專利名稱：一種采用高效液相色譜檢測(cè)功能啤酒中?；撬岬姆椒?br> 技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于啤酒質(zhì)量評(píng)價(jià)技術(shù)領(lǐng)域，更詳細(xì)地說(shuō)，涉及用于檢測(cè)功能啤酒中?；?酸的高效液相色譜法。
背景技術(shù)：
牛磺酸(Taurine)是一種廣泛存在于人和動(dòng)物體內(nèi)的含硫？氨基酸，早在1827年 就被從牛的膽汁中發(fā)現(xiàn)并分離出來(lái)，并因此而得名。牛磺酸作為人體內(nèi)一種條件性必需氨 基酸有著廣泛的生物學(xué)活性，是調(diào)節(jié)機(jī)體正常生理功能的重要物質(zhì)。研究表明，?；撬嵋蚱?對(duì)運(yùn)動(dòng)機(jī)體內(nèi)的自由基代謝、Ca2+轉(zhuǎn)運(yùn)等具有良好的調(diào)節(jié)作用，從而表現(xiàn)出良好的抗運(yùn)動(dòng)疲 勞效果。目前，市場(chǎng)上已推出了多種添加?；撬岬墓δ茱嬈?，如含有?；撬岬倪\(yùn)動(dòng)啤酒、運(yùn) 動(dòng)飲料等為對(duì)這些功能啤酒進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制，需要建立準(zhǔn)確的啤酒中?；撬釡y(cè)定方 法。目前定量檢測(cè)食品中?；撬岷砍Ｓ玫姆椒ㄓ兴釅A滴定法、氨基酸自動(dòng)分析法、薄層色 譜法和高效液相色譜法等，而專門(mén)針對(duì)啤酒檢測(cè)的多為熒光光度法，其它方法沒(méi)有應(yīng)用到 啤酒檢測(cè)，由于各種方法和樣品的差異性，在樣品前處理、分析步驟以及所使用的試劑等方 面都有所不同。熒光光度法采用強(qiáng)酸性陽(yáng)離子樹(shù)脂分離出啤酒中的牛磺酸，與鄰苯二 甲醛(OPA)/2巰基乙醇衍生化后進(jìn)行熒光法測(cè)定。由于?；撬崾腔腔被?(NH2-CH2-CH2-SO3H)，含有磺酸根(SO3H)，與樹(shù)脂結(jié)合最不緊密，當(dāng)經(jīng)過(guò)陽(yáng)離子樹(shù)脂柱的時(shí)候 首先被洗脫下來(lái)，可能存在樣品中與樹(shù)脂結(jié)合較弱的其它氨基酸共流出，從而導(dǎo)致測(cè)定值 偏高。此外，陽(yáng)離子樹(shù)脂處理操作較為繁瑣，不利于常規(guī)檢測(cè)。而且由于啤酒中存在幾十種 不同種類(lèi)的游離氨基酸，易對(duì)?；撬岬臋z測(cè)產(chǎn)生干擾，僅靠單一的熒光光度法很難將?；?酸從其它氨基酸中完全分離，從而影響其準(zhǔn)確定量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是建立一種能對(duì)功能啤酒中?；撬徇M(jìn)行準(zhǔn)確定性和定量的高效液 相色譜法，用于該類(lèi)型啤酒的質(zhì)量控制。本發(fā)明采用高效液相色譜法(英文簡(jiǎn)稱HPLC)，利 用6-氨基喹啉基-N-羥基琥珀酰亞氨基甲酸酯(英文縮寫(xiě)AQC)柱前衍生，二極管陣列或 紫外檢測(cè)器和熒光檢測(cè)器串聯(lián)檢測(cè)，通過(guò)調(diào)節(jié)緩沖液濃度、PH以及溶劑梯度淋洗，實(shí)現(xiàn)啤酒 中?；撬崤c其它氨基酸的完全分離，從而對(duì)其進(jìn)行準(zhǔn)確定性和定量。本發(fā)明所述的一種采用高效液相色譜檢測(cè)功能啤酒中?；撬岬姆椒?，包括下述步 驟(一)衍生前處理程序6-氨基喹啉基-N-羥基琥珀酰亞氨基甲酸酯(AQC)柱前衍生；本發(fā)明還包括下述步驟( 二)梯度洗脫程序流動(dòng)相A為139. 92mmol/L三水乙酸鈉+16. 39mmol/L三乙 胺的緩沖液，用50%磷酸調(diào)節(jié)pH至4. 98，流動(dòng)相B為純水，流動(dòng)相C為乙腈，分別針對(duì)標(biāo)樣 和啤酒樣品優(yōu)化梯度洗脫程序，使得?；撬崤c啤酒中其它干擾物質(zhì)完全分離；
(三)色譜分析和數(shù)據(jù)處理程序樣品分析所使用的色譜柱為美國(guó)Waters公司的AccQ-Tag氨基酸分析C18柱， 3. 9mm*50mm，4um，將待測(cè)啤酒和牛磺酸標(biāo)樣譜圖對(duì)比，以保留時(shí)間定性，色譜峰峰面積定
量，計(jì)算公式如下
權(quán)利要求
1.一種采用高效液相色譜檢測(cè)功能啤酒中牛磺酸的方法，其特征是包括下述步驟 (一)衍生前處理程序6-氨基喹啉基-N-羥基琥珀酰亞氨基甲酸酯柱前衍生。
2.如權(quán)利要求1所述的一種采用高效液相色譜檢測(cè)功能啤酒中?；撬岬姆椒?，其特征 是還包括(二)梯度洗脫程序流動(dòng)相A為139. 92mmol/L三水乙酸鈉+16. 39mmol/L三乙 胺的緩沖液，用50%磷酸調(diào)節(jié)pH至4. 98，流動(dòng)相B為純水，流動(dòng)相C為乙腈，分別針對(duì)標(biāo)樣 和啤酒樣品優(yōu)化梯度洗脫程序，使得?；撬崤c啤酒中其它干擾物質(zhì)完全分離；(三)色譜分析和數(shù)據(jù)處理程序樣品分析所使用的色譜柱為美國(guó)Waters公司的AccQ-Tag氨基酸分析C18柱， 3. 9mm*50mm，4um,將待測(cè)啤酒和?；撬針?biāo)樣譜圖對(duì)比，以保留時(shí)間定性，色譜峰峰面積定量。
3.如權(quán)利要求2所述的一種采用高效液相色譜檢測(cè)功能啤酒中?；撬岬姆椒?，其特 征是所述的步驟(二)梯度洗脫程序?yàn)?1) (To. 5分鐘內(nèi)，流動(dòng)相為100%緩沖液A，進(jìn)行 等度洗脫；(2)0. 5分鐘時(shí)，流動(dòng)相瞬間切換為99%緩沖液A+1%乙腈；(3)0. 5 27. 0分鐘， 流動(dòng)相由99%緩沖液A+1%乙腈線性變換為95%緩沖液A+5%乙腈，逐漸增大有機(jī)相(乙 腈)比例以減小流動(dòng)相極性；(4) 27. (Γ33. 0分鐘，遵循曲線8所代表的為非線性換相方式， 流動(dòng)相由95%緩沖液A+5%乙腈逐漸變換為91 %緩沖液A+9%乙腈，進(jìn)一步減小流動(dòng)相 極性，使在色譜柱上保留較強(qiáng)的組分洗脫下來(lái)；(5)33. (Γ33. 5分鐘，流動(dòng)相由91%緩沖液 A+9%乙腈線性變換為60%純水+40%乙腈，開(kāi)始沖洗色譜柱；(6) 33. 5^34. 0分鐘，流動(dòng)相 從60 %純水A+40 %乙腈變?yōu)?0 %純水+60 %乙腈，進(jìn)一步加大有機(jī)相比例以增強(qiáng)沖洗強(qiáng) 度；(7) 34. 0 37· 0分鐘，以40%純水+60%乙腈沖洗色譜柱3分鐘；(8) 37. 1分鐘，流動(dòng)相變 換為100%緩沖液A，開(kāi)始平衡色譜柱；(9)37.廣45. 0分鐘，以100%緩沖液A平衡色譜柱至 初始狀態(tài)，為分析下一個(gè)樣品做好準(zhǔn)備。
4.如權(quán)利要求2或3所述的一種采用高效液相色譜檢測(cè)功能啤酒中牛磺酸的方法，其 特征是步驟(二)前包括二極管陣列或紫外和熒光雙檢測(cè)器串聯(lián)檢測(cè)程序，即將二極管陣 列或紫外檢測(cè)器和熒光檢測(cè)器串聯(lián)在色譜柱后，樣品中的?；撬嵫苌a(chǎn)物與其它干擾物質(zhì) 在色譜柱上實(shí)現(xiàn)分離，并依次通過(guò)二極管陣列或紫外檢測(cè)器和熒光檢測(cè)器，分別利用待測(cè) 物質(zhì)的紫外和熒光特性進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)?；撬岬碾p重定性和定量。
5.如權(quán)利要求2或3所述的一種采用高效液相色譜檢測(cè)功能啤酒中?；撬岬姆椒?，其 特征是步驟(三)計(jì)算公式如下式中C樣——待測(cè)啤酒中牛磺酸的含量，mg/L ； Cfe標(biāo)樣中?；撬岬暮浚琺g/L;A#------待測(cè)啤酒中?；撬岬姆迕娣e；A標(biāo)------標(biāo)樣中?；撬岬姆迕娣e；f——待測(cè)啤酒的稀釋因子。
6.如權(quán)利要求2或3所述的一種采用高效液相色譜檢測(cè)功能啤酒中?；撬岬姆椒?，其 特征是步驟(三)后包括驗(yàn)證程序，方法評(píng)價(jià)指標(biāo)包括加標(biāo)回收率、重現(xiàn)性和最小檢出限等達(dá)到啤酒樣品的分析要求。
全文摘要
一種采用高效液相色譜檢測(cè)功能啤酒中?；撬岬姆椒ǎㄏ率霾襟E(一)衍生前處理程序6-氨基喹啉基-N-羥基琥珀酰亞氨基甲酸酯柱前衍生；(二)梯度洗脫程序流動(dòng)相A為139.92mmol/L三水乙酸鈉+16.39mmol/L三乙胺的緩沖液，用50％磷酸調(diào)節(jié)pH至4.98，分別針對(duì)標(biāo)樣和啤酒樣品優(yōu)化梯度洗脫程序，使得牛磺酸與啤酒中其它干擾物質(zhì)完全分離，樣品分析所使用的色譜柱為美國(guó)Waters公司的AccQ-Tag氨基酸分析C18柱，3.9mm*50mm，4um；(三)數(shù)據(jù)處理程序?qū)⒋郎y(cè)啤酒和牛磺酸標(biāo)樣譜圖對(duì)比，以保留時(shí)間定性，色譜峰峰面積定量。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了啤酒中?；撬崤c其它氨基酸的完全分離，從而對(duì)其進(jìn)行準(zhǔn)確定性和定量。方法操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確可靠，具有較高的靈敏度。
文檔編號(hào)G01N30/02GK102147397SQ201010301398
公開(kāi)日2011年8月10日 申請(qǐng)日期2010年2月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月9日
發(fā)明者單連菊, 李梅, 楊朝霞, 楊梅, 董建軍, 郝俊光 申請(qǐng)人:青島啤酒股份有限公司