胸腹水惡性細胞的包埋方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種胸腹水惡性細胞的包埋方法。該方法包括以下步驟：首先將胸腹水分別置于若干50ml離心管內(nèi)，并將分析純乙醇分別加入離心管中，混勻、靜置2-4小時，得到沉淀物；將沉淀物中的水份吸取，將其采用固定模具包裹得到標本并置于取材盒中；將得到的標本進行脫水，脫水劑為乙醇；將脫水后的標本透明,透明劑為二甲苯；將透明處理后的標本在70℃恒溫箱內(nèi)浸蠟,包埋劑是石蠟；將浸蠟處理后的標本在包埋工作站中采用石蠟包埋，將標本和石蠟倒入包埋盒中，待包埋盒表面的石蠟凝固后，將包埋盒置于冷水中使得石蠟快速凝固，最后從包埋盒中取出蠟塊并保存。本方法可以極大地提高脫落細胞陽性檢出率，可進一步進行后續(xù)的分子、基因及免疫組化等診斷。
【專利說明】胸腹水惡性細胞的包埋方法

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于細胞生物學領域，涉及一種胸腹水惡性細胞的包埋方法。

【背景技術】
[0002] 診斷惡性胸腹腔腔積液的金標準是在胸腹水中找到癌細胞。
[0003] 胸腹水脫落細胞診斷因具有快速、簡便以及患者痛苦少等優(yōu)點，在臨床上已被廣 泛應用，并成為診斷疾病的重要手段之一，尤其對良惡性疾病的鑒別起關鍵性作用，可以 為臨床提供非常有價值的，因此胸腹水脫落細胞學檢查已經(jīng)成為早期篩查惡性腫瘤的重要 手段。
[0004] 但目前往往胸腹水診斷陽性率很低。原因之一就是檢測方法的選擇。目前許多大 型醫(yī)院病理科常用的脫落細胞學檢查方法依然是細胞離心沉渣后直接涂片法。但是這種方 法收集到的細胞數(shù)量少，常需多次送檢才能得到滿意的結(jié)果；制作的涂片質(zhì)量受標本的新 鮮程度、血細胞含量、細胞分布情況、涂片厚薄及染色等因素的影響，使得漏診率和誤診率 較高,惡性腫瘤細胞檢出率極低。
[0005] 但是由于送檢脫落細胞學的取材方便、簡單，快捷，臨床醫(yī)生常常選擇此種輔助檢 查方法，正是因為這樣，造成了臨床與病理科之間因腫瘤細胞檢出率過低而帶來的診療方 面的困惑，臨床醫(yī)生強烈要求尋找新的方法和技術提高脫落細胞的陽性檢出率。
[0006] 近年來，隨著液基薄層制片技術的普及，大大提高了標本涂片質(zhì)量，其利用流體動 力學原理可制備厚薄均勻的涂片，并可減少涂片上血細胞、粘液等因素的影響。但其受標本 及涂片數(shù)量的限制，不能進一步進行后續(xù)的分子及基因等診斷。特別是對細胞形態(tài)不典型 的間皮細胞、轉(zhuǎn)移癌細胞的鑒別等，僅僅用涂片法是難以勝任的，常需做免疫細胞化學染色 檢查才能確診。
[0007] 對此，病理科在長期的工作中提出來瓊脂細胞包埋和凝血酶細胞包埋方法，極大 的提高了脫落細胞陽性檢出率，并可進一步進行后續(xù)的分子、基因及免疫組化等診斷。
[0008] 因此，尋找一種新的細胞包埋技術是亟待解決的問題。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 為了解決上述技術問題，本發(fā)明的目的在于提供一種胸腹水惡性細胞的包埋方 法，可以極大地提高脫落細胞陽性檢出率，可進一步進行后續(xù)的分子、基因及免疫組化等診 斷。
[0010] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種胸腹水惡性細胞的包埋方法，其包括步驟首 先將胸腹水分別置于若干50ml離心管內(nèi)，并將分析純乙醇分別加入離心管中，混勻、靜置 2-4小時，得到沉淀物；將沉淀物中的水份吸取，將其采用固定模具包裹得到標本并置于取 材盒中；將得到的標本進行脫水，脫水劑為乙醇；將脫水后的標本透明，透明劑為二甲苯； 將透明處理后的標本在70°C恒溫箱內(nèi)浸蠟，包埋劑是石蠟；將浸蠟處理后的標本在包埋工 作站中采用石蠟包埋，將標本和石蠟倒入包埋盒中，待包埋盒表面的石蠟凝固后，將包埋盒 置于冷水中使得石蠟快速凝固，最后從包埋盒中取出蠟塊并保存。
[0011] 通過以上技術方案，本發(fā)明的有益效果如下：
[0012] a.取材方便、簡單；
[0013] b.收集到的有核細胞多，切片質(zhì)量好，細胞結(jié)構清晰，大大提高了陽性檢出率，特 別是對細胞量較少的標本，意義更大；
[0014] c.制成的蛋白質(zhì)蠟塊可以長期保存，可以連續(xù)切片，克服了以往涂片法標本有限 的缺點；
[0015] d.本發(fā)明主要是利用改變電解質(zhì)平衡進行自體蛋白質(zhì)骨架結(jié)構的原理，沒有加入 任何外來物質(zhì)，利于進一步的分子診斷及基因檢測等，同時克服了瓊脂和凝血酶等細胞包 埋技術因加入了外源性物質(zhì)而不利于進一步的分子診斷及基因檢測等缺點。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0016] 圖1為采用本方法的胸腹水自體蛋白質(zhì)骨架包埋切片的示意圖；

【具體實施方式】
[0017] 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明的【具體實施方式】作進一步描述，本發(fā)明的優(yōu)點和特點將 會隨著描述而更為清楚。但這些實施例僅是范例性的，并不對本發(fā)明的范圍構成任何限制。
[0018] 下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0019] 下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0020] 如圖1所示，在血性背景下，紅細胞裂解破碎，腫瘤細胞密集，分布均勻，瘤細胞胞 膜結(jié)構清晰，核染色質(zhì)嗜堿性，粗顆粒，核仁清楚，并可見病理性核分裂象。該片可直接診斷 為惡性腫瘤，但為何種腫瘤需做免疫組織化學染色進一步確認。
[0021] 首先將200ml胸腹水置于8個50ml離心管內(nèi)，并將分析純的乙醇分別加入離心管 中，混勻、靜置2-4小時，得到沉淀物；若為血性胸腹水，需要在其中加入等量的50%乙醇混 勻。在加入分析純的乙醇放置一段時間后，胸腹水開始出現(xiàn)沉淀，原因是胸腹水是等電子膠 體，加入的乙醇是正電子液體，它會與胸腹水中負電子的細胞任意比結(jié)合，從而改變胸腹水 的電解質(zhì)平衡，胸腹水中有用的蛋白成份將會聚集，形成豆腐渣樣沉淀物；
[0022] 其次將沉淀物置于潔凈的濾紙上，吸取多余水份，并將沉淀物靠攏、固定模具包裹 后得到標本并置于取材盒內(nèi)。
[0023] 將制好的標本進行脫水，常用的脫水劑為乙醇。脫水采用等級脫水，從較低濃度乙 醇開始，逐漸替換到高濃度乙醇。一般依次為50%乙醇一70%乙醇一80%乙醇一95%乙 醇一無水乙醇（兩次）一95%乙醇，在采用95%乙醇脫水時，可加少許伊紅，使組織著色便 于包埋時定位；每級脫水處理時間為2-8小時，無水乙醇中處理時間為2-4小時。
[0024] 將脫水后的標本透明，常用的透明劑為二甲苯，一般采用二甲苯處理兩次，每級 處理時間為〇. 5-2小時或更長些。若將標本放入二甲苯中時有白色混濁現(xiàn)象發(fā)生，說明標 本脫水不徹底，應將其退回至無水乙醇中再進行脫水。
[0025] 將透明處理后的標本浸蠟，常用的包埋劑是石蠟，浸蠟時間為2-3小時。浸蠟過 程中逐漸使二甲苯揮發(fā)，并不斷加入純石蠟，直至石蠟飽和為止。整個浸蠟過程需在恒溫箱 內(nèi)進行，按需要調(diào)整溫度。
[0026] 脫水、透明以及浸蠟的步驟均在脫水機中進行。
[0027] 將浸蠟處理后的標本在包埋工作站中采用石蠟包埋，浸蠟后再更換兩次已熔融的 純石蠟，將標本和石蠟倒入包埋盒中，用加熱的鑷子迅速將標本按一定的間隔和所需的切 面擺放整齊，同時用加熱的鑷子趕走材料周圍的氣泡，待包埋盒表面的石蠟凝固后將包埋 盒平放入冷水中，使石蠟迅速凝固；最后從包埋盒中取出蠟塊，以便保存，同時將樣品編號 封于蠟塊上，以免樣品混淆；所述石蠟溫度為58_62°C。
[0028] 人體胸腹水是等滲膠體，電解質(zhì)正負電子平衡（如：豆?jié){），自體蛋白質(zhì)骨架包埋 技術，主要是通過固定液改變細胞電解質(zhì)平衡，使蛋白質(zhì)析出，最終形成絮狀沉淀，從而制 成蛋白質(zhì)蠟塊。
[0029] 脫水的目的是除去標本中的水份，便于透明、浸蠟、包埋等步驟的進行，因為這些 程序中所用的藥品都不能與水混合，所以必須脫水。脫水過程應緩慢進行，不能操之過急或 時間過長，以免組織變硬變脆或發(fā)生收縮現(xiàn)象。
[0030] 透明的目的是將脫水劑從材料中除去，使材料透明，增加折光系數(shù)；同時便于進行 下一步的浸蠟和包埋等程序（因為脫水劑不能溶解石蠟）。采用逐級進行的步驟，可減少材 料收縮。透明劑是一種既能與脫水劑混合，又能與包埋劑混合的藥劑。二甲苯穿透能力強， 但又宜使標本收縮變脆，使用時不能在其中停留時間過長。
[0031] 浸蠟的目的是逐漸除去透明劑，并為包埋劑所代替。一般所用的石蠟分熔點40°C 以下的軟蠟和熔點62°C以上的硬蠟。浸蠟過程一般是從低溫到高溫、從低熔點到高熔點逐 漸進行，這一過程不能操之過急，否則浸蠟不徹底影響切片。此外，軟材料可用熔點較低的 石蠟，較硬的材料可用熔點較高的石蠟；冬季可用熔點較低的石蠟，夏季可用熔點較高的石 蠟。石蠟需要純凈，不含雜質(zhì)。浸蠟過程是使石蠟慢慢溶于浸有標本的透明劑中，溶解在透 明劑中的石蠟漸漸深入到材料的細胞中去，最后使透明劑完全被石蠟取代，以便切片。
[0032] 上面已經(jīng)舉例說明了本發(fā)明的實施例，本領域技術人員應該理解的是，在不偏離 本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術方案的細節(jié)和形式進行修改或替換，但這些修改 和替換均落入本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。
【權利要求】
1. 一種胸腹水惡性細胞的包埋方法，其特征在于，包括步驟： 步驟1、將胸腹水分別置于若干50ml離心管內(nèi)，并將分析純乙醇分別加入離心管中，混 勻、靜置2-4小時，得到沉淀物； 步驟2、將沉淀物中的水份吸取，將其采用固定模具包裹得到標本并置于取材盒中； 步驟3、采用乙醇作為脫水劑，對所得到的標本進行脫水處理； 步驟4、采用二甲苯作為透明劑，對脫水后的標本進行透明處理； 步驟5、對透明處理后的標本在70°C恒溫箱內(nèi)采用石蠟做浸蠟處理； 步驟6、對浸蠟處理后的標本在包埋工作站中采用石蠟包埋，其中，將標本和石蠟倒入 包埋盒中，待包埋盒表面的石蠟凝固后，將包埋盒置于冷水中使得石蠟快速凝固，最后從包 埋盒中取出蠟塊并保存。
2. 根據(jù)權利要求1所述的胸腹水惡性細胞的包埋方法，其特征在于，在步驟3中，脫水 處理采用等級脫水方式，依次采用50 %乙醇、70 %乙醇、80 %乙醇、95 %乙醇、無水乙醇、無 水乙醇，最后采用95%乙醇脫水。
3. 根據(jù)權利要求2所述的胸腹水惡性細胞的包埋方法，其特征在于，在步驟3中，采用 50 %乙醇、70 %乙醇、80 %乙醇、95 %乙醇脫水處理時間為2-8小時，在無水乙醇中時間為 2-4h 〇
4. 根據(jù)權利要求1所述的胸腹水惡性細胞的包埋方法，其特征在于，在步驟4中，所述 透明處理采用二甲苯處理兩次，每次處理時間為0. 5-2小時。
5. 根據(jù)權利要求1所述的胸腹水惡性細胞的包埋方法，其特征在于，在步驟5中，所述 浸蠟處理的時間為2-3小時。
6. 根據(jù)權利要求1所述的胸腹水惡性細胞的包埋方法，其特征在于，步驟3、步驟4以 及步驟5在脫水機中進行。
7. 根據(jù)權利要求1所述的胸腹水惡性細胞的包埋方法，其特征在于，在步驟6中，所述 石蠟溫度為58-62°C。
【文檔編號】G01N1/36GK104122132SQ201410374357
【公開日】2014年10月29日 申請日期:2014年7月31日 優(yōu)先權日:2014年7月31日
【發(fā)明者】劉建勇, 李微, 張益清, 王緒華, 梁超, 陳忠, 方國偉, 黃士昂 申請人:北京海思特臨床檢驗所有限公司