一種藥物組合物坐珠達(dá)西的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種藥物組合物坐珠達(dá)西的檢測方法。本發(fā)明的檢測方法能全面、準(zhǔn)確的測定西紅花的含量，能對(duì)毒性藥材馬錢子進(jìn)行含量檢測；本發(fā)明還對(duì)蓽茇、牛黃和沒食子酸進(jìn)行薄層色譜鑒別，能更全面準(zhǔn)確地對(duì)藥物組合物坐珠達(dá)西進(jìn)行檢測。
【專利說明】一種藥物組合物坐珠達(dá)西的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種藥物組合物的檢測方法，特別涉及一種藥物組合物坐珠達(dá)西的檢測方法，屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]坐珠達(dá)西，收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn).藏藥》(以下簡稱《藏藥部頒標(biāo)準(zhǔn)》)，標(biāo)準(zhǔn)編號(hào):WS3-BC-0315-95，是由寒水石、木香、丁香、船形烏頭、西紅花、肉豆蘧、草果、熊膽、牛黃、馬錢子、麝香等35味藥物制成。本處方療效顯著，臨床應(yīng)用廣泛。
[0003]對(duì)于坐珠達(dá)西的檢測方法，現(xiàn)行法定標(biāo)準(zhǔn)《藏藥部頒標(biāo)準(zhǔn)》中只有2個(gè)化學(xué)反應(yīng)鑒別項(xiàng)和船形烏頭薄層鑒別項(xiàng)，沒有任何量化的測定指標(biāo)，不能有效檢測該制劑的質(zhì)量；發(fā)表于《中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)》2012年29卷3期的《提高坐珠達(dá)西質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究》(簡稱“文獻(xiàn)”)，對(duì)熊膽、牛黃、木香、丁香進(jìn)行了薄層色譜檢測，對(duì)毒性藥材馬錢子進(jìn)行了液相色譜鑒另O，同時(shí)對(duì)西紅花中的西紅花苷I利用高效液相色譜法進(jìn)行含量測定，采用的流動(dòng)相為甲醇-水(45:55);對(duì)于馬錢子的液相色譜鑒別的流動(dòng)相條件是乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸鈉與0.02mol/L磷酸二氫鉀混合液(10%磷酸調(diào)pH到2.8),比例20:80。
[0004]由于坐珠達(dá)西中藥物組成極為復(fù)雜，較全面的對(duì)坐珠達(dá)西進(jìn)行檢測存在技術(shù)問題，如選擇哪些檢測指標(biāo)、如何排除其他組分的干擾等，并且現(xiàn)行法定標(biāo)準(zhǔn)《藏藥部頒標(biāo)準(zhǔn)》中的檢測項(xiàng)目過于簡單，不能準(zhǔn)確、專屬的控制坐珠達(dá)西的質(zhì)量。文獻(xiàn)雖然有所改進(jìn)，增加了西紅花的含量測定，增加了對(duì)毒性藥材馬錢子的檢測，并增加了熊膽、牛黃等4味藥材的薄層色譜鑒別，但對(duì)于西紅花的含量測定不全面，沒有對(duì)西紅花苷II進(jìn)行檢測；對(duì)于毒性藥材馬錢子中的士的寧也只進(jìn)行定性檢測，沒有定量檢測，實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)，文獻(xiàn)對(duì)牛黃的鑒別方法不太理想，并且操作復(fù)雜，耗時(shí)過長。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種藥物組合物坐珠達(dá)西的檢測方法。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
[0007]一種藥物組合物坐珠達(dá)西的檢測方法，包括以下含量測定和/或鑒別方法的一種或幾種:
[0008]含量測定:
[0009]A.西紅花的含量測定
[0010]a)色譜條件與系統(tǒng)適用性:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-0.05mol/L醋酸銨為流動(dòng)相；流動(dòng)相體積份數(shù)比為40:5:55 ;檢測波長為430nm ;理論板數(shù)按西紅花苷-1峰計(jì)算應(yīng)不低于4000 ；
[0011]b)對(duì)照品溶液的制備:取西紅花苷-1、西紅花苷-1I對(duì)照品，精密稱定，加體積百分比60%甲醇制成每Iml含30 μ g和15 μ g的溶液，即得；
[0012]c)供試品溶液的制備:取藥物組合物坐珠達(dá)西研細(xì)后粉末1.5g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入體積百分比60%甲醇25ml，稱定重量，冰浴中超聲處理20分鐘，放至室溫，用體積百分比60%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0013]d)測定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，計(jì)算，即得；
[0014]B.馬錢子中士的寧的含量測定
[0015]a)色譜條件與系統(tǒng)適用性:以苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0的甲醇-0.2%三乙胺混合液為流動(dòng)相；流動(dòng)相體積份數(shù)比為32:58 ;檢測波長為255nm ;理論板數(shù)按士的寧峰計(jì)算應(yīng)不低于2000 ；
[0016]b)對(duì)照品溶液的制備:取士的寧對(duì)照品，精密稱定，加甲醇制成每Iml含20 μ I的溶液，即得對(duì)照品溶液；
[0017]c)供試品溶液的制備:取藥物組合物坐珠達(dá)西研細(xì)后粉末2g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入體積比25:1的三氯甲烷與濃氨溶液的混合溶液50ml，稱定重量，力口熱回流2小時(shí)，放冷，再稱定重量，用體積比25:1的三氯甲烷與濃氨溶液的混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液20ml，置分液漏斗中，用體積百分比2%的硫酸溶液提取5次，每次20ml,合并硫酸液,加濃氨溶液調(diào)節(jié)pH至9-10,用三氯甲燒提取5次,每次20ml,合并三氯甲烷液，減壓回收至干，殘?jiān)眉状嫁D(zhuǎn)移至IOml的量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；
[0018]d)測定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，計(jì)算，即得；
[0019]鑒別:
[0020]C.蓽茇的薄層色譜法鑒別
[0021]取藥物組合物坐珠達(dá)西3g研細(xì)，加無水乙醇10ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液濃縮至2ml，作為供試品溶液；取缺少蓽茇的陰性對(duì)照樣品，同法制成陰性對(duì)照溶液；另取胡椒堿對(duì)照品，同法制成每Iml含0.2mg的對(duì)照品溶液；照《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄VI B的薄層色譜法試驗(yàn)，分別吸取胡椒堿對(duì)照品溶液5μ 1、供試品溶液5μ 1、陰性對(duì)照溶液5 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比7:2:1的苯-醋酸乙酯-丙酮為展開劑展開，取出晾干，噴以體積百分比10%硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置365nm紫外光燈下檢視；坐珠達(dá)西溶液在與對(duì)照品溶液相同的位置上應(yīng)有相同顏色的斑點(diǎn)，陰性溶液無此斑點(diǎn)；
[0022]D.牛黃的薄層色譜鑒別法鑒別
[0023]取藥物組合物坐珠達(dá)西3g，加醋酸乙酯30ml，超聲30min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml使溶解，作為供試品溶液；取缺少牛黃的陰性對(duì)照樣品，同法制成陰性對(duì)照溶液；另取膽酸、豬去氧膽酸對(duì)照品各，加甲醇分別制成每Iml中各含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄VI B的薄層色譜法試驗(yàn)，分別吸取膽酸對(duì)照品溶液5 μ 1、豬去氧膽酸10 μ 1、供試品溶液5 μ 1、陰性對(duì)照溶液5 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比2:2:1乙醚-三氯甲烷-冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積百分比10%硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置365nm紫外光燈下檢視，坐珠達(dá)西溶液在與對(duì)照品溶液相同的位置上應(yīng)有相同顏色的斑點(diǎn)，陰性溶液無此斑點(diǎn)；
[0024]E.沒食子酸的薄層色譜法鑒別[0025]取藥物組合物坐珠達(dá)西粉末3g，加甲醇30ml，超聲處理30min，濾過，濾液濃縮至lml，作為供試品溶液；另取沒食子酸對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液；照《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄VI B的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述2種溶液各5 μ L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比5:5:0.5 二甲苯-醋酸乙酯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積百分比I %三氯化鐵乙醇溶液，105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
[0026]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)如下:
[0027]本發(fā)明的檢測方法能全面、準(zhǔn)確的測定西紅花的含量，對(duì)毒性藥材馬錢子進(jìn)行含量檢測；本發(fā)明還增加了對(duì)蓽茇、沒食子酸的薄層色譜鑒別，改進(jìn)了牛黃的薄層色譜鑒別，能更全面對(duì)藥物組合物坐珠達(dá)西進(jìn)行檢測。
[0028]術(shù)語說明:
[0029]西紅花的含量等于西紅花苷I和西紅花苷II的總含量。
[0030]坐珠達(dá)西是中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)記載的藥品名稱。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0031]圖1是西紅花苷-1線性關(guān)系圖；
[0032]圖2是西紅花苷-1I線性關(guān)系圖；
[0033]圖3是西紅花苷-1、西紅花苷-1I混合對(duì)照品溶液高效液相色譜圖；
[0034]圖4是坐珠達(dá)西西紅花供試品溶液高效液相色譜圖；
[0035]圖5是士的寧線性關(guān)系圖；
[0036]圖6是士的寧對(duì)照品溶液高效液相色譜圖；
[0037]圖7是坐珠達(dá)西馬錢子供試品溶液高效液相色譜圖；
[0038]其中，圖3、圖4、圖6、圖7的橫坐標(biāo)是時(shí)間，單位:分鐘(Minutes);縱坐標(biāo)是電壓，單位:伏特(Volts)。
【具體實(shí)施方式】
[0039]下面結(jié)合實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)的闡述，但不限于這些具體記載的實(shí)施例。所檢測的藥物組合物坐珠達(dá)西為青海金訶藏藥藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)售。
[0040]實(shí)驗(yàn)例1:坐珠達(dá)西中西紅花的測定
[0041]1.儀器、試藥和供試樣品
[0042]儀器:高效液相色譜儀:日立L-7110泵，日立-7420檢測器；島津AUW220D電子天平
[0043]對(duì)照品:西紅花苷-1對(duì)照品(批號(hào):111588-200501 )、西紅花苷-1I對(duì)照品(批號(hào):100001-200504)
[0044]樣品:坐珠達(dá)西(青海金訶藏藥藥業(yè)股份有限公司)批號(hào):20090501、20090502、20090503
[0045]2.流動(dòng)相選擇
[0046]研究發(fā)現(xiàn)坐珠達(dá)西中藥物成分復(fù)雜，對(duì)西紅花的測定產(chǎn)生干擾，單純使用甲醇-水、乙醇-水體系均無法達(dá)到很好的色譜分離,使用甲醇-乙腈-水體系基本完成色譜的分離，調(diào)節(jié)水為0.05mol/L醋酸銨后，色譜分離良好，配合供試品的制備，能克服藥味對(duì)西紅花測定的影響。
[0047]3.對(duì)照品制備
[0048]西紅花苷-1對(duì)照品貯備溶液:取西紅花苷-1對(duì)照品，精密稱定，加60%甲醇制成分別每Iml含65.8 μ g的溶液，即得。
[0049]西紅花苷-1I對(duì)照品貯備溶液:取西紅花苷-1I對(duì)照品，精密稱定，加60%甲醇制成分別每Iml含30.4 μ g的溶液，即得。
[0050]西紅花對(duì)照溶液:精密量取西紅花苷-1、西紅花苷-1I對(duì)照品貯備溶液，加60%甲醇制成分別每Iml含32.9 μ g和15.2 μ g的溶液，即得。
[0051]4.供試品制備
[0052]取坐珠達(dá)西研細(xì)后粉末2g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入60%甲醇25ml，稱定重量，冰浴中超聲處理40分鐘，放置室溫，再稱定重量，用60%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0053]5.線性試驗(yàn)
[0054]精密量取西紅花苷-1對(duì)照品貯備液溶液(65.8 μ g/ml) lml、3ml、5ml、8ml、10ml，分別置IOml容量瓶中，甲醇稀釋至刻度，搖勻，各精密進(jìn)樣10μ 1，以峰面積(A)對(duì)對(duì)照品濃度(C)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程:A=21172C-9555.5，相關(guān)系數(shù):R=0.9999。結(jié)果表明:在
6.58 μ g/ml?65.80 μ g/ml范圍內(nèi)，西紅花苷-1的峰面積(A)與濃度(C)線性關(guān)系良好。所得峰圖參見說明書附圖的圖1。
[0055]精密量取西紅花苷-1I對(duì)照品貯備液溶液(30.4μ g/ml)lml、3ml、5ml、8ml、10ml，分別置IOml容量瓶中，甲醇稀釋至刻度，搖勻，各精密進(jìn)樣10μ L，以峰面積(A)對(duì)對(duì)照品濃度(C)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程:A=28716C-521.60，相關(guān)系數(shù):R=0.9993。結(jié)果表明:在
3.04 μ g/ml?30.40 μ g/ml范圍內(nèi)，西紅花苷-1I的峰面積(A)與濃度(C)線性關(guān)系良好。所得峰圖參見說明書附圖的圖2。
[0056]6.精密度試驗(yàn)
[0057]分別精密吸取西紅花苷-1、西紅花苷-1I對(duì)照品溶液10 μ 1，注入液相色譜儀，各連續(xù)測定6次，所得峰圖參見說明書附圖的圖3，記錄峰面積并計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，分別為RSD=0.783%、RED=0.794%。結(jié)果表明，儀器精密度良好。
[0058]7.重復(fù)性試驗(yàn)
[0059]取本品，重復(fù)測定6次，所得峰圖參見說明書附圖的圖4，計(jì)算樣品中西紅花苷-1、西紅花苷-1I的總含量，平均含量為1.5mg/g, RSD=0.20%。表明分析方法重復(fù)性良好。
[0060]8.回收率試驗(yàn)
[0061]精密稱取同一批樣品6份，精密加入西紅花苷-1、西紅花苷-1I對(duì)照品，測定其含量，計(jì)算回收率，結(jié)果，平均回收率為97.81%，RSD=L 12%。表明該測定方法測定結(jié)果準(zhǔn)確。
[0062]9.樣品測定
[0063]取坐珠達(dá)西3批，測定并計(jì)算西紅花苷-1、西紅花苷-1I的總量，結(jié)果如下。
[0064]表I樣品含量測定結(jié)果
【權(quán)利要求】
1.一種藥物組合物坐珠達(dá)西的檢測方法，包括以下含量測定和/或鑒別方法的一種或幾種: 含量測定: A.西紅花的含量測定 a)色譜條件與系統(tǒng)適用性:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-0.05mol/L醋酸銨為流動(dòng)相；流動(dòng)相體積份數(shù)比為40:5:55 ;檢測波長為430nm ;理論板數(shù)按西紅花苷-1峰計(jì)算應(yīng)不低于4000 ； b)對(duì)照品溶液的制備:取西紅花苷-1、西紅花苷-1I對(duì)照品，精密稱定，加體積百分比60%甲醇制成每Iml含30 μ g和15 μ g的溶液，即得； c)供試品溶液的制備:取藥物組合物坐珠達(dá)西研細(xì)后粉末1.5g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入體積百分比60%甲醇25ml，稱定重量，冰浴中超聲處理20分鐘，放至室溫，用體積百分比60%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； d)測定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液10μ 1，注入液相色譜儀，測定，計(jì)算，即得； B.馬錢子中士的寧的含量測定 a)色譜條件與系統(tǒng)適用性:以苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸調(diào)節(jié)PH至3.0的甲醇-0.2%三乙胺混合液為流動(dòng)相；流動(dòng)相體積份數(shù)比為32:58 ;檢測波長為255nm ;理論板數(shù)按士的寧峰計(jì)算應(yīng)不低于2000 ； b)對(duì)照品溶液的制備:取士的寧對(duì)照品，精密稱定，加甲醇制成每Iml含20μ I的溶液，即得對(duì)照品溶液； c)供試品溶液的制備:取藥物組合物坐珠達(dá)西研細(xì)后粉末2g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入體積比25:1的三氯甲烷與濃氨溶液的混合溶液50ml，稱定重量，加熱回流2小時(shí)，放冷，再稱定重量，用體積比25:1的三氯甲烷與濃氨溶液的混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液20ml，置分液漏斗中，用體積百分比2%的硫酸溶液提取5次，每次20ml，合并硫酸液，加濃氨溶液調(diào)節(jié)pH至9-10，用三氯甲烷提取5次，每次20ml，合并三氯甲烷液，減壓回收至干，殘?jiān)眉状嫁D(zhuǎn)移至IOml的量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液； d)測定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液10μ 1，注入液相色譜儀，測定，計(jì)算，即得； 鑒別: C.蓽茇的薄層色譜法鑒別 取藥物組合物坐珠達(dá)西3g研細(xì)，加無水乙醇10ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液濃縮至2ml，作為供試品溶液；取缺少蓽茇的陰性對(duì)照樣品，同法制成陰性對(duì)照溶液；另取胡椒堿對(duì)照品，同法制成每Iml含0.2mg的對(duì)照品溶液；照《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄VI B的薄層色譜法試驗(yàn)，分別吸取胡椒堿對(duì)照品溶液5μ 1、供試品溶液5μ 1、陰性對(duì)照溶液5 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比7:2:1的苯-醋酸乙酯-丙酮為展開劑展開，取出晾干，噴以體積百分比10%硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置365nm紫外光燈下檢視；坐珠達(dá)西溶液在與對(duì)照品溶液相同的位置上應(yīng)有相同顏色的斑點(diǎn)，陰性溶液無此斑點(diǎn)；D.牛黃的薄層色譜鑒別法鑒別 取藥物組合物坐珠達(dá)西3g，加醋酸乙酯30ml，超聲30min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状糮1.5ml使溶解，作為供試品溶液；取缺少牛黃的陰性對(duì)照樣品，同法制成陰性對(duì)照溶液?’另取膽酸、豬去氧膽酸對(duì)照品各，加甲醇分別制成每Iml中各含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄VI B的薄層色譜法試驗(yàn)，分別吸取膽酸對(duì)照品溶液5 μ 1、豬去氧膽酸10 μ 1、供試品溶液5 μ 1、陰性對(duì)照溶液5 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比2:2:1乙醚-三氯甲烷-冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積百分比10%硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置365nm紫外光燈下檢視，坐珠達(dá)西溶液在與對(duì)照品溶液相同的位置上應(yīng)有相同顏色的斑點(diǎn)，陰性溶液無此斑點(diǎn)； E.沒食子酸的薄層色譜法鑒別 取藥物組合物坐珠達(dá)西粉末3g，加甲醇30ml，超聲處理30min，濾過，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液；另取沒食子酸對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液；照《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄VI B的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述2種溶液各5 μ L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比5:5:0.5 二甲苯-醋酸乙酯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積百分比1%三氯化鐵乙醇溶液，105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜`相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK103512979SQ201310496290
【公開日】2014年1月15日 申請(qǐng)日期:2013年10月21日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月21日
【發(fā)明者】孫緒丁, 任松鵬, 趙延霞, 李懷平, 姬濤 申請(qǐng)人:山東阿如拉藥物研究開發(fā)有限公司