新型的特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答體外檢測(cè)方法及其臨床應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種新型的特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答體外檢測(cè)方法及其臨床應(yīng)用，該方法包括Sm合成肽抗原的合成及篩選，待檢血液與Sm混合肽抗原的混合培養(yǎng)，檢測(cè)培養(yǎng)血上清液中特定細(xì)胞因子的水平。該檢測(cè)方法可以應(yīng)用于系統(tǒng)性紅斑狼瘡臨床的輔助診斷和治療監(jiān)控。本發(fā)明具備多種臨床應(yīng)用功能，而且簡(jiǎn)便快速，容易操作,可靈活運(yùn)用等特點(diǎn)，具有很好的應(yīng)用前景。
【專(zhuān)利說(shuō)明】新型的特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答體外檢測(cè)方法及其臨床應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于臨床免疫及醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷領(lǐng)域，具體涉及一種新型的細(xì)胞免疫應(yīng)答體外檢測(cè)技術(shù)。這種實(shí)驗(yàn)方法基于檢測(cè)由Smith (Sm)合成肽抗原體外刺激外周血T細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子水平，為系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)的實(shí)驗(yàn)診斷和治療監(jiān)控提供參考。
【背景技術(shù)】
[0002]系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是影響人群最廣泛、最嚴(yán)重的自身免疫病之一，通常好發(fā)于育齡女性，能引發(fā)全身多種組織及器官的炎癥病變。由于該疾病發(fā)作潛伏，病程遷延反復(fù)并不斷加重，臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，診斷和治療難度大，世界衛(wèi)生組織把它列為新世紀(jì)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域急待攻克的堡壘。
[0003]該疾病的病因目前尚不清楚。傳統(tǒng)的觀(guān)點(diǎn)是SLE患者的多器官炎癥損害主要?dú)w因于體液免疫紊亂引起的B細(xì)胞異常活化產(chǎn)生的多種自身抗體，并通過(guò)抗原抗體免疫復(fù)合物沉積并激活補(bǔ)體等途徑造成。因此，臨床診斷，病情監(jiān)控及治療的參考實(shí)驗(yàn)指標(biāo)幾乎都依賴(lài)血清中自身抗體。而近年來(lái)的大量研究表明，細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答及其產(chǎn)生的細(xì)胞因子，特別是炎癥性的細(xì)胞因子等異?？赡苁窃斐杉t斑狼瘡病理炎癥的另一關(guān)鍵原因(YAP，D.Y.& LAIj K.N.Cytokines and their roles in the pathogenesis of systemiclupus erythematosus: from basics to recent advances.J Biomed Biotechnolj 2010，365083.)，并與體液免疫相互作用，在整個(gè)疾病的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中起重要作用(DAVIS，L S.，HUTCHESON, J.& MOHAN, C.The role of cytokines in the pathogenesis andtreatment of systemic lupus erythematosus.J Interferon Cytokine Res, 2011，31，781-9.)。最近Iwata報(bào)道了一些SLE病人甚至出現(xiàn)以T細(xì)胞免疫紊亂為主導(dǎo)的發(fā)病機(jī)制(IWATA, S.，SAIT0, K., T0KUNAGA, M.& TANAKA, Y.B cell or T cell-dominantrecurrence after rituximab therapy in patients with SLE.Ann Rheum Dis.2012.)。這樣，檢測(cè)細(xì)胞免疫應(yīng)答的產(chǎn)物(如細(xì)胞因子)與自身抗體一樣，對(duì)SLE的診斷，監(jiān)控與治療至關(guān)重要。
[0004]衡量細(xì)胞免疫應(yīng)答的水平可通過(guò)檢測(cè)由免疫原體外刺激全血白細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子來(lái)衡量。雖然細(xì)胞因子能敏感地反映機(jī)體的細(xì)胞免疫反應(yīng)，但由于多種生理或病理因素均可影響細(xì)胞因子的釋放，所以細(xì)胞因子本身不具疾病特異性(PICC0LI，L., MERONI,V.，GENC0, F.，TAMAROZZI, F.，TINELLI, C.，F(xiàn)ILICE, C.& BRUNETTI, E.Serumcytokine profile by ELISA in patients withechinococcal cysts of the liver: astage-specific approach to assess their biological activity.Clin Dev Immunol,2012，483935.)。至今為止，國(guó)際上尚未實(shí)現(xiàn)以檢測(cè)細(xì)胞因子來(lái)診斷自身免疫性疾病(包括SLE)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。
[0005]診斷及監(jiān)控SLE是基于綜合臨床表現(xiàn)及實(shí)驗(yàn)檢查的美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(ACR)的分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)，臨床醫(yī)生在判斷該標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的11項(xiàng)指標(biāo)時(shí)受主觀(guān)因素影響較大，診斷準(zhǔn)確性差，加上缺乏既敏感及特異的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)，經(jīng)常出現(xiàn)誤診或漏診。而對(duì)SLE的治療基本上依賴(lài)各類(lèi)免疫抑制劑，藥物副作用大，常引發(fā)繼發(fā)性感染。雖然近年來(lái)不斷涌現(xiàn)出新型的治療藥物(細(xì)胞因子拮抗劑)，臨床醫(yī)生對(duì)它們的選擇多依賴(lài)個(gè)人經(jīng)驗(yàn)作主觀(guān)判斷，存在盲目性。而目前國(guó)際上仍缺乏能指導(dǎo)細(xì)胞因子個(gè)體化治療的實(shí)驗(yàn)方法(KALUNIAN，K.& JOAN, T.Μ.New directions in the treatment of systemic lupus erythematosus.Curr Med ResOpin.2009.；R0NNBL0M, L & ELKONj Κ.B.Cytokines as therapeutic targets inSLE.Nat Rev Rheumatol, 2010，6，339-347.)。
[0006]Smith (Sm)抗原已被證明是系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)最特異的抗原。SLE病人體內(nèi)除了出現(xiàn)高特異的抗Sm抗體，還存在針對(duì)Sm抗原的特異性T細(xì)胞免疫反應(yīng)(FRITSCH-STORK, R.，MULLEGGER, D.，SKRINER, K.，JAHN-SCHMID, B.，SM0LEN,J.S.& STEINER, G.The spliceosomal autoantigen heterogeneous nuclearribonucleoprotein A2 (hnRNP-A2) is a major T cell autoantigen in patients withsystemic lupus erythematosus.Arthritis Res Ther, 2006, 8, R118.)。與雙鏈 DNA相比，Sm屬于蛋白抗原，具有能直接刺激T細(xì)胞活化增殖并釋放細(xì)胞因子的優(yōu)點(diǎn)。
[0007]基于以上背景，本發(fā)明結(jié)合Sm抗原對(duì)SLE的高特異性及其能在體外直接刺激T細(xì)胞活化產(chǎn)生大量細(xì)胞因子的高敏感性，發(fā)展了一種新型的細(xì)胞免疫應(yīng)答體外檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)方法，用以輔助診斷SLE并為其治療和監(jiān)控提供參考。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的在于建立一種新型的細(xì)胞免疫應(yīng)答體外檢測(cè)方法，并用于SLE的輔助診斷和治療監(jiān)控。 [0009]本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
本發(fā)明利用Sm抗原能特異地刺激SLE患者T細(xì)胞活化并產(chǎn)生多種細(xì)胞因子的現(xiàn)象，首先篩選出這些能被T細(xì)胞特異識(shí)別的Sm合成肽，并將其混合作為體外刺激全血細(xì)胞的抗原?；赟LE患者全血中的記憶性T細(xì)胞能快速而特異地識(shí)別Sm抗原并活化產(chǎn)生細(xì)胞因子，本發(fā)明將待檢血液與Sm混合肽抗原混合培養(yǎng)時(shí)間控制在18-24小時(shí)(37°C )。然后檢測(cè)培養(yǎng)血上清液中特定細(xì)胞因子的水平，以判斷機(jī)體對(duì)特異性抗原的細(xì)胞免疫應(yīng)答能力以及患者的整體細(xì)胞免疫功能狀況。實(shí)驗(yàn)同時(shí)設(shè)定本底對(duì)照(只加生理鹽水)及陽(yáng)性對(duì)照(絲裂原:植物血凝素(PHA))。
[0010]其中，用于刺激外周血的Sm混合肽抗原包含五條合成肽，由FMOC固相合成方法自動(dòng)或人工合成，經(jīng)HPLC分析和純化，抗原純度90%以上。具體氨基酸序列如下:
Sml: RGNNIRYFILPDSLPLDTLLSm2:SHETVTIELKNGTQVHGTIT
Sm3:GVDVSMNTHLKAVKMTSm4:TVGKSSKMLQHIDYRMRCI
Sm5: PMGIPPGRGTPMGMPPPGM
本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的結(jié)果可有多種臨床用途:1.通過(guò)測(cè)定待檢血經(jīng)Sm混合肽刺激產(chǎn)生IL-6的含量，判斷患者對(duì)Sm抗原的刺激是否存在高水平的特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答，可實(shí)驗(yàn)診斷SLE ；2.通過(guò)分析SLE患者經(jīng)Sm混合肽刺激后產(chǎn)生的細(xì)胞因子譜，為患者選擇細(xì)胞因子拮抗劑進(jìn)行個(gè)體化治療時(shí)提供實(shí)驗(yàn)參考；3.通過(guò)觀(guān)察SLE患者外周血對(duì)絲裂原刺激所釋放的細(xì)胞因子的能力，既可評(píng)估病人的整體細(xì)胞免疫功能狀況，也可用來(lái)判定該實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性(如患者是否存在較強(qiáng)的免疫功能抑制)，以排除假陰性結(jié)果。[0011]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn):
本發(fā)明原創(chuàng)性地應(yīng)用一組對(duì)SLE高度特異的Sm合成肽抗原刺激外周全血中的T細(xì)胞，然后通過(guò)測(cè)定T細(xì)胞活化后產(chǎn)生的細(xì)胞因子水平，首次在國(guó)際上建立了一種針對(duì)疾病特異性抗原的細(xì)胞免疫應(yīng)答的體外測(cè)定方法，并應(yīng)用于SLE的實(shí)驗(yàn)診斷，免疫功能監(jiān)控及指導(dǎo)個(gè)體化治療，填補(bǔ)了該領(lǐng)域的空白。這種新型的細(xì)胞免疫功能檢測(cè)手段具備多種臨床應(yīng)用功能，而且簡(jiǎn)便快速，容易操作，可靈活運(yùn)用等特點(diǎn)。將與目前廣泛應(yīng)用的抗Sm和抗dsDNA抗體等體液免疫檢測(cè)方法互為補(bǔ)充，并可更全面地評(píng)估SLE患者的免疫狀況，大大地提高了 SLE的實(shí)驗(yàn)診斷水平。綜合分析由Sm合成肽抗原和絲裂原刺激產(chǎn)生的多種細(xì)胞因子，可為SLE的治療提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為降低治療的副作用，減少目前狼瘡治療中的主觀(guān)性和盲目性起到重要的作用，具有很好的應(yīng)用前景。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0012]圖1.體外檢測(cè)Sm混合肽抗原刺激外周血白細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子的實(shí)驗(yàn)方法。
[0013]圖2.系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者與對(duì)照的外周血在Sm抗原刺激后產(chǎn)生的IL_6水平。虛線(xiàn)為陽(yáng)性界值。檢測(cè)對(duì)象包括SLE患者41例，疾病對(duì)照(Disease control )61例(其中包括類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎10例，干燥綜合征7例，硬皮病6例，混合結(jié)締組織病6例，其它疾病32例)，健康對(duì)照(Healthy control) 42例。
[0014]圖3.受試者工作特征曲線(xiàn)(ROC曲線(xiàn))分析本發(fā)明的臨床診斷價(jià)值。A: SLE區(qū)分疾病對(duì)照(disease control)的ROC曲線(xiàn)；B: SLE區(qū)分健康對(duì)照(healthy control)的ROC曲線(xiàn)；C: SLE區(qū)分所有對(duì)照(controls)的ROC曲線(xiàn)。AUC: ROC曲線(xiàn)區(qū)域下的面積.圖4.不同SLE患者(A, B, C)外周血白細(xì)胞受Sm合成肽混合抗原(Sm peptidecocktail)刺激產(chǎn)生的細(xì)胞因子譜比較。Nil及PHA (植物血凝素)為自身本底及陽(yáng)性對(duì)照。
[0015]圖5.隨訪(fǎng)SLE患者在使用免疫抑制劑(潑尼松:prednisone)治療過(guò)程中外周血白細(xì)胞對(duì)PHA刺激應(yīng)答水平的變化。圖示為同一病人的外周血白細(xì)胞在用藥前(day 0)，使用20mg/d的潑尼松一周(day 7)后，繼續(xù)使用10mg/d潑尼松的第30天，以及使用低劑量5mg/潑尼松的第60天對(duì)PHA刺激產(chǎn)生的各種細(xì)胞因子水平。
【具體實(shí)施方式】
[0016]以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說(shuō)明，但本發(fā)明不僅限于此。
[0017]實(shí)施例1:體外檢測(cè)Sm混合肽抗原刺激患者白細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子
1.實(shí)驗(yàn)材料
(1)無(wú)菌血培養(yǎng)管:含有30μ I生理鹽水(本底對(duì)照),30 μ g Sm混合肽抗原(每種Sm合成肽各5 μ g)及10 μ g PHA陽(yáng)性對(duì)照；
(2)細(xì)胞因子檢測(cè):可自由選擇商業(yè)化的試劑盒。如需同時(shí)檢測(cè)多種細(xì)胞因子，可用本實(shí)驗(yàn)采用的液態(tài)芯片技術(shù)(Luminex xMAP multiplex beads assay)。如只需檢測(cè)單一的細(xì)胞因子(如IL-6)含量，可用ELISA方法。
[0018]2.實(shí)驗(yàn)步驟
(O Sm合成肽序列及合成
用于刺激外周血的Sm混合肽抗原包含五條合成肽，由FMOC固相合成方法自動(dòng)或人工合成，經(jīng)HPLC分析和純化，抗原純度90%以上。具體氨基酸序列如下:
Sml: RGNNIRYFILPDSLPLDTLL Sm2:SHETVTIELKNGTQVHGTIT
Sm3:GVDVSMNTHLKAVKMTSm4:TVGKSSKMLQHIDYRMRCI
Sm5: PMGIPPGRGTPMGMPPPGM
(2)血培養(yǎng):如圖1所示，外周肝素抗凝血各I ml加入三種分別含有30μ I生理鹽水(空白對(duì)照管)，6Χ5 μ g Sm混合合成肽及10 μ g絲裂原植物血凝素(PHA)的無(wú)菌管,經(jīng)充分混勻后放入37°C溫箱孵育20-24小時(shí)(過(guò)夜)。
[0019](3)細(xì)胞因子檢測(cè):第二天取出離心(3000轉(zhuǎn)10分鐘)分離血漿，然后采用液態(tài)芯片技術(shù)同時(shí)檢測(cè)血漿中的多種細(xì)胞因子或用ELISA檢測(cè)單一的細(xì)胞因子(e.g.1L-6)含量。
[0020]3.結(jié)果計(jì)算及判定
細(xì)胞因子釋放水平=細(xì)胞因子含量(抗原或陽(yáng)性對(duì)照)-細(xì)胞因子含量(自身本底對(duì)
昭)
(I)分析待檢血 對(duì)Sm混合肽刺激產(chǎn)生的IL-6的水平，用以實(shí)驗(yàn)診斷SLE:若待檢者受Sm混合肽刺激產(chǎn)生的IL-6≥2000pg/ml,結(jié)果為SLE陽(yáng)性，反之為陰性。
[0021](2)如果陽(yáng)性對(duì)照管產(chǎn)生的IL-6低于1000 pg/ml，表明病人處于中度或高度免疫抑制狀態(tài)(如使用高劑量的免疫抑制劑)，試驗(yàn)結(jié)果為不可判定，須待患者細(xì)胞免疫功能恢復(fù)到一定水平(陽(yáng)性對(duì)照管產(chǎn)生的IL-6≥1000 pg/ml)后再重新進(jìn)行檢測(cè)。
[0022]實(shí)施例2:細(xì)胞免疫應(yīng)答檢測(cè)方法對(duì)SLE的實(shí)驗(yàn)診斷
對(duì)應(yīng)用Sm混合肽刺激T細(xì)胞產(chǎn)生IL-6水平用于診斷SLE的方法進(jìn)行臨床驗(yàn)證，分別檢測(cè)了 41例SLE患者，61例疾病對(duì)照者(其中包括類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎10例，干燥綜合征7例，硬皮病6例，混合結(jié)締組織病6例，其它疾病32例)及健康對(duì)照41例。結(jié)果見(jiàn)圖2。以產(chǎn)生IL-6 2000pg/ml作為診斷陽(yáng)性的界值(圖2中虛線(xiàn))，顯示該法對(duì)SLE的診斷敏感性為73%，特異性為92%。
[0023]米用受試者工作特征曲線(xiàn)(receiveroperating characteristic curve,簡(jiǎn)稱(chēng)ROC曲線(xiàn))評(píng)估該法的診斷價(jià)值，以ROC曲線(xiàn)下方區(qū)域面積(AUC)為參考指標(biāo)，圖3顯示SLE對(duì)疾病對(duì)照(disease control),健康對(duì)照(healthy control),及綜合兩對(duì)照的AUC分別為0.86，0.94及0.90，表明該法對(duì)SLE具有較高的臨床診斷價(jià)值。
[0024]實(shí)施例3: SLE患者經(jīng)Sm混合肽刺激產(chǎn)生的細(xì)胞因子譜存在明顯個(gè)體差異 借助液態(tài)芯片技術(shù)同時(shí)檢測(cè)培養(yǎng)血上清液中的七種細(xì)胞因子，結(jié)果表明不同SLE患者
的免疫細(xì)胞經(jīng)Sm混合肽抗原(Sm peptide cocktail)刺激后產(chǎn)生的細(xì)胞因子譜存在明顯個(gè)體差異。以圖4所示的3位SLE病人為例:SLE病人A產(chǎn)生的炎癥性細(xì)胞因子以IL-6及IL-1 β為主，病人B主要以IL-6及TNF-α為主，而病人C僅以IL-6為主導(dǎo)。該結(jié)果同時(shí)也反映了同一細(xì)胞因子在不同狼瘡患者的病理炎癥發(fā)展中所起的作用可能不同。因此，分析SLE患者的免疫細(xì)胞在該疾病特異的Sm抗原刺激實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生的細(xì)胞因子譜，臨床醫(yī)生可對(duì)其中占主導(dǎo)地位的細(xì)胞因子進(jìn)行針對(duì)性地抑制，這樣在選擇細(xì)胞因子拮抗劑治療病理炎癥時(shí)就有了科學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)，從而避免盲目用藥，優(yōu)化治療效果。另外，檢測(cè)的細(xì)胞因子類(lèi)型可根據(jù)臨床需要進(jìn)行變換，以便為SLE的個(gè)體化治療提供指引。
[0025]本實(shí)驗(yàn)表明通過(guò)分析SLE患者外周全血受Sm混合肽刺激產(chǎn)生的細(xì)胞因子譜，可為病人進(jìn)行細(xì)胞因子拮抗劑的個(gè)體化治療時(shí)提供實(shí)驗(yàn)參考。
[0026]實(shí)施例4:外周血白細(xì)胞對(duì)PHA刺激的應(yīng)答能力反映臨床免疫抑制水平
SLE患者在使用免疫抑制劑(如潑尼松=Prednisone)治療過(guò)程中，其外周血白細(xì)胞對(duì)PHA刺激產(chǎn)生的細(xì)胞因子水平出現(xiàn)顯著波動(dòng)。以圖5中隨訪(fǎng)的一位SLE患者為例，用藥前(day O),該病人的外周血白細(xì)胞在對(duì)PHA刺激應(yīng)答水平很高，伴隨大劑量潑尼松(20mg/天)的使用，一周(day 7)后，其對(duì)PHA刺激應(yīng)答水平明顯下降，再隨著相對(duì)高劑量(lOmg/天)潑尼松的繼續(xù)使用，在第30天，出現(xiàn)了顯著的細(xì)胞免疫功能抑制，表現(xiàn)為對(duì)PHA刺激應(yīng)答的無(wú)反應(yīng)。隨后及時(shí)減低潑尼松劑量至5mg/天，在隨訪(fǎng)的第60天，對(duì)PHA刺激應(yīng)答開(kāi)始有所反應(yīng)(IL-6首先開(kāi)始回升)，表明細(xì)胞免疫功能開(kāi)始恢復(fù)。以上結(jié)果表明隨著治療狼瘡炎癥的免疫抑制劑使用的增加和持續(xù)，機(jī)體正常淋巴細(xì)胞功能(對(duì)PHA的刺激應(yīng)該有強(qiáng)烈的免疫反應(yīng))出現(xiàn)明顯的抑制，說(shuō)明發(fā)生繼發(fā)感染等副作用的機(jī)會(huì)在增加。而在使用低劑量免疫抑制劑一段時(shí)間后，正常淋巴細(xì)胞功能逐漸回升。因此臨床醫(yī)生應(yīng)根據(jù)病人體征，以及對(duì)絲裂原刺激的免疫應(yīng)答能力，對(duì)后續(xù)免疫抑制治療的安全性進(jìn)行評(píng)估，及時(shí)作出調(diào)整劑量的決定，以減少藥物副作用，提高療效。
[0027]本實(shí)驗(yàn)說(shuō)明分析SLE患者外周全血對(duì)絲裂原刺激產(chǎn)生的細(xì)胞因子水平可以監(jiān)控病人的免疫功能狀態(tài)。
【權(quán)利要求】
1.一種新型的細(xì)胞免疫應(yīng)答體外檢測(cè)方法，其特征在于包括以下步驟: (1)篩選并混合能被T細(xì)胞特異識(shí)別的Smith(Sm)合成肽，作為刺激待檢外周血白細(xì)胞的抗原，同時(shí)設(shè)立絲裂原PHA作陽(yáng)性對(duì)照； (2)將待檢血液與抗原混合，37°C培養(yǎng)20-24小時(shí)； (3)檢測(cè)培養(yǎng)血上清液中特定細(xì)胞因子的水平，以判斷機(jī)體對(duì)特異性抗原Sm混合肽和非特異性免疫原絲裂原PHA的細(xì)胞免疫應(yīng)答水平。
2.如權(quán)利要求1所述的細(xì)胞免疫應(yīng)答體外檢測(cè)方法，其特征在于:所述的Sm混合肽抗原包含五條合成肽，分別為Sml、Sm2、Sm3、Sm4、Sm5 ,具體氨基酸序列如下:
Sml: RGNNIRYFILPDSLPLDTLL ；
Sm2:SHETVTIELKNGTQVHGTIT ；
Sm3:GVDVSMNTHLKAVKMT ；
Sm4:TVGKSSKMLQHIDYRMRCI ；
Sm5: PMGIPPGRGTPMGMPPPGM。
3.如權(quán)利要求1、2所述的細(xì)胞免疫應(yīng)答體外檢測(cè)方法，其特征在于:所述的Sm合成肽抗原由FMOC固相合成方法自動(dòng)或人工合成，經(jīng)HPLC分析和純化，抗原純度90%以上。
4.一種如權(quán)利要求1、2、3所述的細(xì)胞免疫應(yīng)答體外檢測(cè)方法的臨床應(yīng)用，其特征在于包括: (1)通過(guò)測(cè)定待檢血經(jīng)Sm混合肽刺激產(chǎn)生IL-6的含量，判斷患者對(duì)Sm混合肽抗原的刺激是否存在高水平的細(xì)胞免疫應(yīng)答，以實(shí)驗(yàn)診斷SLE ； (2)通過(guò)分析SLE患者經(jīng)Sm混合肽抗原特異刺激后產(chǎn)生的細(xì)胞因子譜，為病人選擇細(xì)胞因子拮抗劑進(jìn)行個(gè)體化治療提供實(shí)驗(yàn)參考； (3)通過(guò)觀(guān)察SLE患者外周血對(duì)絲裂原刺激所釋放的細(xì)胞因子的能力，既可以評(píng)估病人的整體細(xì)胞免疫功能狀態(tài)，也可用來(lái)判定該實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，以排除假陰性結(jié)果。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK103983785SQ201410122051
【公開(kāi)日】2014年8月13日 申請(qǐng)日期:2014年3月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月29日
【發(fā)明者】陳仁奮, 魏秀妹 申請(qǐng)人:陳仁奮