專利名稱：一種檢測(cè)水溶性維生素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種維生素的檢測(cè)方法，尤其是關(guān)于動(dòng)物飼料中水溶性維生素的檢測(cè)方法，屬于化學(xué)成份的檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
水溶性維生素是指能在水中溶解的維生素，主要包括維生素B1、維生素B2、維生素B6、煙酰胺和維生素C等。其中，維生素B1又稱硫胺素，參與動(dòng)物體內(nèi)糖類代謝，維持神經(jīng)、消化和循環(huán)系統(tǒng)的正常功能。維生素B2又稱核黃素，在生物氧化的呼吸鏈中起遞氫作用，參與動(dòng)物體內(nèi)多種物質(zhì)代謝和能量代謝。維生素B6參與氨基酸、糖原代謝和激素的合成，能促進(jìn)消化、吸收，增強(qiáng)免疫力。煙酰胺是輔酶I和輔酶II的組成部分，是動(dòng)物體內(nèi)合成多種脫氫酶的輔酶的重要原料。上述水溶性維生素對(duì)生命活動(dòng)具有重要作用。維生素通常是從食物中攝取的，人工飼養(yǎng)的動(dòng)物食物源固定，維生素的攝取途徑單一?？刂坪蔑暳现械木S生素添加量就成了防止家畜缺乏維生素的主要手段。現(xiàn)有飼料工業(yè)檢測(cè)水溶性維生素B:、B2、B6和煙酰胺的方法，是先將樣品分別預(yù)處理后，再分別按照以下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)GB/T14700-2002《飼料中維生素B1的測(cè)定》、GB/T14701-2002《飼料中維生素B2的測(cè)定》、GB/T14702-2002《飼料中維生素B6的測(cè)定》和NY/T2130-2012《飼料中煙酰胺的測(cè)定》。上述水溶性維生素檢測(cè)方法存在以下不足(I)檢測(cè)分別進(jìn)行，操作重復(fù)，檢測(cè)周期冗長(zhǎng)。(2)前處理過(guò)程中，所用的提取液、流動(dòng)相為多種不同試劑，需分別配置，操作重復(fù)，過(guò)程繁瑣。(3)為消除檢測(cè)結(jié)果中拖尾現(xiàn)象，流動(dòng)相配制時(shí)需用額外添加三乙胺。三乙胺是一種易燃、易爆、有毒、具強(qiáng)刺激性的藥品，增加測(cè)試過(guò)程危險(xiǎn)性。(4)維生素B1和B2結(jié)構(gòu)類似，分離較困難。先分別提取再檢測(cè)，維生素B1和B2相互影響，檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中檢測(cè)過(guò)程繁雜，檢測(cè)周期冗長(zhǎng)、分離效果不佳等不足，提出一種檢測(cè)水溶性維生素的方法。本發(fā)明的檢測(cè)方法可以在較短的時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)對(duì)維生素BpByB6和煙酰胺的同時(shí)分離及精確檢測(cè)。為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供了以下技術(shù)方案一種水溶性維生素的檢測(cè)方法，包括以下步驟(I)制備維生素B1、B2、B6和煙酰胺的標(biāo)準(zhǔn)溶液，利用高效液相色譜儀對(duì)其檢測(cè)，得所述維生素的保留時(shí)間，并生成維生素濃度與峰面積之間對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線；(2)取飼料樣品進(jìn)行預(yù)處理，然后利用所述高效液相色譜儀在與步驟(I)相同的條件下對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，得到所述溶液樣品的各組份的保留時(shí)間和檢測(cè)峰面積；
(3)將步驟(2)中獲得的所述溶液樣品的各組分的保留時(shí)間和檢測(cè)到的峰面積與步驟(I)中得到的保留時(shí)間及所述的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比對(duì)，計(jì)算確定飼料中的維生素B2,B6和煙酰胺的含量；進(jìn)一步的，所述步驟(2)中的預(yù)處理包括(201)將詞料樣品用尚子對(duì)溶液超聲提取,得提取液；(202)將步驟(201)所得提取液于沸水中煮沸20_30min ；(203)將步驟(202)得到的提取液冷卻至室溫，定容，搖勻；靜置，取上清液過(guò)濾；所述離子對(duì)溶液為含有4-8mmol/L己燒磺酸鈉和15_25mmol/L磷酸的水溶液。進(jìn)一步，上述水溶性維生素的檢測(cè)方法中，所述離子對(duì)溶液為含有5mmol/L己烷磺酸鈉和20mmol/L磷酸的離子對(duì)溶液。進(jìn)一步，上述水溶性維生素的檢測(cè)方法中，所述高效液相色譜的流動(dòng)相為所述離子對(duì)溶液。進(jìn)一步，上述水溶性維生素的檢測(cè)方法中，所述高效液相色譜的流動(dòng)相分為流動(dòng)相A和流動(dòng)相B，其中流動(dòng)相A為所述離子對(duì)溶液，流動(dòng)相B為乙腈。高效液相色譜檢測(cè)過(guò)程采用梯度洗脫方式，優(yōu)選梯度洗脫程序如表I。表I用于洗脫水溶性維生素的梯度洗脫程序
權(quán)利要求
1.一種水溶性維生素的檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟 (1)制備維生素BpByB6和煙酰胺的標(biāo)準(zhǔn)溶液，利用高效液相色譜儀對(duì)其檢測(cè)，得所述維生素的保留時(shí)間，并生成維生素濃度與峰面積之間對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線； (2)取飼料樣品進(jìn)行預(yù)處理，然后利用所述高效液相色譜儀在與步驟(I)相同的條件下對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，得到所述溶液樣品的各組份的保留時(shí)間和檢測(cè)峰面積； (3)將步驟(2)中獲得的所述溶液樣品的各組分的保留時(shí)間和檢測(cè)到的峰面積與步驟(O中得到的保留時(shí)間及所述的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比對(duì)，計(jì)算確定飼料中的維生素V B2, B6和煙酰胺的含量； 所述步驟(2)中的預(yù)處理包括 (201)將飼料樣品用離子對(duì)溶液超聲提取，得提取液； (202)將步驟(201)所得提取液于沸水中煮沸20-30min； (203)將步驟(202)得到的提取液冷卻至室溫，定容，搖勻；靜置，取上清液過(guò)濾； 所述離子對(duì)溶液為含有4-8mmol/L己烷磺酸鈉和15-25mmol/L磷酸的水溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)水溶性維生素的方法，其特征在于，所述離子對(duì)溶液為含有5mmol/L己燒磺酸鈉和20mmol/L磷酸的離子對(duì)溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)水溶性維生素的方法，其特征在于，步驟(203)中提取液過(guò)濾用的是O. 45 μ m水相濾膜。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)水溶性維生素的方法，其特征在于，所述高效液相色譜的流動(dòng)相為權(quán)利要求I中所述離子對(duì)溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)水溶性維生素的方法，其特征在于，高效液相色譜流動(dòng)相分為A，B兩種，A為權(quán)利要求I中所述的離子對(duì)溶液，B為乙腈，高效液相色譜檢測(cè)過(guò)程采用梯度洗脫方式。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測(cè)水溶性維生素的方法，其特征在于，檢測(cè)過(guò)程梯度洗脫程序如下流動(dòng)相A、B初始比例為91:9，待基線平衡后進(jìn)樣，同時(shí)調(diào)整流動(dòng)相A、B比例在12min內(nèi)線性調(diào)整為80:20。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)水溶性維生素的方法，其特征在于，步驟(201)預(yù)處理中，飼料樣品與提取液比例是重量體積比g/L，2 Γ5 :1。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)水溶性維生素的方法，其特征在于，高效液相色譜檢測(cè)條件色譜柱，資生堂 UG120 (5 μ m, 4. 6mm i. d. X 250mm);溫度，30<€ ;流速，I. OmL/min ;檢測(cè)波長(zhǎng)210nm。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種測(cè)定水溶性維生素的方法，步驟包括(1)制備維生素標(biāo)準(zhǔn)溶液，利用高效液相色譜儀對(duì)其檢測(cè)，得保留時(shí)間并生成標(biāo)準(zhǔn)曲線；(2)取樣品預(yù)處理得到溶液樣品，利用所述高效液相色譜儀在與步驟(1)相同的條件下對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，得到樣品保留時(shí)間和峰面積；(3)將步驟(2)中獲得的保留時(shí)間和峰面積與步驟(1)中得到的保留時(shí)間及所述標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比對(duì)，通過(guò)計(jì)算確定維生素含量。步驟(2)中預(yù)處理步驟包括超聲提取，將提取液于沸水中煮沸20-30min，冷卻至室溫，定容，搖勻；靜置，取上清液過(guò)濾。采用本發(fā)明方法避免重復(fù)制樣的繁瑣過(guò)程，一次性完成四種維生素的測(cè)試，檢測(cè)速度提高，且檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。
文檔編號(hào)G01N30/88GK102980967SQ20121058454
公開(kāi)日2013年3月20日 申請(qǐng)日期2012年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月28日
發(fā)明者梁玉樹(shù), 王虎, 何蕓蕓 申請(qǐng)人:新希望乳業(yè)控股有限公司