尿中1-溴-2丙醇的氣相色譜檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種尿中1-溴-2丙醇的氣相色譜檢測方法，吸取2.0mL尿樣于10mL離心管中，加1.5mL硫酸溶液，搖勻，置于沸水浴加熱8小時，取出冷卻至室溫，加5mL氫氧化鈉溶液混勻，加2.0mL甲苯，振搖2min，于1500r/min離心10分鐘，取出1.5mL甲苯層，放入另一離心管中，加20mL七氟丁酸酐，振搖2min，放置5min，加1mL緩沖液，振搖2min，除去過剩的七氟丁酸酐，放置2min，取甲苯層進樣測定，記錄峰值，計算得到尿中1-溴-2丙醇的濃度；本發(fā)明準確度高，誤差在千分之五以下，操作簡單，靈敏度高，檢出限為2.5μg/mL，出峰穩(wěn)定，可重復性高。
【專利說明】
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種尿中1-溴_2丙醇的氣相色譜檢測方法，屬于化學分析【技術領域】。 尿中1-溴-2丙醇的氣相色譜檢測方法

【背景技術】
[0002] 溴丙燒（1-bromopropane，1-BP)，也稱溴代正丙燒（n-propyl bromide，nPB)。是一 種無色略有甜味的液體，相對分子質(zhì)量為123.00,密度為1.35 g/mi，熔點為一 1 10.0°C， 沸點為71. 0°C。微溶于水，溶于丙酮、苯、氯仿，能與乙醇、乙醚混溶。由于1-BP具有低毒高 效、不破壞臭氧層等特點，20世紀90年代后期以來成為消耗臭氧層物質(zhì)（ozonedepleting substances，ODS)清洗劑的理想替代品。目前，I-BP作為一種高效環(huán)保清洗劑，廣泛用于各 種油脂、助焊劑、五金電子、精密機械、服裝干洗等行業(yè)的清洗過程。此外，還作為化工原料， 用于農(nóng)藥、醫(yī)藥、染料等的生產(chǎn)以及粘膠、涂料的配制。
[0003] 職業(yè)接觸I-BP可經(jīng)呼吸道和皮膚吸收進入體內(nèi)，其中大多數(shù)中毒者是由于長期 接觸工作環(huán)境中的高濃度1-BP，經(jīng)呼吸道吸入1-BP引起中毒。大鼠毒代動力學研究表明， 1-BP進入機體，除少部分以原型與谷胱甘肽（GSH)結合外，絕大多數(shù)經(jīng)細胞色素 P450氧 化，其中主要是第2位碳上發(fā)生羥化，生成1-溴-2-丙醇，后者與GSH、葡萄糖醛酸結合經(jīng)尿 排出；一部分1-溴-2-丙醇可進一步氧化生成溴丙酮 [1]。
[0004] 1-BP主要通過呼吸道進入人體，進入體內(nèi)部分主要通過1-溴-2丙醇方式經(jīng)尿 液排出體外。故通過分析尿中濃度，可估計1-BP環(huán)境暴露量。Ichihara等研究了職業(yè)暴 露1-BP者班后尿中1-溴-2-丙醇作為暴露標志的可行性。該研究使用被動式個體采樣 器估計工人外暴露量，尿樣采集后保存在4 °C條件下，使用氣相色譜-火焰離子化檢測器 (GC-FID)測定尿樣中的1-BP，檢出限為0. 5 ng/mL。同時該研究對尿中1-BP的穩(wěn)定性進 行了測試，以第1天尿中1-BP濃度為100%，在4 °C保存條件下，分別在第1、7、14天測定 尿中1-BP的濃度。結果顯示，第1、7、14天尿中1-BP濃度分別為100. 0% ± 3. 6%、94. 9% ± 2. 3%、91. 2% ± 1. 8%。
[0005] 國內(nèi)李衛(wèi)華等人探索溴丙烷（1-BP)對接觸工人神經(jīng)毒性的劑量-效應關系時發(fā) 現(xiàn)1-BP毒作用基準劑量（BMD)和基準劑量下限值（BMDL)分別為55. 55和30. 78 mg/m3， 1-BP可引起脛神經(jīng)DL延長、振動覺下降的劑量依賴性改變。
[0006] 生殖毒性方面，到目前為止，國內(nèi)外未見職業(yè)接觸I-BP引起作業(yè)工人嚴重生殖毒 性的病例報道。人群流行病學調(diào)查的主要發(fā)現(xiàn)是1-BP可引起作業(yè)工人月經(jīng)周期紊亂。肝毒 性方面，動物實驗提示1-BP暴露引起大鼠肝臟系數(shù)和肝細胞中空泡數(shù)目的增加，1-BP可能 具有輕或中度肝臟毒性。Stelljes和Wood的研究還提出了 1-BP引起肝細胞空泡的基準劑 量的下限值（BMDL)是1. 24 g/m3。但其他支持1-BP具有肝毒性的證據(jù)仍然缺乏，如直接反 映肝損傷的指標一血清肝功酶活力改變和病理組織損傷等指標在動物實驗中均未觀察到。 此外，人群流行病學調(diào)查也未發(fā)現(xiàn)具體說明肝功酶活力的異常。
[0007] 但近年來我國電子、農(nóng)藥、染料、醫(yī)藥、造紙、制革等產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速，每年溴代烷烴 的需求量超過14 000 t，其中高純度的I-BP為8000 t。接觸工人數(shù)量大，從國外人群流行 病學資料研究表明其短期大劑量接觸和長期接觸均可以對人體造成職業(yè)性損害，故其潛在 隱患不容忽視。為切實做好I-BP中毒的三級預防，做到防患于未然，目前亟須在1-BP中 毒機制、生物接觸限值及檢測、中毒診斷標準等諸多方面進行深入研究，盡快制定尿中1-BP 檢測標準。
[0008] 1-BP的代謝過程較為復雜。1-BP可通過多種途徑排出體外，包括以原形方式排 出、脫溴、經(jīng)P450氧化以及與谷胱甘肽結合等。動物實驗發(fā)現(xiàn)，1-BP進入機體后，主要是經(jīng) 細胞色素 P450氧化，經(jīng)羥化作用，生成1-溴-2-丙醇，再與谷胱甘肽、葡萄糖醛酸結合經(jīng)尿 排出，部分1-溴-2-丙醇可進一步氧化成酮。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明提供一種尿中1-溴_2丙醇的氣相色譜檢測方法，操作簡單，靈敏度高。
[0010] 尿中1-溴-2丙醇的氣相色譜檢測方法，包括如下步驟： 1) 標準曲線制備：將1-溴-2丙醇用CS2稀釋至2. 50、10. 00、50· 00、100. 00、 500. 00 μ g/mL的溶液，采用氣相色譜法檢測不同濃度1-溴-2丙醇溶液的峰值，以1-溴-2 丙醇溶液為橫坐標，峰值為縱坐標擬合得到標準曲線； 2) 樣品處理：吸取2. OmL尿樣于10mL離心管中，加1. 5mL硫酸溶液，搖勻，置于沸水 浴加熱8小時，取出冷卻至室溫，加5mL氫氧化鈉溶液混勻，加2. OmL甲苯，振搖2min，于 100(T2000r/min的轉速下離心10分鐘，取出1. 5mL甲苯層，放入另一離心管中，加20mL 七氟丁酸酐，振搖2min，放置5min，加 lmL緩沖液，振搖2min，除去過剩的七氟丁酸酐，放 置2min，取甲苯層進樣測定，記錄峰值，將峰值代入到步驟1)的標準曲線中，計算得到尿中 1-溴-2丙醇的濃度； 其中氣相色譜法檢測條件為：色譜柱：SPB-1 30mX0. 25mmX0. 25μπι ;進樣口溫度 200°C ;檢測器：氫火焰離子化檢測器，溫度250°C ;色譜條件為：色譜柱程序升溫：起始溫度 3(T40°C，維持3min，然后以1(T2(TC /min的速度升溫至200°C，維持6min ;以N2為載氣流 量為1. OmL/min ;分流進樣，分流比：10:1 ;進樣體積1. 0 μ L。
[0011] 步驟1)制備得到的標準曲線為：y=5. 788*χ+12. 66, R2=0. 9999。
[0012] 所述升溫速度為15°C /min。
[0013] 所述步驟2)中轉速為1500r/min。
[0014] 所述起始溫度35 °C。
[0015] 有益效果：本發(fā)明提出采用氣相色譜檢測方法檢測尿中1-溴-2丙醇的含量，準確 度高，誤差在千分之五以下，操作簡單，靈敏度高，檢出限為2. 5 μ g/mL，出峰穩(wěn)定，可重復性 商。

【具體實施方式】
[0016] 實施例1 Trace GC Ultra氣相色譜儀，配有Auto injector AI3000自動進樣器（美國Finnigan 公司）；氫氣發(fā)生器（QL型，濟南應用化工科技開發(fā)有限公司）；低噪音空氣泵（GA3000,北京 中興匯利科技發(fā)展有限公司）；自動進樣小瓶（美國Agilent公司），溶劑解吸型活性炭管 (100/50mg，江蘇省南通金南玻儀五金廠)。
[0017] 準確稱取1-溴-2丙醇50. OOmg，CS2溶解后定容至50mL容量瓶，此溶液即為L 0 mg/mL的1-ΒΡ貯備液。4° C冰箱保存?zhèn)溆?。移取適量1-溴-2丙醇的貯備液用CS2稀釋 至2. 50、10. 00、50. 00、100. 00、500. 00 μ g/mL的標準系列，采用氣相色譜法檢測不同濃度 1-溴-2丙醇溶液的峰值，以1-溴_2丙醇溶液為橫坐標，峰值為縱坐標擬合得到標準曲線 為 y=5. 788*χ+12· 66, R2=0. 9999。
[0018] 收集1-BP暴露工人班后尿于清潔的100mL規(guī)格的聚乙烯瓶中，在收集過程中避免 尿樣多次轉移和外來物的污染，l〇〇mL尿樣中加2?3滴濃鹽酸，4°C可保存2周。
[0019] 本次研究采取尿比重校正法進行校正，樣品采集后及時測定尿液比重，測量時，將 收集的尿樣移入25mL量筒中，放入尿比重計，穩(wěn)定后讀數(shù)，并記錄（d)。對于尿比重低于 1.010和大于1.030的樣品應當舍棄，并重新采樣、測定。
[0020] 用清潔的聚乙烯塑料瓶采集班末尿樣，尿樣的采集應大于50mL。必要時采集雙份 樣品，一份作為備份樣品。隨機抽取與樣品采集同批號的采尿瓶2份，作為樣品空白。將采 集后的樣品和樣品空白置于清潔容器中冷藏運輸，在_20°C下至少可保存兩周。
[0021] 吸取2.0mL尿樣于10mL離心管中，加1.5mL硫酸溶液，搖勻，蓋好，放置于沸水 浴加熱8小時，取出冷卻至室溫，加5mL氫氧化鈉溶液混勻，加2. OmL甲苯，振搖2min，于 1500r/min離心10分鐘。取出約1. 5mL甲苯層，放入另一離心管中，加20mL七氟丁酸酐，振 搖2min，放置5min，加 lmL緩沖液，振搖2min，以除去過剩的七氟丁酸酐，放置2min，取甲苯 層進樣測定。
[0022] 色譜分析條件 色譜柱：SPB-1 (30mX0. 25mmX0. 25μπι，美國 Supelco 公司）;進樣 口溫度 200°C ;檢測 器：氫火焰離子化檢測器，溫度250°C;通過對柱溫、進樣方式、載氣流量等色譜條件優(yōu)化，確 定的色譜條件為：色譜柱程序升溫：

【權利要求】
1. 尿中1-溴-2丙醇的氣相色譜檢測方法，其特征在于包括如下步驟： 1) 標準曲線制備：將1-溴-2丙醇用CS2稀釋至2. 50、10. 00、50· 00、100. 00、 500. 00 μ g/mL的溶液，采用氣相色譜法檢測不同濃度1-溴-2丙醇溶液的峰值，以1-溴-2 丙醇溶液為橫坐標，峰值為縱坐標擬合得到標準曲線； 2) 樣品處理：吸取2. OmL尿樣于10mL離心管中，加1. 5mL硫酸溶液，搖勻，置于沸水 浴加熱8小時，取出冷卻至室溫，加5mL氫氧化鈉溶液混勻，加2. OmL甲苯，振搖2min，于 100(T2000r/min的轉速下離心10分鐘，取出1. 5mL甲苯層，放入另一離心管中，加20mL 七氟丁酸酐，振搖2min，放置5min，加 lmL緩沖液，振搖2min，除去過剩的七氟丁酸酐，放 置2min，取甲苯層進樣測定，記錄峰值，將峰值代入到步驟1)的標準曲線中，計算得到尿中 1-溴-2丙醇的濃度； 其中氣相色譜法檢測條件為：色譜柱：SPB-1 30mX0. 25mmX0. 25μπι ;進樣口溫度 200°C ;檢測器：氫火焰離子化檢測器，溫度250°C ;色譜條件為：色譜柱程序升溫：起始溫度 3(T40°C，維持3min，然后以KT20°C /min的速度升溫至200°C，維持6min ;以N2為載氣流 量為1. OmL/min ;分流進樣，分流比：10:1 ;進樣體積1. 0 μ L。
2. 根據(jù)權利要求1所述尿中1-溴-2丙醇的氣相色譜檢測方法，其特征在于：步驟1) 制備得到的標準曲線為：y=5. 788*χ+12. 66, R2=0. 9999。
3. 根據(jù)權利要求1所述尿中1-溴-2丙醇的氣相色譜檢測方法，其特征在于：所述升 溫速度為15°C /min。
4. 根據(jù)權利要求1所述尿中1-溴-2丙醇的氣相色譜檢測方法，其特征在于：所述步 驟2)中轉速為1500r/min。
5. 根據(jù)權利要求1所述尿中1-溴-2丙醇的氣相色譜檢測方法，其特征在于：所述起 始溫度35°C。
【文檔編號】G01N30/02GK104101660SQ201410293916
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2014年6月27日 優(yōu)先權日:2014年6月27日
【發(fā)明者】繆榮明 申請人:繆榮明