn)展中的降低許多的靈敏度。在發(fā)現(xiàn)(觀察性研究諸如這個(gè))的上下文中，具有嚴(yán)格mgfr的充分表征的患者組群已經(jīng)是非常有用的。具有非常準(zhǔn)確的mgfr在這里使我們能夠?qū)⑽覀兊幕颊咭运麄兊恼鎸?shí)進(jìn)展者狀態(tài)正確地分類，且作為后果，我們可以將此與相對(duì)小組群中的生物標(biāo)志物的變化準(zhǔn)確地關(guān)聯(lián)，并且仍然導(dǎo)致有效重大發(fā)現(xiàn)，其尚不可能使用不太準(zhǔn)確的egfr，其中需要更大的患者數(shù)目。因?yàn)閏kd的進(jìn)展是一個(gè)涉及許多途徑的復(fù)雜病理生理學(xué)過(guò)程，可能需要幾種生物標(biāo)志物(而不是一種獨(dú)特生物標(biāo)志物)的組合來(lái)做出準(zhǔn)確的預(yù)測(cè)。盡管該組群是相對(duì)小的組群并且大多數(shù)患者在隨訪階段中僅具有兩種mgfr，它具有幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)。已經(jīng)討論了mgfr的應(yīng)用，但是另外這也是人種上不同的組群且含有不同病理學(xué)的良好表現(xiàn)，這解釋了在登記中的ckd。由于冗余度，我們?cè)O(shè)法減少我們的最終模型中的生物標(biāo)志物的數(shù)目。綜上所述，我們提議將tgf-α、egf和mcp1與白蛋白和人口統(tǒng)計(jì)風(fēng)險(xiǎn)因素一起作為要在疾病過(guò)程的早期潛在地使用的、ckd進(jìn)展的新分子標(biāo)記。參考文獻(xiàn)1.go，a.s.，chertow，g.m.，fan，d.，mcculloch，c.e.&hsu，c.-y.chronickidneydiseaseandtherisksofdeath，cardiovascularevents，andhospitalization.n.engl.j.med.351，1296-1305(2004).2.fox，c.s.，等人.associationsofkidneydiseasemeasureswithmortalityandend-stagerenaldiseaseinindividualswithandwithoutdiabetes：ameta-analysis.lancet380，1662-1673(2012).3.weis，l.，等人.renalfunctioncanimproveatanystageofchronickidneydisease.plosone8，e81835(2013).4.shankland，s.j.thepodocyte′sresponsetoinjury：roleinproteinuriaandglomerulosclerosis.kidneyint.69，2131-2147(2006).5.perkins，b.a.，等人.regressionofmicroalbuminuriaintype1diabetes.n.engl.j.med.348，2285-2293(2003).6.gilbert，r.e.，akdeniz，a.，allen，t.j.&jerums，g.urinarytransforminggrowthfactor-βinpatientswithdiabeticnephropathy：implicationsforthepathogenesisoftubulointerstitialpathology.nephrol.dial.transplant.16，2442-2443(2001).7.riser，b.l.，等人.urinaryccn2(ctgf)asapossiblepredictorofdiabeticnephropathy：preliminaryreport.kidneyint.64，451-458(2003).8.gilbert，r.e.，等人.urinaryconnectivetissuegrowthfactorexcretioninpatientswithtype1diabetesandnephropathy.diabetescare26，2632-2636(2003).9.ghoul，b.e.，等人.urinaryprocollageniiiaminoterminalpropeptide(piiinp)：afibrotestforthenephrologist.clin.j.am.soc.nephrol.5，205-210(2010).10.soylemezoglu，o.，等人.urinaryandserumtypeiiicollagen：markersofrenalfibrosis.nephrol.dial.transplant.12，1883-1889(1997).11.vanvliet，a.i.，baelde，h.j.，vleming，l.-j.，deheer，e.&anthoniebruijn，j.distributionoffibronectinisoformsinhumanrenaldisease.j.pathol.193，256-262(2001).12.guerrot，d.，等人.identificationofperiostinasacriticalmarkerofprogression/reversalofhypertensivenephropathy.plosone7，e31974(2012).13.catania，j.m.，chen，g.&parrish，a.r.roleofmatrixmetalloproteinasesinrenalpathophysiologies.am.j.physiol.renalphysiol.292，f905-f911(2007).14.eardley，k.s.，等人.therelationshipbetweenalbuminuria，mcp-1/ccl2，andinterstitialmacrophagesinchronickidneydisease.kidneyint.69，1189-1197(2006).15.liu，y.，等人.urinaryinterleukin18fordetectionofacutekidneyinjury：ameta-analysis.am.j.kidneydis.62，1058-1067(2013).16.parikh，c.r.，abraham，e.，ancukiewicz，m.，edelstein，c.l.&network，f.t.a.r.d.s.urineil-18isanearlydiagnosticmarkerforacutekidneyinjuryandpredictsmortalityintheintensivecareunit.j.am.soc.nephrol.16，3046-3052(2005).17.shlipak，m.g.，fried，l.f.，cushman，m.等人.cardiovascularmortalityriskinchronickidneydisease：comparisonoftraditionalandnovelriskfactors.jama293，1737-1745(2005).18.yoshino，j.，monkawa，t.，tsuji，m.，hayashi，m.&saruta，t.leukemiainhibitoryfactorisinvolvedintubularregenerationafterexperimentalacuterenalfailure.j.am.soc.nephrol.14，3090-3101(2003).19.lajer，m.，jorsal，a.，tarnow，l.，parving，h.&rossing，p.plasmagrowthdifferentiationfactor-15independentlypredictsall-causeandcardiovascularmortalityaswellasdeteriorationofkidneyfunctionintype1diabeticpatientswithnephropathy.diabetescare33，1567-1572(2010).20.lautrette，a.，等人.angiotensiniiandegfreceptorcross-talkinchronickidneydiseases：anewtherapeuticapproach.nat.med.11，867-874(2005).21.viau，a.，等人.lipocalin2isessentialforchronickidneydiseaseprogressioninmiceandhumans.j..clin.invest.120，4065-4076(2010).22.eremina，v.，等人.glomerular-specificalterationsofvegf-aexpressionleadtodistinctcongenitalandacquiredrenaldiseases.j.clin.invest.111，707-716(2003).23.sakamoto，i.，等人.lymphaticvesselsdevelopduringtubulointerstitialfibrosis.kidneyint.75，828-838(2009).24.kamijo，a.，等人.clinicalevaluationofurinaryexcretionofliver-typefattyacid-bindingproteinasamarkerforthemonitoringofchronickidneydisease：amulticentertrial.j.lab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