一種水產(chǎn)品中微囊藻毒素含量的檢測(cè)方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種水產(chǎn)品中微囊藻毒素含量的檢測(cè)方法，其特征在于：包括如下步驟：1）分別配置若干梯度濃度的微囊藻毒素的標(biāo)準(zhǔn)使用液，對(duì)其分別進(jìn)行色譜分析，獲得峰面積，并分別以所述梯度濃度和峰面積為橫縱坐標(biāo)繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；2）吸取設(shè)定體積的樣品溶液進(jìn)行色譜分析，測(cè)定其峰面積，并通過(guò)步驟1）所述的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出樣品溶液的微囊藻毒素濃度。本發(fā)明的檢測(cè)方法準(zhǔn)確方便、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于2%，檢出限為0.01μg/kg，且無(wú)需有機(jī)溶劑、測(cè)試快速安全、選擇性好且靈敏度高，能集采樣、萃取、濃縮、進(jìn)樣于一體，還能夠與液相色譜儀聯(lián)用，可手動(dòng)和自動(dòng)操作，使得樣品處理技術(shù)及分析操作簡(jiǎn)單省時(shí)，非常適于水產(chǎn)品中微囊藻毒素含量的研究。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種水產(chǎn)品中微囊藻毒素含量的檢測(cè)方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種毒素含量的檢測(cè)方法，具體涉及一種水產(chǎn)品中微囊藻毒素的檢測(cè) 方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 微囊藻毒素（microcystins，MCs)是一類(lèi)由藍(lán)藻產(chǎn)生的單環(huán)七肽結(jié)構(gòu)的天然肝毒 素，是水體中最常見(jiàn)的一種藍(lán)綠藻毒素。目前已知存在的最普遍、含量相對(duì)較多，毒性較大 的MC主要是MC-LR。其他的如MC-YR、MC-RR、MC-LF、MC-LW也較為常見(jiàn)。MC在陽(yáng)光照射 下非常穩(wěn)定，但暴露在紫外線(xiàn)下可水解或發(fā)生化學(xué)異構(gòu)、化學(xué)鍵合反應(yīng)而喪失毒性，尤其當(dāng) 紫外線(xiàn)波長(zhǎng)接近其吸收峰最大吸收波長(zhǎng)時(shí)，MC被迅速地降解。藻毒素很高的耐熱性，加熱 煮沸都不能將毒素破壞，也不能將其去除。
[0003] MC廣泛存在于作為飲水來(lái)源的富營(yíng)養(yǎng)湖泊、池塘和河流等水體中。MC不僅能直接 導(dǎo)致一些水生生物如魚(yú)類(lèi)、貝類(lèi)及蛘類(lèi)的患病及死亡，而且一些野生動(dòng)植物及家畜、家禽飲 用了含有產(chǎn)毒藻種及藻毒素的水后，也會(huì)引起中毒甚至死亡，MC可通過(guò)食物鏈的生物富集 危害人類(lèi)的健康。MC可通過(guò)多種途徑進(jìn)入人體，如通過(guò)口、鼻、皮膚等途徑攝入；通過(guò)飲水 攝入；通過(guò)食用水產(chǎn)品或藻類(lèi)食品攝入等，如魚(yú)類(lèi)處于水生生態(tài)系統(tǒng)食物鏈的較高等級(jí)，通 過(guò)生物富集作用會(huì)在體內(nèi)積累比環(huán)境水中含量更高的MC，從而給人群健康帶來(lái)直接的安全 隱患。因此，測(cè)定水產(chǎn)品中微囊藻的毒素含量是非常必要的。
[0004] 目前，微囊藻毒素檢測(cè)方法主要有生物測(cè)試法，氣相色譜法，酶聯(lián)分析法，蛋白磷 酸酶抑制分析法和細(xì)胞毒素研究技術(shù)等。生物測(cè)試法操作簡(jiǎn)單快速，結(jié)果直觀，但是卻會(huì) 消耗較多的毒素，靈敏度和專(zhuān)一性不高，最小研究線(xiàn)要用半致死量和致死量來(lái)衡量；聯(lián)酶分 析法操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，能檢出毒素的不同同系物，但是對(duì)多種同系物的識(shí)別需要廣譜抗 體；蛋白磷酸酶抑制分析法的缺陷是不能區(qū)分特異性的同系物，而細(xì)胞毒素研究技術(shù)則是 生產(chǎn)工作量大，最小檢出限為l(T20mg/ml，準(zhǔn)確度不高。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供一種檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法無(wú)需有機(jī)溶劑、測(cè) 試快速安全、選擇性好且靈敏度高，使得樣品處理技術(shù)及分析操作簡(jiǎn)單省時(shí)。
[0006] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是： 一種水產(chǎn)品中微囊藻毒素含量的檢測(cè)方法，其特征在于：包括如下步驟： 1) 分別配置若干梯度濃度的微囊藻毒素的標(biāo)準(zhǔn)液，對(duì)其分別進(jìn)行色譜分析，獲得峰面 積，并分別以所述梯度濃度和峰面積為橫縱坐標(biāo)繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)； 2) 吸取設(shè)定體積的樣品溶液進(jìn)行色譜分析，測(cè)定其峰面積，并通過(guò)步驟1)所述的標(biāo)準(zhǔn) 曲線(xiàn)計(jì)算出樣品溶液的微囊藻毒素濃度。
[0007] 優(yōu)選地，所述色譜分析條件如下： 色譜柱：C18, 250mmX 4. 6mm，粒徑 5 μ m ; 柱溫：35°C ; 流動(dòng)相：乙臆+水+二氣乙酸=(36+64+0. 10); 流速：1. 〇ml/min ; 波長(zhǎng)：240nm ; 進(jìn)樣量：20 μ L。
[0008] 優(yōu)選地，所述樣品經(jīng)過(guò)前處理獲得，其步驟為：取出待檢測(cè)水產(chǎn)品中富含微囊藻毒 素的部分，然后醇取樣品并對(duì)醇取后的樣品進(jìn)行干燥和研磨。
[0009] 優(yōu)選地，所述樣品溶液最后按以下公式計(jì)算樣品中微囊藻毒素的濃度：

【權(quán)利要求】
1. 一種水產(chǎn)品中微囊藻毒素含量的檢測(cè)方法，其特征在于：包括如下步驟： 1) 分別配置若干梯度濃度的微囊藻毒素的標(biāo)準(zhǔn)液，對(duì)其分別進(jìn)行色譜分析，獲得峰面 積，并分別以所述梯度濃度和峰面積為橫縱坐標(biāo)繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)； 2) 吸取設(shè)定體積的樣品溶液進(jìn)行色譜分析，測(cè)定其峰面積，并通過(guò)步驟1)所述的標(biāo)準(zhǔn) 曲線(xiàn)計(jì)算出樣品溶液的微囊藻毒素濃度。
2. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)方法，其特征在于：所述色譜分析條件如下： 色譜柱：C18, 250mmX 4. 6mm，粒徑 5 μ m ; 柱溫：35°C ; 流動(dòng)相：乙臆+水+二氣乙酸=(36+64+0. 10); 流速：1. 〇ml/min ; 波長(zhǎng)：240nm ; 進(jìn)樣量：20 μ L。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于：所述樣品經(jīng)過(guò)前處理獲得，其步驟 為：取出待檢測(cè)水產(chǎn)品中富含微囊藻毒素的部分，然后醇取樣品并對(duì)醇取后的樣品進(jìn)行干 燥和研磨。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于：所述樣品溶液最后按以下公式計(jì)算 樣品中微囊藻毒素的濃度： 式中：
C#--樣品中微囊藻毒素的濃度，單位為μ g/g ; Cm--測(cè)試溶液中微囊藻毒素的濃度，單位為μ g/ml ; V--樣品溶液的體積，單位為ml ; m〇--水產(chǎn)品的取樣量，單位為g。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK104155372SQ201410321722
【公開(kāi)日】2014年11月19日 申請(qǐng)日期:2014年7月7日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月7日
【發(fā)明者】葉文婷, 雷新慧, 徐婷, 張建, 母凌燕 申請(qǐng)人:深圳市格瑞斯特環(huán)保技術(shù)有限公司