專利名稱：檢測(cè)克倫特羅的磁顆?；瘜W(xué)發(fā)光試劑盒及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用法，特別是檢測(cè)動(dòng)物組織、尿液、飼料等樣本中克倫羅殘留量的磁顆粒化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒。
背景技術(shù)：
克倫特羅(Clenbuterol)屬于β -興奮劑，近年來(lái)被非法添加到飼料中以提高脂肪型動(dòng)物的瘦肉率和加速動(dòng)物生長(zhǎng)，而被廣泛添加于動(dòng)物飼料中，并且可以殘留在動(dòng)物體內(nèi)。然而這種藥物對(duì)人有嚴(yán)重的副作用。輕則導(dǎo)致心跳心律不正常，重則可引發(fā)心臟病。目前，我國(guó)及許多國(guó)家已禁止其作為飼料添加劑使用。目前，主要采用高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜-質(zhì)譜法(LC-MS)、氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MQ和酶聯(lián)免疫法(ELISA)等方法用于動(dòng)物源性食品中克倫特羅殘留檢測(cè)。1、高效液相色譜法(HPLC)具有檢測(cè)精度高、假陽(yáng)性率低的特點(diǎn)，檢測(cè)克倫特羅殘留的最低檢測(cè)限為1 15μ g/kg。HPLC法的主要缺點(diǎn)是儀器價(jià)格昂貴，操作比較繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)，檢測(cè)費(fèi)用昂貴，對(duì)檢測(cè)人員專業(yè)要求較高，樣本前處理較復(fù)雜。2、氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)靈敏度很高，假陽(yáng)性率低。該方法的主要缺點(diǎn)是樣品需要衍生化這樣復(fù)雜的前期處理。雖然經(jīng)過(guò)衍生化處理的樣品能在質(zhì)譜中給出更多的結(jié)構(gòu)信息，但是衍生化會(huì)產(chǎn)生多個(gè)不同的產(chǎn)物并導(dǎo)致樣品的部分丟失，造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果的偏差。3、液相色譜-質(zhì)譜法(LC-MQ，樣品不需要衍生化處理，可對(duì)尿液、血液、肝臟、毛發(fā)和眼球樣品進(jìn)行檢測(cè)。該方法對(duì)克倫特羅的最低檢測(cè)限達(dá)到0. lyg/kg，LC-MS/MS聯(lián)用， 可進(jìn)ー步提高信噪比，所以可用于對(duì)陽(yáng)性結(jié)果的確認(rèn)手段。但是，無(wú)論LC-MS還是LC-MS/ MS,儀器檢測(cè)法與GC-MS —祥，并未能解決儀器造價(jià)昂貴，操作步驟繁瑣，樣本前處理復(fù)雜， 對(duì)操作人員專業(yè)素養(yǎng)要求高等問(wèn)題。4、酶聯(lián)免疫法(ELISA)是20世紀(jì)70年代出現(xiàn)，用于微量物質(zhì)的檢測(cè)，最早應(yīng)用于傳染病、腫瘤標(biāo)志物、激素水平等臨床檢測(cè)，90年代開始在我國(guó)食品安全檢測(cè)領(lǐng)域推廣應(yīng)用，目前依托ELISA技術(shù)的試劑盒、試紙條已經(jīng)成為食品安全快速檢測(cè)領(lǐng)域的主導(dǎo)產(chǎn)品，同時(shí)也是我公司研發(fā)和銷售的主要產(chǎn)品類型。酶聯(lián)免疫檢測(cè)法基于抗原-抗體的特異性反應(yīng)，檢測(cè)靈敏度較高、特異性較好，技術(shù)操作簡(jiǎn)易，容易掌握，確實(shí)解決了大量的以前難以解決的許多微量小分子物質(zhì)如抗生素、激素、農(nóng)藥殘留等的定性、定量分析工作，對(duì)食品安全快速檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展起到了積極的促進(jìn)作用。但是，ELISA方法存在許多自身無(wú)法克服的缺陷，主要表現(xiàn)在1)非均相反應(yīng)檢測(cè)過(guò)程中為分離游離物與結(jié)合物，需要多步洗板過(guò)程，耗時(shí)費(fèi)力，難以提高操作的自動(dòng)化程度。2)酶催化反應(yīng)借助酶催化底物顯色，測(cè)定反應(yīng)液吸光度值。反應(yīng)的時(shí)間與溫度對(duì)酶活力存在較大影響，試劑穩(wěn)定性差。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種克倫特羅檢測(cè)試劑盒，采用該試劑盒進(jìn)行克倫特羅的檢測(cè)時(shí)不僅具備較高的靈敏度，特異性，而且具有較高的反應(yīng)速度。本發(fā)明的另ー個(gè)目的在于提供ー種克倫特羅的測(cè)試方法，該方法操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，特異性好。實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種克倫特羅檢測(cè)試劑盒，其包含的主要試劑有發(fā)光標(biāo)記物、熒光素標(biāo)記物、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品、分離試劑。所述的分離試劑是包被有羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠。所述的順磁性納米微珠，表面含有-OH、-COOH或-NH2活性基團(tuán)的微珠，用于包被羊抗FITC單克隆抗體，其內(nèi)芯是!^e3O4或Y -Fe2O3，使得微珠具有順磁性。所述的發(fā)光標(biāo)記物是異魯米諾衍生物標(biāo)記的克倫特羅半抗原。所述的異魯米諾衍生物是 ABEI、AHEI 或 ABEN。所述的試劑盒還包括標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品和濃縮洗液。所述的熒光素標(biāo)記物是FITC標(biāo)記的克倫特羅單克隆抗體。本發(fā)明還提供ー種利用試劑盒檢測(cè)克倫特羅的方法，包括下列步驟1)分別吸取20 μ 1-100 μ 1標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，然后加入20 μ 1-100 μ 1發(fā)光標(biāo)記物，再加20 μ 1-100 μ 1熒光素標(biāo)記物，充分混勻后，37°C溫育15min ；2)加入包被有羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠80-150 μ 1，混勻后在37°C 溫育5min ；3)用磁分離架分離5min，棄上清后用清洗液300-500 μ 1沖洗復(fù)合物沉淀；4)上述清洗步驟重復(fù)2-4次；5) 4)所得分離好的復(fù)合物直接放入測(cè)量暗箱，加入激發(fā)底物1和激發(fā)底物2，延遲 3-5s后檢測(cè)發(fā)出的相對(duì)光強(qiáng)度(RLU)，樣本中的含量與RLU成一定比例關(guān)系，可以通過(guò)RLU 集合標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算克倫特羅的濃度。所述的發(fā)光底物的主要成分是NaOH和Η202。本發(fā)明中分析測(cè)試方法所用的分析儀是包括電源電路、自動(dòng)注射泵1和2、測(cè)量室、發(fā)光室、光電倍增管計(jì)數(shù)器和輸出系統(tǒng)，同時(shí)還配置有計(jì)算機(jī)與中文界面的Windows控制軟件，可進(jìn)行資料錄入、結(jié)果匯總、質(zhì)量控制、結(jié)果儲(chǔ)存和結(jié)果查詢等功能，可完成多種分析模式的編程，定量或定性報(bào)告結(jié)果，自動(dòng)生成并儲(chǔ)存、更新功能，兩點(diǎn)自動(dòng)修正標(biāo)準(zhǔn)曲線， 所采用的系統(tǒng)是CI-2008系統(tǒng)。本發(fā)明所述的分離試劑是包被羊抗FITC單克隆抗體，其表面基團(tuán)的含量是 0. 1-0. 3eqm/g,其保存于含有 0. 1-0. 5 % BSA, 0. 01-0. 1 % Tween-20,0. 02 % NaN3, pH7. 2-7. 6的PBS緩沖液中。所述的FITC是異硫氰酸熒光素。所述百分含量為質(zhì)量百分含里。所述的發(fā)光標(biāo)記物是異魯米諾衍生物ABEI、AHEI或ABEN標(biāo)記的克倫特羅半抗原標(biāo)記其保存于PH7. 2-7. 6，含0. 1-0. 3% Tween-20,0. 01% NaN3的PBS緩沖液中。所述百分
含量是質(zhì)量百分含量。所述的熒光素標(biāo)記物是FITC標(biāo)記的克倫特羅單克隆抗體，其保存于pH7. 2-7. 6， 含5-8% BSA,0. 02-0. 04% NaN3的PBS緩沖液。所述百分含量為質(zhì)量百分含量。
克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)品溶液(Ong/ml，0.Olng/ml，0. 03ng/ml，0. 09ng/ml，0. 27ng/ml， 0. 81ng/ml)，標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液為ρΗ7· 4,0. 03% NaN3,0. 05mol/L TRIS緩沖液。所述百分含量
為質(zhì)量百分含量?？藗愄亓_質(zhì)控品溶液濃度分別為0. 02ng/ml，0. 5ng/ml，質(zhì)控品稀釋液pH7. 4， 0. 03% NaN3,0. 05mol/L TRIS緩沖液。所述百分含量為質(zhì)量百分含量。所述的濃縮洗液為PH7. 2-7. 8,0. 2-0. 4 % Tween-20,0. 02-0. 04 % NaN3, 0. 1-0. 2mol/L PBS緩沖液。所述百分含量為質(zhì)量百分含量。本發(fā)明的有益效果如下1)本發(fā)明試劑盒可特異性檢測(cè)克侖特羅，對(duì)其他藥物無(wú)交叉。2)本發(fā)明試劑盒的靈敏度較高，對(duì)克侖特羅的檢測(cè)靈敏度可達(dá)0. Olng/ml。3)本發(fā)明試劑盒的檢測(cè)快捷，檢測(cè)時(shí)間低于20min。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1試劑盒具體組分的制備1、發(fā)光標(biāo)記物的制備a)克倫特羅半抗原的合成將克倫特羅用琥珀酸酐進(jìn)行?；磻?yīng)，把克倫特羅分子結(jié)構(gòu)上的醇羥基?；蔀楹?個(gè)碳的羧基間接臂的克倫特羅半抗原。b)發(fā)光標(biāo)記物制備取4. 5mmol/L ABEI，溶于4ml蒸餾水中，5. Ommol/L N-羥基琥珀酰亞胺溶于0. 5ml N，N-ニ甲基甲酰胺中，二者充分混勻后室溫反應(yīng)3-4h。取上述制備的克倫特羅半抗原 15mg，用pH7. 4PBS調(diào)節(jié)體積到1. 5ml，然后加入上述活化的ABEI溶液，充分混勻后室溫反應(yīng)過(guò)夜，過(guò)G-25凝膠柱純化。2、熒光標(biāo)記物制備a)免疫原的制備將克倫特羅半抗原與卵清蛋白采用混合酸酐法進(jìn)行偶聯(lián)得到免疫原。b)克倫特羅單克隆抗體的制備動(dòng)物免疫以免疫原對(duì)Balb/c小鼠進(jìn)行免疫，免疫劑量為150 μ g/只，使其產(chǎn)生抗血清。細(xì)胞融合和克隆化取免疫Balb/c小鼠脾細(xì)胞，按9 1比例與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合，得到單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。細(xì)胞凍存和復(fù)蘇將雜交瘤細(xì)胞用凍存液制成IX IO6個(gè)/ml的細(xì)胞懸液，在液氮中長(zhǎng)期保存。復(fù)蘇時(shí)取出凍存管，立即放入37°C水浴中速融，離心去除凍存液后，移入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)。單克隆抗體的制備與純化將Balb/c小鼠腹腔注入滅菌石蠟油0. 5ml/只，7天后腹腔注射雜交瘤細(xì)胞5X IO5個(gè)/只，7天后采集腹水。用辛酸-飽和硫酸銨法進(jìn)行純化，純化后的腹水放入-20°C環(huán)境保存。C)熒光標(biāo)記物制備用0. 025mol/L, pH9. O的碳酸鹽緩沖液將克倫特羅單克隆抗體稀釋成質(zhì)量百分比濃度；根據(jù)欲標(biāo)記的蛋白質(zhì)總量，按每毫克免疫球蛋白加0. Olmg FITC，用分析天平準(zhǔn)確稱取所需的FITC粉末。用同一緩沖液將FITC配成0. lmg/ml的溶液，按上述抗體溶液體積的3-5倍，混入FITC稀釋液；在4 。C避光條件下電磁攪拌、標(biāo)記30-4 ；將標(biāo)記溶液 3000r/min，室溫離心20min，除去其中少量的沉淀物，裝入透析袋中，再pH7. 4的PBS緩沖液透析2-3天，期間至少更換透析液3次；取透析過(guò)夜的標(biāo)記物，通過(guò)kphadexG-25或G-50 柱，分離游離熒光素，收集標(biāo)記的熒光標(biāo)記物進(jìn)行鑒定，分裝，貯存于4°C冰箱中。3、分離試劑制備a)磁珠活化表面-COOH基團(tuán)的磁珠(購(gòu)于DYNAL，粒徑為2. 8 μ m)，其含量是0. 15eq/g;取 100 μ 1 磁珠，用 100 μ 1 25mmol/L, ρΗ5· 0,0. 05% Tween_20MES 溶液洗滌兩次，磁分離后移除上清；使用前，用4°C貯存的25mmol/L MES溶液分別配置50mmol/L的EDC、NHS溶液；分別加入50 μ 1新配置的EDC和NHS溶液到裝有磁珠的離心管中，渦旋混勻，室溫活化30min ； 離心管置于磁分離架上磁分離鈿化，移除上清，加入100 μ 1，25mmol/L，pH5. 0，MES清洗2-3 次后即可得表面羧基活化的磁珠。b)磁珠偶聯(lián)羊抗FITC單克隆抗體將50-100 μ g羊抗FITC單克隆抗體溶解到60 μ 1，25mmol/L, pH5. OMES中，用所述 MES溶液調(diào)節(jié)總體積至100 μ 1，輕柔混勻磁珠與抗體；室溫條件下至少偶聯(lián)30min或4。C偶聯(lián)2h，該期間可利用渦旋儀使磁珠保持混勻狀態(tài)；離心管置于磁分離架上磁分離3-5min， 移除上清；為了淬滅未反應(yīng)的-C00H，可加入100 μ 1，ρΗ7. 4，TRIS反應(yīng)15min或100μ 1， ρΗ8· 0，含有 50mmol/L 乙醇胺的 PBS 封閉磁珠；用 100 μ 1,0. 1-0. 3% BSA,0. 1% Tween-20 的PBS或TRIS清洗封閉好的磁珠3-5次；最后將磁珠復(fù)溶于含0. 1-0. 5% BSA, 0. 01-0. 1 % Tween-20,0. 02% NaN3 的 PBS 或 TRIS 緩沖液中，2_8°C保藏。實(shí)施例ニ試劑盒的組建組建檢測(cè)克倫特羅的磁顆?；瘜W(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，使其含有下列組分FITC標(biāo)記的克倫特羅單克隆抗體的熒光標(biāo)記物ABEI標(biāo)記的克倫特羅半抗原的發(fā)光標(biāo)記物表面包被羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微球的分離試劑克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)品溶液(Ong/ml，0.01ng/ml，0. 03ng/ml，0. 09ng/ml，0. 27ng/ml， 0. 81ng/ml)，標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液為ρΗ7· 4，含有0. 03% NaN3,0. 05mol/L TRIS緩沖液。所述百分含量為質(zhì)量百分含量。克倫特羅質(zhì)控品溶液濃度分別為0. 02ng/ml,0. 5ng/ml，質(zhì)控品稀釋液pH7. 4，含有0. 03% NaN3,0. 05mol/L TRIS緩沖液。所述百分含量為質(zhì)量百分含量。濃縮洗液為ρΗ7· 6,0. 4% Tween-20,0. 02% NaN3,0. lmol/L PBS 緩沖液。所述百分含量為質(zhì)量百分含量。實(shí)施例三實(shí)際樣品中克倫特羅的檢測(cè)1、樣本前處理(一 )尿液取20 μ 1清亮尿樣直接測(cè)定(如尿樣渾濁必須通過(guò)過(guò)濾或3000g以上，15°C離心 IOmin直至清亮)，暫不使用的樣本應(yīng)冷凍保存，樣品稀釋倍數(shù)1
( ニ )組織帶有低脂肪的肉、肝等組織稱取2. 0士0. 05g均質(zhì)樣本至50ml聚苯乙烯離心管中；加入6ml 4% NaCl-O. IM HCl-甲醇混合液，用振蕩器振蕩搖至均勻；靜置10分鐘，3000g以上離心5分鐘；肝臟樣本 取Iml上清液加入20 μ 1 IM氫氧化鈉溶液混勻(混勻以后測(cè)定ρΗ值，大約為8)；肌肉樣本取Iml上清液加入30 μ 1 IM氫氧化鈉溶液混勻(混勻以后測(cè)定ρΗ值，大約為8)；取 20μ 1用于分析，樣品稀釋倍數(shù)1(三)飼料用研缽研碎飼料樣本，稱取2. 0士0. 05g研碎的樣本至50ml聚苯乙烯離心管中，加入aiil IM鹽酸溶液，加入16ml去離子水用均質(zhì)器進(jìn)行均質(zhì)；用渦旋儀渦動(dòng)3min，放振蕩器上振蕩15min ；3000g以上，離心20min，轉(zhuǎn)移出全部上清液至IOml聚苯乙烯離心管中，并加入aiil IM氫氧化鈉溶液混合均勻，檢查ρΗ值是否在6. 5-7. 5之間；(用鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值)；3000g以上，離心20min，取100 μ 1上清液至2ml干凈的聚苯乙烯離心管中， 加入900 μ 1去離子水混合均勻；取20 μ 1用于分析，樣品稀釋倍數(shù)100(四)牛奶取100 μ 1牛奶樣本，加入400 μ 1 4%氯化鈉溶液，渦動(dòng)混勻，取20 μ 1用于分析，
樣品稀釋倍數(shù)5。2、用試劑盒檢測(cè)與結(jié)果分析分別吸取20 μ 1-100 μ 1標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，然后加入20 μ 1_100 μ 1發(fā)光標(biāo)記物，再加 20μ 1-100μ 1熒光素標(biāo)記物，充分混勻后，37°C溫育15min ；加入包被有羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠80-150 μ 1，混勻后在37°C溫育5min ；用磁分離架分離5min，棄上清后用清洗液300-500 μ 1沖洗復(fù)合物沉淀；所得分離好的復(fù)合物直接放入測(cè)量暗箱，加入激發(fā)底物1和激發(fā)底物2，延遲3- 后檢測(cè)發(fā)出的相對(duì)光強(qiáng)度(RLU)，樣本中克倫特羅的含量與 RLU成一定比例關(guān)系，可以通過(guò)RLU結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算克倫特羅的濃度。激發(fā)底物1是NaOH，激發(fā)底物2是H202。底物裝載前，用蒸餾水清洗底物泵10_20 遍，排空管道內(nèi)殘存的水跡后，再將相應(yīng)的底物直接放入儀器內(nèi)，將泵管插入底物瓶中；用底物沖洗管道5次，并測(cè)定底物的RLU值，正常情況下，底物的RLU值不應(yīng)超過(guò)1200。若超過(guò)1200，需重新用蒸餾水對(duì)管道和底物泵進(jìn)行更多次清洗，直至空白值降至合理范圍內(nèi)。若超過(guò)三天不做實(shí)驗(yàn)，需卸載底物瓶，并蓋上蓋子，以防蒸發(fā)。隨后用蒸餾水清洗管道，并排空，以免強(qiáng)堿溶液腐蝕底物泵。本發(fā)明采用6 個(gè)克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)品(Ong/ml, 0. 0lng/ml, 0. 03ng/ml, 0. 09ng/ml, 0. 27ng/ml,0. 81ng/ml)進(jìn)行曲線測(cè)繪。儀器根據(jù)所述方法檢測(cè)得到一條RLU值與克倫特羅濃度相關(guān)的定標(biāo)曲線，此后測(cè)量中，每ー個(gè)樣本中的克倫特羅濃度與標(biāo)準(zhǔn)曲線相比較得出樣本中的克倫特羅含量。實(shí)施例四試劑盒質(zhì)量的測(cè)定1、試劑盒的靈敏度試劑盒靈敏度的定義為測(cè)定20次零標(biāo)準(zhǔn)品，測(cè)定的平均值加上3倍標(biāo)準(zhǔn)差。該試劑盒的靈敏度為0. 0lng/ml 02、樣本的準(zhǔn)確度和精密度準(zhǔn)確度是指測(cè)定值與真值間的符合程度，試劑盒準(zhǔn)確度常用回收率表示。精密度又稱可重復(fù)性，常用變異系數(shù)表示。按照實(shí)施例三的樣本提取方法，以0. 05ng/g(ml)、0. lng/g(ml)兩個(gè)濃度的克倫特羅分別對(duì)豬尿、豬肝、豬肉進(jìn)行添加，以2ng/g3ng/g兩個(gè)濃度的克倫特羅對(duì)飼料樣本進(jìn)行添加、以0. lng/ml,0. 2ng/ml兩個(gè)濃度的克倫特羅對(duì)牛奶樣本進(jìn)行添加回收，每種樣本每個(gè)濃度各4個(gè)平行，用三批試劑盒進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算樣本的平均回收率及精密度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表。表1準(zhǔn)確度和精密度測(cè)定ng/g (ml)
權(quán)利要求
1.ー種檢測(cè)克倫特羅的磁顆?；瘜W(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，包括的試劑有發(fā)光標(biāo)記物、熒光素標(biāo)記物、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品、分離試劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的分離試劑是包被有羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于所述的順磁性納米微珠是里面包覆有 Fe3O4或γ -Fe2O3，表面含有_0H、-COOH或-NH2活性基團(tuán)的微珠。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的試劑盒，其特征在于所述的發(fā)光標(biāo)記物是異魯米諾衍生物標(biāo)記的克倫特羅半抗原。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于所述的異魯米諾發(fā)光標(biāo)記物是ABEI、 AHEI 或 ABEN。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的試劑盒，其特征在于所述的試劑盒還包括標(biāo)準(zhǔn)液、 質(zhì)控品和濃縮洗液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-3之一所述的試劑盒，其特征在于所述的熒光素標(biāo)記物是FITC標(biāo)記的克倫特羅單克隆抗體。
8.ー種利用權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的試劑盒檢測(cè)克倫特羅的方法，包括下列步驟1)分別吸取20μ1_100μ1標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，然后加入20μ1_100μ1發(fā)光標(biāo)記物，再加 20μ1-100μ1熒光素標(biāo)記物，充分混勻后，37°C溫育15min ；2)加入包被有羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠80-150μ1，混勻后在37°C溫育 5min ；3)用磁分離架分離5min，棄上清后用清洗液300_500μ1沖洗復(fù)合物沉淀；4)上述清洗步驟重復(fù)2-4次；5)4)所得分離好的復(fù)合物直接放入測(cè)量暗箱，加入激發(fā)底物1和激發(fā)底物2，延遲 3- 后檢測(cè)發(fā)出的相對(duì)光強(qiáng)度(RLU)，樣本中克倫特羅的含量與RLU成一定比例關(guān)系，可以通過(guò)RLU集合標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算克倫特羅的濃度。
全文摘要
本發(fā)明涉及檢測(cè)克倫特羅的磁顆?；瘜W(xué)發(fā)光試劑盒，包括的試劑有發(fā)光標(biāo)記物、熒光素標(biāo)記物、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品、分離試劑。發(fā)光標(biāo)記物是異魯米諾發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的克倫特羅半抗原，熒光標(biāo)記物是指熒光素或其衍生物標(biāo)記的克倫特羅單克隆抗體，分離試劑是指包被有羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠。本發(fā)明還涉及一種采用所述的試劑盒檢測(cè)動(dòng)物源性食品中克倫特羅的方法，本方法對(duì)克倫特羅檢測(cè)具備較高的靈敏度、特異性和較快的檢測(cè)速度。
文檔編號(hào)G01N21/76GK102539412SQ201010588988
公開日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2010年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月15日
發(fā)明者萬(wàn)宇平, 何麗霞, 何方洋, 馮才偉, 張禹, 徐恩寧, 朱亮, 李勇, 楊昌松, 湯慶彩 申請(qǐng)人:北京勤邦生物技術(shù)有限公司