專利名稱：經(jīng)由評(píng)估蛋白質(zhì)片段檢測(cè)并展示毛發(fā)損傷的系統(tǒng)和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本公開的實(shí)施方案涉及通過評(píng)估和鑒定提取的蛋白質(zhì)片段來測(cè)量毛發(fā)損傷的方法。
背景技術(shù)：
由蛋白質(zhì)損失導(dǎo)致的毛發(fā)損傷是一個(gè)已知的問題；然而，一般來講，大多數(shù)人未認(rèn)識(shí)到他們的毛發(fā)遭受的蛋白質(zhì)損失量或他們的毛發(fā)健康水平。蛋白質(zhì)損失可由每天的事件和環(huán)境因素如紫外線暴露、漂白、著色、燙發(fā)、拉直、機(jī)械操縱和鹽水接觸引起。分子水平上的適當(dāng)?shù)拿l(fā)構(gòu)造是具有健康的外觀、光澤和觸感的毛發(fā)的重要特征。毛發(fā)主要由蛋白質(zhì)組成，并且在它長(zhǎng)出頭皮后是可再生的。因此，保護(hù)毛發(fā)的總體蛋白 質(zhì)完整性的產(chǎn)品是有價(jià)值的。因此，在蛋白質(zhì)和纖維水平上保護(hù)毛干對(duì)確保毛發(fā)具有健康的外觀是重要的。鑒定從毛發(fā)中提取的蛋白質(zhì)片段，并將蛋白質(zhì)片段類型與毛發(fā)損傷類型相關(guān)聯(lián)I)使得能夠正確鑒定毛發(fā)損傷的類型，并且2)可提供設(shè)計(jì)在使用漂白劑時(shí)防止損傷的產(chǎn)品和/或不產(chǎn)生損傷的其它組合物所必需的信息。此外，鑒定特定的毛發(fā)疾病類型也是有價(jià)值的?；加忻l(fā)疾病的個(gè)體的毛發(fā)對(duì)損傷和/或處理的反應(yīng)不同于正常毛發(fā)。因此，基于毛發(fā)在蛋白質(zhì)水平上對(duì)特定損傷類型的響應(yīng)表征何種類型的毛發(fā)疾病是可能的。當(dāng)鑒定出蛋白質(zhì)片段時(shí)，也可產(chǎn)生由蛋白質(zhì)損失得到的利用可用鍵的產(chǎn)品，具體地為專用于特定損傷類型的產(chǎn)品。發(fā)明概沭本公開一般涉及通過將從毛發(fā)中提取的蛋白質(zhì)片段與毛發(fā)損傷類型相關(guān)聯(lián)來檢測(cè)毛發(fā)損傷類型的系統(tǒng)和方法。將毛發(fā)損傷類型或來源與標(biāo)記蛋白質(zhì)片段相關(guān)聯(lián)的方法包括產(chǎn)生兩個(gè)相同的毛發(fā)樣品樣品A和樣品B;向樣品A施用損傷組合物或處理劑(treatment);向樣品B施用無損傷組合物或處理劑；使用合適的溶劑樣品從樣品A和樣品B的每個(gè)中提取所述不穩(wěn)定蛋白質(zhì)(liable protein);用MALDI-MS分析得自樣品A和樣品B的蛋白質(zhì)片段樣品；比較樣品A和樣品B的MALDI-MS結(jié)果；通過鑒定所述存在于樣品A中而不存在于樣品B中的獨(dú)特修飾模式(unique modification pattern)來鑒定所述標(biāo)記蛋白質(zhì)片段。用于展示毛發(fā)損傷類型或來源的方法，所述方法包括使用合適的溶劑從毛發(fā)樣品中提取所述不穩(wěn)定蛋白質(zhì)；用MALDI-MS分析所述蛋白質(zhì)片段樣品；得到蛋白質(zhì)片段結(jié)果；以及通過比較所述蛋白質(zhì)片段結(jié)果與對(duì)于特定損傷的標(biāo)記蛋白質(zhì)片段列表來鑒定所述毛發(fā)損傷。附圖
概沭圖I :該圖是漂白劑導(dǎo)致的損傷毛發(fā)的標(biāo)記蛋白質(zhì)片段的MALDI-MS結(jié)果與未損傷毛發(fā)的蛋白質(zhì)片段的MALDI-MS結(jié)果的比較。發(fā)明詳沭如本文所用，“毛發(fā)”指人或動(dòng)物來源的角質(zhì)纖維，例如頭發(fā)或睫毛。此外，如本文所用，將術(shù)語“角質(zhì)蛋白質(zhì)”理解為指毛發(fā)中存在的那些蛋白質(zhì)。如本文所用，術(shù)語“蛋白質(zhì)片段”指在角質(zhì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)損傷后脫離的氨基酸和較大的蛋白質(zhì)，它們通過靜電相互作用、結(jié)合基質(zhì)蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的弱氫鍵、或者不包括混入角質(zhì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的任何其它力而保持在毛發(fā)結(jié)構(gòu)內(nèi)。如本文所用，“標(biāo)記蛋白質(zhì)片段”指已經(jīng)與特定毛發(fā)損傷和/或損傷處理類型相關(guān)聯(lián)的蛋白質(zhì)片段。如本文所用，“洗脫物”“洗脫”等指經(jīng)由接觸毛發(fā)與未添加任何還原劑或萃取劑的水溶液從毛發(fā)中移除蛋白質(zhì)，從而不改變角質(zhì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)并且不中斷或還原毛發(fā)樣品中存在的化學(xué)鍵，所述化學(xué)鍵不是靜電相互作用、結(jié)合基質(zhì)蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的弱氫鍵、或者不包括混入角質(zhì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的任何其它力。如本文所用，“可洗脫的”指毛發(fā)樣品中存在的蛋白質(zhì)片段，其在不加入任何還原劑或萃取劑的情況下可在水溶液中從毛發(fā)結(jié)構(gòu)中移除。此外，“可洗脫的”指在基本上由水組成的溶液中可移出毛發(fā)結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)，所述溶液不中斷或還原角質(zhì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中存在的 化學(xué)鍵，所述化學(xué)鍵不是靜電相互作用、結(jié)合基質(zhì)蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的弱氫鍵、或者不包括混入角質(zhì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的任何其它力。已經(jīng)開發(fā)了一種方法，該方法利用水溶液從毛發(fā)中提取蛋白質(zhì)片段，不改變角質(zhì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，用于檢測(cè)和展示毛發(fā)損傷。在提交于2010年5月17日的專利申請(qǐng)61/345, 321中描述了一種此類方法。在從毛發(fā)中提取出蛋白質(zhì)片段時(shí)分析該蛋白質(zhì)片段。從對(duì)該蛋白質(zhì)片段的分析中，鑒定毛發(fā)已經(jīng)發(fā)生的損傷類型是可能的，尤其是測(cè)定毛發(fā)損傷的來源是可能的。一種此類特異性標(biāo)記蛋白質(zhì)片段包括當(dāng)漂白毛發(fā)時(shí)產(chǎn)生的那些標(biāo)記蛋白質(zhì)片段?？墒褂没诳贵w的檢測(cè)和/或質(zhì)譜儀技術(shù)測(cè)試一種毛發(fā)樣品，提取蛋白質(zhì)片段并測(cè)試所得蛋白質(zhì)片段。在一個(gè)實(shí)施方案中使用Matrix Assisted LaserDesorptionIonization (“MALDI”)，也稱為 MALDI-TOF 質(zhì)譜儀“MALDI-MS”，來評(píng)估蛋白質(zhì)片段。這種技術(shù)是質(zhì)譜儀中使用的軟電離技術(shù)。MALDI-MS可用于分析生物分子如肽和蛋白質(zhì)以及大的有機(jī)分子如聚合物。在MALDI中，分析物首先與UV吸收基質(zhì)如α -氰基-4-羥基肉桂酸(CHCA)共結(jié)晶，然后經(jīng)受脈沖激光(YAG或氮激光)輻射。這引起分析物/基質(zhì)結(jié)晶的蒸發(fā)/解吸并產(chǎn)生離子，所述離子被傳送到質(zhì)譜分析儀中進(jìn)行檢測(cè)。在MALDI-T0F中，使用了飛行時(shí)間質(zhì)譜分析儀。可以MS模式獲取MALDI-T0F數(shù)據(jù)，從而產(chǎn)生分子量信息(例如肽)，并且可使用MS/MS模式(例如肽序列/結(jié)構(gòu)信息)。典型的MALDI質(zhì)譜采集需要小于一分鐘的時(shí)間，因此它可用于快速篩選受關(guān)注樣品中的分子種類?？赏ㄟ^比較在不同條件下處理的樣品(如原始毛發(fā)對(duì)漂白的毛發(fā)樣品)中獲取的質(zhì)譜檢測(cè)改變和分子標(biāo)記?？稍诎l(fā)生或不發(fā)生酶消化蛋白質(zhì)的情況下進(jìn)行MALDI-MS。然后將蛋白質(zhì)片段測(cè)試結(jié)果與已知的標(biāo)記蛋白質(zhì)片段庫進(jìn)行比較，以鑒定毛發(fā)損傷為何種類型，以及在一些情況下，毛發(fā)損傷的初始來源，即漂白。這使得能對(duì)損傷進(jìn)行“指紋識(shí)別”;意指如果測(cè)試毛發(fā)樣品并且所述結(jié)果包括某些標(biāo)記蛋白質(zhì)片段，那么所述毛發(fā)樣品已經(jīng)受到特定來源的損傷。用于評(píng)估蛋白質(zhì)片段的附加方法包括但不限于液相色譜法-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜，可產(chǎn)生對(duì)蛋白質(zhì)片段的抗體并且可開發(fā)出ELISA測(cè)定法。此外可使用iTRAQ方法,通過Applied Biosystems,Carlsbad California可用的試劑產(chǎn)生同位素標(biāo)記與每個(gè)賴氨酸側(cè)鏈和蛋白質(zhì)片段游離N-末端基團(tuán)的共價(jià)胺鍵。這使得多個(gè)樣品可同時(shí)通過MALDI MS進(jìn)行分析。多個(gè)樣品可同時(shí)通過MALDI MS進(jìn)行分析，以最小化由于測(cè)試變異性引起的測(cè)試數(shù)據(jù)的差異。可通過用多種不同組合物或處理劑損傷毛發(fā)樣品，然后通過比較所得蛋白質(zhì)片段與未損傷的類似毛發(fā)樣品進(jìn)行分析來產(chǎn)生這些標(biāo)記蛋白質(zhì)片段的庫?？赏ㄟ^MALDI-MS鑒定標(biāo)記蛋白質(zhì)片段，因?yàn)閾?jù)信基于毛發(fā)遭受的損傷類型將產(chǎn)生相同的標(biāo)記蛋白質(zhì)結(jié)果。這意味著標(biāo)記蛋白質(zhì)片段指示毛發(fā)損傷的類型或來源。漂白引起的毛發(fā)損傷導(dǎo)致特定的標(biāo)記蛋白質(zhì)片段，UV引起的毛發(fā)損傷導(dǎo)致特定的標(biāo)記蛋白質(zhì)片段等。據(jù)信漂白引起的毛發(fā)損傷導(dǎo)致蛋白質(zhì)片段N-末端的+28和+71修飾，所述蛋白質(zhì)
片段具有以下結(jié)構(gòu)
權(quán)利要求
1.一種將毛發(fā)損傷類型或來源與標(biāo)記蛋白質(zhì)片段相關(guān)聯(lián)的方法，所述方法包括 a)產(chǎn)生兩種相同的毛發(fā)樣品樣品A和樣品B； b)向樣品A施用損傷組合物或處理劑；向樣品B施用無損傷組合物或處理劑； c)使用合適的溶劑樣品從樣品A和樣品B的每個(gè)中提 取不穩(wěn)定蛋白質(zhì)； d)用MALDI-MS分析來自樣品A和樣品B的蛋白質(zhì)片段樣品； e)比較樣品A和樣品B的MALDI-MS結(jié)果； f)通過鑒定存在于樣品A中而不存在于樣品B中的獨(dú)特修飾模式來鑒定所述標(biāo)記蛋白質(zhì)片段。
2.如權(quán)利要求I所述的方法，其中MALDI-MS在蛋白質(zhì)的酶消化后進(jìn)行。
3.如權(quán)利要求I所述的方法，其中MALDI-MS在不發(fā)生蛋白質(zhì)的酶消化的情況下進(jìn)行。
4.一種用于展示毛發(fā)損傷類型或來源的方法，所述方法包括 a)使用合適的溶劑從毛發(fā)樣品中提取不穩(wěn)定蛋白質(zhì)； b)用MALDI-MS分析所述蛋白質(zhì)片段樣品；得到蛋白質(zhì)片段結(jié)果； c)通過比較所述蛋白質(zhì)片段結(jié)果與對(duì)于特定損傷的標(biāo)記蛋白質(zhì)片段列表來鑒定所述毛發(fā)損傷。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述MALDI-MS蛋白質(zhì)片段結(jié)果包括對(duì)具有以下結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)片段的N-末端的a+28和+71修飾，所述蛋白質(zhì)片段
全文摘要
本發(fā)明公開了用于展示毛發(fā)損傷類型和/或來源的方法的實(shí)施方案，該實(shí)施方案包括用水溶液從毛發(fā)樣品中提取蛋白質(zhì)片段、用MALDI-MS測(cè)試法測(cè)試所得蛋白質(zhì)片段、然后比較損傷的樣品和未損傷的樣品之間的結(jié)果或比較損傷的樣品和已知的標(biāo)記蛋白質(zhì)片段列表之間的結(jié)果，以鑒定損傷類型和/或來源。
文檔編號(hào)G01N33/68GK102893160SQ201180024698
公開日2013年1月23日 申請(qǐng)日期2011年5月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月17日
發(fā)明者M.G.戴維斯, M.J.弗拉格勒, Y.孫, T.喬德哈里 申請(qǐng)人:寶潔公司