一種舒肝解郁膠囊的質(zhì)量控制方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種舒肝解郁膠囊質(zhì)量的控制方法，通過(guò)高效液相色譜法測(cè)定舒肝解郁膠囊指紋圖譜從而有效監(jiān)控該藥物質(zhì)量。該方法包括：首先建立舒肝解郁膠囊對(duì)照指紋譜圖，再測(cè)定舒肝解郁膠囊待測(cè)產(chǎn)品指紋譜圖，最后將所述舒肝解郁膠囊待測(cè)產(chǎn)品指紋圖譜與所述舒肝解郁膠囊對(duì)照指紋圖譜進(jìn)行比較，識(shí)別其相同吸收峰數(shù)量，確定產(chǎn)品質(zhì)量是否合格。該方法通過(guò)比對(duì)指紋圖譜中主要化學(xué)成分的信息，從該藥物的物質(zhì)群整體，從宏觀的角度給予藥物質(zhì)量控制，更加合理地反映舒肝解郁膠囊藥品質(zhì)量。
【專利說(shuō)明】一種舒肝解郁膠囊的質(zhì)量控制方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種舒肝解郁膠囊的質(zhì)量控制方法。
【背景技術(shù)】
[0002]抑郁癥是一種常見(jiàn)的精神疾病，主要表現(xiàn)為情緒低落、興趣減低、悲觀、思維遲緩、自責(zé)自罪、飲食睡眠差、擔(dān)心或感到全身多處不適、嚴(yán)重者可出現(xiàn)自殺念頭和行為。隨著現(xiàn)代社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人們生活、工作壓力的增大，抑郁癥發(fā)病率逐年增長(zhǎng)。目前，抑郁癥已迅速成為全球疾病中給人類造成嚴(yán)重負(fù)擔(dān)的第二位重要疾病，對(duì)患者及其家屬造成的痛苦和對(duì)社會(huì)造成的損失是其他疾病所無(wú)法比擬的。因此，社會(huì)對(duì)抑郁癥治療的藥物需求是巨大的。相對(duì)于西醫(yī)使用特定作用靶點(diǎn)藥物治療來(lái)講，中醫(yī)使用活性物質(zhì)群，能夠作用于多靶點(diǎn)，呈現(xiàn)多效性，而調(diào)整是其主要作用機(jī)制，顯示出傳統(tǒng)醫(yī)藥的獨(dú)特性。
[0003]舒肝解郁膠囊是國(guó)內(nèi)首個(gè)SFDA批準(zhǔn)的用于治療抑郁的中成藥。主要的功效為健脾安神，適用于輕、中度單相抑郁癥屬肝郁脾虛證者，癥見(jiàn)情緒低落、興趣下降、遲滯、入睡困難、早醒、多夢(mèng)、緊張不安、急躁易怒、食少納呆、胸悶、疲乏無(wú)力、多汗、疼痛、舌苔白或膩，脈弦或細(xì)。該藥是在吸取中醫(yī)有關(guān)治療抑郁的經(jīng)驗(yàn)基礎(chǔ)上，借鑒國(guó)內(nèi)外現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療抑郁的最新研究成果配方而得。舒肝解郁膠囊的作用機(jī)制是通過(guò)其有效成分透過(guò)血腦屏障對(duì)海馬神經(jīng)元的萎縮以及中樞局部組織的生化失調(diào)產(chǎn)生重要的保護(hù)作用。有臨床報(bào)道舒肝解郁膠囊對(duì)輕中度抑郁有效率為68.10%，遠(yuǎn)較安慰劑的29.0%高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，臨床總體療效評(píng)估也證實(shí)了舒肝解郁膠囊抗抑郁療效明顯優(yōu)于安慰劑，并且其安全性及耐受性良好[舒肝解郁膠囊治療輕中度抑郁癥的隨機(jī)雙盲安慰劑對(duì)照研究，孫新宇等，臨床研究，2009，18(5)]。另有臨床實(shí)驗(yàn)證實(shí)舒肝解郁療效與氟西汀相當(dāng)，且起效快，治療一周就表現(xiàn)出顯著療效，其不良反應(yīng)發(fā)生率(20.0%)較氟西汀組(43.3%)少，且癥狀輕，歷時(shí)短，依存性更好[舒肝解郁膠囊與氟西汀治療抑郁癥的對(duì)照研究，承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，趙敬平，2011]。因此，舒肝解郁膠囊是一種療效和安全性俱佳的純中藥制劑。
[0004]舒肝解郁膠囊由貫葉金絲桃、刺五加兩味中藥組成。貫葉金絲桃已經(jīng)有2400年的使用歷史，1876年美國(guó)處方集記載金絲桃對(duì)于由情緒低落引起的神經(jīng)系統(tǒng)不平衡的有治療作用。2010版《中國(guó)藥典》記載其有“疏肝解郁，清熱利濕，消腫通乳”的功效。貫葉金絲桃醇提取的主要成分為6類:萘并二蒽酮類(naphtho1-anthrones)、間苯三酚類(phloroglucinols)、黃酮類(flavonoids)、雙黃酮類(bifIavones)、苯丙烯酸類(phenylpropanes)、原花青素(proanthocyanidins)。另外,還有少量的單寧酸、氧雜蒽酮、揮發(fā)油和氨基酸等。刺五加始見(jiàn)于《神農(nóng)本草經(jīng)》，2010版《中國(guó)藥典》記載其有“益氣健脾，補(bǔ)腎安神”的功效。文獻(xiàn)報(bào)道其主要的化學(xué)成分有刺五加皂苷、黃酮類、多糖類、三萜皂苷類、木脂素和咖啡酰奎寧酸類等。由于舒肝解郁膠囊使用的藥材貫葉金絲桃和刺五加均具有復(fù)雜的化學(xué)成分，因此如何對(duì)其具體活性成分進(jìn)行有效檢測(cè)，從而控制舒肝解郁膠囊的質(zhì)量，獲得安全有效的藥物，成為了目前亟待解決的問(wèn)題。
[0005]隨著中藥現(xiàn)代化、國(guó)際化的不斷發(fā)展，現(xiàn)代分析技術(shù)如紅外光譜(IR)、紫外光譜(UV)、氣相色譜(Ge)、高效液相色譜(HPLC)、薄層色譜、X光衍射法、毛細(xì)管電泳、分子生物技術(shù)以及其他分析方法不斷在中藥鑒定中藥質(zhì)控等方面的應(yīng)用，建立了一種對(duì)中藥和中藥復(fù)方產(chǎn)品從原料到成品進(jìn)行質(zhì)量控制以及對(duì)其復(fù)雜成分檢出的方法即指紋圖譜。目前，美國(guó)FDA，英國(guó)和印度草藥典，德國(guó)藥用植物學(xué)會(huì)，加拿大藥用植物學(xué)會(huì)均接受色譜指紋圖譜的質(zhì)控方法。由于中藥復(fù)方指紋圖譜整張圖譜是由不同峰群組成，每一峰群都代表一組生物信息，且各種生物信息之間的相互協(xié)同及拮抗作用，正好體現(xiàn)了中藥復(fù)方的配伍和組方理論。此外，這些峰群或峰群之間通過(guò)對(duì)機(jī)體主病及主證的治療，體現(xiàn)了控制某張中藥復(fù)方指紋圖譜，就可確保其相應(yīng)藥效。[0006]因此，通過(guò)指紋圖譜信息來(lái)控制舒肝解郁膠囊質(zhì)量，是從該藥物的物質(zhì)群整體，從宏觀的角度給予質(zhì)量控制，能更加合理、真實(shí)地反映舒肝解郁膠囊藥品質(zhì)量。目前對(duì)于舒肝解郁膠囊指紋圖譜的建立以及其標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜尚未見(jiàn)報(bào)道。由于舒肝解郁膠囊所用藥材刺五加和貫葉連翹中的藥物活性成分都比較多，因此這兩種藥物同時(shí)檢測(cè)(即檢測(cè)舒肝解郁膠囊)時(shí)得到的指紋圖譜必須清晰表現(xiàn)出刺五加和貫葉連翹中各自的有效活性成分，避免不同成分的峰出現(xiàn)重疊，這就給其指紋圖譜的建立帶來(lái)了不小的困難?，F(xiàn)有技術(shù)中有大量報(bào)道刺五加或貫葉連翹指紋圖譜的檢測(cè)方法，然而我們通過(guò)實(shí)驗(yàn)得知現(xiàn)有技術(shù)關(guān)于刺五加或貫葉連翹的HPLC指紋圖譜檢測(cè)條件并不能用于舒肝解郁膠囊指紋圖譜的測(cè)定，其存在不能有效分離刺五加和貫葉連翹中各自的有效活性成分，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，效率低，操作復(fù)雜等缺點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明提供一種舒肝解郁膠囊的質(zhì)量控制方法，包括以下步驟:
[0008](a)舒肝解郁膠囊對(duì)照指紋譜圖的建立
[0009]舒肝解郁膠囊對(duì)照樣品溶液制備:取舒肝解郁膠囊對(duì)照品內(nèi)容物，置于量瓶中，加入甲醇與水的混合溶液超聲溶解，定容，濾過(guò)，即為對(duì)照樣品溶液；
[0010]舒肝解郁膠囊對(duì)照樣品指紋圖譜的測(cè)定:吸取上述對(duì)照品溶液注入液相色譜儀，按照高效液相色譜法測(cè)定，得到舒肝解郁膠囊對(duì)照指紋圖譜；色譜條件:色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動(dòng)相A為甲酸水溶液，流動(dòng)相B為乙腈，檢測(cè)波長(zhǎng)240_300nm ；
[0011](b)舒肝解郁膠囊待測(cè)產(chǎn)品指紋譜圖的測(cè)定
[0012]取舒肝解郁膠囊待測(cè)產(chǎn)品內(nèi)容物，按照(a)中所述步驟及條件測(cè)定該待測(cè)產(chǎn)品的指紋圖譜；
[0013](C)將所述舒肝解郁膠囊待測(cè)產(chǎn)品指紋圖譜與所述舒肝解郁膠囊對(duì)照指紋圖譜進(jìn)行比較，識(shí)別其相同吸收峰數(shù)量，確定產(chǎn)品質(zhì)量是否合格。
[0014]其中(a)步驟中優(yōu)選所述甲醇與水的混合溶液為20%~75%的甲醇溶液，檢測(cè)波長(zhǎng)為240-300nm，柱溫為25-35°C，進(jìn)樣體積為1-1Oul ;更優(yōu)選所述甲醇與水的混合溶液為50%甲醇溶液，檢測(cè)波長(zhǎng)為265nm，柱溫為30°C，進(jìn)樣體積為5ul。
[0015]其中所述舒肝解郁膠囊的質(zhì)量控制方法中(a)步驟中舒肝解郁膠囊對(duì)照樣品溶液制備方法優(yōu)選為:取舒肝解郁膠囊對(duì)照品內(nèi)容物0.25g，置于25ml量瓶中，加入50%CH30H溶液，超聲30min，溶解，加50%CH30H定容至刻度，濾過(guò)，即得對(duì)照樣品溶液。[0016]所述舒肝解郁膠囊的質(zhì)量控制方法(a)步驟中所述色譜條件進(jìn)一步優(yōu)選為:色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動(dòng)相A為0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為乙腈；
[0017]所述梯度洗脫程序優(yōu)選為:
[0018]0-3min時(shí)，流動(dòng)相A為95%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為5%的乙腈；
[0019]IOmin時(shí)，流動(dòng)相A為90%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為10%的乙腈；
[0020]20min時(shí)，流動(dòng)相A為80%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為20%的乙腈；
[0021 ]30min時(shí)，流動(dòng)相A為65%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為35%的乙腈；
[0022]40min時(shí)，流動(dòng)相A為45%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為55%的乙腈；
[0023]45min時(shí)，流動(dòng)相A為0%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為100%的乙腈；
[0024]50min時(shí)，流動(dòng)相A為0%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為100%的乙腈；
[0025]51-60min時(shí)，流動(dòng)相A為95%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為5%的乙腈；
[0026]本發(fā)明采用高效液相色譜法測(cè)定獲得的舒肝解郁膠囊對(duì)照品指紋圖譜中含有7個(gè)單峰面積占總峰面積百分比超過(guò)4%的吸收峰，分別是:
[0027]2號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為17.40min, RSD為0.09%,平均峰面積535.48，RSD%為25.40% ；
[0028]3號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為17.81min, RSD為0.09%,平均峰面積543.92，RSD%為33.10% ；
[0029]6號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為25.02min, RSD為0.06%,平均峰面積2136.24，RSD%為13.35% ；
[0030]7號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為25.70min, RSD為0.05%,平均峰面積1934.51，RSD%為25.88% ；
[0031]8號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為25.97min，RSD為0.05%，平均峰面積2221.12，RSD%S13.79% ；
[0032]9號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為27.60min, RSD為0.05%,平均峰面積804.87，RSD%為
12.59% ；
[0033]11號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為33.70min, RSD為0.04%，平均峰面積1757.78，RSD%為 27.66% ；
[0034]本發(fā)明采用高效液相色譜法測(cè)定獲得的舒肝解郁膠囊對(duì)照品指紋圖譜中含有11個(gè)單峰面積占總峰面積的百分比超過(guò)1.5%的吸收峰，分別是:
[0035]I號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為13.85min, RSD為0.14%,平均峰面積272.90，RSD%為31.95% ；
[0036]2號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為17.40min, RSD為0.09%,平均峰面積535.48，RSD%為25.40% ；
[0037]3號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為17.81min, RSD為0.09%,平均峰面積543.92，RSD%為33.10% ；
[0038]4號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為18.31min, RSD為0.09%,平均峰面積279.93，RSD%為35.21% ；
[0039]6號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為25.02min, RSD為0.06%,平均峰面積2136.24，RSD%為13.35% ；
[0040]7號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為25.70min, RSD為0.05%,平均峰面積1934.51，RSD%為25.88% ；
[0041]8號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為25.97min，RSD為0.05%，平均峰面積2221.12，RSD%S
13.79% ；
[0042]9號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為27.60min, RSD為0.05%,平均峰面積804.87，RSD%為
12.59% ；
[0043]10號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為27.94min, RSD為0.05%,平均峰面積416.84，RSD%為19.74% ；
[0044]11號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為33.70min, RSD為0.04%，平均峰面積1757.78，RSD%為 27.66% ；
[0045]12號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為37.51min, RSD為0.04%,平均峰面積307.31，RSD%為16.64% ；
[0046]本發(fā)明采用高效液相色譜法測(cè)定獲得的舒肝解郁膠囊對(duì)照品指紋圖譜中還含有I個(gè)單峰面積未超過(guò)總峰面積1.0%的吸收峰，是:
[0047]5號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為21.56min, RSD為0.08%,平均峰面積95.12，RSD%為57.86% ；
[0048]本發(fā)明采用如下方法控制舒肝解郁膠囊的質(zhì)量:取待測(cè)舒肝解郁膠囊，采用與舒肝解郁膠囊對(duì)照品的制備方法、色譜條件、測(cè)定方法完全相同的方法進(jìn)行測(cè)定，獲取指紋圖譜，將待測(cè)品指紋圖譜和對(duì)照品指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有7個(gè)或7個(gè)以上相同的吸收峰時(shí)，認(rèn)為舒肝解郁膠囊待測(cè)品質(zhì)量合格。
[0049]優(yōu)選，將待測(cè)品指紋圖譜和對(duì)照品指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有11個(gè)或11個(gè)以上相同的吸收峰時(shí)，認(rèn)為舒肝解郁膠囊待測(cè)品質(zhì)量合格。
[0050]更優(yōu)選，將待測(cè)品指紋圖譜和對(duì)照品指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有12個(gè)或12個(gè)以上相同的吸收峰時(shí)，認(rèn)為舒肝解郁膠囊待測(cè)品質(zhì)量合格。
[0051]同時(shí)本申請(qǐng)發(fā)明人考察獲知，當(dāng)采用甲酸水-乙腈體系作為流動(dòng)相時(shí)更適合于高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)舒肝解郁膠囊，舒肝解郁膠囊中刺五加和貫葉連翹的主要活性物質(zhì)能達(dá)到較理想的分離，沒(méi)有重疊，且峰形優(yōu)異。
[0052]本申請(qǐng)發(fā)明人通過(guò)二極管陣列檢測(cè)器(DAD檢測(cè)器檢測(cè))檢測(cè)舒肝解郁吸收波長(zhǎng)，發(fā)現(xiàn)舒肝解郁中的各個(gè)成分在200-400nm范圍內(nèi)有吸收，其在240_300nm處均有吸收，均適合作為檢測(cè)波長(zhǎng)條件，其中當(dāng)檢測(cè)波長(zhǎng)為265nm時(shí)樣品中的各個(gè)成分均有吸收且主要化合物具有較強(qiáng)吸收。
[0053]本申請(qǐng)發(fā)明人還考察了不同提取液對(duì)待測(cè)品的提取效果對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，包括水、乙醇水溶液以及甲醇水溶液。結(jié)果顯示乙醇水溶液提取的效果不如水和甲醇水溶液:例如75%CH30H提取樣品的各峰峰高和峰面積均明顯大于75%CH3CH20H提取的樣品。當(dāng)使用水或含有甲醇的水溶液(含量包括75%CH30H、50%CH30H、25%CH30H)時(shí)，樣品的檢測(cè)結(jié)果均可以，其中當(dāng)使用50%CH30H時(shí)，其檢測(cè)效果最好。
[0054]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其具有以下優(yōu)勢(shì):
[0055]1、本發(fā)明提供了一種通過(guò)指紋圖譜對(duì)舒肝解郁膠囊質(zhì)量進(jìn)行有效評(píng)價(jià)的方法，避免了只測(cè)定其中一、二個(gè)化學(xué)成分就對(duì)舒肝解郁膠囊整體質(zhì)量判斷的局限性，更好的使舒肝解郁膠囊的質(zhì)量控制更加客觀和準(zhǔn)確；
[0056]2、本發(fā)明所提供的指紋圖譜檢測(cè)方法其刺五加主要有效成分在22分鐘之前出峰，貫葉連翹主要成分在24分鐘后出峰，兩種藥材各自有效成分的峰分離性好；
[0057]3、本發(fā)明所提供的指紋圖譜檢測(cè)方法所需檢測(cè)時(shí)間合理，主要活性成分的峰在40分鐘內(nèi)出峰，并且峰強(qiáng)度都較大，因此使得檢測(cè)效率高效；
[0058]4、本發(fā)明所提供的指紋圖譜檢測(cè)方法其重復(fù)性和穩(wěn)定性好；
[0059]5、本發(fā)明所提供的指紋圖譜檢測(cè)方法避免了在流動(dòng)相中使用磷酸，使其能夠在經(jīng)高效液相色譜檢測(cè)后直接與質(zhì)譜儀聯(lián)用，有效確定相關(guān)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)，更好的監(jiān)控相關(guān)藥物的質(zhì)量。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】:
[0060]圖1有效成分對(duì)照品HPLC色譜圖
[0061]其中:峰I為紫丁香苷，峰2為綠原酸，峰3為蘆丁，峰4為金絲桃苷，峰5為異嗪吡啶，峰6為槲皮苷，峰7為槲皮素。
[0062]圖2空白基線HPLC色譜圖
[0063]圖3舒肝解郁膠囊對(duì)照品HPLC指紋圖譜
[0064]圖4貫葉金絲桃提取物HPLC指紋圖譜
[0065]圖5刺五加提取物HPLC指紋圖譜
[0066]圖6不同批次舒肝解郁膠囊HPLC指紋圖譜(10個(gè)批次)
[0067]圖7實(shí)施例三HPLC色譜圖
【具體實(shí)施方式】
[0068]實(shí)施例一貫葉金絲桃指紋圖譜的測(cè)定
[0069]1、試劑:乙臆(HPLC, Sigma aldrich Company Inc.USA) > 甲酸為分析純(Sigma aldrich Company Inc.USA)、純凈水經(jīng) Mill1-Q 純水系統(tǒng)自制(MilliporeBedford, MA, USA)。
[0070]2、儀器:Agilent Infinity 1290 (CA, USA)與 Finnigan LTQ 1n Trap MassSpectrometer (San Jose, CA, USA)聯(lián)用，軟件分別為 Agilent Chemstation 和 Xcalibur。
[0071]3、貫葉金絲桃提取物樣品制備:取貫葉金絲桃提取物(按照實(shí)施例五制備)稱量
0.22g，置于25ml量瓶中，加入50%CH30H溶液，超聲30min，溶解，加50%CH30H定容至刻度，濾過(guò)，即得貫葉金絲桃提取物樣品溶液；
[0072]4、色譜條件:色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動(dòng)相A為甲酸水溶液，流動(dòng)相B為乙腈，梯度洗脫程序?yàn)?
[0073]0-3min時(shí)，流動(dòng)相A為95%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為5%的乙腈；
[0074]IOmin時(shí)，流動(dòng)相A為90%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為10%的乙腈；
[0075]20min時(shí)，流動(dòng)相A為80%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為20%的乙腈；
[0076]30min時(shí)，流動(dòng)相A為65%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為35%的乙腈；
[0077]40min時(shí)，流動(dòng)相A為45%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為55%的乙腈；[0078]45min時(shí)，流動(dòng)相A為0%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為100%的乙腈；
[0079]50min時(shí)，流動(dòng)相A為0%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為100%的乙腈；
[0080]51-60min時(shí)，流動(dòng)相A為95%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為5%的乙腈；
[0081]檢測(cè)波長(zhǎng)265nm,流速為0.5ml/min,柱溫為30°C,進(jìn)樣體積為5ul ；
[0082]5、測(cè)定:吸取上述貫葉金絲桃提取物樣品溶液注入液相色譜儀，按照高效液相色譜法測(cè)定，得到貫葉金絲桃提取物指紋圖譜(見(jiàn)附圖4)，其中主要化學(xué)成分吸收峰有7個(gè)，分別是:
[0083]I號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為25.02，RSD為0.06%,占總峰面積百分比為20.15% ；
[0084]2號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為25.71，RSD為0.05%,占總峰面積百分比為18.63% ；
[0085]3號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為25.97，RSD為0.06%,占總峰面積百分比為19.95% ；
[0086]4號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為27.61，RSD為0.04%,占總峰面積百分比為7.31% ；
[0087]5號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為27.95，RSD為0.09%,占總峰面積百分比為3.25% ；
[0088]6號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為33.72，RSD為0.05%,占總峰面積百分比為13.85% ；
[0089]7號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為37.55，RSD為0.03%,占總峰面積百分比為2.59% ；
[0090]實(shí)施例二刺五加指紋圖譜的測(cè)定
[0091]1、本實(shí)驗(yàn)中試劑和儀器同實(shí)施例一
[0092]2、刺五加提取物樣品制備:取刺五加提取物(按照實(shí)施例六制備)稱量0.20g，置于25ml量瓶中，加入50%CH30H溶液，超聲30min，溶解，加50%CH30H定容至刻度，濾過(guò)，即得刺五加提取物樣品溶液；
[0093]3、色譜條件:色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動(dòng)相A為甲酸水溶液，流動(dòng)相B為乙腈，梯度洗脫程序?yàn)?
[0094]0-3min時(shí)，流動(dòng)相A為95%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為5%的乙腈；
[0095]IOmin時(shí)，流動(dòng)相A為90%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為10%的乙腈；
[0096]20min時(shí)，流動(dòng)相A為80%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為20%的乙腈；
[0097]30min時(shí)，流動(dòng)相A為65%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為35%的乙腈；
[0098]40min時(shí)，流動(dòng)相A為45%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為55%的乙腈；
[0099]45min時(shí)，流動(dòng)相A為0%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為100%的乙腈；
[0100]50min時(shí)，流動(dòng)相A為0%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為100%的乙腈；
[0101]51-60min時(shí)，流動(dòng)相A為95%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為5%的乙腈；
[0102]檢測(cè)波長(zhǎng)265nm,流速為0.5ml/min,柱溫為30°C,進(jìn)樣體積為5ul ；
[0103]4、測(cè)定:吸取上述刺五加提取物樣品溶液注入液相色譜儀，按照高效液相色譜法測(cè)定，得到刺五加提取物指紋圖譜(見(jiàn)附圖5)，其中主要化學(xué)成分吸收峰有5個(gè)，分別是:
[0104]I號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為13.83，RSD為0.04%,占總峰面積百分比為12.37% ；
[0105]2號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為17.41，RSD為0.06%,占總峰面積百分比為18.56% ；
[0106]3號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為17.80，RSD為0.09%,占總峰面積百分比為13.99% ；
[0107]4號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為18.31，RSD為0.09%,占總峰面積百分比為12.62% ；
[0108]5號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為21.56，RSD為0.04%,占總峰面積百分比為5.89%。
[0109]實(shí)施例三舒肝解郁膠囊質(zhì)量控制檢測(cè)
[0110]1、樣品:舒肝解郁膠囊對(duì)照品，由成都康弘藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司提供，批號(hào):110902。
[0111]2、試劑:乙腈(HPLC, Sigma aldrich Company Inc.USA) > 甲酸為分析純(Sigma aldrich Company Inc.USA)、純凈水經(jīng) Mill1-Q 純水系統(tǒng)自制(MilliporeBedford, MA, USA)、醋酸銨(廣東光華化學(xué)廠有限公司，中國(guó))。
[0112]3、儀器:Agilent Infinity 1290 (CA, USA)與 Finnigan LTQ 1n Trap MassSpectrometer (San Jose, CA, USA)聯(lián)用，軟件分別為 Agilent Chemstation 和 Xcalibur。
[0113]4、舒肝解郁膠囊對(duì)照品溶液制備:取對(duì)照品膠囊內(nèi)容物0.25g于25ml量瓶中，加入50%CH30H約20ml，超聲30min，加50%CH30H至刻度，搖勻，取適量溶液過(guò)0.45um濾膜，取
續(xù)濾液，即得。
[0114]5、色譜條件:色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料(Eclipse Plus C18，5um，250*4.6mm，Agilent);流動(dòng)相以 0.5% 甲酸和 20mM 醋酸銨水溶液(0.5%HC00H，20mMNH4Ac)為流動(dòng)相A，為乙腈流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫，梯度條件為:
[0115]0-3min時(shí),95%的流動(dòng)相A, 5%的流動(dòng)相B
[0116]20min時(shí)，85%的流動(dòng)相A，15%的流動(dòng)相B
[0117]40min時(shí),80 %的流動(dòng)相A, 20%的流動(dòng)相B
[0118]55min時(shí)，55%的流動(dòng)相A，45%的流動(dòng)相B
[0119]65min時(shí),30%的流動(dòng)相A, 70%的流動(dòng)相B
[0120]75min時(shí),0%的流動(dòng)相A, 100%的流動(dòng)相B[0121 ] 85min時(shí),0%的流動(dòng)相A, 100%的流動(dòng)相B
[0122]86-94min時(shí),95%的流動(dòng)相A, 5%的流動(dòng)相B
[0123]流速為1.0ml/min，柱溫:30°C，UV檢測(cè)波長(zhǎng)為265nm，進(jìn)樣體積:5ul。
[0124]6、結(jié)果:上述條件檢測(cè)方法需要較長(zhǎng)的梯度時(shí)間才能檢測(cè)出所有有效成分，總時(shí)間長(zhǎng)達(dá)94min。檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖7。
[0125]該方法同本發(fā)明實(shí)驗(yàn)方法對(duì)比見(jiàn)表1:
[0126]表1對(duì)比例同本發(fā)明檢測(cè)方法對(duì)比
【權(quán)利要求】
1.一種舒肝解郁膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征在于包括以下步驟: Ca)舒肝解郁膠囊對(duì)照指紋譜圖的建立 舒肝解郁膠囊對(duì)照樣品溶液制備:取舒肝解郁膠囊對(duì)照品內(nèi)容物，置于量瓶中，加入甲醇與水的混合溶液超聲溶解，定容，濾過(guò)，即為對(duì)照樣品溶液； 舒肝解郁膠囊對(duì)照樣品指紋圖譜的測(cè)定:吸取上述對(duì)照品溶液注入液相色譜儀，按照高效液相色譜法測(cè)定，得到舒肝解郁膠囊對(duì)照指紋圖譜；色譜條件:色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動(dòng)相A為甲酸水溶液，流動(dòng)相B為乙腈，檢測(cè)波長(zhǎng)240_300nm ； (b>舒肝解郁膠囊待測(cè)產(chǎn)品指紋譜圖的測(cè)定 取舒肝解郁膠囊待測(cè)產(chǎn)品內(nèi)容物，按照(a)中所述步驟及條件測(cè)定該待測(cè)產(chǎn)品的指紋圖譜； (c)將所述舒肝解郁膠囊待測(cè)產(chǎn)品指紋圖譜與所述舒肝解郁膠囊對(duì)照指紋圖譜進(jìn)行比較，識(shí)別其相同吸收峰數(shù)量，確定產(chǎn)品質(zhì)量是否合格。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的舒肝解郁膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征在于:(a)步驟中所述甲醇與水的混合溶液為20%~75%的甲醇溶液，檢測(cè)波長(zhǎng)為240-300nm，流速為0.5ml/min,柱溫為25-35°C，進(jìn)樣體積為1-1Oul ;優(yōu)選甲醇與水的混合溶液為50%甲醇溶液，檢測(cè)波長(zhǎng)為265nm，柱溫為30°C，進(jìn)樣體積為5ul。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的舒肝解郁膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征在于:(a)步驟中所述舒肝解郁膠囊對(duì)照樣品溶液制備方法為，取舒肝解郁膠囊對(duì)照品內(nèi)容物0.25g，置于25ml量瓶中，加入50%CH30H溶液，超聲30min，溶解，加50%CH30H定容至刻度，濾過(guò)，即得對(duì)照樣品溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的舒肝解郁膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征在于:(a)步驟中所述流動(dòng)相A為0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為乙腈。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的舒肝解郁膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述梯度洗脫程序如下: 0-3min時(shí)，流動(dòng)相A為95%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為5%的乙腈； IOmin時(shí)，流動(dòng)相A為90%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為10%的乙腈； 20min時(shí)，流動(dòng)相A為80%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為20%的乙腈； 30min時(shí)，流動(dòng)相A為65%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為35%的乙腈； 40min時(shí)，流動(dòng)相A為45%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為55%的乙腈； 45min時(shí)，流動(dòng)相A為0%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為100%的乙腈； 50min時(shí)，流動(dòng)相A為0%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為100%的乙腈； 51-60min時(shí)，流動(dòng)相A為95%的0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為5%的乙腈。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)所述的舒肝解郁膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述舒肝解郁膠囊對(duì)照品指紋圖譜中含有7個(gè)單峰面積占總峰面積百分比超過(guò)4%的吸收峰，分別是: 2號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為17.40min, RSD為0.09%,平均峰面積535.48，RSD%為25.40% ； 3號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為1 7.81min, RSD為0.09%,平均峰面積543.92，RSD%為.33.10% ； 6號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為25.02min, RSD為0.06%,平均峰面積2136.24，RSD%為13.35% ； 7號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為25.70min, RSD為0.05%,平均峰面積1934.51，RSD%為25.88% ； 8號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為25.97min, RSD為0.05%,平均峰面積2221.12，RSD%為13.79% ； 9號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為27.60min, RSD為0.05%,平均峰面積804.87，RSD%為12.59% ； 11號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為33.70min, RSD為0.04%,平均峰面積1757.78，RSD%為27.66%。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)所述的舒肝解郁膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述舒肝解郁膠囊對(duì)照品指紋圖譜中含有11個(gè)單峰面積總峰面積的百分比超過(guò)1.5%的吸收峰，分別是: 1號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為13.85min, RSD為0.14%,平均峰面積272.90，RSD%為31.95% ； 2號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為17.40min, RSD為0.09%,平均峰面積535.48，RSD%為25.40% ； 3號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為17.81min, RSD為0.09%,平均峰面積543.92，RSD%為33.10% ； 4號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為18.31min, RSD為0.09%,平均峰面積279.93，RSD%為35.21% ； 6號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為25.02min, RSD為0.06%,平均峰面積2136.24，RSD%為13.35% ； 7號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為25.70min, RSD為0.05%,平均峰面積1934.51，RSD%為25.88% ； 8號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為25.97min, RSD為0.05%,平均峰面積2221.12，RSD%為13.79% ； 9號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為27.60min, RSD為0.05%,平均峰面積804.87，RSD%為12.59% ； 10號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為27.94min, RSD為0.05%,平均峰面積416.84，RSD%為19.74% ； 11號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為33.70min, RSD為0.04%,平均峰面積1757.78，RSD%為27.66% ； 12號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為37.5Imin，RSD為0.04%,平均峰面積307.31，RSD%為16.64%。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的舒肝解郁膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述舒肝解郁膠囊對(duì)照品指紋圖譜中還含有I個(gè)單峰面積未超過(guò)總峰面積1.0%的吸收峰，具體是: 5號(hào)峰，平均保留時(shí)間RT為21.56min，RSD為0.08%，平均峰面積95.12，RSD%*57.86%。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)所述的舒肝解郁膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述舒肝解郁膠囊待測(cè)產(chǎn)品指紋圖譜與所述舒肝解郁膠囊對(duì)照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有7個(gè)或7個(gè)以上相同的吸收峰時(shí)，認(rèn)為舒肝解郁膠囊待測(cè)品質(zhì)量合格。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-5所述的舒肝解郁膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述舒肝解郁膠囊待測(cè)產(chǎn)品指紋圖譜與所述舒肝解郁膠囊對(duì)照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有11個(gè)或11個(gè)以上相同的吸收峰時(shí)，認(rèn)為舒肝解郁膠囊待測(cè)品質(zhì)量合格；優(yōu)選二者指紋圖譜有12個(gè)或12個(gè)以上相 同的吸收峰。
【文檔編號(hào)】G01N30/86GK103529136SQ201210352424
【公開(kāi)日】2014年1月22日 申請(qǐng)日期:2012年9月21日 優(yōu)先權(quán)日:2012年7月4日
【發(fā)明者】柯瀟, 鄔智剛, 朱文漓 申請(qǐng)人:成都康弘藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司