一種改進(jìn)測(cè)定托吡酯有關(guān)物質(zhì)的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種改進(jìn)測(cè)定托吡酯有關(guān)物質(zhì)的方法，它是對(duì)托吡酯中有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行歸屬研究，并且測(cè)定主成分檢測(cè)濃度與峰面積的線(xiàn)性關(guān)系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：托吡酯有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)濃度在4～40mg/ml范圍內(nèi)，隨著主成分濃度的提高，逐漸不成線(xiàn)性關(guān)系。因此采用自身對(duì)照法比面積歸一化法更準(zhǔn)確可靠。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種改進(jìn)測(cè)定托吡酯有關(guān)物質(zhì)的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于藥物檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及確定藥品中有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)條件及定量方法，更具體的說(shuō)是一種改進(jìn)測(cè)定托吡酯有關(guān)物質(zhì)的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]癲癇(epilepsy)俗稱(chēng)“羊癲瘋、羊角風(fēng)”是大腦神經(jīng)元突發(fā)性異常放電，導(dǎo)致短暫的大腦功能障礙的一種慢性疾病。而癲癇(羊癲瘋)發(fā)作(epileptic seizure)是指腦神經(jīng)元異常和過(guò)度超同步化放電所造成的臨床現(xiàn)象。其特征是突然和一過(guò)性癥狀，由于異常放電的神經(jīng)元在大腦中的部位不同，而有多種多樣的表現(xiàn)?？拱d癇藥物可通過(guò)兩種方式來(lái)消除或減輕癲癇發(fā)作，一是影響中樞神經(jīng)元，以防止或減少他們的病理性過(guò)渡放電；其二是提高正常腦組織的興奮閾，減弱病灶興奮的擴(kuò)散，防止癲癇復(fù)發(fā)。一般將60年代前合成的抗癲癇藥如:苯妥英鈉、卡馬西平、乙琥胺、丙戊酸鈉等稱(chēng)為老抗癲癇藥，其中苯巴比妥、苯妥英鈉、卡馬西平、丙戊酸鈉是目前廣泛應(yīng)用的一線(xiàn)抗癲癇藥。
[0003]托卩比酯是由美國(guó)強(qiáng)生制藥(Johnson&Johnson)公司開(kāi)發(fā)的GABA再攝取抑制劑，1995年以商品名Topamax在英國(guó)上市，臨床用于治療成人原發(fā)性部分性癲癇。它有別于以往傳統(tǒng)抗癲癇藥物之處在于它首先是一個(gè)帶有磺胺基團(tuán)的單糖衍生物，是一種結(jié)構(gòu)全新的抗癲癇藥物。其次是具有獨(dú)特的三重作用機(jī)理:(I)選擇性阻斷鈉離子通道，限制持續(xù)重復(fù)發(fā)作；(2)增強(qiáng)氨基丁酸介導(dǎo)的神經(jīng)抑制作用；(3)阻斷介導(dǎo)的神經(jīng)興奮作用，因而具有廣譜強(qiáng)效的抗癲癇作用。
[0004]托卩比酯(topiramate),別名為妥泰(Topamax),化學(xué)名稱(chēng)為2, 3:4，5_雙_0_ (1-甲基亞乙基)-β-D吡喃果糖氨基磺酸酯，是一個(gè)由氨基磺酸酯取代單糖的新型抗癲癇藥物。美國(guó)藥典中有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)主要有Testl和Test2兩種方法。其中Testl是采用C18色譜柱，檢測(cè)器和柱溫為55°C，流動(dòng)相為乙腈-水(50: 50)，流速為0.6ml/min進(jìn)行檢測(cè)，；Test2是采用C6色譜柱，柱溫為35°C，流動(dòng)相為甲醇-水(32: 68)，流速為1.5ml/min ;兩種檢測(cè)方法都采用面積歸一化計(jì)算有關(guān)物質(zhì)含量。但我們的研究結(jié)果表明:采用面積歸一化法測(cè)得的雜質(zhì)含量偏高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于，克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺點(diǎn)與不足，提供一種改進(jìn)托吡酯有關(guān)物質(zhì)測(cè)定的方法，本發(fā)明采用美國(guó)藥典有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)的Testl，采用自身對(duì)照法計(jì)算有關(guān)物質(zhì)的含量，其結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠。
[0006]為實(shí)現(xiàn)上述目的本發(fā)明公開(kāi)了如下的技術(shù)內(nèi)容:
[0007]—種改進(jìn)測(cè)定托吡酯有關(guān)物質(zhì)的方法，其特征在于按如下的步驟進(jìn)行:
[0008](I)色譜條件
[0009]色譜柱為Kromasil C18 柱(250mm*4.6mm*5 μ m)；
[0010]流動(dòng)相:乙腈-水的體積比為48: 52?52: 48[0011 ]流速:0.48-0.72ml/min
[0012]檢測(cè)器和柱溫:50°C；55°C ；60°C ；
[0013]配樣濃度:4_40mg/ml；
[0014]進(jìn)樣體積:40-60μ I ；
[0015](2)有關(guān)物質(zhì)歸屬
[0016]分別向原料藥溶液中添加硫酸鉀、雙丙酮-D-吡喃果糖、異丙醚，說(shuō)明相對(duì)托吡酯保留時(shí)間0.4雜質(zhì)為硫酸鹽無(wú)保留的無(wú)機(jī)離子，相對(duì)托吡酯保留時(shí)間0.9的雜質(zhì)為雙丙酮-β -D-吡喃果糖，相對(duì)托吡酯保留時(shí)間2.2的雜質(zhì)為異丙醚；相對(duì)托吡酯保留時(shí)間4.5的雜質(zhì)歸屬采用液質(zhì)聯(lián)用，測(cè)定條件除流速0.4ml/min ；
[0017](3)有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)濃度的確定
[0018]精密稱(chēng)取托吡酯4000mg置IOOml量瓶中，配成濃度為40mg/ml儲(chǔ)備液，精密移取
l、2、3、4、5、6、7、8、9、10ml置IOml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，得濃度為4、8、12、16、20、24、28、32、36、40mg/ml 溶液，相當(dāng)于檢測(cè)濃度的 10%,20%,30%,40%,50%,60%,70%,80%,90%U00%,作為供試品溶液；取50 μ I分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖；以相對(duì)托吡酯保留時(shí)間4.5雜質(zhì)為例，不同檢測(cè)濃度(10?100%)按照面積歸一化法其雜質(zhì)含量分別為 0.11、0.09,0.11,0.11,0.11,0.12,0.12,0.13,0.14,0.14%，而按照自身對(duì)照法其雜質(zhì)含量分別為 0.10,0.09,0.10,0.10,0.09,0.10,0.10,0.10,0.10,0.10%。
[0019]本發(fā)明更加詳細(xì)的測(cè)定方法如下:
[0020]I儀器與試劑
[0021]LC-10A型高效液相色譜儀(日本Shimadzu公司)；RID_10A型示差折光檢測(cè)器(日本Shimadzu公司);SIL_10AV型自動(dòng)進(jìn)樣器(日本Shimadzu公司);Class_vp工作站(日本Shimadzu公司);電子天平(瑞士 Mettler toledo公司)。
[0022]托吡酯原料藥(本公司自制110601批)，乙腈(色譜純，TEDIA Company)，水為屈臣氏純凈水。
[0023]2方法與結(jié)果
[0024]2.1色譜條件
[0025]根據(jù)合成路線(xiàn)，首先選用美國(guó)藥典有關(guān)物質(zhì)方法Testl,色譜柱為Kromasil C18柱(250mm*4.6mm*5 μ m);流動(dòng)相:乙腈-水(50: 50);流速:0.6ml/min ;檢測(cè)器和柱溫:55°C ;配樣濃度:4-40mg/ml ;進(jìn)樣體積:40-60 μ I。
[0026]2.2系統(tǒng)適用性
[0027]稱(chēng)取D-吡喃果糖3mg和雙丙酮-β -D-吡喃果糖3mg置IOml量瓶中，加40mg/ml的托吡酯溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，取50 μ I注入液相色譜儀，記錄色譜圖。D-吡喃果糖、雙丙酮-β -D-吡喃果糖和托吡酯之間都能達(dá)到基線(xiàn)分離，見(jiàn)圖1，2。
[0028]2.3有關(guān)物質(zhì)歸屬
[0029]分別向原料藥溶液中添加硫酸鹽、雙丙酮-β -D-吡喃果糖、異丙醚，說(shuō)明相對(duì)托吡酯保留時(shí)間0.4雜質(zhì)為硫酸鹽等無(wú)保留的無(wú)機(jī)離子，相對(duì)托吡酯保留時(shí)間0.9的雜質(zhì)為雙丙酮-β -D-吡喃果糖，相對(duì)托吡酯保留時(shí)間2.2的雜質(zhì)為異丙醚。
[0030]相對(duì)托吡酯保留時(shí)間4.5的雜質(zhì)歸屬采用液質(zhì)聯(lián)用，測(cè)定條件除流速0.4ml/min夕卜，其它同上，質(zhì)譜圖見(jiàn)圖3，化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖4。[0031]由于合成路線(xiàn)中會(huì)產(chǎn)生相對(duì)托吡酯保留時(shí)間4.5的雜質(zhì)，該雜質(zhì)極性較小，不容易洗脫，需要強(qiáng)洗脫能力的乙腈配制流動(dòng)相，因此選用美國(guó)藥典Testl作為有關(guān)物質(zhì)液相檢測(cè)條件。
[0032]2.4有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)濃度的考察
[0033]精密稱(chēng)取托吡酯4000mg置100ml量瓶中，配成濃度為40mg/ml儲(chǔ)備液。精密移取
l、2、3、4、5、6、7、8、9、10ml置IOml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，得濃度為4、8、12、16、20、24、28、32、36、40mg/ml 溶液(相當(dāng)于檢測(cè)濃度的 10% ,20% ,30% ,40% ,50% ,60%,70%,80%,90%,100% )作為供試品溶液。取50 μ I分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見(jiàn)表1。以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，作圖，見(jiàn)圖5。
[0034]表1有關(guān)物質(zhì)測(cè)定不同濃度測(cè)定結(jié)果
【權(quán)利要求】
1.一種改進(jìn)測(cè)定托吡酯有關(guān)物質(zhì)的方法，其特征在于按如下的步驟進(jìn)行: (1)色譜條件 色譜柱為 Kromasil C18 柱(250mm*4.6mm*5 μ m)； 流動(dòng)相:乙腈-水的體積比為48: 52~52: 48
流速:0.48-0.72ml/min 檢測(cè)器和柱溫:50°C ；55°C ；60°C ； 配樣濃度:4-40mg/ml ； 進(jìn)樣體積:40-60 μ I ； (2)有關(guān)物質(zhì)歸屬: 分別向原料藥溶液中添加無(wú)機(jī)鹽、雙丙酮-β -D-批喃果糖、異丙醚，說(shuō)明相對(duì)托吡酯保留時(shí)間0.4雜質(zhì)為無(wú)保留的無(wú)機(jī)離子，相對(duì)托吡酯保留時(shí)間0.9的雜質(zhì)為雙丙酮-β -D-吡喃果糖，相對(duì)托吡酯保留時(shí)間2.2的雜質(zhì)為異丙醚；相對(duì)托吡酯保留時(shí)間4.5的雜質(zhì)歸屬采用液質(zhì)聯(lián)用，測(cè)定條件為流速0.4ml/min ； (3)有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)濃度的確定: 精密稱(chēng)取托吡酯4000mg置100ml量瓶中，采用流動(dòng)相配成濃度為40mg/ml儲(chǔ)備液，精密移取l、2、3、4、5、6、7、8、9、10ml置IOml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，得濃度為4、8、12、16、20、24、28、32、36、40mg/ml 溶液，相當(dāng)于檢測(cè)濃度的 10%,20%,30%,40%,50%,60%、70 %、80 %、90 %、100 %，作為供試品溶液；分別各取50 μ I注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按照自身對(duì)照法檢測(cè)雜質(zhì)；所述的無(wú)機(jī)鹽為硫酸鉀、硫酸鈉、氯化鉀、氯化鐵或EDTA。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK103630615SQ201210302454
【公開(kāi)日】2014年3月12日 申請(qǐng)日期:2012年8月24日 優(yōu)先權(quán)日:2012年8月24日
【發(fā)明者】韓建萍, 田青松, 劉穎 申請(qǐng)人:天津泰普藥品科技發(fā)展有限公司