液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定香精香料中香葉醇的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種香精香料中香葉醇的檢測(cè)方法，該方法采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定，采用外標(biāo)法定量。該檢測(cè)方法具有檢測(cè)時(shí)間短、操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、回收率高及重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，該方法色譜條件使得香葉醇的色譜峰與雜質(zhì)色譜峰分離較好，并且具有較好的線(xiàn)性范圍，檢測(cè)限為0.001μg/mL，回收率在90.8％～98.3％之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD<5％(n＝6)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于化學(xué)檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及香葉醇的測(cè)定方法，具體地說(shuō)是一種通過(guò)液 相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速測(cè)定香精香料中香葉醇的方法。 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定香精香料中香葉醇的方法

【背景技術(shù)】
[0002] 香葉醇（Geraniol，反-3, 7-二甲基-2, 6-辛二烯-1-醇）別名櫳牛兒醇、香天竺 蔡醇，是一種單萜烯醇，天然存在于玫瑰草油（含量80 %左右）、香葉油、茉莉油等250多 種植物中，具有類(lèi)似玫瑰花香，是香料的常用主香劑，廣泛應(yīng)用于藥物、煙草、食品配料等領(lǐng) 域。在卷煙香味中起到重要的作用，是最為常見(jiàn)的煙用香料，可以增加卷煙的玫瑰香氣、甜 香,過(guò)多則會(huì)產(chǎn)生皂香和花香。
[0003] 目前，對(duì)香葉醇的檢測(cè)方法主要是氣質(zhì)聯(lián)用法（GC-MS)。但香精香料樣品成分復(fù) 雜，用氣質(zhì)聯(lián)用法（GC-MS)將目標(biāo)物和干擾物基線(xiàn)分離需要較長(zhǎng)的分析時(shí)間，且前處理步 驟繁瑣。
[0004] 近年來(lái)，隨著液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS)技術(shù)的發(fā)展，LC-MS/MS技術(shù)在化合 物分析中得到廣泛的應(yīng)用。液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS)分析技術(shù)無(wú)論在靈敏度上還 是選擇性上都具有明顯的優(yōu)勢(shì)，且分析時(shí)間較短。檢測(cè)香精香料中香葉醇的LC-MS/MS方法 未見(jiàn)報(bào)導(dǎo)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種準(zhǔn)確檢測(cè)香精香料中香葉醇含量的方法。
[0006] 本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：
[0007] -種香精香料中香葉醇的檢測(cè)方法，該方法采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定，采用 外標(biāo)法定量。
[0008] 在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，發(fā)明所述的香精香料中香葉醇的檢測(cè)方法包括以下步 驟：
[0009] (1)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制；稱(chēng)取香葉醇標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇配制成具有濃度梯度的香葉醇 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；
[0010] (2)樣品溶液的制備：使用甲醇萃取香精香料樣品中的香葉醇，過(guò)濾后得到樣品 溶液；
[0011] (3)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析：利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀分別對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣 品溶液進(jìn)行檢測(cè)分析；
[0012] (4)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算煙用香精香料中香葉醇的含量。
[0013] 在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，發(fā)明所述的香精香料中香葉醇的檢測(cè)方法，其中所述 的香精香料為煙用香精香料，優(yōu)選地，所述的香精香料樣品使用甲醇萃取樣品中的香葉醇； 優(yōu)選地，萃取用的甲醇為濃度為8?12% (v/v)甲醇水溶液，更優(yōu)選地，萃取用的甲醇為濃 度為10% (v/v)甲醇水溶液。
[0014] 在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，發(fā)明所述的香精香料中香葉醇的檢測(cè)方法，其中萃取 的方式為超聲萃取。
[0015] 在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，發(fā)明所述的香精香料中香葉醇的檢測(cè)方法，其中步驟 (2)所述的樣品溶液的制備過(guò)程如下：稱(chēng)取適量待測(cè)香精香料樣品，加入適量甲醇水溶液， 室溫下超聲萃取，過(guò)濾后，得到樣品溶液。優(yōu)選的過(guò)濾方式采用微孔濾膜過(guò)濾，例如〇. 22 μ m 有機(jī)濾膜或〇. 45 μ m有機(jī)濾膜。
[0016] 在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述香精香料樣品的制備方法具體為：稱(chēng)取0. lg左 右試樣，置于25mL錐形瓶中；加入10% (v/v)甲醇水溶液lOmL,室溫下超聲30min,用 0. 22 μ m有機(jī)濾膜過(guò)濾后直接進(jìn)樣。
[0017] 在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，發(fā)明所述的香精香料中香葉醇的檢測(cè)方法，其中液相 色譜的分析條件為以下（i)至（vi)中的一項(xiàng)或多項(xiàng)：
[0018] ⑴采用C18色譜柱，
[0019] 優(yōu)選地，所述的色譜柱的規(guī)格為50mmX 2. 1mm i. d.，2. 6 μ m粒徑，
[0020] (ii)色譜柱溫度為28?32°C，優(yōu)選為30°C，
[0021] (iii)進(jìn)樣量為8?12 μ L，優(yōu)選為10 μ L，
[0022] (iv)流動(dòng)相：乙腈-乙酸銨-乙酸-水溶液，
[0023] 優(yōu)選的流動(dòng)相：A為乙腈，B為5mm〇L/L乙酸銨溶液（其中含有0. 1% (v/v)乙酸）， 采用等度洗脫程序，體積比50 :50，
[0024] (v)流速為 0· 1 ?0· 3ml/min，優(yōu)選為 0· 2ml/min,
[0025] (vi)洗脫時(shí)間約 lOmin。
[0026] 在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，發(fā)明所述的香精香料中香葉醇的檢測(cè)方法，其中質(zhì)譜 的分析條件為以下（i)至（iii)中的一項(xiàng)或多項(xiàng)：
[0027] (i)用電噴霧離子阱串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定香葉醇；
[0028] (ii)離子源：電噴霧電離源（ESI);
[0029] (iii)以選擇離子對(duì)定性，優(yōu)選的離子對(duì)為：子離子73. 1 (m/z),母離子155. 3 (m/ z)。
[0030] 在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，發(fā)明所述的香精香料中香葉醇的檢測(cè)方法，其中液 相色譜的分析條件為：色譜柱采用菲羅門(mén)C 18液相色譜柱，色譜柱的規(guī)格為50mmX2. 1mm 1. d.，2. 6 μ m粒徑，色譜柱溫度為30°C，進(jìn)樣量為10 μ L，流速為0. 2ml/min ;流動(dòng)相：A為乙 腈，B為5mm〇L/L乙酸銨溶液（其中還含有0. 1% (v/v)乙酸），采用等度洗脫程序，體積比 50 :50,洗脫時(shí)間總共約lOmin。
[0031] 在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，發(fā)明所述的香精香料中香葉醇的檢測(cè)方法，其中質(zhì)譜 的分析條件為：掃描方式：正離子掃描；檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM);電噴霧電壓：5500V ; 離子源溫度：700°C ;輔助氣Gasl壓力：60psi ;輔助氣Gas2壓力：50psi ;去簇電壓（DP): 40V ;碰撞能（CE) :20V。
[0032] 在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，發(fā)明所述的香精香料中香葉醇的檢測(cè)方法，其中所述 的質(zhì)譜的分析條件為離子源：電噴霧電離源（ESI);掃描方式：正離子掃描；檢測(cè)方式：多 反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM);電噴霧電壓：5500V ;離子源溫度：700°C;輔助氣Gasl壓力：60psi ;輔助氣 Gas2壓力：50psi ;去簇電壓（DP) :40V ;碰撞能（CE) :20V ;離子對(duì)選擇為：定性離子對(duì)m/z 155. 3>73· 1，155. 3>127· 1，定量離子對(duì) m/z 155. 3>73· 1。
[0033] 在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，發(fā)明所述的香精香料中香葉醇的檢測(cè)方法，其中外標(biāo) 法所用的標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制步驟如下：稱(chēng)取〇. lg香葉醇，精確至〇. 〇〇〇lg，用甲醇溶解后轉(zhuǎn) 移至1000mL容量瓶中并定容，定為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；分別移取0. 01mL，0. 05mL，0. lmL，0. 5mL， 1. OmL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液到lOOmL容量瓶中，用濃度為10% (v/v)的甲醇水溶液定容，則香葉醇 的濃度為 〇. 01 U g/mL、0. 05 μ g/mL、0. 1 μ g/mL、0. 5 μ g/mL、1. 0 μ g/mL，得到香葉醇的系列 標(biāo)準(zhǔn)溶液。
[0034] 在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，發(fā)明所述的香精香料中香葉醇的檢測(cè)方法，其中香葉 醇含量的計(jì)算方法為：首先以標(biāo)準(zhǔn)溶液所檢測(cè)出的目標(biāo)物的色譜峰面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行 回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；然后將樣品溶液檢出的目標(biāo)物的色譜峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，即 得到樣品中的香葉醇濃度，由此即可計(jì)算出煙用香精香料中香葉醇的含量。
[0035] 本發(fā)明的檢測(cè)方法對(duì)樣品的處理方法和色譜條件進(jìn)行了優(yōu)化，達(dá)到了以下效果：
[0036] (1)檢測(cè)時(shí)間短：采用本發(fā)明的檢測(cè)方法測(cè)定煙用香精香料中香葉醇的含量，檢 測(cè)周期僅需要10分鐘左右。
[0037] (2)本發(fā)明的檢測(cè)方法具有操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、回收率高及重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)，本 發(fā)明的檢測(cè)方法的色譜條件能夠使香葉醇的色譜峰與雜質(zhì)色譜峰分離較好，并且具有較好 的線(xiàn)性相關(guān)性，檢測(cè)限為0. 001 μ g/mL，平均回收率為90. 8%?98. 3%，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD〈5% (η = 6)。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0038] 圖1為本發(fā)明的檢測(cè)方法的流程圖；
[0039] 圖2為實(shí)施例1中濃度為1 μ g/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液中香葉醇的色譜圖；
[0040] 圖3為實(shí)施例1中樣品溶液的色譜圖；
[0041] 圖4為香葉醇的質(zhì)譜圖；
[0042] 圖5為實(shí)施例1獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

【具體實(shí)施方式】
[0043] 下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì) 理解，下列實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體 條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠(chǎng)商者，均為 可以通過(guò)市購(gòu)獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0044] 實(shí)施例1
[0045] 本實(shí)施例對(duì)煙用香精香料中香葉醇含量進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)方法如下所述，所述檢測(cè) 方法的流程圖如圖1所示。
[0046] (1)稱(chēng)取〇· lg香葉醇（分析純），精確至〇· 〇〇〇lg，用甲醇溶解后轉(zhuǎn)移至l〇〇〇mL 容量瓶中并定容，定為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；分別移取〇. 01mL，0. 05mL，0. lmL，0. 5mL，1. OmL的標(biāo)準(zhǔn) 儲(chǔ)備液到l〇〇mL容量瓶中，用10% (v/v)甲醇水溶液定容，則香葉醇的濃度為0.01 μ g/mL、 0. 05 μ g/mL、0. 1 μ g/mL、0. 5 μ g/mL、1. 0 μ g/mL，得到香葉醇的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。標(biāo)準(zhǔn)溶液避 光4°C保存，取用時(shí)放置于常溫下，達(dá)到常溫后方可使用。每周做一次標(biāo)線(xiàn)；
[0047] (2)樣品溶液的制備：稱(chēng)取0. lg左右的待測(cè)煙用香精香料樣品，置于25mL維形 瓶中；準(zhǔn)確加入10% (v/v)甲醇水溶液10mL，室溫下超聲30min,用0. 22μηι有機(jī)濾膜過(guò) 濾后，得到樣品溶液，于4°C保存待分析；
[0048] (3)色譜分析條件為采用菲羅門(mén)C18液相色譜柱，色譜柱的規(guī)格為50mmX2. 1mm i. d.，2. 6 μ m粒徑。色譜柱溫度為30°C，進(jìn)樣量為10 μ L，流速為0. 2ml/min ;流動(dòng)相：A為 乙腈，B為5mm〇L/L乙酸銨溶液（該乙酸銨溶液中還含有0. 1% (v/v)的乙酸），采用等度 洗脫程序，體積比50 :50。洗脫時(shí)間總共lOmin。濃度為1 μ g/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜分析結(jié) 果見(jiàn)圖2 ;樣品溶液的色譜分析結(jié)果見(jiàn)圖3 ;
[0049] (4)質(zhì)譜分析條件為離子源：電噴霧電離源（ESI);掃描方式：正離子掃描；檢 測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM);電噴霧電壓：5500V;離子源溫度：700°C ;輔助氣Gasl壓力： 60psi ;輔助氣Gas2壓力：50psi ;去簇電壓（DP) :40V ;碰撞能（CE) :20V。香葉醇的質(zhì)譜 圖見(jiàn)圖4。依據(jù)碎片豐度高、選擇性高的原則順序，確定離子對(duì)選擇為：定性離子對(duì)m/z 155. 3>73· 1，155. 3>127· 1，定量離子對(duì) m/z 155. 3>73· 1。
[0050] (4)煙用香精香料中香葉醇含量的計(jì)算：首先以標(biāo)準(zhǔn)溶液所檢測(cè)出的目標(biāo)物的色 譜峰面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)（見(jiàn)圖5);與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)相對(duì)應(yīng)的回歸 方程、相關(guān)系數(shù)等數(shù)據(jù)如表1所示。
[0051] 表1香葉醇的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和檢測(cè)限
[0052]

【權(quán)利要求】
1. 一種香精香料中香葉醇的檢測(cè)方法，該方法采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定，采用外 標(biāo)法定量。
2. 權(quán)利要求1的檢測(cè)方法，包括以下步驟： (1) 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制；稱(chēng)取香葉醇標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇配制成具有濃度梯度的香葉醇標(biāo)準(zhǔn) 工作溶液； (2) 樣品溶液的制備：使用甲醇萃取香精香料樣品中的香葉醇，過(guò)濾后得到樣品溶液； (3) 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析：利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀分別對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶 液進(jìn)行檢測(cè)分析； (4) 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算煙用香精香料中香葉醇的含量。
3. 權(quán)利要求2的檢測(cè)方法，其中所述的香精香料為煙用香精香料， 優(yōu)選地，所述的香精香料樣品使用甲醇萃取樣品中的香葉醇； 優(yōu)選地，萃取用的甲醇為濃度為8?12% (v/v)甲醇水溶液，更優(yōu)選地，萃取用的甲醇 為濃度為10% (v/v)甲醇水溶液。
4. 權(quán)利要求2的檢測(cè)方法，其中萃取的方式為超聲萃取。
5. 權(quán)利要求2的檢測(cè)方法，其中所述的香精香料樣品的制備過(guò)程如下：稱(chēng)取適量待測(cè) 香精香料樣品，加入適量甲醇水溶液，室溫下超聲萃取，過(guò)濾后，得到樣品溶液。
6. 權(quán)利要求2的檢測(cè)方法，其中液相色譜的分析條件為以下（i)至（vi)中的一項(xiàng)或多 項(xiàng)： ⑴采用C18色譜柱， 優(yōu)選地，所述的色譜柱的規(guī)格為50mmX 2. 1mm i. d.，2. 6 μ m粒徑， (ii) 色譜柱溫度為28?32°C，優(yōu)選為30°C， (iii) 進(jìn)樣量為8?12 μ L，優(yōu)選為10 μ L， (iv) 流動(dòng)相：乙腈-乙酸銨-乙酸-水溶液， 優(yōu)選的流動(dòng)相：A為乙腈，B為5mm〇L/L乙酸銨溶液（含0. 1% (v/v)乙酸），采用等度 洗脫程序，體積比50 :50， (v) 流速為 〇· 1 ?〇· 3ml/min，優(yōu)選為 0· 2ml/min， (vi) 洗脫時(shí)間約l〇min。
7. 權(quán)利要求2的檢測(cè)方法，其中質(zhì)譜的分析條件為以下（i)至（iii)中的一項(xiàng)或多項(xiàng)： (i) 用電噴霧離子阱串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定香葉醇， (ii) 離子源：電噴霧電離源（ESI); (iii) 以選擇離子對(duì)定性，優(yōu)選的離子對(duì)為：定性離子對(duì)m/z 155. 3>73. 1， 155. 3>127· 1，定量離子對(duì) m/z 155. 3>73· 1。
8. 權(quán)利要求7的檢測(cè)方法，其中質(zhì)譜的分析條件為：掃描方式：正離子掃描；檢測(cè)方 式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM);電噴霧電壓：5500V ;離子源溫度：700°C ;輔助氣Gasl壓力：60psi ; 輔助氣Gas2壓力：50psi ;去簇電壓（DP) :40V ;碰撞能（CE) :20V。
9. 權(quán)利要求2或6的檢測(cè)方法，其中色譜分析條件為：色譜柱采用菲羅門(mén)C18液相色譜 柱，色譜柱溫度為30°C，進(jìn)樣量為10 μ L，流速為0. 2ml/min ;流動(dòng)相：A為乙腈，B為5mmoL/ L乙酸銨溶液（含0. 1%乙酸），采用等度洗脫程序，體積比50 :50,洗脫時(shí)間總共約lOmin。
10. 權(quán)利要求2的檢測(cè)方法，其中外標(biāo)法所用的標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制步驟如下：稱(chēng)取0. lg 香葉醇，精確至o. OOOlg，用甲醇溶解后轉(zhuǎn)移至lOOOmL容量瓶中并定容，定為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液； 分別移取〇. 01mL，0. 05mL，0. lmL，0. 5mL，1. OmL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液到100mL容量瓶中，用濃度 為10% (v/v)甲醇水溶液定容，則香葉醇的濃度為0. 01yg/mL、0. 05yg/mL、0. lyg/mL、 0. 5 μ g/mL、1. 0 μ g/mL，得到香葉醇的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。
【文檔編號(hào)】G01N30/88GK104101677SQ201410383802
【公開(kāi)日】2014年10月15日 申請(qǐng)日期:2014年8月7日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月7日
【發(fā)明者】鄧其馨, 黃朝章, 張建平, 蘇明亮, 劉江生, 謝衛(wèi) 申請(qǐng)人:福建中煙工業(yè)有限責(zé)任公司