本發(fā)明涉及用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀直接測(cè)定出尼羅替尼中3-(4-甲基-1h-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺(以下簡(jiǎn)稱化合物i)的含量。此方法能較好的控制原料藥及制劑中痕量化合物i含量，為患者的健康安全用藥提供保障，屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
。技術(shù)背景尼羅替尼，化學(xué)名nilotinib。為一種治療對(duì)既往治療耐藥或不耐受的費(fèi)城染色體陽性的慢性髓性白血病(ph+cml)慢性期或加速期成人患者的藥物。尼羅替尼結(jié)構(gòu)如下：尼羅替尼中含有反應(yīng)殘留的化合物i，結(jié)構(gòu)如下：準(zhǔn)確定量地測(cè)定尼羅替尼中痕量的化合物i含量極具挑戰(zhàn)性。很難采用氣相、液相色譜等對(duì)其進(jìn)行痕量直接測(cè)定。目前，只有測(cè)定尼羅替尼中常量3-(4-甲基-1h-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺含量的方法采用經(jīng)典的色譜法,其專一性、靈敏度、方法精密度和重復(fù)性都存在很大的缺陷，不能提供可靠的痕量分析結(jié)果。為了克服原方法的缺陷，本發(fā)明采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀直接測(cè)定尼羅替尼中化合物i的含量。該分析方法 具有操作簡(jiǎn)單、專一性好、靈敏極高、重現(xiàn)性好等特點(diǎn)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：如上所述，直接準(zhǔn)確定量測(cè)定痕量化合物i存在各種缺陷。然而,利用化合物i具有穩(wěn)定性強(qiáng)和非常適合反相液相色譜分離的特征，以及在質(zhì)譜檢測(cè)器中很容易離子化并具有穩(wěn)定的適合定量分析的分子結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，可以采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀直接測(cè)定。除此之外,化合物i在質(zhì)譜檢測(cè)器有靈敏的吸收這一特征使本方法的靈敏度和專一性大大提高。通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)尼羅替尼在乙腈中有非常好的溶解性。本發(fā)明將用乙腈作為稀釋劑。本發(fā)明涉及一種尼羅替尼中化合物i含量的測(cè)定分析方法，該方法為直接用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定尼羅替尼中化合物i的含量。上述樣品配制中用乙腈作為稀釋液。上述采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，正離子選擇離子模式。該方法包括以下幾個(gè)步驟：(1)取尼羅替尼原料或制劑粉末，以乙腈溶液作為稀釋液制備得到樣品溶液；(2)采用十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，流動(dòng)相為0.05％-0.2％甲酸或乙酸或三氟乙酸水溶液和乙腈，進(jìn)行梯度洗脫。(3)設(shè)置流動(dòng)相流速為0.3-1.2ml/ml，柱溫控制在25℃-40℃之間。(4)取步驟(1)的樣品溶液5ul，進(jìn)樣，記錄質(zhì)譜總離子流圖。(5)采用質(zhì)譜檢測(cè)器，離子模式選擇正離子，取(1)的樣品溶液進(jìn)樣，記錄化合物i質(zhì)譜離子流圖。本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：樣品前處理：稀釋液：采用色譜級(jí)的乙腈?；衔飅標(biāo)準(zhǔn)溶液：用稀釋液精密配制5.7ng/ml的化合物i溶液。樣品溶液：精密稱取30mg樣品于10ml的容量瓶中，用稀釋液溶解并定容至刻度，進(jìn)樣。本發(fā)明使用色譜柱為：十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱。流速0.3-1.2ml/ml。柱溫25℃-40℃。流動(dòng)相a：0.05％-0.2％甲酸或乙酸或三氟乙酸水溶液，流動(dòng)相b：乙腈，梯度如下：ab0min90％10％8min10％90％質(zhì)譜檢測(cè)器：正離子模式，[m+h]+:242附圖說明：附圖1：根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例1得到的化合物i質(zhì)譜棒圖；附圖2：根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例1得到的化合物i標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)譜總離子流圖；附圖3：根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例2得到的尼羅替尼樣品質(zhì)譜總離子流圖；附圖4：根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例3得到的尼羅替尼樣品加樣回收率質(zhì)譜總離子流圖。具體實(shí)施方式為了更好的理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合本發(fā)明的具體實(shí)施例作進(jìn)一步說明，但其不限制于本發(fā)明。實(shí)施例一儀器與條件：高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀：agilent1260infinity，ms檢測(cè)器。色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱流動(dòng)相：a：0.05％-0.2％甲酸或乙酸或三氟乙酸水溶液b:乙腈。等度如下：0～8.0min，有機(jī)相比例由10％變?yōu)?0％。柱溫：35℃。流速：1.0ml/min選擇正離子：242進(jìn)樣體積：5ul。實(shí)驗(yàn)步驟：1)流動(dòng)相a配制：精密量取1.0ml三氟乙酸溶于1000ml水中，混勻。2)稀釋液b：乙腈3)標(biāo)準(zhǔn)溶液c：精密稱取約28.5mg化合物i于100ml容量瓶中，加b溶解定容，搖勻，精密量取2.0ml置于另一100ml容量瓶中，加b定容，即得標(biāo)準(zhǔn)溶液c，進(jìn)樣，記錄質(zhì)譜棒圖，見典型圖1。記錄化合物i質(zhì)譜總離子流圖，見典型圖2。實(shí)施例二儀器與條件：高效液相色譜儀：agilent1260infinity，ms檢測(cè)器。色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱流動(dòng)相：a：0.05％-0.2％甲酸或乙酸或三氟乙酸水溶液b:乙腈。等度如下：0～8.0min，有機(jī)相比例由10％變?yōu)?0％。柱溫：35℃。流速：1.0ml/min選擇正離子：242進(jìn)樣體積：5ul。實(shí)驗(yàn)步驟：1)流動(dòng)相a配制：精密量取1.0ml三氟乙酸溶于1000ml水中，混勻。2)稀釋液b：乙腈3)標(biāo)準(zhǔn)溶液c：精密稱取約28.5mg化合物i于100ml容量瓶中，加b溶解定容，搖勻，精密量取2.0ml置于另一100ml容量瓶中，加b定容，即得標(biāo)準(zhǔn)溶液c。4)樣品溶液d:精密稱取約30mg尼羅替尼樣品置于10ml容量瓶中，加b定容，即得樣品溶液d，進(jìn)樣。記錄化合物i質(zhì)譜總離子流圖，見典型圖3。實(shí)施例三儀器與條件：高效液相色譜儀：agilent1260infinity，ms檢測(cè)器。色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱流動(dòng)相：a：0.05％-0.2％甲酸或乙酸或三氟乙酸水溶液b:乙腈。等度如下：0～8.0min，有機(jī)相比例由10％變?yōu)?0％。柱溫：35℃。流速：1.0ml/min選擇正離子：242進(jìn)樣體積：5ul。實(shí)驗(yàn)步驟：1)流動(dòng)相a配制：精密量取1.0ml三氟乙酸溶于1000ml水中，混勻。2)稀釋液b：乙腈3)標(biāo)準(zhǔn)溶液c：精密稱取約28.5mg化合物i于100ml容量瓶中，加b溶解定容，搖勻，精密量取2.0ml置于另一100ml容量瓶中，加b定容，即得標(biāo)準(zhǔn)溶液c。4)樣品溶液e:精密稱取約30.0mg尼羅替尼樣品，用標(biāo)準(zhǔn)溶液c溶解并滴定至刻度，混勻，進(jìn)樣。記錄化合物i質(zhì)譜總離子流圖，見典型圖4。當(dāng)前第1頁(yè)12