一種基于電子誘導(dǎo)裂解質(zhì)譜的人參皂苷同分異構(gòu)單體識(shí)別方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及分析檢測(cè)領(lǐng)域，特別涉及一種基于電子誘導(dǎo)裂解質(zhì)譜的人參皂苷同分異構(gòu)單體識(shí)別方法。
【背景技術(shù)】
[0002]人參皂苷，屬于一種固醇類天然產(chǎn)物，是人參屬藥材中主要的活性成分。研究表明，人參皂苷能夠影響和改變多種腫瘤細(xì)胞的增殖，分化和凋亡，具有多重的生物效能。人參皂苷的成分復(fù)雜，有很多同分異構(gòu)單體存在。不同類型的人參皂苷在生物活性以及功效方面有較大的差別，人參皂苷單體的類型也可以做為區(qū)分不同的人參屬藥材的標(biāo)志性化合物。如Rf存在于人參中，而其同分異構(gòu)體擬人參皂苷Fll存在于西洋參中，其含量差別可以做為區(qū)分人參和西洋參的生物標(biāo)志物。人參皂苷的結(jié)構(gòu)確認(rèn)比較復(fù)雜，到目前為止，據(jù)報(bào)道且能夠確定化學(xué)式的人參皂苷大約有100余種。市場(chǎng)上的各種人參以及其相應(yīng)的衍生產(chǎn)品非常復(fù)雜，開發(fā)人參皂苷的結(jié)構(gòu)分析方法對(duì)于市場(chǎng)上人參類相關(guān)產(chǎn)品的種類鑒定，真假判斷，保障人參產(chǎn)品的安全使用，具有非常重要的意義。
[0003]在人參皂苷結(jié)構(gòu)確認(rèn)的方法中，質(zhì)譜方法起著非常重要的作用。人參皂苷可以通過液相色譜分離后，進(jìn)行質(zhì)譜分析，以便進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)確認(rèn)。對(duì)于不同的人參皂苷，由于其在液相色譜中保留時(shí)間不同，分子量不同，可以通過保留時(shí)間和母離子的質(zhì)荷比進(jìn)行有效的區(qū)分。但是人參皂苷存在諸多的同分異構(gòu)單體，由于其結(jié)構(gòu)相似，在液相色譜中保留時(shí)間也非常接近，難以實(shí)現(xiàn)完全的分離，而同分異構(gòu)體，在離子化后形成的母離子的質(zhì)荷比則完全一樣(如Rf和Fll)，因此不能準(zhǔn)確地判斷人參皂苷單體的類型。利用串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)可以為人參皂苷的結(jié)構(gòu)確認(rèn)提供進(jìn)一步的信息。碰撞裂解是串聯(lián)質(zhì)譜中一種常用的離子活化方法。但是，由于碰撞裂解屬于“慢熱”型離子活化技術(shù)，通常會(huì)首先導(dǎo)致整個(gè)化合物結(jié)構(gòu)中最弱鍵首先會(huì)斷裂，給出的結(jié)構(gòu)信息相對(duì)較少，結(jié)構(gòu)接近的同分異構(gòu)的碰撞裂解質(zhì)譜圖往往非常接近，難以保證人參皂苷異構(gòu)單體的準(zhǔn)確區(qū)分。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的就是為了解決上述問題，提供一種基于電子誘導(dǎo)裂解質(zhì)譜的人參皂苷同分異構(gòu)單體的識(shí)別方法。本發(fā)明利用高分辨離子回旋共振質(zhì)譜儀結(jié)合電子誘導(dǎo)裂解活化技術(shù)，發(fā)明了一種人參皂苷同分異構(gòu)體的特異性碎片離子結(jié)構(gòu)識(shí)別技術(shù)，并應(yīng)用于人參皂苷異構(gòu)單體的區(qū)分。
[0005]基于傅立葉變化離子回旋共振質(zhì)譜儀的電子激發(fā)的裂解技術(shù)，包括電子捕獲裂解，電子轉(zhuǎn)移裂解和電子誘導(dǎo)裂解等技術(shù)對(duì)于整個(gè)母離子體系引入電子。通過不同能量的電子和母離子的相互作用，可以產(chǎn)生多種類型的碎片離子。如電子誘導(dǎo)裂解中，對(duì)于氣相體系引入>10eV的自由電子，電子和母離子作用會(huì)產(chǎn)生電荷誘導(dǎo)型裂解碎片和自由誘導(dǎo)型裂解碎片，并且可以應(yīng)用于單電荷/多電荷體系和正/負(fù)母離子體系。初步的研究結(jié)果表明，對(duì)于人參皂苷異構(gòu)單體而言，電子誘導(dǎo)裂解能夠比碰撞裂解產(chǎn)生更多的結(jié)構(gòu)信息碎片離子。
[0006]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
[0007]傅立葉變換離子回旋共振質(zhì)譜儀在人參皂苷同分異構(gòu)單體識(shí)別中的應(yīng)用。
[0008]優(yōu)選的，所述人參皂苷同分異構(gòu)單體為Rgl和Rf以及Re和Rb2。
[0009]優(yōu)選的，識(shí)別過程中，通過電子誘導(dǎo)裂解產(chǎn)生電荷誘導(dǎo)型裂解碎片和自由誘導(dǎo)型裂解碎片。
[0010]更優(yōu)選的，所述電子誘導(dǎo)裂解的條件為:偏壓為-1OV?-15V，提取極電壓為11?14V；電子福射時(shí)間:正尚子模式下為0.2s，在負(fù)尚子模式下，電子的福射時(shí)間設(shè)置為5s;空白譜圖偏壓設(shè)置為0V。
[0011]本發(fā)明還提供了一種基于傅立葉變換離子回旋共振電子誘導(dǎo)裂解質(zhì)譜的人參皂苷同分異構(gòu)單體識(shí)別方法，包括如下步驟:
[0012]樣品前處理；
[0013]離子化；
[0014]電子誘導(dǎo)裂解，或電子誘導(dǎo)裂解和碰撞裂解；
[0015]將不同人參皂苷單體的電子誘導(dǎo)裂解譜圖進(jìn)行比對(duì);或?qū)⑼蝗藚⒃碥諉误w的電子誘導(dǎo)裂解圖譜與其相應(yīng)的碰撞裂解圖譜進(jìn)行比對(duì)，進(jìn)而識(shí)別和區(qū)分人參皂苷同分異構(gòu)單體。
[0016]優(yōu)選的，所述人參皂苷同分異構(gòu)單體為Rgl和Rf以及Re和Rb2。
[0017]優(yōu)選的，所述離子化過程中，采用電噴霧離子化，流速設(shè)定為30uL/hr，分別采用正負(fù)兩種模式進(jìn)行離子化，毛細(xì)管電壓設(shè)為3kV，傳輸毛細(xì)管的溫度為220°C;
[0018]優(yōu)選的，所述離子化過程中，采用前端四極桿進(jìn)行母離子選擇，質(zhì)量寬度設(shè)為5m/z，離子聚集時(shí)間設(shè)置為1-2s。
[0019]優(yōu)選的，所述電子誘導(dǎo)裂解過程中，偏壓為-1OV?-15V，提取極電壓為11?14V;電子福射時(shí)間:正尚子模式下為0.2s，在負(fù)尚子模式下，電子的福射時(shí)間設(shè)置為5s;空白譜圖偏壓設(shè)置為0V。
[0020]優(yōu)選的，所述電子誘導(dǎo)裂解和碰撞裂解處理過程中:碰撞裂解采用的碰撞能為10-25V;所述電子誘導(dǎo)裂解的條件為:偏壓為-1OV?-15V，提取極電壓為11?14V；電子福射時(shí)間:正尚子模式下為0.2s，在負(fù)尚子模式下，電子的福射時(shí)間設(shè)置為5s ；空白譜圖偏壓設(shè)置為OV0
[0021 ]更優(yōu)選的，具體步驟如下:
[0022]—種基于傅立葉變換離子回旋共振電子誘導(dǎo)裂解質(zhì)譜的人參皂苷同分異構(gòu)單體識(shí)別方法，步驟如下:
[0023](I)樣品前處理:稱取適量的人參皂苷異構(gòu)單體(如Rgl和Rf以及Re和Rb2)，用甲醇(農(nóng)殘基)和水(去離子水，>18.2兆歐)的配置成濃度為0.5uM的溶液。
[0024](2)質(zhì)譜條件:采用傅立葉變化離子回旋共振質(zhì)譜儀。利用電噴霧，流速設(shè)定為30uL/hr的，分別采用正負(fù)兩種模式進(jìn)行離子化，毛細(xì)管電壓設(shè)為3kV，傳輸毛細(xì)管的溫度為220°C。采用前端四極桿進(jìn)行母離子選擇，質(zhì)量寬度設(shè)為5m/z，離子聚集時(shí)間設(shè)置為l-2s。采用寬帶模式進(jìn)行數(shù)據(jù)采集，質(zhì)量范圍設(shè)為50-1000。
[0025](3)電子誘導(dǎo)裂解和碰撞裂解:采用加熱空心陰極產(chǎn)生電子，偏壓設(shè)置為-1OV?-15V之間，提取極電壓設(shè)置為11?14V。電子輻射時(shí)間:正離子模式下設(shè)置為0.2s，為了增加電子與負(fù)離子的相互作用，在負(fù)離子模式下，電子的輻射時(shí)間設(shè)置為5s?？瞻鬃V圖偏壓設(shè)置為0V，保證無自由輻射電子，其余參數(shù)不變。碰撞裂解時(shí)，采用碰撞能設(shè)為10-25V。
[0026](4)譜圖解析:碎片離子確認(rèn)采用精確質(zhì)量數(shù)測(cè)量，母離子質(zhì)荷比內(nèi)標(biāo)法校準(zhǔn)質(zhì)量數(shù)，精確度設(shè)定為5ppm。分別對(duì)于碰撞裂解和電子誘導(dǎo)裂解譜圖中碎片離子的類型和豐度進(jìn)行比較，確定電子誘導(dǎo)裂解的碎片離子的歸屬。
[0027]本發(fā)明還提供了一種基于傅立葉變換離子回旋共振電子誘導(dǎo)裂解質(zhì)譜篩選人參皂苷同分異構(gòu)單體特異性碎片離子的方法，其特征在于，
[0028]樣品前處理；
[0029]離子化；
[°03°]電子誘導(dǎo)裂解和碰撞裂解；
[0031]將同一人參皂苷單體的電子誘導(dǎo)裂解圖譜與其相應(yīng)的碰撞裂解圖譜進(jìn)行比對(duì)，篩選出特異性碎片離子，作為人參皂苷單體的標(biāo)記碎片離子。
[0032]優(yōu)選的，所述人參皂苷同分異構(gòu)單體為Rgl和Rf以及Re和Rb2。
[0033]優(yōu)選的，所述離子化過程中，采用電噴霧離子化，流速設(shè)定為30uL/hr，分別采用正負(fù)兩種模式進(jìn)行離子化，毛細(xì)管電壓設(shè)為3kV，傳輸毛細(xì)管的溫度為220°C;
[0034]優(yōu)選的，所述離子化過程中，采用前端四極桿進(jìn)行母離子選擇，質(zhì)量寬度設(shè)為5m/z，咼子聚集時(shí)間設(shè)置為1-2s。
[0035]優(yōu)選的，所述電子誘導(dǎo)裂解和碰撞裂解處理過程中:碰撞裂解采用的碰撞能為10-25V;所述電子誘導(dǎo)裂解的條件為:偏壓為-1OV?-15V，提取極電壓為11?14V；電子福射時(shí)間:正尚子模式下為0.2s，在負(fù)尚子模式下，電子的福射時(shí)間設(shè)置為5s ；空白譜圖偏壓設(shè)置為OV0
[0036]更優(yōu)選的，具體步驟如下:
[0037](I)樣品前處理:稱取適量的人參皂苷異構(gòu)單體(如Rgl和Rf以及Re和Rb2)，用甲醇(農(nóng)殘基)和水(去離子水，>18.2兆歐)的配置成濃度為0.5uM的溶液。
[0038](2)質(zhì)譜條件:采用傅立葉變化離子回旋共振質(zhì)譜儀。利用電噴霧，流速設(shè)定為30uL/hr的，分別采用正負(fù)兩種模式進(jìn)行離子化，毛細(xì)管電壓設(shè)為3kV，傳輸毛細(xì)管的溫度為220°C。采用前端四極桿進(jìn)行母離子選擇，質(zhì)量寬度設(shè)為5m/z，離子聚集時(shí)間設(shè)置為l-2s。采用寬帶模式進(jìn)行數(shù)據(jù)采集，質(zhì)量范圍設(shè)為50-1000。
[0039](3)電子誘導(dǎo)裂解和碰撞裂解:采用加熱空心陰極產(chǎn)生電子，偏壓設(shè)置為-1OV?-15V之間，提取極電壓設(shè)置為11?14V。電子輻射時(shí)間:正離子模式下設(shè)置為0.2s，為了增加電子與負(fù)離子的相互作用，在負(fù)離子模式下，電子的輻射時(shí)間設(shè)置為5s。空白譜圖偏壓設(shè)置為0V，保證無自由輻射電子，其余參數(shù)不變。碰撞裂解時(shí)，采用碰撞能設(shè)為10-25V。
[0040](4)譜圖解析:碎片離子確認(rèn)采用精確質(zhì)量數(shù)測(cè)量，母離子質(zhì)荷比內(nèi)標(biāo)法校準(zhǔn)質(zhì)量數(shù)，精確度設(shè)定為5ppm。分別對(duì)于碰撞裂解和電子誘導(dǎo)裂解譜圖中碎片離子的類型和豐度進(jìn)行比較，確定電子誘導(dǎo)裂解的碎片離子的歸屬，篩選出特異性碎片離子，做為人參皂苷單體的標(biāo)記碎片離子。
[0041]傅立葉變換離子回旋共振質(zhì)譜儀在篩選人參皂苷同分異構(gòu)單體特異性碎片離子中的應(yīng)用。
[0042]優(yōu)選的，所述人參皂苷同分異構(gòu)單體為Rgl和Rf以及Re和Rb2。
[0043]優(yōu)選的，識(shí)別過程中，通過電子誘導(dǎo)裂解產(chǎn)生電荷誘導(dǎo)型裂解碎片和自由誘導(dǎo)型裂解碎片。
[0044]更優(yōu)選的，所述電子誘導(dǎo)裂解的條件為:偏壓為-1OV?-15V，提取極電壓為11?14V；電子福射時(shí)間:正尚子模式下為0.2s，在負(fù)尚子模式下，電子的福射時(shí)間設(shè)置為5s;空白譜圖偏壓設(shè)置為0V。
[0045]上述方法用于獲得不同的人參皂苷異構(gòu)體的電子誘導(dǎo)裂解和碰撞裂解質(zhì)譜圖。
[0046]所述方法在人參皂苷單體同分異構(gòu)體中的應(yīng)用。
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