專利名稱：一種動(dòng)物源性食品中多種堿性藥物殘留量的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及分析化學(xué)、食品安全領(lǐng)域，具體地說(shuō)，是一種動(dòng)物源性食品中多種堿性 藥物殘留量的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
伴隨人們對(duì)動(dòng)物源性食品需求量的增加，近20年來(lái)，獸藥(包括飼料藥物添加劑) 在畜牧業(yè)中的應(yīng)用日益廣泛，而動(dòng)物性食品中的獸藥殘留問(wèn)題也逐漸成為目前人們普遍關(guān) 注的社會(huì)焦點(diǎn)。目前非法使用違禁藥物、濫用抗菌藥和藥物添加劑等，已經(jīng)是造成我國(guó)動(dòng)物 源性食品中獸藥殘留超標(biāo)，引起畜禽產(chǎn)品安全問(wèn)題的主要原因。藥物殘留可以直接引發(fā)對(duì) 人體的急慢性中毒、過(guò)敏和變態(tài)反應(yīng)，并通過(guò)環(huán)境和食物鏈的作用間接對(duì)人體導(dǎo)致潛在危 害，有關(guān)獸藥殘留問(wèn)題引發(fā)的進(jìn)出口貿(mào)易糾紛的報(bào)道不斷發(fā)生，對(duì)我國(guó)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展產(chǎn)生了 很多的負(fù)面影響。食品添加劑聯(lián)合委員會(huì)(JECFA)將獸藥按照功能分為七類抗生素類、驅(qū)腸蟲類、 生長(zhǎng)促進(jìn)劑類、抗原蟲藥類、滅錐蟲藥類、苯二氮卓類和腎上腺素受體阻斷劑。其中涉 及到的獸藥種類繁多，化合物結(jié)構(gòu)差異較大，這對(duì)開(kāi)發(fā)相關(guān)的分析檢測(cè)方法帶來(lái)了極大的 難度和挑戰(zhàn)。通常通過(guò)簡(jiǎn)化樣品前處理流程、采用新型快速、靈敏的儀器設(shè)備(如超高效液 相色譜_串聯(lián)質(zhì)譜等)來(lái)提高方法的效率，同時(shí)開(kāi)發(fā)多殘留同時(shí)檢測(cè)方法也是一個(gè)常用的 解決手段。在現(xiàn)代農(nóng)藥檢測(cè)領(lǐng)域，多殘留同時(shí)分析已經(jīng)成為開(kāi)發(fā)相關(guān)檢測(cè)方法的趨勢(shì)，對(duì)化 合物種類的覆蓋也逐漸擴(kuò)展和完善。對(duì)于獸藥而言，由于性質(zhì)差別較大，現(xiàn)有的多殘留分析 一般限于化學(xué)結(jié)構(gòu)類似的同族藥物來(lái)開(kāi)發(fā)相應(yīng)的方法，其所能同時(shí)分析的藥物種類比較有 限，遠(yuǎn)不能滿足目前獸藥種類不斷增加的需求。目前，國(guó)內(nèi)還沒(méi)有能同時(shí)分析不同類別獸藥 的方法的報(bào)道。獸藥相當(dāng)一部分種類的化合物都具有氨基、亞氨基等類似官能基團(tuán)，能與游離質(zhì) 子相互作用為復(fù)合陽(yáng)離子形態(tài)，我們稱為堿性獸藥，例如磺胺類、β “興奮劑、硝基咪唑類、 三苯甲烷類、苯并咪唑類、苯二氮卓類藥物，對(duì)它們的分析方法均為同類藥物的多殘留檢測(cè) 方法，采用方法多為GC-MS、HPLC和HPLC-MS等。GC-MS檢測(cè)時(shí)某些熱不穩(wěn)定化合物會(huì)分解， 進(jìn)樣前需要衍生化，步驟比較繁瑣。HPLC方法由于檢測(cè)器的限制，對(duì)待分析的各個(gè)組分和 干擾雜質(zhì)的分離要求較高，而且受靈敏度限制對(duì)于某些禁用藥物的不能滿足檢檢測(cè)限量要 求。伴隨LC-MS技術(shù)的快速發(fā)展，為復(fù)雜基質(zhì)樣品和多殘留定性和定量分析提供了強(qiáng)有力 的手段，但目前國(guó)內(nèi)在方法的開(kāi)發(fā)上多限于同一族類物質(zhì)，還沒(méi)有采用HPLC-MS進(jìn)行跨類 同時(shí)檢測(cè)的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有方法的不足，建立一種動(dòng)物源性食品中多種堿性藥物 殘留量的檢測(cè)方法，以方便、快捷、準(zhǔn)確、高效地同時(shí)檢測(cè)動(dòng)物源性食品中76種獸藥(見(jiàn)表 1，受體激動(dòng)劑類、磺胺類、苯二氮卓類、硝基咪唑類、苯并咪唑類、三苯甲烷類)的殘留量。表1 76種堿性獸藥標(biāo)準(zhǔn)品信息
權(quán)利要求
一種動(dòng)物源性食品中多種堿性獸藥殘留量的檢測(cè)方法，其特征在于包括以下步驟(1)樣品提取準(zhǔn)確稱取2 5g均勻試樣，于50mL塑料離心管中，加入15 30mL乙腈、1 2mL異丙醇和5 10mL檸檬酸緩沖溶液，在2000r/min下渦旋混合提取5min，4000r/min離心5min，上清液轉(zhuǎn)移至250mL梨形瓶中；沉淀重復(fù)上述提取操作，合并提取液，加入3 6mL異丙醇后在40±2℃的溫度下旋轉(zhuǎn)濃縮至5mL左右，轉(zhuǎn)移濃縮液至50mL塑料離心管中，并用5mL檸檬酸緩沖液潤(rùn)洗梨形瓶，合并洗液，在4℃下8500r/min冷凍離心10min，濾膜過(guò)濾后待用；(2)提取液凈化將固相萃取柱裝好，依次用3 6mL甲醇、3 6mL水和3 6mL檸檬酸緩沖液活化；轉(zhuǎn)移待凈化液至固相萃取柱的頂部，以0.5mL/min流速過(guò)柱；用2 3mL檸檬酸緩沖液、2 3mL水、2 3mL水 甲醇溶液淋洗柱，低真空抽干后，依次用3 4mL甲醇和4 6mL氨水甲醇溶液，洗脫柱上的待分析成分，合并收集洗脫液，在氮吹濃縮裝置上于40±2℃的溫度下蒸干，加入1.0mL含甲酸的水 甲醇溶液振蕩溶解殘?jiān)?，濾膜過(guò)濾待用；(3)液相色譜 質(zhì)譜測(cè)定高效液相色譜條件a)色譜柱C18柱，150mm×4.6mm(i.d.)，粒徑3.0μm或相當(dāng)者；b)流動(dòng)相A含0.05～0.1％甲酸的乙腈，流動(dòng)相B含0.05～0.1％甲酸2～10mmol/L乙酸銨水溶液+甲醇(95+5，V/V)；流速0.5～1.0mL/min；梯度洗脫；c)柱溫35℃；d)進(jìn)樣量10～30μL；質(zhì)譜條件a)電噴霧電壓(IS)4500V；b)霧化氣壓力(GS1)448.175kPa(65Psi)；c)氣簾氣壓力(CUR)206.85kPa(30Psi)；d)輔助氣壓力(GS2)482.65kPa(70Psi)；e)碰撞氣壓力(CAD)34.475kPa(5Psi)；f)離子源溫度(TEM)550℃；g)碰撞室入口電壓(EP)為10V、碰撞室出口電壓(CXP)為13V，并分別設(shè)定母離子(Q1)、子離子(Q3)、碰撞電壓(CE)和去簇電壓(DP)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的動(dòng)物源性食品中多種堿性藥物殘留量的檢測(cè)方法，其特征在 于所述檸檬酸緩沖溶液500mL中含有10. 5g 一水合檸檬酸和10. 2g六水合氯化鎂，并用氨 水調(diào)節(jié)PH為2. 5。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的動(dòng)物源性食品中多種堿性藥物殘留量的檢測(cè)方法，其特征在 于在步驟(1)中所述濾膜為0. 45 μ m孔徑的濾膜。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的動(dòng)物源性食品中多種堿性藥物殘留量的檢測(cè)方法，其特征在 于在步驟(2)中所述固相萃取柱為親水性聚苯乙烯-二乙烯基苯固相萃取柱和陽(yáng)離子交 換固相萃取柱，安裝順序?yàn)橛H水性聚苯乙烯-二乙烯基苯固相萃取柱在上，陽(yáng)離子交換固 相萃取柱在下，所述水-甲醇溶液中水甲醇=95 5 (V/V)，所述氨水甲醇溶液的濃度為 5%，所述含甲酸的水-甲醇溶液中水甲醇=95 5 (V/V)，甲酸濃度為0.1%，所述濾膜 為0. 22 μ m孔徑的濾膜。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的動(dòng)物源性食品中多種堿性藥物殘留量的檢測(cè)方法，其特征在 于在步驟(3)中所述梯度洗脫的梯度變化為0 3分鐘，流動(dòng)相A :0 25%，流動(dòng)相B 100 75% ； 3 4分鐘，流動(dòng)相A 25 40 %，流動(dòng)相B 75 60 % ； 4 7分鐘，流動(dòng)相A :40 50%，流動(dòng)相B :60 50% ； 7 9分鐘，流動(dòng)相A 50%,流動(dòng)相B 50% ； 9 13分鐘，流動(dòng)相A :50 100%，流動(dòng)相B :50% 0 ； 13 18分鐘，流動(dòng)相A 100%，18 18. 5分鐘，流動(dòng)相A 100 0%，流動(dòng)相B 0 ~ 100% ； 18. 5分鐘后，流動(dòng)相B 100%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的動(dòng)物源性食品中多種堿性藥物殘留量的檢測(cè)方 法，其特征在于所述動(dòng)物源性食品為選自豬肉、豬肝、雞蛋、蝦、牛奶的至少一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的動(dòng)物源性食品中多種堿性藥物殘留量的檢測(cè)方 法，其特征在于所述堿性獸藥包括β -受體激動(dòng)劑類、磺胺類、苯二氮卓類、硝基咪唑類、苯 并咪唑類、三苯甲烷類。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的動(dòng)物源性食品中多種堿性藥物殘留量的檢測(cè)方法，其特征 在于所述β-受體激動(dòng)劑類包括選自萊克多巴胺(Ractopamine)、沙米特羅(Salmeterol xinafoate)、夕少 T 月安 If (Salbutamol)、特布 # (Terbinafine hydrochloride)、西 馬特羅(Cimaterol)、克倫特羅(Clenbuterol)、妥布特羅(Tulobuterol)、噴布特 羅(Penbutolol sulfate)、甲氧醋胺(3-Methoxytyramine hydrochloride)、 得安 (Propanolol)、氯丙那林(Clorprenaline hydrochloride)的至少一種；磺胺類包括選 自磺胺嘧啶(Sulfadiazine)、磺胺噻唑(Sulfathiazole)、磺胺吡啶(Sulfapyridine)、 磺胺甲基嘧啶(Sulfamerazine)、磺胺二甲基嘧啶(Sulfamethazine)、磺胺-6-(間) 甲氧嘧啶(Sulfamonomethoxine)、磺胺甲噻二 唑(Sulfamethizole)、磺胺 _5_(對(duì)) 甲氧嘧啶(Sulfameter)、磺胺氯噠嗪(Sulfachloropyridazine)、磺胺甲氧噠嗪 (Sulfamethoxypyridazine)、磺胺鄰 二甲氧嘧啶(Sulfadoxine)、磺胺間 二甲氧嘧 啶(Sulfadimethoxine)、磺胺甲基異惡唑(Sulfamethoxazole)、磺胺二甲異惡唑 (Sulfafurazole)、苯酰磺胺(Sulfabenzamide)、磺胺喹惡啉(Sulfaquinoxaline)、磺胺 醋酰(Sulphacetamide)、三甲氧芐胺嘧啶(Trimethoprim)、磺胺胍(Sulfaguanidine) 的至少一種；苯二氮卓類包括選自氟西泮(Fluraz印am hydrochloride)、咪噠唑侖 (Dormicummaleate)、阿普唑倉(cāng)(Alprazolam)、利眠寧(Chlordiaz印oxide)、溴西泮 (Bromazepam)、氯硝西泮(Clonazepam)、地西泮(Diazepam)、勞拉西泮(Lorazepam)、 硝西泮(Nitraz印am)、去烷基氟拉西泮(Desalkylfluraz印am)、2-羥乙基氟拉西 泮(2-Hydroxylethylfluraz印am)、氟拉西泮(Flurazepam)、α _ 羥基阿普唑侖 (α -hydroxyalprazolam)、去甲基氣西洋(N-Desmethylflunitrazepam)、α _ |圣基味 _ 唑倉(cāng)(a -hydroxymidazo 1 am)、7_ 氨基氟西泮(7-Aminof lunitrazepam)、三唑倉(cāng) (Triazolam)、替馬西泮(Temazepam)、奧沙西泮(Oxazepam)的至少一種；硝基咪唑類 包括選自輕基甲硝唑(1- (2-hydroxyethyl) -2-hydroxy-methyl-5-nitroimidazol) > 2-甲硝咪唑(2-Methyl-5-nitroimidazole)、羥基二甲硝咪唑(2-Hydroxymethyl-l_methyl-5-nitroimidazole)、甲硝唑(Metronidazole)、二甲硝咪唑(Dimetridazole)、 洛硝噠唑(Ronidazole)、氯甲硝咪唑(5-Chloro-l-methyl-4-nitroimidazole)、 苯硝咪唑(5-nitrobenzimidazole)、羥基異丙硝唑(2-(2-Hydroxyisopropyl)-1 -methyl-5-nitroimidazol)> 異 丙 石肖 P坐(2_isopropyl_l_methyl_5_nitroimidazo 1 Ipronidazole)的至少一種；苯并咪唑類包括選自阿苯達(dá)唑(Albendazole)、阿苯達(dá) 唑亞砜(Albendazole sulfoxide)、阿苯達(dá)唑砜(Albendazole sulfone)、2_ 氨基-阿 苯達(dá)唑砜(Albendazole-2-aminosulfone)、氟苯達(dá)唑(Flubendazole)、芬苯達(dá)唑砜 (Fenbendazole sulfone)、苯硫胍(Febantel pestanal)、奧芬達(dá)唑(Oxfendazole) 達(dá)唑(Oxibendazole)、甲苯咪唑(Mebendazole)、氨基甲苯咪唑(Amino mebendazole)、 5-羥基-甲苯咪唑(5-hydroxyl-mebendazole)、噻苯噠唑(Thibenzole)、5-羥基-噻 苯噠唑(5-hydroxyl-thibenzole)的至少一種；三苯甲烷類包括選自隱色孔雀石綠 (Leucomalachite Green)、隱色結(jié)晶紫(Leucocrystal Violet)的至少一種。
全文摘要
本發(fā)明涉及分析化學(xué)、食品安全領(lǐng)域，具體為一種動(dòng)物源性食品中多種堿性藥物殘留量的檢測(cè)方法。該方法通過(guò)乙腈、異丙醇和檸檬酸緩沖溶液渦旋混合提取、親水性聚苯乙烯-二乙烯基苯固相萃取柱和陽(yáng)離子交換固相萃取柱凈化及液相色譜-質(zhì)譜測(cè)定來(lái)檢測(cè)豬肉、豬肝、雞蛋、蝦、牛奶中多種堿性藥物如β-受體激動(dòng)劑類、磺胺類、苯二氮卓類、硝基咪唑類、苯并咪唑類、三苯甲烷類的殘留量。該方法具有簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確、高效的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N30/02GK101949898SQ20101024950
公開(kāi)日2011年1月19日 申請(qǐng)日期2010年8月10日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月10日
發(fā)明者夏敏勇, 張曉梅, 鄧曉軍, 郭德華 申請(qǐng)人:上海安譜科學(xué)儀器有限公司;上海出入境檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)植物與食品檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心