專利名稱：一種提高蘇云金桿菌毒力效價的助劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物農(nóng)藥助劑，特別是提高蘇云金桿菌毒力效價的助 劑。
背景技術(shù)：
農(nóng)藥助劑(pesticide adjuvants)，又稱農(nóng)藥輔助劑，是農(nóng)藥制劑加工 或使用中用于改善制劑理化性質(zhì)的輔助物質(zhì)。助劑本身無生物活性，但是通過增加農(nóng)藥在 生物體表面的滯留量、延長滯留時間和提高對生物體的穿透能力等，能增強防治效果。同 時，助劑還有利于提高藥效、降低成本、延長藥劑貨架壽命、保護天敵、減少環(huán)境污染等，因 此是當(dāng)前新農(nóng)藥開發(fā)與應(yīng)用的研究熱點。國內(nèi)外許多學(xué)者研究如何提高Bt的殺蟲效果，其中包括對Bt進行細胞或者基因 的改造、助劑的篩選、優(yōu)化組合以及對劑型加工技術(shù)的改進等等。埃及學(xué)者Salarma及其同 事就有關(guān)化學(xué)添加劑對Bt的協(xié)同作用進行了研究報道，所有的化學(xué)添加劑包括無機鹽、氨 基酸、有機酸蛋白質(zhì)溶解劑等。在國內(nèi)的研究中一般是通過在Bt制劑中直接加入一些添加 物來提高毒力。孫明等在Bt制劑中加入有助于伴孢晶體溶解的介質(zhì)以提高毒力；袁哲明等 在Bt制劑中加入取食刺激物對Bt有明顯的增效作用；徐建敏等研究過部分化學(xué)添加劑對 Bt-ICPs殺斜紋夜蛾效果的影響；溫志強等研究了 7種學(xué)試劑對Bt殺小菜蛾效果的影響； 王明道等報道了 9種化學(xué)添加劑對Bt殺棉鈴蟲效果的影響；許文耀研究了 11種添加物對 Bt制劑殺鱗翅目害蟲的增效作用；邱思鑫等從82種添加劑中篩選出12種有增效作用的物 質(zhì)進行不同濃度對Bt菌株殺蟲效果的影響。在Bt制劑生產(chǎn)中，產(chǎn)品的殺蟲活性是衡量制劑質(zhì)量的主要標準。而由于其活性和 穩(wěn)定性受多種環(huán)境因素影響，其作用方式又屬于胃毒作用，導(dǎo)致了 Bt制劑存在見效慢、防 效不穩(wěn)定、殘效期短等問題。為了克服和改善Bt制劑的不足，近年來，對蘇云金芽孢桿菌的 增效途徑探索漸成研究熱點。增效途徑主要包括四個方面1)大量分離篩選更有效的Bt 株系；2)對現(xiàn)有高毒菌株進行遺傳改良，提高其殺蟲活性，擴大殺蟲譜；3)改進Bt劑型加 工技術(shù)，改善制劑的性能，增強制劑殺蟲效果和持效期，如制備粉劑、懸浮劑、油劑、乳劑、片 劑、ES、淀粉膠囊劑等；4)大力開發(fā)各種增效劑和增效因子，提高現(xiàn)有菌株的殺蟲活性。其 中開發(fā)新劑型是重要手段之一。而開發(fā)一種新劑型，助劑是關(guān)鍵因素，良好助劑可改善制劑 的理化性質(zhì)提高使用效果，提高殺蟲毒力。本發(fā)明將引自中國農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)藥研究室的農(nóng)藥 助劑，篩選出高毒力助劑，直接為生產(chǎn)服務(wù)。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是探索提高蘇云金桿菌毒力效價助劑的篩選方法，篩選 出能有效提高蘇云金桿菌毒力效價的助劑，直接服務(wù)于生產(chǎn)。本發(fā)明的目的是通過以下方法實現(xiàn)的。本發(fā)明的一種提高蘇云金桿菌毒力效價的助劑，其特征在于助劑的篩選方法如 下1、將Bt原粉和各種助劑分別配制成混粉過60目篩后分裝入小袋并編碼，所述助 劑與混粉的重量比為助劑/混粉=5%。2、增效測定分別取不同助劑配制成的混粉300mg，用200ml自來水配制成藥液， 將供試小白菜葉片于藥液中浸lOsec，取出后立即用濾紙吸干葉片上的藥液，用于飼養(yǎng)2齡棉鈴蟲幼蟲，24h、48h檢查死亡蟲口數(shù)，計算死亡率。3、對死亡率、LC50及效價統(tǒng)計，篩選能顯著提高Bt殺蟲毒力效價的助劑。通過助劑對Bt殺蟲制劑的增效實驗，表明添加適量的助劑，能顯著提高Bt殺蟲制 劑的毒力。如表1 (藥劑濃度與試蟲死亡率的關(guān)系)所示，當(dāng)添加助劑濃度增加時，害蟲死亡 率隨之增加，助劑濃度與供試蟲死亡率呈線性正相關(guān)(備注050433P為原粉代號)。表1藥劑濃度與試蟲死亡率的關(guān)系 從表1的數(shù)據(jù)中，通過求毒力回歸式y(tǒng) = a+bx、LC5(l、回歸系數(shù)及增效比，可以得出 BCM-101增效最好，增效比達1. 7214，JFC次之，增效比達到1. 3443 ；其他助劑均表現(xiàn)相加作 用(見表2)。表2Bt加入助劑后的毒力測定及增效效果測定具體實施方式
為了充分公開本發(fā)明的提高蘇云金桿菌毒力效價助劑的篩選方 法，以下結(jié)合實施例加以說明。實施例一一種提高蘇云金桿菌毒力效價的助劑，篩選方法如下1.1供試藥劑和材料32000IU/mg Bt 原粉、50000IU/mg Bt 原粉、助劑 AP、標準品 B6 效價 15000IU/mg， 均由浦城綠安生物農(nóng)藥公司提供；助劑JFC、BCM-101、6501、SD-1227A、B-10250由中國農(nóng)業(yè) 大學(xué)農(nóng)藥研究室提供。棉鈴蟲幼蟲(2齡)=Heliotis armigera Hubner由浦城綠安生物農(nóng) 藥公司提供。1. 2材料處理(按助劑/混粉=5%配制)取6個內(nèi)膜袋分別寫上6種助劑的代號助劑AP、6501、SD-1227A、BCM-10UB-10250、JFC。將天平調(diào)零，稱取19. Og Bt原粉裝入內(nèi)膜袋，用Iml的移液槍吸入相應(yīng)助劑 (與內(nèi)膜袋代號一致)，將助劑均勻滴在原粉中，直到天平左右平衡(備注原粉+助劑= 20. Og)。觀察助劑的表面性狀及其與原粉的混配情況。將內(nèi)膜袋袋口握緊，用手把混粉搓 勻，不留下小顆粒。將搓勻的混粉倒入60目篩子中，觀察混粉的性狀以及能否全部通過60 目篩子并裝入原來的內(nèi)膜袋；若篩上有粗頭無法過篩，則另取內(nèi)膜袋裝好，以便后面的理化 性質(zhì)檢驗。將6種混粉配制好后，即可準備進行理化性的檢測。(備注混粉指Bt原粉與 助劑的混合物)。1. 2增效試驗方法(1)取7只帶玻璃珠的錐形瓶做上標記(1#、2#......7#)；往1#瓶加入自來水
200ml和600mg標準品混勻備用；往2# 7#瓶分別加入200ml自來水和300mg的32000IU/ mgBt原粉，再分別往2# 7#錐形瓶加入100 μ 1的助劑，它們分別是(BCM-101、JFC、6501、 B-10250、SD-1227A)；將所有錐形瓶放置搖床搖30min ；將下?lián)u床的錐形瓶藥液以1. 5倍稀 釋成5個濃度；每個濃度用60ml稀釋液浸葉片。(2)取差不多大小的小白菜葉片(經(jīng)過自來水浸泡、沖洗，并自然晾干的葉片)分 別浸入不同濃度藥液中浸lOsec，取出后立即用濾紙吸干葉片上多余的藥液，并放在搪瓷盤 中自然晾干，最后置于小燒杯中，每個燒杯放入2片葉子。(3)挑取出2齡棉鈴蟲幼蟲放置于小燒杯中，燒杯內(nèi)放一小團浸過自來水棉花球， 每個處理用10頭供試蟲，用雙層紗布捆綁好，在室溫中，相對濕度60 80%的條件下飼養(yǎng)。(4)24h、48h檢查死亡蟲口數(shù)，計算死亡率。每個濃度重復(fù)4次。
(5)死亡率、LC50及效價統(tǒng)計 以昆蟲受試濃度的對數(shù)為自變量X，以死亡率機率值為因變量y，采用最小二乘 法，在計算機上求出毒力回歸式y(tǒng) = a+bx, LC5tl、回歸系數(shù)和統(tǒng)計各處理的效價等。待測品 效價IU/mg =標準品LC5tl/待測品LC5tlX標準品效價。
權(quán)利要求
一種提高蘇云金桿菌毒力效價助劑的篩選方法，其特征在于包括以下步驟(1)將Bt原粉和各種助劑分別配制成混粉過60目篩后分裝入小袋并編碼，所述助劑與混粉的重量比為助劑/混粉＝5％；(2)增效測定分別取不同助劑配制成的混粉300mg，用200ml自來水配制成藥液，將供試小白菜葉片于藥液中浸10sec，取出后立即用濾紙吸干葉片上的藥液，用于飼養(yǎng)2齡棉鈴蟲幼蟲，24h、48h檢查死亡蟲口數(shù)，計算死亡率；(3)對死亡率、LC50及效價統(tǒng)計，篩選能顯著提高殺蟲毒力效價的助劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高蘇云金桿菌毒力效價助劑的篩選方法，其特征在于 當(dāng)添加助劑濃度增加時，害蟲死亡率隨之增加，助劑濃度與供試蟲死亡率呈線性正相關(guān)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種提高蘇云金桿菌毒力效價助劑的篩選方法，其特征 在于在Bt原粉中添加助劑BCM-101的殺蟲毒力效價最佳。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種生物農(nóng)藥助劑，開發(fā)一種生物農(nóng)藥的新劑型，助劑是關(guān)鍵因素，良好助劑可改善制劑的理化性質(zhì)提高使用效果，提高殺蟲毒力。實驗表明，當(dāng)添加助劑濃度增加時，害蟲死亡率隨之增加，助劑濃度與供試蟲死亡率呈線性正相關(guān)。本發(fā)明篩選的助劑BCM-101與Bt原粉配合使用增效最好，增效比達1.7214；助劑JFC次之，增效比為1.3443。本發(fā)明名稱為一種提高蘇云金桿菌毒力效價的助劑。
文檔編號G01N33/00GK101887056SQ200910111748
公開日2010年11月17日 申請日期2009年5月13日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月13日
發(fā)明者黃勤清 申請人:福建農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院