專利名稱：一種治療眼底出血癥的中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療眼底出血癥的中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，屬于制藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
在我們的日常生活中眼底出血是一種發(fā)病率非常高的疾病，在我國(guó)有很多人都非常容易患發(fā)眼底出血這種疾病，研究顯示，導(dǎo)致眼底出血的原因很多，主要有視網(wǎng)膜中央動(dòng)脈阻塞，高血壓性視網(wǎng)膜病變，視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞，視網(wǎng)膜靜脈周圍炎，視網(wǎng)膜動(dòng)脈周圍炎，腎病性視網(wǎng)膜病變，糖尿病性視網(wǎng)膜病變，柯茨病(coats)，視網(wǎng)膜血管瘤，脈絡(luò)膜血管瘤等，還有一些眼外傷所致的脈絡(luò)膜破裂、視網(wǎng)膜震蕩、黃斑穿孔等挫傷性脈絡(luò)膜出血，中醫(yī)一般認(rèn)為是熱傷經(jīng)絡(luò)，血熱則妄行，例如糖尿病中醫(yī)診斷為陰虛燥熱引起的，其眼底出血為其并發(fā)癥?，F(xiàn)檢索到2007年9月5日公開(kāi)的公開(kāi)號(hào)為CN101028487A的專利即提供了一種治療眼底出血中藥制劑和血明目的質(zhì)量檢測(cè)方法，該發(fā)明所述的和血明目制劑未確定處方組成中各藥材的用量，故每個(gè)劑量單位的重量無(wú)法確定，本領(lǐng)域技術(shù)人員采用該發(fā)明記載的方法無(wú)法實(shí)現(xiàn)此質(zhì)量檢測(cè)方法，即該發(fā)明不具有實(shí)用性，其創(chuàng)造性是不存在的，即使采用本發(fā)明所述的中藥制劑作為檢測(cè)對(duì)象，其檢測(cè)結(jié)果亦不顯著、可靠性差。本發(fā)明依據(jù)中醫(yī)涼血止血、滋陰化瘀、養(yǎng)肝明目的治病理論，采用由蒲黃8.93%、丹參8.93%、地黃7.14%、墨旱蓮7.14%、菊花5.95%、黃芩炭5.36%、決明子5.36%、車前子5.36%、茺蔚子5.36%、女貞子5.36%、夏枯草5.36%、龍膽5.36%、郁金3.57%、木賊5.36%、赤芍3.57%、牡丹皮3.57%、山楂
3.57%、當(dāng)歸3.57%、川芎1.19%制成藥劑學(xué)上任一種中藥制劑，提供了一種該中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，該質(zhì)量檢測(cè)方法簡(jiǎn)單方便且穩(wěn)定可靠，有效確保產(chǎn)品質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種治療眼底出血癥的中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，該質(zhì)量檢測(cè)方法簡(jiǎn)單方便且穩(wěn)定可靠，有效確保產(chǎn)品質(zhì)量。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案:
本發(fā)明所述的中藥制劑由蒲黃8.93%、丹參8.93%、地黃7.14%、墨旱蓮7.14%、菊花
5.95%、黃芩炭5.36%、決明子5.36%、車前子5.36%、茺蔚子5.36%、女貞子5.36%、夏枯草
5.36%、龍膽5.36%、郁金3.57%、木賊5.36%、赤芍3.57%、牡丹皮3.57%、山楂3.57%、當(dāng)歸
3.57%、川芎1.19%制成，該中藥制劑可以是藥劑學(xué)上所述的任一種劑型，其質(zhì)量檢測(cè)方法可以是顯微鑒別方法、薄層鑒別方法或含量測(cè)定方法中的一種或幾種。1.顯微鑒別方法:
取本品，置顯微鏡下觀察:花粉粒類圓形或橢圓形，直徑約17 29 μ m，表面有網(wǎng)狀雕紋(蒲黃)。韌皮纖維淡黃色，梭形，壁厚，孔溝細(xì)(黃岑)。種皮內(nèi)表皮細(xì)胞表面觀類長(zhǎng)方形，壁薄，微波狀，常作鑲嵌狀排列(車前子)。花粉粒類圓形，直徑24 34 μ m，外壁有刺，刺長(zhǎng)3 5μηι,具3個(gè)萌發(fā)孔(菊花)。
2.薄層鑒別方法1:
(I)黃芩苷鑒別方法:
取相當(dāng)于生藥材8.4g的本品，研細(xì)，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，取上清液作為供試品溶液，另取黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μ1，分別點(diǎn)于同一以4%醋酸鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水4 8:1 4:0.5 2:0.5 2為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。(2)大黃酚鑒別方法:
取相當(dāng)于生藥材8.4g的本品，研細(xì)，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀甀Oml使溶解，再加 鹽酸1ml，水浴加熱回流30分鐘，立即冷卻，用乙醚振搖提取3次，每次15ml，合并乙醚液，低溫?fù)]干乙醚，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液，另取大黃酚對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5μ1、對(duì)照品溶液 μ ，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以60 90°C石油醚-甲酸乙酯-甲酸10 20:3 7:0.5 2的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑
3.薄層鑒別方法2:
(I)芍藥苷鑒別方法:
取相當(dāng)于生藥材16.Sg的本品，研細(xì)，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用水飽和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，拌入中性氧化鋁3g，水浴干燥，加在100 200目、內(nèi)徑為1cm、重量為2g的中性氧化鋁柱上，以甲醇60ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液，另取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸30 40:3 5:5 10:0.1 0.2為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2%香草醛硫酸溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。( 2 )香蒲新苷鑒別方法:
取香蒲新苷對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液及芍藥苷鑒別方法項(xiàng)下的供試品溶液各 μ ，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以丙酮-水I 3:2 5為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，放置，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。(3)龍膽鑒別方法:
取芍藥苷鑒別方法項(xiàng)下的供試品溶液，加甲醇2ml稀釋后作為供試品溶液，另取龍膽對(duì)照藥材0.5g,加甲醇20ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干，殘洛加甲醇Iml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水20 30:5 10:1 3下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置254nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯一個(gè)相同顏色的主斑點(diǎn)。(4)菊花鑒別方法:
取相當(dāng)于生藥材8.4g的本品，研細(xì)，加乙酸乙酯30ml，加熱回流I小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液，另取菊花對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以60 90°C石油醚-乙酸乙酯10 15: I 3為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2%香草醛硫酸溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯一個(gè)相同顏色的主斑點(diǎn)。4.含量測(cè)定方法:
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.5%醋酸6 8:90 92為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為281nm，理論板數(shù)按丹參素鈉峰計(jì)算應(yīng)不低于1500 ；對(duì)照品溶液的制備取丹參素鈉對(duì)照品適量，加50%甲醇制成每Iml含丹參素鈉25Pg的溶液，即得；
供試品溶液的制備取相當(dāng)于生藥材16.8g的本品，精密稱定，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理10分鐘，功率為250W、頻率為40 kHz，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。5.由顯微鑒別方法、薄層鑒別方法和含量測(cè)定方法構(gòu)成的檢測(cè)方法:
顯微鑒別:
取本品，置顯微鏡下觀察:花粉粒類圓形或橢圓形，直徑約17 29 μ m，表面有網(wǎng)狀雕紋(蒲黃)。韌皮纖維淡黃色，梭形，壁厚，孔溝細(xì)(黃岑)。種皮內(nèi)表皮細(xì)胞表面觀類長(zhǎng)方形，壁薄，微波狀，常作鑲嵌狀排列(車前子)。花粉粒類圓形，直徑24 34 μ m，外壁有刺，刺長(zhǎng)3 5μηι,具3個(gè)萌發(fā)孔(菊花)。薄層鑒別:
(I)取相當(dāng)于生藥材8.4g的本品，研細(xì)，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，取上清液作為供試品溶液，另取黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μ1，分別點(diǎn)于同一以4%醋酸鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水4 8:1 4:0.5 2:0.5 2為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。(2)取相當(dāng)于生藥材8.4g的本品，研細(xì)，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀甀Oml使溶解，再加鹽酸1ml，水浴加熱回流30分鐘，立即冷卻，用乙醚振搖提取3次，每次15ml，合并乙醚液，低溫?fù)]干乙醚，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液，另取大黃酚對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5μ1、對(duì)照品溶液 μ ,分 別點(diǎn)于同一娃膠G薄層板上，以60 90°C石油醚-甲酸乙酯-甲酸10 20:3 7:0.5 2的上層溶液為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
(3)取相當(dāng)于生藥材16.Sg的本品，研細(xì)，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用水飽和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，拌入中性氧化鋁3g，水浴干燥，加在100 200目、內(nèi)徑為lcm、重量為2g的中性氧化鋁柱上，以甲醇60ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液，另取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸30 40:3 5:5 10:0.1 0.2為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2%香草醛硫酸溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。(4)取香蒲新苷對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液及芍藥苷鑒別方法項(xiàng)下的供試品溶液各 μ ，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以丙酮-水I 3:2 5為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，放置，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。(5)取芍藥苷鑒別方法項(xiàng)下的供試品溶液，加甲醇2ml稀釋后作為供試品溶液，另取龍膽對(duì)照藥材0.5g，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水20 30:5 10:1 3下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置254nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯一個(gè)相同顏色的主斑點(diǎn)。(6)取相當(dāng)于生藥材8.4g的本品，研細(xì)，加乙酸乙酯30ml，加熱回流I小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液，另取菊花對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以60 90°C石油醚-乙酸乙酯10 15: I 3為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2%香草醛硫酸溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯一個(gè)相同顏色的主斑點(diǎn)。含量測(cè)定方法:
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.5%醋酸6 8:90 92為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為281nm，理論板數(shù)按丹參素鈉峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。對(duì)照品溶液的制備取丹參素鈉對(duì)照品適量，加50%甲醇制成每Iml含丹參素鈉25Pg的溶液，即得。供試品溶液的制備取相當(dāng)于生藥材16.8g的本品，精密稱定，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理10分鐘，功率為250W、頻率為40 kHz，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
本發(fā)明提供了一種治療眼底出血癥的中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，該中藥制劑由蒲黃8.93%、丹參8.93%、地黃7.14%、墨旱蓮7.14%、菊花5.95%、黃芩炭5.36%、決明子5.36%、車前子5.36%、茺蔚子5.36%、女貞子5.36%、夏枯草5.36%、龍膽5.36%、郁金3.57%、木賊
5.36%、赤芍3.57%、牡丹皮3.57%、山楂3.57%、當(dāng)歸3.57%、川芎1.19%制成藥劑學(xué)上任一種劑型，通過(guò)涼血止血、滋陰化瘀、養(yǎng)肝明目達(dá)到治療陰虛肝旺，熱傷絡(luò)脈所引起的眼底出血。本發(fā)明在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)上，給定了各組份之間量的關(guān)系，通過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)研究、對(duì)比，確定了一種可操作性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高的質(zhì)量檢測(cè)方法，在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)上刪除了黃芩藥材對(duì)照、決明子藥材對(duì)照、大黃素對(duì)照、墨旱蓮藥材對(duì)照、原兒茶醛對(duì)照等鑒別方法不顯著、重現(xiàn)性差的薄層鑒別，新增加了芍藥苷、香蒲新苷、龍膽藥材、菊花藥材等一系列對(duì)照方法顯著、重現(xiàn)性及穩(wěn)定性可靠的薄層鑒別方法，同時(shí)提供了顯微鑒別和含量測(cè)定方法，多方面、多角度的確保了產(chǎn)品質(zhì)量，能夠更有效的檢測(cè)產(chǎn)品是否合格、質(zhì)量是否優(yōu)劣，保證了患者用藥的安全性、有效性?，F(xiàn)就本發(fā)明的重要研究方法介紹如下:
一、實(shí)驗(yàn)藥品
實(shí)驗(yàn)藥品處方:
權(quán)利要求
1.一種治療眼底出血癥的中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，該中藥制劑由蒲黃8.93%、丹參8.93%、地黃7.14%、墨旱蓮7.14%、菊花5.95%、黃芩炭5.36%、決明子5.36%、車前子5.36%、茺蔚子5.36%、女貞子5.36%、夏枯草5.36%、龍膽5.36%、郁金3.57%、木賊5.36%、赤芍3.57%、牡丹皮3.57%、山楂3.57%、當(dāng)歸3.57%、川芎1.19%制成，其特征在于該中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法為顯微鑒別方法、薄層鑒別方法或含量測(cè)定方法中的一種或幾種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療眼底出血癥的中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，該中藥制劑由蒲黃8.93%、丹參8.93%、地黃7.14%、墨旱蓮7.14%、菊花5.95%、黃芩炭5.36%、決明子5.36%、車前子5.36%、茺蔚子5.36%、女貞子5.36%、夏枯草5.36%、龍膽5.36%、郁金3.57%、木賊5.36%、赤芍3.57%、牡丹皮3.57%、山楂3.57%、當(dāng)歸3.57%、川芎1.19%制成，其特征在于該中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法為顯微鑒別方法。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種治療眼底出血癥的中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于:取本品，置顯微鏡下觀察:(I)蒲黃鑒別:花粉粒類圓形或橢圓形，直徑約17 29μπι，表面有網(wǎng)狀雕紋；(2)黃芩鑒別:韌皮纖維淡黃色，梭形，壁厚，孔溝細(xì)；(3)車前子鑒別:種皮內(nèi)表皮細(xì)胞表面觀類長(zhǎng)方形，壁薄，微波狀，常作鑲嵌狀排列；(4)菊花鑒別:花粉粒類圓形，直徑24 34 μ m,外壁有刺，刺長(zhǎng)3 5 μ m，具3個(gè)萌發(fā)孔。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療眼底出血癥的中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，該中藥制劑由蒲黃8.93%、丹參8.93%、地黃7.14%、墨旱蓮7.14%、菊花5.95%、黃芩炭5.36%、決明子5.36%、車前子5.36%、茺蔚子5.36%、女貞子5.36%、夏枯草5.36%、龍膽5.36%、郁金3.57%、木賊5.36%、赤芍3.57%、牡丹皮3.57%、山楂3.57%、當(dāng)歸3.57%、川芎1.19%制成，其特征在于該中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法為薄層鑒別方法。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種治療眼底出血癥的中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于鑒別該中藥制劑中的黃芩苷、大黃酚、芍藥苷、香蒲新苷、龍膽或者菊花中的兩種或幾種。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種治療眼底出血癥的中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于鑒別該中藥制劑中的黃芩苷和大黃酚； 黃芩苷鑒別方法: 取相當(dāng)于生藥材8.4g的本品，研細(xì)，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，取上清液作為供試品溶液，另取黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μ1，分別點(diǎn)于同一以4%醋酸鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水4 8:1 4:0.5 2:0.5 2為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； 大黃酚鑒別方法: 取相當(dāng)于生藥材8.4g的本品，研細(xì)，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀甀Oml使溶解，再加鹽酸1ml，水浴加熱回流30分鐘，立即冷卻，用乙醚振搖提取3次，每次15ml，合并乙醚液，低溫?fù)]干乙醚，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液，另取大黃酚對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5μ1、對(duì)照品溶液 μ ，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以60 90°C石油醚-甲酸乙酯-甲酸10 20:3 7:0.5 2的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種治療眼底出血癥的中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于鑒別該中藥制劑中的芍藥苷、香蒲新苷、龍膽和菊花； 芍藥苷鑒別方法: 取相當(dāng)于生藥材16.Sg的本品，研細(xì)，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用水飽和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，拌入中性氧化鋁3g，水浴干燥，加在100 200目、內(nèi)徑為1cm、重量為2g的中性氧化鋁柱上，以甲醇60ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液，另取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸30 40:3 5:5 10:0.1 0.2為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2%香草醛硫酸溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； 香蒲新苷鑒別方法: 取香蒲新苷對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液及芍藥苷鑒別方法項(xiàng)下的供試品溶液各 μ ，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以丙酮-水I 3:2 5為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，放置，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)； 龍膽鑒別方法: 取芍藥苷鑒別方法項(xiàng)下的供試品溶液，加甲醇2ml稀釋后作為供試品溶液，另取龍膽對(duì)照藥材0.5g,加甲醇20ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干，殘洛加甲醇Iml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-甲醇 -水20 30:5 10:1 3下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置254nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯一個(gè)相同顏色的主斑點(diǎn)； 菊花鑒別方法: 取相當(dāng)于生藥材8.4g的本品，研細(xì)，加乙酸乙酯30ml，加熱回流I小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液，另取菊花對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以60 90°C石油醚-乙酸乙酯10 15: I 3為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2%香草醛硫酸溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯一個(gè)相同顏色的主斑點(diǎn)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療眼底出血癥的中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，該中藥制劑由蒲黃8.93%、丹參8.93%、地黃7.14%、墨旱蓮7.14%、菊花5.95%、黃芩炭5.36%、決明子5.36%、車前子5.36%、茺蔚子5.36%、女貞子5.36%、夏枯草5.36%、龍膽5.36%、郁金3.57%、木賊5.36%、赤芍3.57%、牡丹皮3.57%、山楂3.57%、當(dāng)歸3.57%、川芎1.19%制成，其特征在于該中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法為含量測(cè)定方法。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種治療眼底出血癥的中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于:色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.5%醋酸6 8:90 92為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為281nm，理論板數(shù)按丹參素鈉峰計(jì)算應(yīng)不低于1500 ； 對(duì)照品溶液的制備取丹參素鈉對(duì)照品適量，加50%甲醇制成每Iml含丹參素鈉25Pg的溶液，即得； 供試品溶液的制備取相當(dāng)于生藥材16.8g的本品，精密稱定，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理10分鐘，功率為250W、頻率為40 kHz，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得； 測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療眼底出血癥的中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，該中藥制劑由蒲黃8.93%、丹參8.93%、地黃7.14%、墨旱蓮7.14%、菊花5.95%、黃芩炭5.36%、決明子5.36%、車前子5.36%、茺蔚子5.36%、女貞子5.36%、夏枯草5.36%、龍膽5.36%、郁金3.57%、木賊5.36%、赤芍3.57%、牡丹皮3.57%、山楂3.57%、當(dāng)歸3.57%、川芎1.19%制成，其特征在于該中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法由顯微鑒別方法、薄層鑒別方法和含量測(cè)定方法組成； 顯微鑒別: 取本品，置顯微鏡下觀察:(I)蒲黃鑒別:花粉粒類圓形或橢圓形，直徑約17 29μπι，表面有網(wǎng)狀雕紋；(2)黃芩鑒別:韌皮纖維淡黃色，梭形，壁厚，孔溝細(xì)；(3)車前子鑒別:種皮內(nèi)表皮細(xì)胞表面觀類長(zhǎng)方形，壁薄，微波狀，常作鑲嵌狀排列；(4)菊花鑒別:花粉粒類圓形，直徑24 34 μ m,外壁有刺，刺長(zhǎng)3 5 μ m，具3個(gè)萌發(fā)孔； 薄層鑒別: (1)取相當(dāng)于生藥材8.4g的本品，研細(xì)，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，取上清液作為供試品溶液，另取黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μ1，分別點(diǎn)于同一以4%醋酸鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水4 8:1 4:0.5 2:0.5 2為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； (2)取相當(dāng)于生藥材8.4g的本品，研細(xì)，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀甀Oml使溶解，再加鹽酸Iml，水浴加熱回流30分鐘，立即冷卻，用乙醚振搖提取3次，每次15ml，合并乙醚液，低溫?fù)]干乙醚，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液，另取大黃酚對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5μ1、對(duì)照品溶液 μ ,分別點(diǎn)于同一娃膠G薄層板上，以60 90°c石油醚-甲酸乙酯-甲酸10 20:3 7:0.5 2的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)； (3)取相當(dāng)于生藥材16.Sg的本品，研細(xì)，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用水飽和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘洛加甲醇2ml使溶解, 拌入中性氧化招3g,水浴干燥,加在100 200目、內(nèi)徑為1cm、重量為2g的中性氧化鋁柱上，以甲醇60ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液，另取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸30 40:3 5:5 10:0.1 0.2為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出，晾干，噴以2%香草醛硫酸溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； (4)取香蒲新苷對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液及芍藥苷鑒別方法項(xiàng)下的供試品溶液各 μ ，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以丙酮-水I 3:2 5為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，放置，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)； (5)取芍藥苷鑒別方法項(xiàng)下的供試品溶液，加甲醇2ml稀釋后作為供試品溶液，另取龍膽對(duì)照藥材0.5g，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水20 30:5 10:1 3下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置254nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯一個(gè)相同顏色的主斑點(diǎn)； (6)取相當(dāng)于生藥材8.4g的本品，研細(xì)，加乙酸乙酯30ml，加熱回流I小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液，另取菊花對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以60 90°C石油醚-乙酸乙酯10 15: I 3為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2%香草醛硫酸溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯一個(gè)相同顏色的主斑點(diǎn)； 含量測(cè)定方法: 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.5%醋酸6 8:90 92為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為28`1nm，理論板數(shù)按丹參素鈉峰計(jì)算應(yīng)不低于1500 ； 對(duì)照品溶液的制備取丹參素鈉對(duì)照品適量，加50%甲醇制成每Iml含丹參素鈉25Pg的溶液，即得； 供試品溶液的制備取相當(dāng)于生藥材16.8g的本品，精密稱定，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理10分鐘，功率為250W、頻率為40 kHz，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得； 測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療眼底出血癥的中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，該中藥制劑由蒲黃8.93%、丹參8.93%、地黃7.14%、墨旱蓮7.14%、菊花5.95%、黃芩炭5.36%、決明子5.36%、車前子5.36%、茺蔚子5.36%、女貞子5.36%、夏枯草5.36%、龍膽5.36%、郁金3.57%、木賊5.36%、赤芍3.57%、牡丹皮3.57%、山楂3.57%、當(dāng)歸3.57%、川芎1.19%制成藥劑學(xué)上任一種劑型，通過(guò)涼血止血、滋陰化瘀、養(yǎng)肝明目達(dá)到治療陰虛肝旺，熱傷絡(luò)脈所引起的眼底出血。本發(fā)明提供的質(zhì)量檢測(cè)方法可操作性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高，能夠更有效的檢測(cè)產(chǎn)品是否合格、質(zhì)量是否優(yōu)劣，保證了患者用藥的安全性、有效性。
文檔編號(hào)G01N30/90GK103207181SQ201310163688
公開(kāi)日2013年7月17日 申請(qǐng)日期2013年5月7日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月7日
發(fā)明者黃小華, 付彬, 張 浩, 耿小秀, 王海亮 申請(qǐng)人:西安碑林藥業(yè)股份有限公司