專(zhuān)利名稱(chēng)：醛固酮化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)試劑盒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及免疫分析醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體的涉及醛固酮(ALD)化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)試劑盒及其制備方法。
背景技術(shù)：
高血壓(Hypertension)是ー種世界性的常見(jiàn)疾病，世界各地的患病率高達(dá)109Γ20%，并可導(dǎo)致腦血管、心臟、腎臟的病變，是危害人類(lèi)健康的主要疾病。據(jù)衛(wèi)生部最新數(shù)據(jù)，我國(guó)現(xiàn)有高血壓患者2億多人，隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展，人民生活水平的提高，高血壓已日益成為ー個(gè)重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題。醛固酮(aldosterone，ALD)是腎上腺皮質(zhì)激素的ー種，具有代表性的強(qiáng)電解質(zhì)代 謝作用的鹽皮質(zhì)類(lèi)固醇。其作用是保鈉排鉀(増加Na+和Cl—的回放，排出K+和H+)、維持電解質(zhì)平衡與體液容量恒定。ALD是由腎上腺皮質(zhì)球狀帶生成，并受腎臟分泌的血管緊張肽原酶，即血管緊張素的調(diào)節(jié)。醛固酮是人體內(nèi)調(diào)節(jié)血容量的激素，通過(guò)調(diào)節(jié)腎臟對(duì)鈉的重吸收，維持水平衡。醛固酮是調(diào)節(jié)細(xì)胞外液容量和電解質(zhì)的激素，醛固酮的分泌，是通過(guò)腎素-血管緊張素系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的。當(dāng)細(xì)胞外液容量下降時(shí)，刺激腎小球旁細(xì)胞分泌腎素，激活腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)，醛固酮分泌増加，使腎臟重吸收鈉增加，進(jìn)而引起水重吸收增加，細(xì)胞外液容量增多；相反，細(xì)胞外液容量增多時(shí)，通過(guò)上述相反的機(jī)制，使醛固酮分泌減少，腎重吸收鈉水減少，細(xì)胞外液容量下降。血鈉降低，血鉀升高同樣刺激腎上腺皮質(zhì)，使醛固酮分泌増加。血漿中ALD水平的檢測(cè)，對(duì)于原發(fā)性醛固酮增多癥的診斷和療效觀察、Addisons病(阿狄森氏病又稱(chēng)原發(fā)性慢性腎上腺皮質(zhì)機(jī)能減退癥)的診斷及腎上腺皮質(zhì)增生、繼發(fā)性醛固酮增多癥等的鑒別診斷有臨床價(jià)值。目前臨床上常用的測(cè)定醛固酮(ALD)的方法是放射免疫分析技術(shù)(RIA)和酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)，但是這兩種方法存在諸多不足，例如RIA存在放射性污染、標(biāo)記物半衰期短、對(duì)操作者具有放射性損傷，且操作繁瑣，時(shí)間長(zhǎng)等缺點(diǎn)；而ELISA靈敏度低，檢測(cè)范圍窄；隨著標(biāo)記免疫技術(shù)的迅速發(fā)展，各種新的檢測(cè)方法層出不窮，例如時(shí)間分辨免疫分析法、免疫熒光法、化學(xué)發(fā)光法等。其中，化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA)是將化學(xué)發(fā)光和酶免疫分析結(jié)合在此技術(shù)上發(fā)展起來(lái)的，起步于80年代初，在90年代得到了快速發(fā)展和應(yīng)用，是當(dāng)今最為敏感的微量免疫測(cè)定法，具有靈敏度高(檢測(cè)極限10_17 10_19)、可測(cè)定物質(zhì)濃度范圍寬、試劑有效期長(zhǎng)、操作簡(jiǎn)單快速、穩(wěn)定性好、安全無(wú)環(huán)境污染等優(yōu)點(diǎn)，目前已廣泛應(yīng)用到基礎(chǔ)和臨床醫(yī)學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域，成為取代RIA和ELISA的首選技術(shù)。但目前使用的化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA)測(cè)定醛固酮(ALD)的靈敏度普遍低，而且測(cè)定范圍較窄。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的問(wèn)題是提供ー種醛固酮(ALD)化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)試劑盒及其制備方法，解決了靈敏度低，檢測(cè)范圍窄的缺陷。
為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是醛固酮化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)試劑盒,包含ALD抗體包被板；ALD酶結(jié)合物；ALD 校準(zhǔn)品；ALD 質(zhì)控品；發(fā)光液A和發(fā)光液B;20倍濃縮洗液。其中，所述的ALD抗體包被板的固相載體為96孔或48孔的白色微孔板；所述的 ALD酶結(jié)合物使用的酶是辣根過(guò)氧化物酶。所述的ALD質(zhì)控品包括低值質(zhì)控品(QcL)和高值質(zhì)控品(QcH)，其中低值質(zhì)控品的濃度范圍是124. 93 187. 39pg/mL，高值質(zhì)控品的濃度范圍是1640. 33 2460. 50pg/mL。所述的發(fā)光液A包含O. 7g/L魯米諾和O. 165g/L對(duì)碘酚；發(fā)光液B包含O. 675g/L過(guò)氧化脲；所述的20倍濃縮洗液包含75. 5g/L Tris, 120g/LNaCl,5mL/L Tween-20,lg/L Proclin300。本發(fā)明還提供了上述試劑盒的制備方法，包含以下步驟I) ALD抗體包被板制備；包被板制備包括以下步驟a將ALD抗體用O. 02M pH7. 4磷酸鹽緩沖液稀釋至I 10ug/mL，加入到固相載體中，2 8°C包被20 24小時(shí)；b棄去孔內(nèi)液體，用pH7. 4PBS-T緩沖液洗板，然后加入含有O. 5%BSA的磷酸鹽緩沖液封閉微孔板，2 8°C封閉20 24小時(shí)；c棄去孔內(nèi)液體，甩干后于30 37°C烘干16 30小時(shí)；d裝入鋁箔袋，加入干燥劑，封ロ，貼標(biāo)簽，儲(chǔ)存于2 8°C。2)用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記ALD，得ALD酶結(jié)合物；ALD酶結(jié)合物的制備包括以下步驟a將O-(羧甲基)羥胺和ALD溶解在こ醇中，使其濃度分別為5m mo I/L和2mmol/L，在沸水浴中反應(yīng)90min ；b濃縮后，加入40mL 7jC,用こ醚抽提，抽提物用Na2S04干燥，將其溶于O. 01mol/L的氫氧化鈉溶液中，得II液；c將EDC溶解在pH8. O的PBS緩沖液中，得I液；d將HRP溶于PH7. 4的PBS緩沖液中，得III液；e將II液與III液混合，然后逐滴加入I液，在4°C攪拌16小時(shí)，用O. OlMPBS使之充分透析。3)配制不同濃度的ALD校準(zhǔn)品將ALD用校準(zhǔn)品稀釋液稀釋成不同濃度的校準(zhǔn)品，濃度分別為 0,40,120, 360,1000, 3000pg/mL ；4)質(zhì)控品的配制在正常人血清中加入適量的ALD純品，配制低值質(zhì)控品(QcL)和高值質(zhì)控品(QcH)，其濃度的平均值分別為156. 16pg/mL和2050. 41pg/mL。5)配制發(fā)光液A，發(fā)光液B ；6)配制20倍濃縮洗液；
7)組裝將上述試劑組裝成盒，儲(chǔ)存于2 8°C ；8)對(duì)采用該方法制得的試劑盒進(jìn)行物理檢查，并對(duì)準(zhǔn)確度、劑量-反應(yīng)曲線的線性、精密度、特異性、靈敏度、質(zhì)控品的測(cè)定值和穩(wěn)定性進(jìn)行測(cè)定。辣根過(guò)氧化物酶(HRP)純度要求RZ彡3. O,活性彡250U/mL。根據(jù)本發(fā)明的方法，ALD抗體包被板是包被含有ALD抗體的96孔或48孔的白色微孔板；所述的ALD酶結(jié)合物使用的酶是辣根過(guò)氧化物酶；所述的發(fā)光液A包含魯米諾和對(duì)碘酚，發(fā)光液B包含過(guò)氧化服。本發(fā)明方法制備的試劑盒采用如下具體形式，其包含ALD抗體包被的96孔或48孔的白色微孔板、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的ALD、不同濃度的ALD校準(zhǔn)品、發(fā)光液A液為魯米諾和對(duì)碘酚、發(fā)光液B液為過(guò)氧化脲、20倍濃縮洗液為配方為75. 5g/L Tris, 120g/L NaCl, 5mL/L Tween-20,lg/LProclin300oProClin300以其廣譜活性、優(yōu)越的兼容性和穩(wěn)定性及其在使用濃度下的低毒性，ProClin300成為用于診斷試劑的理想高效防腐劑。Proclin300防腐劑可在更長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)根除細(xì)菌、真菌及酵母，從而延長(zhǎng)產(chǎn)品的儲(chǔ)存時(shí)間。其水溶性確保其可輕易溶入所需試劑中。特別是，ProClin300防腐對(duì)大多數(shù)的酶或抗體交聯(lián)反應(yīng)的功能無(wú)影響，所以不會(huì)干擾檢驗(yàn)指示劑。本發(fā)明的醛固酮(ALD)定量檢測(cè)試劑盒，采用目前最為敏感的免疫測(cè)定方法——化學(xué)發(fā)光免疫分析技木，醛固酮(ALD)定量檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光法)采用競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)人血清、血漿中的醛固酮含量。樣本加到固相含有ALD抗體的白色不透明的板條微孔中，再加入ALD-辣根過(guò)氧化物酶(HRP)結(jié)合物，此酶結(jié)合物與樣本中的ALD競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合固相ALD抗體。洗掉游離成分。加入底物工作液，在氧化劑作用下，HRP催化魯米諾生成處于激發(fā)態(tài)的氨基鄰苯ニ甲酸離子，其恢復(fù)到基態(tài)時(shí)，釋放出425nm的光子，于第5_15分鐘測(cè)定各加樣本孔的發(fā)光值RLU。樣本的RLU與其中的ALD濃度呈負(fù)相關(guān)。樣本中的ALD濃度依據(jù)由校準(zhǔn)品ALD濃度和對(duì)應(yīng)的RLU建立的數(shù)學(xué)模型進(jìn)行定量，從而檢測(cè)人血清、血漿中的ALD含量。本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)(I)本試劑盒利用化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)測(cè)定血漿樣本。操作簡(jiǎn)便，適用于臨床常規(guī)檢測(cè)；(2)靈敏度聞，分析靈敏度不聞?dòng)?5pg/mL ; (3)本廣品的特異性良好，本產(chǎn)品對(duì)血管緊張素I，血管緊張素II、血管緊張素I 7的交叉特異性均小于1% ；
(4)精密度良好，批內(nèi)精密度不高于15%，批間精密度不高于20% ;(5)穩(wěn)定性良好，經(jīng)37°C加速穩(wěn)定性及2 8°C真實(shí)穩(wěn)定性試驗(yàn)證實(shí)，本產(chǎn)品在37°C可存放7天以上，在2 8°C可存放I年；(6)特異性強(qiáng)，反應(yīng)快速，可在65分鐘內(nèi)判斷檢測(cè)結(jié)果，操作簡(jiǎn)便，安全無(wú)環(huán)境污染。此外，本發(fā)明還具有檢測(cè)樣品的濃度范圍寬、試劑有效期長(zhǎng)、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。性能優(yōu)于RIA、Elisa產(chǎn)品，達(dá)到了國(guó)際先進(jìn)水平，成本較低。


圖I是本發(fā)明的博奧賽斯化學(xué)發(fā)光試劑盒測(cè)定ALD與美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司的放免試劑盒測(cè)定ALD的測(cè)定結(jié)果比較圖，其中縱坐標(biāo)為博奧賽斯測(cè)得的ALD值，橫坐標(biāo)為放免試劑盒測(cè)定ALD值，兩種方法相關(guān)系數(shù)(r) =0. 9719，直線方程y=0. 9761x+6. 0824。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例I :制備醛固酮化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)試劑盒醛固酮化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)試劑盒，包含I) ALD抗體包被的96孔白色微孔板；2 ) ALD-辣根過(guò)氧化物酶(HRP )結(jié)合物；3) ALD 校準(zhǔn)品； 4) ALD 質(zhì)控品；5)發(fā)光液A液和發(fā)光液B液，發(fā)光液A液包含魯米諾和對(duì)碘酚，發(fā)光液B液包含過(guò)氧化脲；6) 20 倍濃縮洗液的配方為 75. 5g/L Tris, 120g/L NaCl，5mL/L Tween-20,1g/LProclin300, Proclin300 選自美國(guó) sigma 公司。通過(guò)下述方法制備醛固酮(ALD)化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)試劑盒I)包被將ALD抗體用O. 02M磷酸鹽緩沖液稀釋至I 10ug/mL，加入到96孔白色微孔板中，2 8°C包被20 24小時(shí)；棄去孔內(nèi)液體，用pH7. 4PBS-T緩沖液洗板，然后加入含O. 5%BSA的磷酸鹽緩沖液封閉微孔板，2 8°C封閉20 24小時(shí)；棄去孔內(nèi)液體，甩干后于30 37°C烘干16 30小時(shí)；裝入鋁箔袋，加入干燥劑，封ロ，貼標(biāo)簽，儲(chǔ)存于2 8で。2) ALD酶結(jié)合物的制備步驟如下a將0-(羧甲基)羥胺和ALD溶解在こ醇中，使其濃度分別為5mmol/L和2mmol/L，在沸水浴中反應(yīng)90min ；b濃縮后，加入40mL水，用こ醚抽提，抽提物用Na2SO4干燥，將其溶于O. Olmol/L的氫氧化鈉溶液中，得II液；c將EDC溶解在pH8. O的PBS緩沖液中，得I液；d將HRP溶于PH7. 4的PBS緩沖液中，得III液；e將II液與III液混合，然后逐滴加入I液，在4°C攪拌16小時(shí)，用O. OlMPBS使之充分透析。3)配制不同濃度的ALD校準(zhǔn)品將ALD用校準(zhǔn)品稀釋液稀釋成不同濃度的校準(zhǔn)品，濃度分別為 0,40,120, 360,1000, 3000pg/mL ；4)質(zhì)控品的配制在正常人血清中加入適量的ALD純品，配制低值質(zhì)控品(QcL)和高值質(zhì)控品(QcH)，其濃度的平均值分別為156. 16pg/mL和2050. 41pg/mL。5)配制發(fā)光液A液和B液發(fā)光液A液包含O. 7g/L魯米諾和O. 165g/L對(duì)碘酹，緩沖液為5mmol/LTriS · HCl(pH8. 6) ；B液包含O. 675g/L過(guò)氧化脲，用エ藝用水配制6)配制20倍濃縮洗液按照下述配方配制濃縮洗液，75.5g/L Tris, 120g/L NaCl, 5mL/LTween-20, lg/LProclin300o7)組裝將上述試劑組裝成盒，儲(chǔ)存于2 8°C ;其中包含發(fā)光液A、發(fā)光液B、20倍濃縮洗液、ALD酶結(jié)合物各I瓶，ALD抗體包被板I塊，ALD校準(zhǔn)品6瓶、ALD質(zhì)控品2瓶。8)對(duì)采用該方法制得的試劑盒進(jìn)行物理檢查，并對(duì)準(zhǔn)確度、劑量-反應(yīng)曲線的線性、精密度、特異性、靈敏度、質(zhì)控品的測(cè)定值和穩(wěn)定性進(jìn)行測(cè)定。
說(shuō)明(I)物理檢查在外觀上液體組分應(yīng)澄清，無(wú)沉淀或絮狀物；其他組分應(yīng)無(wú)包裝破損。(2)準(zhǔn)確性試劑盒校準(zhǔn)品與企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)品系列同時(shí)進(jìn)行分析測(cè)定，用Log(X)-Logit(Y)數(shù)學(xué)模型擬合，要求兩條劑量-反應(yīng)曲線不顯著偏離平行(t檢驗(yàn)，
11〈2. 447)；以企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)品為對(duì)照品，用Log(X) -Logit (Y)數(shù)學(xué)模型擬合，試劑盒校準(zhǔn)品的實(shí)測(cè)值與標(biāo)示值比值的平均值應(yīng)在O. 90 I. 10范圍內(nèi)。企業(yè)校準(zhǔn)品的配制方法如下將高純度的醛固酮(ALD)用稀釋液(含牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液)稀釋為系列梯度，其濃度分別為40、120、360、1000、3000pg/mL，并以不含ALD的稀釋液作為零值對(duì)照。
(3)劑量-反應(yīng)曲線的線性用Log⑴-Logit⑴數(shù)學(xué)模型擬合，劑量-反應(yīng)曲線在O 3000pg/mL濃度范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)r絕對(duì)值不低于O. 9900。(4)分析靈敏度試劑盒分析靈敏度不高于15pg/mL。(5)精密度批內(nèi)不精密度(CV%)應(yīng)不高于15. 0% ;批間不精密度(CV%)應(yīng)不高于20. 0%。(6)質(zhì)控品測(cè)定值平行測(cè)定10孔高值和低值的質(zhì)控品，用Log (X)-Logit (Y)數(shù)學(xué)模型擬合，質(zhì)控品測(cè)值應(yīng)在允許范圍內(nèi)，QcL和QcH的允許范圍分別為124. 92 187. 39pg/mL和 1640. 33 2460. 50pg/mL。(7)特異性交叉反應(yīng)應(yīng)符合下表要求。
權(quán)利要求
1.醛固酮化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含 ALD抗體包被板； ALD酶結(jié)合物； ALD校準(zhǔn)品； ALD質(zhì)控品； 發(fā)光液A液和B液； 20倍濃縮洗液。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的醛固酮化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的ALD抗體包被板是包被含有ALD抗體的96孔或48孔的白色微孔板。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的醛固酮化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的ALD抗原酶結(jié)合物使用的酶是辣根過(guò)氧化物酶，要求純度RZ ^ 3. 0，活性> 250U/mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的醛固酮化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于ALD質(zhì)控品包括低值質(zhì)控品和高值質(zhì)控品，其中低值質(zhì)控品的濃度范圍是124. 93 187. 39pg/mL,高值質(zhì)控品的濃度范圍是1640. 33 2460. 50pg/mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的醛固酮化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的發(fā)光液A包含O. 7g/L魯米諾和O. 165g/L對(duì)碘酚；發(fā)光液B包含O. 675g/L過(guò)氧化脲。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的醛固酮化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的20 倍濃縮洗液包含 75. 5g/LTris, 120g/LNaCl, 5mL/LTween-20, lg/LProclin300。
7.一種制備所述權(quán)利要求I的試劑盒的方法，其特征在于包含以下步驟 1)ALD抗體包被板制備； 2)ALD酶結(jié)合物的制備； 3)配制不同濃度的ALD校準(zhǔn)品； 4)ALD質(zhì)控品的配制； 5)配制發(fā)光液A液和B液； 6)配制20倍濃縮洗液； 7)組裝將上述試劑組裝成盒，儲(chǔ)存于2 8°C; 8)對(duì)采用該方法制得的試劑盒進(jìn)行物理檢查，對(duì)其準(zhǔn)確度、劑量-反應(yīng)曲線的線性、精密度、特異性、靈敏度、質(zhì)控品的測(cè)定值和穩(wěn)定性進(jìn)行測(cè)定。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的試劑盒的制備方法，其特征在于包被板的制備包含如下步驟 a將ALD抗體用O. 02mol/L pH7. 4磷酸鹽緩沖液稀釋至I 10ug/mL,加入到固相載體中，2 8°C包被20 24小時(shí)； b棄去孔內(nèi)液體，用pH7. 4PBS-T緩沖液洗板，然后加入含有O. 5%BSA的磷酸鹽緩沖液封閉微孔板，2 8°C封閉20 24小時(shí)； c棄去孔內(nèi)液體，甩干后于30 37°C烘干16 30小時(shí)； d裝入鋁箔袋，加入干燥劑，封口，貼標(biāo)簽，儲(chǔ)存于2 8°C。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的醛固酮化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述的ALD酶結(jié)合物的制備步驟如下 a將0-(羧甲基)羥胺和ALD溶解在乙醇中，使其濃度分別為5mmol/L和2mmol/L，在沸水浴中反應(yīng)90min ； b濃縮后，加入40mL 7jC,用乙醚抽提，抽提物用Na2SO4干燥，將其溶于O. 01mol/L的氫氧化鈉溶液中，得II液； c將EDC溶解在pH8. O的PBS緩沖液中，得I液； d將HRP溶于PH7. 4的PBS緩沖液中，得III液； e將II液與III液混合，然后逐滴加入I液，在4°C攪拌16小時(shí)，用O. OlMPBS使之充分透析。
10.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的試劑盒的制備方法，其特征在于，所述的ALD抗體包被板是包被含有ALD抗體的96孔或48孔的白色微孔板。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種醛固酮ALD化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)試劑盒，本發(fā)明試劑盒包含ALD抗體包被板、ALD酶結(jié)合物、ALD校準(zhǔn)品、ALD質(zhì)控品、發(fā)光液A液和B液、20倍濃縮洗液。制備本發(fā)明試劑盒包含以下步驟1)ALD抗體包被板的制備；2)ALD酶結(jié)合物的制備；3)配制不同濃度的ALD校準(zhǔn)品；4)ALD質(zhì)控品的制備；5)配制發(fā)光液A液和B液；6)配制20倍濃縮洗液；7)組裝將上述試劑組裝成盒，儲(chǔ)存于2～8℃；8)對(duì)采用該方法制得的試劑盒進(jìn)行物理檢查，并對(duì)準(zhǔn)確度、劑量-反應(yīng)曲線的線性、精密度、特異性、靈敏度、質(zhì)控品的測(cè)定值和穩(wěn)定性進(jìn)行測(cè)定。本發(fā)明試劑盒與現(xiàn)有試劑盒相比操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，特異性好。
文檔編號(hào)G01N21/76GK102735679SQ20121021282
公開(kāi)日2012年10月17日 申請(qǐng)日期2012年6月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月26日
發(fā)明者劉萍, 宋啟超, 張影, 范利花 申請(qǐng)人:博奧賽斯(天津)生物科技有限公司