專利名稱：黃瓜果實中丙醇二酸的定性定量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于化學檢測技術(shù)領(lǐng)域，涉及ー種黃瓜果實中丙醇ニ酸的檢測方法，具體涉及ー種利用高效液相色譜技術(shù)(HPLC)對黃瓜果實中丙醇ニ酸進行定性定量的檢測方法。
背景技術(shù)：
丙醇ニ酸(Tartronic acid)是ー種小分子有機酸。它可抑制碳水化合物在動物體內(nèi)轉(zhuǎn)化為脂肪?，F(xiàn)代藥理學研究表明黃瓜果實中含有丙醇ニ酸，可以阻止人體內(nèi)脂肪堆積，有減肥和預(yù)防冠心病的功效。黃瓜發(fā)澀的ロ感主要來自黃瓜所含的丙醇ニ酸，這是其它 一般蔬菜不含的成分。丙醇ニ酸和唾液融合會有點兒發(fā)澀的ロ感。據(jù)研究，黃瓜中所含丙醇ニ酸無毒副作用，是良好的天然減肥食品。丙醇ニ酸在不同品種的黃瓜果實中含量差異比較大。目前關(guān)于黃瓜中含有丙醇ニ酸的宣傳報道有很多，但卻沒有黃瓜中丙醇ニ酸的鑒定和含量檢測方法，此方面研究國內(nèi)外尚屬空白。鑒于丙醇ニ酸的減肥和美容功效以及黃瓜在人們餐桌上的重要性，預(yù)計此領(lǐng)域的研究將會倍受青睞。

發(fā)明內(nèi)容
針對目前各種關(guān)于黃瓜中含有丙醇ニ酸的報道，但卻沒有相應(yīng)的實驗方法對其進行定性定量檢測，本發(fā)明提供ー種黃瓜果實中丙醇ニ酸的定性定量檢測方法。本發(fā)明的上述目的通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)(I)黃瓜果實的前處理將黃瓜果實去除兩端和種腔部分，粉碎后再研磨；(2)丙醇ニ酸的提取將研磨好的黃瓜果實樣品離心，取上清液；(3)丙醇ニ酸的HPLC檢測HPLC檢測時采用弱堿陰離子型色譜柱，選擇流動相等度洗脫，選擇檢測器測定波長后進行檢測，所述流動相為硫酸鈉溶液；流速為O. 8 I. Oml/min ；r = 215nm,進樣量為 10 μ I ；(4)丙醇ニ酸定性定量方法的建立用流動相逐級稀釋丙醇ニ酸標準品，配制成濃度為O. 5mg/ml、lmg/ml、2mg/ml、5mg/ml、10mg/ml的一組標準工作溶液，以姆個濃度下的標準溶液所得的相對響應(yīng)值為縱坐標，標準溶液的濃度為橫坐標，建立標準曲線，在檢測樣品時，根據(jù)樣品所得的相對響應(yīng)值，然后從標準曲線中讀出樣品中丙醇ニ酸含量。本發(fā)明通過建立黃瓜果實中丙醇ニ酸的檢測方法，對發(fā)掘黃瓜中丙醇ニ酸含量高和低的種質(zhì)資源，從而為黃瓜種質(zhì)資源創(chuàng)新、高丙醇ニ酸專用品種選育及其產(chǎn)品開發(fā)奠定基礎(chǔ)。此方法前處理簡單，成本低，可同時分析多個樣品，重復性好，結(jié)果精確穩(wěn)定。


圖I為5mg/ml丙醇ニ酸標準品的HPLC圖2為丙醇ニ酸標準曲線。
具體實施例方式具體實施方式
一本實施方式按照如下方法檢測黃瓜果實中丙醇ニ酸(I)黃瓜果實的前處理將黃瓜果實去除兩端末梢部分，然后切成段，去除種腔部分(包括種子)，用榨汁機粉碎至糊狀，取少量于研缽中研磨。(2)丙醇ニ酸的提取將研磨好的黃瓜果實樣品裝入I. 5ml離心管中，記錄管中樣品重量。然后離心，取 上清液過O. 45 μ m濾膜，進行HPLC檢測。(3)丙醇ニ酸的 HPLC-DAD 檢測HPLC檢測時采用弱堿陰離子型色譜柱，選擇流動相等度洗脫，選擇測定波長后檢測。(4)丙醇ニ酸定性定量方法的建立用流動相逐級稀釋丙醇ニ酸標準品，配制成濃度為O. 5mg/ml、lmg/ml、2mg/ml、5mg/ml、10mg/ml的一組標準工作溶液,在O. 5 10mg/ml濃度范圍內(nèi)，以姆個濃度下的標準溶液所得的相對響應(yīng)值(O. 5mg/ml :415309. 3 ；lmg/ml :1073755 ；2mg/ml :2310325 ；5mg/ml :6693463 ；10mg/ml :14609955)為縱坐標，標準溶液的濃度為橫坐標，建立標準曲線(見圖2)，線性方程為y = 1498. 2x_522765，R2 = O. 9988，在檢測樣品時，根據(jù)樣品所得的相對響應(yīng)值，然后從標準曲線中讀出樣品中丙醇ニ酸含量。本實施方式所述步驟(I)中，黃瓜果實為新鮮黃瓜，或是新鮮黃瓜粉碎后裝入袋中，置于-20°C下保存。本實施方式所述步驟(I)中，要將黃瓜研磨至完全沒有顆粒的狀態(tài)，達到細胞破碎的目的。本實施方式所述步驟(2)中，要做兩管樣品，每管裝混合均勻的黃瓜樣品I. 40g左右，先稱出空管的重量，再稱出加樣品后的總重量。在10000 12000r/min條件下離心3 6min。本實施方式所述步驟(2)中，將上清液倒至一個空的離心管中，然后用5ml注射器將倒出的上清液吸干，將注射器中的空氣推出，從注射器上讀出上清液體積。本實施方式所述步驟(3)中，在新的色譜柱第一次使用時，要先進ー針高濃度的丙醇ニ酸標準品溶液，如10mg/ml。本實施方式所述步驟(3)中，檢測時間為8 IOmin。本實施方式所述步驟(3)中陰離子交換色譜柱為HypersilSAX，規(guī)格為5μπι，4. 6X250mm,大連依利特陰離子交換柱；流動相硫酸鈉溶液(O. 02 O. 3mol/L);流速O. 8 I. Oml/min ;檢測器紫外檢測器，r = 215nm,進樣量10 μ I。本實施方式所述步驟(4)中，5mg/ml標準溶液的配制方法為首先稱取IOmg丙醇ニ酸標準品，然后加入2ml流動相，將配好的標準溶液置于4°C下保存。其他標準溶液的配制方法同上。
具體實施方式
ニ本實施方式可以按照如下方法檢測不同品種黃瓜果實中的丙醇ニ酸取不同品種的鮮嫩黃瓜果實，每個品種取鮮嫩黃瓜果實的果肉部分500g，先用榨汁機榨成糊狀，再取IOg放于研缽中研磨，研磨至無顆粒很細的狀態(tài)。取I. 5ml離心管，記錄空管重量。將研磨好的黃瓜裝入離心管中(大半管接近管ロ的位置)，再稱量記錄管的重量。12000r/min條件下離心3min。將離心管中的上清液倒至一個空的I. 5ml離心管中，用5ml注射器將其吸干(彈出注射器上清液中的氣泡，將注射器旋轉(zhuǎn)著向上推，直至注射器中不再有空氣)，從注射器上記錄上清液的體積。拔掉針頭，換上O. 45 μ m的水相針頭過濾器，慢慢將上清液過濾至Waters上機小瓶中。將上述黃瓜果實樣品做HPLC分析，記錄色譜圖(圖I)。其中，色譜柱HypersilSAX, 5ym,4.6X 250mm,大連依利特陰離子交換柱；流動相硫酸鈉溶液(O. 03mol/L);流速:1. Oml/min ;檢測器紫外檢測器，r = 215nm ;檢測時間IOmin0
標準曲線在標準工作液濃度為O. 5 10mg/ml范圍內(nèi)，以峰面積⑴和標準品濃度(X)進行線性回歸，得回歸方程為y = 1498. 2x-522765, R2 = O. 9988。按外標法以峰面積計算樣品中丙醇ニ酸的含量(表I)。并計算出供試品種黃瓜果實中丙醇ニ酸的平均含量為O. 489g/100g。表I黃瓜果實丙醇ニ酸含量表(單位g/100g)
權(quán)利要求
1.一種黃瓜果實中丙醇二酸的定性定量檢測方法，其特征在于所述檢測方法如下 (1)黃瓜果實的前處理將黃瓜果實去除兩端和種腔部分，粉碎后再研磨； (2)丙醇二酸的提取將研磨好的黃瓜果實樣品離心，取上清液； (3)丙醇二酸的HPLC檢測HPLC檢測時采用弱堿陰離子型色譜柱，選擇流動相等度洗脫，選擇檢測器測定波長后進行檢測，所述流動相為硫酸鈉溶液；流速為0. 8 I. Oml/min ；r = 215nm,進樣量為 10 U I ; (4)丙醇二酸定性定量檢測方法的建立用流動相逐級稀釋丙醇二酸標準品，配制成濃度為0. 5mg/ml、lmg/ml、2mg/ml、5mg/ml、10mg/ml的一組標準工作溶液，以每個濃度下的標準溶液所得的相對響應(yīng)值為縱坐標，標準溶液的濃度為橫坐標，建立標準曲線，在檢測樣品時，根據(jù)樣品所得的相對響應(yīng)值，然后從標準曲線中讀出樣品中丙醇二酸含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的黃瓜果實中丙醇二酸的定性定量檢測方法，其特征在于所述步驟(I)中，黃瓜果實為新鮮黃瓜，或是新鮮黃瓜粉碎后裝入袋中，置于_20°C下保存。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的黃瓜果實中丙醇二酸的定性定量檢測方法，其特征在于所述步驟(I)中，將黃瓜研磨至完全沒有顆粒的狀態(tài)。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的黃瓜果實中丙醇二酸的定性定量檢測方法，其特征在于所述步驟(2)中，離心分離轉(zhuǎn)速為10000 12000r/min，時間為3 6min。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的黃瓜果實中丙醇二酸的定性定量檢測方法，其特征在于所述步驟(2)中，將上清液倒至一個空的離心管中，然后用注射器將倒出的上清液吸干，將注射器中的空氣推出，從注射器上讀出上清液體積。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的黃瓜果實中丙醇二酸的定性定量檢測方法，其特征在于所述步驟(3)中，陰離子交換色譜柱為HypersilSAX，規(guī)格為5 y m，4. 6 X 250_。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的黃瓜果實中丙醇二酸的定性定量檢測方法，其特征在于所述硫酸鈉溶液濃度為0. 02 0. 3mol/L。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的黃瓜果實中丙醇二酸的定性定量檢測方法，其特征在于所述檢測器為紫外檢測器。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的黃瓜果實中丙醇二酸的定性定量檢測方法，其特征在于所述步驟(3)中，檢測時間為8 IOmin。
10.根據(jù)權(quán)利要求I所述的黃瓜果實中丙醇二酸的定性定量檢測方法，其特征在于所述步驟(4)中，5mg/ml標準溶液的配制方法為首先稱取IOmg丙醇二酸標準品，然后加入2ml流動相，將配好的標準溶液置于4°C下保存。
全文摘要
黃瓜果實中丙醇二酸的定性定量檢測方法，屬于化學檢測技術(shù)領(lǐng)域。針對目前沒有相應(yīng)的實驗方法對黃瓜中丙醇二酸進行定性定量檢測，本發(fā)明的黃瓜果實中丙醇二酸的定性定量檢測方法為將黃瓜果實去除兩端和種腔部分，粉碎后再研磨；將研磨好的黃瓜果實樣品離心，取上清液；HPLC檢測時采用弱堿陰離子型色譜柱，選擇流動相等度洗脫，選擇檢測器測定波長后進行檢測；用流動相逐級稀釋丙醇二酸標準品，以每個濃度下的標準溶液所得的相對響應(yīng)值為縱坐標，標準溶液的濃度為橫坐標，建立標準曲線，從標準曲線中讀出樣品中丙醇二酸含量。本發(fā)明前處理簡單，成本低，可同時分析多個樣品，重復性好，結(jié)果精確穩(wěn)定。
文檔編號G01N30/06GK102706994SQ201210211489
公開日2012年10月3日 申請日期2012年6月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月26日
發(fā)明者周秀艷, 武濤, 秦智偉, 辛明, 高潔 申請人:東北農(nóng)業(yè)大學