專利名稱：應(yīng)用膜分離和全二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜快速檢測中藥中農(nóng)藥多殘留的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于食品安全技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種應(yīng)用膜分離和全二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜快速檢測中藥中農(nóng)藥多殘留的方法。
背景技術(shù)：
我國是中藥種植、使用及出口大國，其藥用功效越來越得到國內(nèi)外消費(fèi)者的認(rèn)可。近年來由于種植不當(dāng)、環(huán)境污染或利益驅(qū)動(dòng)，人工種植中藥不斷出現(xiàn)農(nóng)藥殘留污染問題，成為影響藥物療效和安全性的重要因素，對人類和環(huán)境造成的危害也是不容忽視的，近年來國內(nèi)外對中藥農(nóng)藥殘留的關(guān)注度呈上升趨勢，目前歐美、日本、韓國等國家都對中藥中的農(nóng)藥殘留制定了嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)，對我國中藥出口造成技術(shù)壁壘。因此建立快速準(zhǔn)確的中藥中農(nóng)藥殘留的檢測方法是很有必要的。現(xiàn)在中藥中的農(nóng)藥殘留的檢測主要有氣相色譜法、液相色譜法以及氣相色譜-質(zhì)譜法，液相色譜-質(zhì)譜法，氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，氣相色譜法和液相色譜法主要依賴色譜分離，針對復(fù)雜基質(zhì)如各種中藥，在農(nóng)藥的定性上存在一定難度，基質(zhì)中的干擾峰與待測農(nóng)藥不能有效分離，干擾結(jié)果的準(zhǔn)確性，甚至造成假陽性。氣相色譜-質(zhì)譜法和液相色譜-質(zhì)譜法主要利用低分辨質(zhì)譜檢測器，由于受到掃描速度的限制，在農(nóng)藥多殘留的分析上靈敏度會(huì)不理想，氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法在 農(nóng)藥多殘留的定量分析上具有較高的靈敏度，適合分析目標(biāo)化合物；在對復(fù)雜基質(zhì)的分離和未知物的篩選及定性定量上，近年來發(fā)展較快的二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜(TOFMS)技術(shù)具有優(yōu)勢，氣相色譜采用兩支極性不同的色譜柱，當(dāng)樣品經(jīng)過第一支非極性柱時(shí)，待測組分按分子大小進(jìn)行分離，在一維色譜柱上未分開的組分在調(diào)制解調(diào)器的作用后進(jìn)入第二支極性色譜柱，一維相同保留時(shí)間的組分在第二支色譜柱上按極性再次分離，實(shí)現(xiàn)了樣品組分的正交分離，強(qiáng)度在三維譜圖上顯示，得到三維譜圖。TOFMS可提供非常高的采集頻率，這使得在GCXGC上重疊峰得以分辨，并自動(dòng)解析。該方法具有較高的分辨率、靈敏度，提高了農(nóng)藥在定性和定量上的準(zhǔn)確性和可靠性，解決了復(fù)雜基質(zhì)如中藥的分離及同時(shí)定性和定量的難題。目前國內(nèi)涉及中藥中農(nóng)藥殘留的檢測標(biāo)準(zhǔn)很少，2010年修訂頒布的新版《中華人民共和國藥典》中涉及了中藥中二十多種農(nóng)藥的檢測方法，多為氣相色譜法，國標(biāo)gb /t23200-2008桑枝、金銀花、枸杞子和荷葉中488種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定氣相色譜-質(zhì)譜法，gb / t 23201-2008桑枝、金銀花、枸杞子和荷葉中413種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法涉及了多殘留農(nóng)藥的檢測，但方法僅適用于基質(zhì)比較簡單的桑枝、金銀花、枸杞子和荷葉四種中藥，而應(yīng)用二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜檢測中藥中的多殘留農(nóng)藥還研究很少。中藥中農(nóng)殘前處理方法主要有溶劑提取、加速溶劑萃取、液液分配、固相微萃取等，這些方法存在耗時(shí)長、試劑消耗量大、待測物回收不穩(wěn)定、易分解、固相微萃取造價(jià)高等問題。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明的目的在于設(shè)計(jì)提供一種快速、簡便，靈敏度高、分離效果好，有效減少來自復(fù)雜的中藥基質(zhì)干擾的應(yīng)用膜分離和全二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜快速檢測中藥中農(nóng)藥多殘留的方法。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種應(yīng)用膜分離和全二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜快速檢測中藥中農(nóng)藥多殘留的方法，包括以下步驟I)中藥樣品中農(nóng)藥殘留的乙腈提??；2)氧化鋁無機(jī)膜的超濾分離；3)樣品提取溶液的固相分散萃取凈化； 4)使用二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜檢測；5)結(jié)果分析。具體地說，包括以下步驟I)中藥樣品中農(nóng)藥殘留的乙腈提取稱取I 2g中藥粉末樣品，加入2 4mL蒸餾水使中藥潤濕，加入IOmL乙腈，劇烈震搖，得到由中藥基質(zhì)、水、乙腈組成的混合勻漿溶液，在上述勻漿溶液中加入Ig氯化鈉固體，再劇烈震搖，然后進(jìn)行離心操作，靜置分層，取出上清液，離心管中再加IOmL乙腈，重復(fù)提取一次，合并2次提取液；2)氧化鋁無機(jī)膜的超濾分離氧化鋁無機(jī)膜膜厚O. 02 O. 2um,固定于溶液過濾接收裝置上，加樣前先用乙腈潤濕，真空抽濾，棄去接收器中的乙腈，加入提取液，真空抽濾至膜面近干，再加入IOmL乙睛抽濾洗膜，接收液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸餾瓶中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干，加入ImL丙酮于蒸餾瓶中溶解待測樣品；3)樣品提取溶液的固相分散萃取凈化在2mL離心管中分別加入150 300mg無水硫酸鎂,50 IOOmgN-丙基-乙二胺，100 200mg石墨碳黑，再加入ImL待測物丙酮溶解液，再進(jìn)行震蕩離心取上清液，上清液過O. 22um有機(jī)濾膜，即得到樣品溶液；4)用二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜檢測c)標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備分別準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)品農(nóng)藥，用甲苯或甲苯-丙酮混合液溶解并配成lmg/mL的儲(chǔ)備液，使用時(shí)再根據(jù)各農(nóng)藥的響應(yīng)，用乙睛稀釋成標(biāo)準(zhǔn)工作液；d)使用二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜儀檢測標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液由自動(dòng)進(jìn)樣器分別吸取標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣品溶液，注入二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜儀中，樣品溶液中農(nóng)藥組分和部分中藥基質(zhì)經(jīng)一維色譜柱分離后，經(jīng)雙噴口 4通道調(diào)制解調(diào)器加熱冷卻后進(jìn)入二維氣相色譜柱再分離，飛行時(shí)間質(zhì)譜全掃描檢測；5)結(jié)果分析軟件Leco ChromaTOF-GC V 4. 32用于數(shù)據(jù)處理，當(dāng)樣品在EI電離源70V電壓的條件下電離時(shí)，其質(zhì)譜圖與NIST/PEST He譜庫相比對，當(dāng)相似度大于設(shè)定值，該物質(zhì)被自動(dòng)識(shí)別完成定性，定量離子是軟件根據(jù)碎片離子的最大豐度自動(dòng)選定；以標(biāo)準(zhǔn)工作液的質(zhì)量濃度X為橫坐標(biāo)，定量離子的峰面積Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對樣品進(jìn)行單離子外標(biāo)法定量；用標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量離子一維和二維保留時(shí)間設(shè)定定量處理方法，當(dāng)樣品中的定量離子的信噪比大于設(shè)定值，一維保留時(shí)間偏差在6 10ms，二維保留時(shí)間偏差在O. I O. 5ms內(nèi)，樣品被設(shè)定的定量處理方法自動(dòng)定量。所述步驟2)氧化鋁無機(jī)膜在使用前要用8mL乙腈潤濕。所述步驟3)在漩渦震蕩器上震搖O. 5 2min，然后在離心機(jī)8000 12000rpm下離心4 6min。
所述的步驟4)中標(biāo)準(zhǔn)品農(nóng)藥為敵敵畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、五氯苯、滅線磷、氧化樂果、四氯硝基苯、氟樂靈、久效磷、硫線磷、甲拌磷、A-666、六氯苯、樂果、莠去津、B-666、五氯硝基苯、特丁硫磷、C-666、二嗪磷、地蟲硫磷、卩密霉胺、氟蟲脲、乙拌磷、D-666、百菌清、異稻溫凈、五氯苯胺、乙草胺、敵稗、甲基毒死蜱、甲基對硫磷、甲草胺、七氯、撲草凈、炔螨特代謝物、甲基嘧啶磷、殺螟硫磷、馬拉硫磷、五氯硝基苯代謝物、異丙甲草胺、毒死蜱、禾草丹、倍硫磷、4，4_ 二氯苯酚、對硫磷、艾氏劑、毒蟲畏、嘧菌環(huán)胺、二甲戊樂靈、氟蟲睛、環(huán)氧七氯、喹硫磷、三唑醇I、腐霉利、pp-DDD、三唑醇2、殺撲磷、噻嗪酮、氯丹、苯線磷、pp-DDE、A-硫丹、丙硫磷、稻痕靈、丙溴磷、op-DDE、異狄氏劑、氟娃唑、睛菌唑、環(huán)氟菌胺、狄氏劑、蟲螨睛、蟲螨磷、乙酯殺螨醇、B-硫丹、乙硫磷、PP-DDT、三唑磷、丙環(huán)唑、硫丹硫酸鹽、甲氧滴滴涕、炔螨特、增效醚、戊唑醇、聯(lián)苯菊酯、溴螨酯、亞胺硫磷、甲氰菊酯、伏殺硫磷、三氟氯氰菊酯、保棉磷、氯菊酯、蠅毒磷、氟氯氰菊酯、苯醚菊酯、氯氰菊酯、氟氰戊菊酯、丙炔氟草胺、氰戊菊酯、氟胺氰菊酯、烯酰嗎啉、苯醚甲環(huán)唑、溴氰菊酯共103種。所述的步驟4)中二維氣相色譜條件一維柱為非極性柱30mX O. 25mmX O. 25um+5mX O. 25mm>5%diphenyl/95%dimethylpolysiloxane ；二維柱為中極性柱 Rtx_200 2. OmXO. 18mmXO. 20um> trifluoropropylmethylpolysiloxane ；載氣He，流速I. Oml/mL,進(jìn)樣2uL，不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣口溫度250°C ；一維色譜柱升溫程序40°C保持lmin，以30°C / min的速度升至130°C，再以IO0C / min的速度升至280°C保持10分鐘，整個(gè)運(yùn)行時(shí)間為29分鐘；二維色譜柱起始溫度比一維高15°C，55°C保持lmin，以30°C / min的速度升至145°C，再以10°C / min的速度升至295°C保持10分鐘；調(diào)制解調(diào)器溫度比二維溫度高40°C，95°C保持lmin，以30°C / min的速度升至185°C，再以10°C / min的速度升至330°C保持10分鐘，調(diào)制周期為4s，其中熱吹O. 8秒，冷吹I. 2秒；質(zhì)譜條件質(zhì)量分析器飛行時(shí)間質(zhì)譜分辨率1000 ;質(zhì)量范圍lO-lOOOamu，采
集速率每秒100張圖譜以上，離子源EI源。電離電壓70V ;離子源溫度250°C，傳輸線溫度 280 0C ο所述的步驟I)中乙腈提取液劇烈震搖I分鐘。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果如下(I)本發(fā)明中涉及的分離膜是氧化鋁無機(jī)膜。常規(guī)的超濾膜是中空纖維有機(jī)膜，孔徑在10-1000埃，相當(dāng)于Ι-lOOnm，但應(yīng)用超濾膜分離耗時(shí)長，需要幾個(gè)小時(shí)。而應(yīng)用孔徑20nm的無機(jī)氧化鋁膜在真空抽濾下對中藥提取液進(jìn)行分離，同樣起到超濾的效果，而分離只需幾分鐘。(2)將膜分離結(jié)合固相分散萃取應(yīng)用于中藥的農(nóng)殘前處理，凈化效果等同2只串聯(lián)的固相微萃取柱(PSA和氨基柱串聯(lián))，優(yōu)于單支氟羅里硅土柱(通過二維色譜質(zhì)譜圖驗(yàn)證)。(3)本發(fā)明首次將膜分離技術(shù)引入農(nóng)藥殘留的前處理方法中，具有創(chuàng)新性。(4)本發(fā)明提供的樣品前處理方法在I小時(shí)內(nèi)可完成，而傳統(tǒng)的方法如固相微萃取需要4-5個(gè)小時(shí)，本發(fā)明方法一次只需38mL乙腈溶液，而固相微萃取方法一次至少要IOOmL乙腈溶液，兩只固相微萃取柱一般在100兀,而固相分散萃取一次只需200mg吸附齊IJ，l-2mL樣品提取液經(jīng)固相分散萃取凈化后可直接進(jìn)樣。因此本發(fā)明具有快速、簡便、節(jié)省試劑、費(fèi)用低、提取凈化效果好等特點(diǎn)。
(5)氣相或液相色譜的定性只依據(jù)一維保留時(shí)間，二維氣相色譜可依據(jù)2個(gè)保留時(shí)間，即一維保留時(shí)間和一個(gè)調(diào)制周期內(nèi)的二維保留時(shí)間，增加了定性的準(zhǔn)確性。一維氣相色譜色譜柱只能是一種極性如非極性或極性，而二維氣相色譜可同時(shí)使用非極性和極性柱，多種待測物經(jīng)過一維非極性柱時(shí)先按分子大小進(jìn)行分離，再經(jīng)過二維極性色譜柱時(shí)再按極性再次分離，因此能達(dá)到GCXGC的分離效果，使復(fù)雜基質(zhì)能得到高效分離，因此本發(fā)明方法非常適合中藥這種復(fù)雜基質(zhì)中多種農(nóng)藥殘留的同時(shí)分析。(6)傳統(tǒng)四級(jí)桿質(zhì)譜采集譜圖的速度很慢，對多農(nóng)殘的分析為提高采集頻率保證足夠的靈敏度，每一種物質(zhì)只能采集2-3個(gè)特征離子，其定性依據(jù)是2-3個(gè)特征例子的豐度t匕，當(dāng)干擾物也出現(xiàn)相同的離子豐度比時(shí)，儀器就會(huì)給出假陽性的判斷。而飛行時(shí)間質(zhì)譜由于其具有高采集速率，每一種物質(zhì)都采集全譜圖，如在50-550amu質(zhì)量范圍內(nèi)全掃，其定性是每一張全譜圖與NIST或農(nóng)殘譜庫中標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的全譜庫相比對，當(dāng)相似度達(dá)到設(shè)定值如700時(shí)，儀器才做出定性的判定，因此結(jié)果是非常準(zhǔn)確的，也不會(huì)出現(xiàn)假陽性。該儀器在沒有標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)也可通過譜庫檢索做出定性分析，該方法也適于做大批量樣品中農(nóng)藥殘留的快速篩選。


圖I為103種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜圖(部分時(shí)間段譜圖)；圖2為實(shí)施例I銀杏葉基質(zhì)的檢出農(nóng)藥的二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜圖；圖3為實(shí)施例2中氯氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)品的實(shí)測質(zhì)譜圖、農(nóng)藥譜庫檢索圖及對比結(jié)果；圖4為實(shí)施例2五味子基質(zhì)在氯氰菊酯(1356，2. 19)處干擾峰的二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜圖；圖5為實(shí)施例2五味子基質(zhì)中疑似氯氰菊酯干擾物的質(zhì)譜圖；圖6為實(shí)施例2五味子基質(zhì)中添加氯菊酯的二維氣相色譜-質(zhì)譜圖；圖7為實(shí)施例3五味子基質(zhì)的檢出農(nóng)藥的二維氣相色譜-質(zhì)譜圖；圖8為實(shí)施例3五味子中檢出氯氰菊酯的實(shí)測質(zhì)譜圖、農(nóng)藥譜庫檢索圖及對比結(jié)果O
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式
對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明實(shí)施例II.儀器與試 劑儀器LecoPega sus 4D GCXGC — TOF — MS 飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(美國 Leco 公司)；配備 Agilent7890 二維氣相色譜儀，Gerstel MPS 2 (Gerstel GmbH, M iilheiman derRuhr, Germany)自動(dòng)進(jìn)樣器，組織勻衆(zhòng)機(jī)(德國IKA公司)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(瑞士 Buchi公司)，高速冷凍離心機(jī)(日本Hitachi CR G Series),離心機(jī)(日本Sigma 2-16PK),過濾接受裝置47mm, 25OmL (賽默飛世爾科技公司)無機(jī)氧化招膜O. 02um, 47mm (Whatman公司)。乙睛，丙酮，HPLC級(jí)，購自迪馬公司，2mL凈化管中包括N-丙基乙二胺(PSA)吸附劑 50mg,無水硫酸續(xù) 150mg,購自 Waters 公司(DisQue Dispersive SPEKit),石墨碳黑(購自美國SEPAX-UCT)，氯化鈉，分析純。103種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品(純度不低于95%，購自Dr. Ehrenstorfer公司),用甲苯或甲苯-丙酮混合液分別配成lmg/mL的單標(biāo),并于-18°C下封存。使用前用乙睛稀釋配置為所需要的標(biāo)準(zhǔn)工作液。2.樣品處理(I)樣品提取稱取磨碎的銀杏葉粉末I. Og于15mL離心管，加入2mL蒸餾水使中藥潤濕,加入IOmL乙腈，劇烈震搖I分鐘,加入Ig氯化鈉固體,再劇烈震搖I分鐘，4000r/min離心5分鐘，取出上清液，離心管中再加IOmL乙腈，重復(fù)提取一次，合并2次提取液；(2)無機(jī)氧化鋁膜分離將氧化鋁無機(jī)膜(膜厚O. 02um,直徑47mm)固定于溶液過濾接收裝置上，加樣前先用8mL乙腈潤濕，真空抽濾，棄去接收器中的乙腈，加入提取液，真空抽濾至膜面近干，再加入IOm乙睛抽濾清洗氧化鋁無機(jī)膜上殘留的農(nóng)藥，接收液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干，加入ImL丙酮于蒸發(fā)瓶中溶解待測樣品。(3)樣品提取溶液的固相分散萃取凈化在2mL離心管中分別加入150mg無水硫酸鎂，50mgPSA, IOOmg石墨碳黑，再加入ImL待測物濃縮液，旋渦震蕩lmin，8000r/min離心5分鐘，取上清液過O. 22um有機(jī)濾膜，濾液轉(zhuǎn)入含O. 5mL濃縮杯的樣品瓶中，待測。(4)基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液分別在進(jìn)樣瓶中加入濃度為lug/mL的103種混合標(biāo)準(zhǔn)溶液O. OlmL, O. 05mL, O. IOmL, O. 25mL，加入空白銀杏葉基質(zhì)提取液至ImL,配成0,0. 01、
0.05,0, 10,0. 25ug/mL系列混合標(biāo)準(zhǔn)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見表I。(與權(quán)利要求書2中的4)要對應(yīng)的上)(5)樣品測定方法標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣品待測液在二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜上分別進(jìn)樣(見圖I)。氣相色譜條件一維柱為TR-pesticides (賽默飛世爾科技公司農(nóng)殘專用柱)，二維柱為Rtx-200，載氣He，流速1.0ml/mL，進(jìn)樣2uL，不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣口溫度250°C，一維色譜柱升溫程序40°C保持lmin，以30°C / min的速度升至130°C，再以10°C / min的速度升至280°C保持10分鐘，整個(gè)運(yùn)行時(shí)間為29分鐘，二維色譜柱起始溫度比一維高15°C，升溫程序同一維。調(diào)制解調(diào)器起始溫度比二維高40°C，調(diào)制周期為4s (熱吹O. 8秒，冷吹
1.2 秒)。質(zhì)譜條件離子源EI電離源，溫度250°C，傳輸線溫度280°C，質(zhì)量掃描范圍50-550amu，采集速率每秒100張圖譜，檢測器電壓1750V，電離電壓_70V。數(shù)據(jù)處理Pegasus,譜庫檢索NIST/PEST He(6)結(jié)果分析軟件Leco ChromaTOF-GC v 4· 32用于數(shù)據(jù)處理，首先得到標(biāo)準(zhǔn)譜圖，建立基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的校正表(該表可包括農(nóng)藥名稱，一維和二維保留時(shí)間、一維和二維保留時(shí)間允許偏差、樣品類型、濃度單位，定量離子及信噪比、相關(guān)系數(shù)、校正方程、標(biāo)準(zhǔn)濃度等信息)，再建立定性定量樣品處理方法(包括NIST/PEST He譜庫，質(zhì)量起始范圍，譜圖相似度，定量離子信噪比、校正表等信息)，樣品譜圖用定性或定量處理方法進(jìn)行譜圖處理，得到定性和定量結(jié)果。在該銀杏葉樣品中檢出莠去津0.01mg/kg、三氟氯氰菊酯
O.06mg/kg、二甲戍樂靈O. 01mg/kg、乙草胺O. 02mg/kg,譜圖見圖2。103種農(nóng)藥的化合物及在二維氣相色譜上的定性定量信息見表I.部分時(shí)間段的二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜圖見圖I-去掉表I 103種農(nóng)藥的化合物名稱及在二維氣相色譜上的定性定量信息

CASquant RKfirstco 線性方程Rz
Registry No ion I，second )
m/z
甲胺轉(zhuǎn)__10265-92-6 94 436, 2. 19 Y=+182331x-4665 0.9819
敵敵畏__62-73-7__109 436,2. 08 Υ=+320782χ-8050 O. 9939
甲拌嶙__298-02-2 75 720, 1. 03 Υ=+157538χ+1286 0.9969
甲基對硫磷 298-00-0 125 844, I. 72 Υ=+204327χ-5474 O. 9994
馬拉硫嶙__121-75-5 125 884, I. 44 Υ=+514481χ-3302 O. 9920
倍硫嶙__55-38-9__278 896,1. 29 Υ=+404730χ-2956 O. 9926
毒死蜱__2921-88-2 97 892, I. 22 Υ=+894303χ-4954 O. 9821
對硫磚__56-38-2__97 900, I. 70 Υ=+562040χ-3553 O. 9951
殺撲磚__950-37-8 145 968, 1. 51 Υ=+309458χ-1255 O. 9849
三唑轉(zhuǎn)__24017-47-8 162 1068, 1. 43 Υ=+106101χ-1234 O. 9849
殺螟硫鱗__122-14-5 125 876, 1. 670 Υ=+468257χ-3639 0. 9923
乙酰甲胺磷 30560-19-1 136 548, 1. 73 Υ=+375821χ-3052 0.9910
氧化樂果__1113-02-6 156 652, I. 93 Υ=+145356χ-1025 O. 9854
二嗪嶙__333-41-5 179 776，I. 09 Υ=+335859χ-1415 0. 9957
久效石粦__6923-22-4 127 704,1.84 Υ=+2456870χ-150339 O. 9921
樂果60-51-5 丨 87 丨 744，I. 62 Υ=+278540χ-2897 丨 0. 9852

權(quán)利要求
1.一種應(yīng)用膜分離和全二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜快速檢測中藥中農(nóng)藥多殘留的方法，其特征在于，包括以下步驟 O中藥樣品中農(nóng)藥殘留的乙腈提?。? 2)氧化鋁無機(jī)膜的超濾分離； 3)樣品提取溶液的固相分散萃取凈化； 4)使用二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜檢測； 5)結(jié)果分析。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的應(yīng)用膜分離和全二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜快速檢測中藥中農(nóng)藥多殘留的方法，其特征在于，包括以下步驟 O中藥樣品中農(nóng)藥殘留的乙腈提取 稱取I 2g中藥粉末樣品，加入2 4mL蒸餾水使中藥潤濕，加入IOmL乙腈，劇烈震搖，得到由中藥基質(zhì)、水、乙腈組成的混合勻漿溶液，在上述勻漿溶液中加入Ig氯化鈉固體，再劇烈震搖，然后進(jìn)行離心操作，靜置分層，取出上清液，離心管中再加IOmL乙腈，重復(fù)提取一次，合并2次提取液； 2)氧化鋁無機(jī)膜的超濾分離 氧化鋁無機(jī)膜膜厚O. 02 O. 2um,固定于溶液過濾接收裝置上，加樣前先用乙腈潤濕，真空抽濾，棄去接收器中的乙腈，加入提取液，真空抽濾至膜面近干，再加入IOmL乙睛抽濾洗膜，接收液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸餾瓶中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干，加入ImL丙酮于蒸餾瓶中溶解待測樣品； 3)樣品提取溶液的固相分散萃取凈化 在2mL離心管中分別加入150 300mg無水硫酸鎂,50 IOOmgN-丙基-乙二胺，100 200mg石墨碳黑，再加入ImL待測物丙酮溶解液，再進(jìn)行震蕩離心取上清液，上清液過O. 22um有機(jī)濾膜，即得到樣品溶液； 4)用二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜檢測 a)標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備分別準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)品農(nóng)藥，用甲苯或甲苯-丙酮混合液溶解并配成lmg/mL的儲(chǔ)備液，使用時(shí)再根據(jù)各農(nóng)藥的響應(yīng)，用乙睛稀釋成標(biāo)準(zhǔn)工作液； b)使用二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜儀檢測標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液由自動(dòng)進(jìn)樣器分別吸取標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣品溶液，注入二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜儀中，樣品溶液中農(nóng)藥組分和部分中藥基質(zhì)經(jīng)一維色譜柱分離后，經(jīng)雙噴口 4通道調(diào)制解調(diào)器加熱冷卻后進(jìn)入二維氣相色譜柱再分離，飛行時(shí)間質(zhì)譜全掃描檢測； 5)結(jié)果分析 軟件Leco ChromaTOF-GC v 4. 32用于數(shù)據(jù)處理，當(dāng)樣品在EI電離源70V電壓的條件下電離時(shí)，其質(zhì)譜圖與NIST/PEST He譜庫相比對，當(dāng)相似度大于設(shè)定值，該物質(zhì)被自動(dòng)識(shí)別完成定性，定量離子是軟件根據(jù)碎片離子的最大豐度自動(dòng)選定；以標(biāo)準(zhǔn)工作液的質(zhì)量濃度X為橫坐標(biāo)，定量離子的峰面積Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對樣品進(jìn)行單離子外標(biāo)法定量；用標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量離子一維和二維保留時(shí)間設(shè)定定量處理方法，當(dāng)樣品中的定量離子的信噪比大于設(shè)定值，一維保留時(shí)間偏差在6 10ms，二維保留時(shí)間偏差在O. I O. 5ms內(nèi)，樣品被設(shè)定的定量處理方法自動(dòng)定量。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用膜分離和全二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜快速檢測中藥中農(nóng)藥多殘留的方法，其特征在于，所述步驟2)氧化鋁無機(jī)膜在使用前要用SmL乙腈潤濕。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用膜分離和全二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜快速檢測中藥中農(nóng)藥多殘留的方法，其特征在于，所述步驟3)在漩渦震蕩器上震搖O. 5 2min，然后在離心機(jī)8000 12000rpm下離心4 6min。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用膜分離和全二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜快速檢測中藥中農(nóng)藥多殘留的方法，其特征在于，所述的步驟4)中標(biāo)準(zhǔn)品農(nóng)藥為敵敵畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、五氯苯、滅線磷、氧化樂果、四氯硝基苯、氟樂靈、久效磷、硫線磷、甲拌磷、A-666、六氯苯、樂果、莠去津、B-666、五氯硝基苯、特丁硫磷、C-666、二嗪磷、地蟲硫磷、嘧霉胺、氟蟲脲、乙拌磷、D-666、百菌清、異稻溫凈、五氯苯胺、乙草胺、敵稗、甲基毒死蜱、甲基對硫磷、甲草胺、七氯、撲草凈、炔螨特代謝物、甲基嘧啶磷、殺螟硫磷、馬拉硫磷、五氯硝基苯代謝物、異丙甲草胺、毒死蜱、禾草丹、倍硫磷、4，4_ 二氯苯酚、對硫磷、艾氏劑、毒蟲畏、嘧菌環(huán)胺、二甲戊樂靈、氟蟲睛、環(huán)氧七氯、喹硫磷、三唑醇I、腐霉利、pp-DDD、三唑醇2、殺撲磷、噻嗪酮、氯丹、苯線磷、pp-DDE、A-硫丹、丙硫磷、稻痕靈、丙溴磷、op-DDE、異狄氏劑、氟娃唑、睛菌唑、環(huán)氟菌胺、狄氏劑、蟲螨睛、蟲螨磷、乙酯殺螨醇、B-硫丹、乙硫磷、PP-DDT、三唑磷、丙環(huán)唑、硫丹硫酸鹽、甲氧滴滴涕、炔螨特、增效醚、戊唑醇、聯(lián)苯菊酯、溴螨酯、亞胺硫磷、甲氰菊酯、伏殺硫磷、三氟氯氰菊酯、保棉磷、氯菊酯、蠅毒磷、氟氯氰菊酯、苯醚菊酯、氯氰菊酯、氟氰戊菊酯、丙炔氟草胺、氰戊菊酯、氟胺氰菊酯、烯酰嗎啉、苯醚甲環(huán)唑、溴氰菊酯共103種。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用膜分離和全二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜快速檢測中藥中農(nóng)藥多殘留的方法，其特征在于，所述的步驟4)中二維氣相色譜條件 一維柱為非極性柱30mX0. 25mmXO. 25um+5mXO. 25mm>5%diphenyl/95%dimethylpolysiloxane ； 二維柱為中極性柱 Rtx_200 2. OmX O. 18mmX O. 20um、trifluoropropylmethylpolysiloxane ； 載氣He，流速I. Oml/mL,進(jìn)樣2uL，不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣口溫度250°C ； 一維色譜柱升溫程序40°C保持lmin，以30°C / min的速度升至130°C，再以10°C /min的速度升至280°C保持10分鐘，整個(gè)運(yùn)行時(shí)間為29分鐘； 二維色譜柱起始溫度比一維高15°C，55°C保持lmin，以30°C / min的速度升至145°C，再以10°C / min的速度升至295°C保持10分鐘； 調(diào)制解調(diào)器溫度比二維溫度高40°C，95°C保持lmin，以30°C / min的速度升至185°C，再以10°C / min的速度升至330°C保持10分鐘，調(diào)制周期為4s，其中熱吹O. 8秒，冷吹I. 2秒； 質(zhì)譜條件質(zhì)量分析器飛行時(shí)間質(zhì)譜分辨率1000 ;質(zhì)量范圍lO-lOOOamu，采集速率每秒100張圖譜以上，離子源EI源。電離電壓70V ;離子源溫度250°C，傳輸線溫度280。。。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用膜分離和全二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜快速檢測中藥中農(nóng)藥多殘留的方法，其特征在于，所述的步驟I)中乙腈提取液劇烈震搖I分鐘。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種應(yīng)用膜分離和全二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜快速檢測中藥中農(nóng)藥多殘留的方法。中藥樣品中的農(nóng)藥殘留用乙腈提取，無機(jī)氧化鋁膜超濾分離，固相分散萃取凈化，全二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜檢測。全二維氣相色譜采用兩支極性不同的色譜柱對中藥基質(zhì)中的基質(zhì)和待測組分的進(jìn)行正交分離，并在調(diào)制解調(diào)器的作用下進(jìn)入飛行時(shí)間質(zhì)譜完成定性定量檢測，外標(biāo)法定量。本發(fā)明方法具有快速、簡便，靈敏度高、分離效果好，節(jié)省試劑、定性定量準(zhǔn)確可靠等特點(diǎn)，解決了復(fù)雜基質(zhì)如中藥中農(nóng)藥殘留的分離及同時(shí)定性和定量的難題。
文檔編號(hào)G01N30/06GK102914608SQ201210453778
公開日2013年2月6日 申請日期2012年11月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月12日
發(fā)明者王云鳳, 高健會(huì), 劉旸 申請人:天津出入境檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)植物與食品檢測中心