專利名稱：：檢測用于診斷和表征障礙的自身抗體的方法
技術領域：
：本申請公開的主題涉及通過檢測自身抗體診斷和表征受試者中的障礙。具體而言，本申請公開的主題涉及利用抗原(在一些實施方案中包括從細胞產生的外來體分離的抗原)來檢測受試者中的自身抗體，用于診斷或表征所述受試者中的癌癥和/或不孕癥(infertility)和/或其他障礙。
背景技術：
：許多疾病如果在早期階段被診斷出，則它們可以被更為有效地治療和/或預防。對于癌癥而言，這一點尤其的正確。例如，卯％的1期卵巢癌病例可治愈，而對于晚期疾病(ffl期和IV期)患者而言，存活5年的幾率低于21%。因此，顯著提高癌癥存活率的希望在于早期診斷。類似地，如果有更加敏感的早期診斷試驗，其他障礙也有可能被更早地診斷并且/或者治療的預后被更好地確定。作為另一個具體的實例，比起被報道的難以產生或維持足月的活妊娠，不孕障礙更以難以預先診斷和確定而眾所周知。更加敏感和特異的診斷測定能夠提供對不孕障礙的更好診斷和對不孕治療的更好預后?，F(xiàn)行對多種障礙(包括例如癌癥)的診斷測定是以抗原為基礎，并依賴于對與所述障礙相關的循環(huán)系統(tǒng)蛋白質的檢測。這些測定依賴于由細胞(例如腫瘤細胞)主動分泌或流出或者因細胞死亡(壞死或凋亡)而產生的特定蛋白質的表達、合成及釋放。這些抗原蛋白質必須"逃離，，疾病的原始位點，使個體免疫組分的抗原加工容量飽和，進入循環(huán)系統(tǒng)并達到足以由以酶或放射性標記為基礎的免疫測定進行檢測的穩(wěn)態(tài)濃度。這些事件通常在疾病最初確立(例如致瘤性轉化事件和腫瘤灶發(fā)生)后才出現(xiàn)。因此，現(xiàn)行的基于抗原的測定無法真正地檢測目標障礙的早期階段。為了顯著改善對目標障礙的診斷測定，尚未獲得滿足的需求是需要一種在障礙確立早期對于疾病標記物的存在更加敏感的檢測該障礙的新方法。
發(fā)明內容
發(fā)明內容部分列出了本申請公開的主題的數(shù)個實施方案，并且在許多情況中列出了這些實施方案的調整方案及變化方案。該
發(fā)明內容部分只是數(shù)目眾多的不同實施方案的示例。提及一個給定實施方案的一個或多個代表性特征時同樣也是示例。這樣的實施方案一般可以以具有或不具有所提及的一種或多種特征而存在；同樣，這些特征可適用于本申請公開的主題的其他實施方案，而不管其是否在該
發(fā)明內容部分中列出。為了避免過度重復，該
發(fā)明內容部分不再列出或顯示這些特征的所有可能的組合。在本申請公開的主題的一些實施方案中，提供了一種用于檢測受試者中的自身抗體水平并且/或者對該水平定量的方法。在一些實施方案中，所述方法包括提供一個來自受試者的包含或疑似包含自身抗體的生物樣品，并將一種抗原與所述樣品相接觸。所述抗原可包括一種分離自一種外來體的自身抗體免疫反應肽。所述方法進一步包括檢測樣品中對所述抗原產生免疫反應的所述自身抗體的水平并且/或者對該水平定量。在一些實施方案中，所述自身抗體與一種癌癥或不孕障礙相關。在一些實施方案中，在本申請公開的主題進一步提供了一種用于診斷與受試者中自身抗體產生相關的障礙的方法。在一些實施方案中，所述方法包括提供一個來自受試者的包含或疑似包含自身抗體的生物樣品，并將一種抗原與所述樣品相接觸。所述抗原可包括一種分離自一種外來體的自身抗體免疫反應肽。所述方法進一步包括檢測所述樣品中對所述抗原產生免疫反應的自身抗體，并將自身抗體對所述抗原的免疫反應性水平與一個參考水平比較，以診斷所述受試者中的所述障礙。在一些實施方案中，在本申請公開的主題還進一步提供了一種用于表征受試者中的一種與自身抗體產生相關的障礙的方法。在一些實施方案中，所述方法包括提供一個來自受試者的包含自身抗體的生物樣品，并將一種抗原與所述樣品相接觸。所述抗原可包括一種分離自一種外來體的自身抗體免疫反應肽。所述方法進一步包括檢測所述樣品中與所述水"^定量，從而丄征所述受試者中的所述障礙。'、^在用于診斷或表征障礙的方法的一些實施方案中，所述障礙為一種癌癥或一種不孕障礙。在本文公開的方法的一些實施方案中，所述障礙為一種上皮癌或一種腺癌。另外，在一些實施方案中，所述抗原包括一種選自以下的癌抗原肽p53、p63、p73、mdm-2、親組織蛋白酶-D(procathepsin-D)、B23、C23、PLAP、cerB/HER2、NY-ESO-l、SCP1、SSX畫1、SSX國2、SSX-4、HSPIO、HSP27、HSP60、HSP90、GRP78、HoxA7、HoxB7、EpCAM、c國ras、間皮素(mesothelin)、生存素(survivin)、粘蛋白(mucin)、EGF激酶、c-myc、核磷蛋白(nucleophosmin)和TAG72。在所述方法的一些實施方案中，所述障礙為一種選自以下的不孕障礙卵巢功能早衰(POF)、多嚢性卵巢綜合征(PCOS)、子宮內膜異位癥、先兆子癇、早產、子宮內發(fā)育受限和反復妊娠丟失。在所述方法的一些實施方案中，所述生物樣品包括乳汁、血液、血清、血漿、腹水、嚢內液、胸膜液、淚液、尿液、唾液、組織或它們的結合物。另外，在一些實施方案中，所述受試者為一種哺乳動物。在本申請公開的方法的一些實施方案中，所述外來體分離自一種細胞，所述細胞在一些實施方案中可為一種培養(yǎng)的細胞。在一些實施方案中，所述細胞為一種癌細胞，例如卵巢癌細胞、宮頸癌細胞、乳腺癌細胞、子宮內膜癌細胞、結腸癌細胞、前列腺癌細胞、肺癌細胞、黑色素瘤細胞、胰腺癌細胞或絨毛膜癌細胞。在一些具體的實施方案中，所述細胞為UL-1細胞、UL-2細胞、UL-3細胞或UL-6細胞。在一些具體的實施方案中，所述細胞為胎盤細胞。在本申請公開的方法的一些實施方案中，所述檢測包括一種選自以下的技術ELISA、RIA、多重免疫測定、免疫沉淀法和蛋白質印跡法。在一些實施方案中，本申請公開的主題還進一步提供了一種用于檢測一個樣品中的自身抗體的試劑盒。在一些實施方案中，所述試劑盒包含一種自身抗體免疫反應肽抗原及一個用于容納所述抗原的容器。在一些實施方案中，所述抗原可分離自一種外來體。在一些實施方案中，所述抗原附著于一種支持物上。在一些實施方案中，所述支持物為微量滴定板、膜(硝酸纖維素、PVDF或類似材料)、聚苯乙烯珠子、試管或浸漬片(dipstick)。在一些實施方案中，所述試劑盒包含一種結合一種自身抗體的抗體制品。進一步，在一些實施方案中，所述抗體制品包含一種可檢測的標記。更進一步，在一些實施方案中，所述可檢測標記包括放射性標記、酶、生物素、染料、熒光標簽標記、半抗原或發(fā)光標記。因此，本申請公開的主題的一個目標為提供檢測用于診斷和表征障礙的自身抗體的方法。通過本申請公開的主題完全地或部分地實現(xiàn)了該目標。本領域普通技術人員在研讀以下的對本申請公開的主題的說明、附圖和非限制性的實施例后，上文已陳述的本申請公開的主題的目標(可通過本申請公開的主題完全地或部分地實現(xiàn))、其他目標和優(yōu)點對于他們來說將是顯而易見的。圖l的圖顯示了，與正常不攜帶腫瘤的對照對比，癌癥患者中腫瘤反應性免疫球蛋白與疾病階段的相關情況。圖2A和2B的照片顯示了存在于代表性卵巢癌患者(2A=II期，2B-IV期)的血清中的免疫球蛋白與源自正常卵巢上皮(NO)和3個卵巢腫瘤細胞系(UL1、UL3和UL6)的細胞抗原的免疫反應性。框指示目的區(qū)域。圖3A-3D的系列照片顯示了在對順鉑(cisplatin)應答的患者中，識別模式差異的2-維電泳分析結果。圖3A-3D顯示了部分的2D印跡，使用來自UL-6的抗原作為靶標和來自mc期卵巢嚢腺癌的患者的血清?；颊逜和B(分別為圖3A和3B)對順鉑應答，而患者C和D(分別為3C和3D)無應答。圖4A和4B的柱狀圖顯示了來自2名卵巢癌患者的蛋白質陣列譜。通過RP-HPLC分離來自UL-1卵巢肺瘤細胞系的免疫沉淀的細胞蛋白質，并將蛋白質結合于MAGNAGRAPH膜。通過將所述孔與來自卵巢癌患者的血清孵育來鑒定免疫反應性蛋白質，以光密度計測定的像素表示。圖5顯示了源自患者的腫瘤反應性自身抗體的免疫反應性模式。圖6的圖顯示了來自正常女性自愿者(對照)、患有良性卵巢疾病的女性和患有侵襲性卵巢癌的女性的血清與一個蛋白質陣列中的抗原(在表l中列出)呈現(xiàn)自身抗體反應性的百分數(shù)。圖7的系列照片所示的原始蛋白質微陣列示出患有早期和晚期卵巢癌的女性中的反應性IgG。圖8A的系列照片顯示了宮頸癌患者抗血清與細胞性抗原的反應性。圖8B的圖顯示了源自宮頸癌細胞系的抗原與患者血清的反應性。圖9的系列照片和圖顯示了視黃酸對從宮頸癌細胞釋放的可溶性抗原的反應性的作用。圖10的系列照片和圖顯示了視黃酸對從宮頸癌細胞釋放的細胞相關抗原的反應性的作用。圖ll的系列圖顯示了來自患有不同期的癌癥、良性疾病的不同患者或正常對照的血清對不同的自身抗體免疫反應肽抗原的免疫反應性。圖12的系列圖顯示了來自對照受試者和患有不同類型癌癥的患者的血清對不同自身抗體免疫反應肽抗原的免疫反應性。圖13的系列照片顯示了重組抗原和源自天然外來體的抗原中對抗來自不同癌癥患者的血清的抗原表位的差異。圖14的圖所示的ELisA結果為被診斷為i期、n期或ni期子宮內膜異位癥的患者和正常對照的血清對源自子宮內膜亞細胞區(qū)室的細胞抗原的免疫反應性?？乖蛛x自子宮內膜細胞的膜、核和胞質溶膠部分，并3皮偶聯(lián)至微量滴定板的孔中。圖15的系列照片顯示了來自子宮內膜和卵巢且被自體反應性體液應答識別的細胞抗原的蛋白質免疫印跡。圖16A-i6c的系列照片顯示了對患有n期和m期子宮內膜異位癥的患者血清進行二維電泳所分離的子宮內膜膜抗原的部分代表性免疫識別。蛋白質分離自Hec-1A(子宮內膜腫瘤細胞系)。將溶解的膜蛋白質(100mg)加載至PH3-10等電聚焦帶上(strip),在電泳后，將該等點聚焦帶加至10-20%丙烯酰胺SDS-PAGE凝膠上部。經過SDS-PAGE后，將蛋白質轉移至硝酸纖維素并進行免疫印跡。圖17的系列照片顯示了獲自被診斷為不孕障礙的女性的血清對源自子宮內膜的細胞抗原的血清學反應模式。圖18的系列照片所示的蛋白質免疫印跡表明了在正常足月分娩和反復妊娠丟失的妊娠過程中產生的自身抗體的存在。具體實施例方式在如下附隨的說明中將詳細地給出本申請公開的主題的一個或多個實施方案。通過該詳細說明、實施例和權利要求書，本申請公開的主題的其他特征、目標和優(yōu)點將是顯而易見的。本文提及的所有出版物、專利申請、專利和其他參考文獻都通過引用的方式全文納入本文。在出現(xiàn)沖突的情況下，以本說明書(包括定義)為準。按照長期形成的專利法慣例，術語"a(—種)"、"an(—個)"和"the(該)"在用于本申請(包括權利要求書)中時是指"一個或多個"。除非另外指出，否則在本說明書和權利要求書中使用的表示成分量、反應條件等的所有數(shù)字應被理解為在所有情況下都被術語"約"修飾。因此，除非相反指出，否則在本說明書和附隨的權利要求書中列出的數(shù)值參數(shù)是可依賴于本申請公開的主題意欲獲得的所需性質而變化的近似值。在提及質量、重量、時間、體積、濃度或百分率的值或量的時候，本文使用的術語"約"的意思是涵蓋偏離所述指定量如下區(qū)間以內的變化范圍，即在一些實施方案中為±20%,在一些實施方案中為±10%，在一些實施方案中為±5%,在一些實施方案中為±1%，在一些實施方案中為±0.5%,以及在一些實施方案中為±0.1%，只要這樣的變化適合于實施本申請7>開的方法。除非另外定義，否則本文使用的所有技術術語和科學術語具有等同于本申請公開的主題所屬領域的普通技術人員通常所理解的含義。任何類似于或等價于本文所述的方法、設備和材料均可用于實施或測試本申請公開的主題，盡管在此只描述代表性的方法、設備和材料?，F(xiàn)有技術中已確定，某些障礙的特征在于在患病的受試者中產生自身抗體。也就是說，該受試者的免疫系統(tǒng)被刺激產生抗自身抗原(與外源抗原例如侵入微生物所特有的抗原相對)的抗體。與自身抗體產生免疫反應的該抗原在一些情形下可具有由于一級序列或翻譯后加工中的變化造成的改變的表位(例如這可發(fā)生在癌癥中)，但也可以是與正常抗原在免疫學上相同。在這兩種情形下，均已發(fā)現(xiàn)自身抗體的產生可與障礙的存在相關，乃至可提供用于表征所述障礙的信息。本申請公開的主題提供了用于檢測受試者中自身抗體水平并且/或者對該水平定量的新方法，所述自身抗體水平可與所述受試者中一種障礙的存在力或對所述障礙的表征相關。例如，在本申請公開的主題的一些實施方案中，提供了用于診斷和/或表征受試者中與自身抗體產生相關的一種癌癥或不孕障礙的方法。L用于檢測自身抗體水平并對該水平定量的方法在一些實施方案中，本申請公開的主題提供了用于檢測并/或定量受試者中的自身抗體水平并且/或者對該水平定量的方法。在一些實施方案中，這些方法可被用于診斷和/或表征受試者中與自身抗體產生相關的障礙。在一些實施方案中，所述方法包括提供來自受試者的包含或疑似包含自身抗體的一個生物樣品，然后將一種抗原與所述樣品接觸。所述抗原包括一種自身抗體免疫反應肽。所述方法接著包括檢測樣品中與所述抗原發(fā)生免疫反應的所述自身抗體的水平并對該水平定量。在一些實施方案中，所述生物樣品可包括例如乳汁、血液、血清、血漿、腹水、嚢內液、胸膜液、唾液、淚液、尿液、組織或它們的結合物。此外，在本申請公開的主題的一些實施方案中，提供了一種用于診斷受試者中的一種與自身抗體產生相關的障礙的方法，該方法是基于檢測所述受試者中的自身抗體。在一些實施方案中，所述方法包括提供來自受試者的包含或疑似包含自身抗體的一個生物樣品；將一種抗原與所述樣品接觸，其中所述抗原包括一種自身抗體免疫反應肽；檢測所述樣品中對所述抗原產生免疫反應的自身抗體；并將自身抗體對所述抗原的免疫反應性水平與一個參考水平相比較，以診斷所述受試者中的所述障礙。本文使用的術語"作診斷"和"診斷"是指這樣的方法，即本領域技術人員通過這些方法可估計乃至確定受試者是否患有一種給定的障礙或病癥。本領域技術人員經常以一種或多種診斷指示物為基礎進行診斷，所述指示物例如一種自身抗體，其量(包括存在或不存在)可指示所述病癥的存在、嚴重性或不存在。除了診斷，臨床的預后也是一個很受關注和注意的方面。為了設計最有效的治療，知曉障礙的嚴重性(例如癌細胞的侵襲力及腫瘤復發(fā)的可能性)很重要。自身抗體的測量可被用于將具有良好預后、不需要進一步治療的受試者與那些更可能受益于更強烈治療的受試者分開。由此，本文使用的"進行診斷"或"診斷"還涵蓋進行預后，基于對診斷性自身抗體的測量，預后可提供對臨床結果的預測(進行或未進行醫(yī)學治療)、對合適療法的選擇(或療法是否有效)或者對現(xiàn)行療法的監(jiān)測及可能的療法改變。而且，在本申請公開的主題的一些實施方案中，可以隨時間多次進行對所述自身抗體的測定以有利于診斷和/或預后。所述自身抗體水平的時間性變化可用于預測臨床結果、監(jiān)測所述障礙的進展和/或針對所述障礙的適當療法的效果。在一個這樣的示例性實施方案中，可能會有以下預期，即生物樣品中自身抗體(以及有可能的一種或多種其他生物標記物，條件是它(們)被監(jiān)測)的量在有效治療的過程中會隨時間減少。將自身抗體的水平(例如升高的水平)與參考水平或"正常水平"相關聯(lián)，以診斷和/或表征一種障礙是指，將自身抗體水平(定量的l或存不存在)與無該障礙的受試者中的預期水平(包括但不限于沒有檢測到自身抗體)相比較。相對于正常水平的變化(例如提高)是指這樣的結果，即所述樣品與在其他相當條件下的類似無疾病樣品相比較時，變化(例如升高)幅度超過測量技術固有的誤差。在一些實施方案中，在所述測試受試者中檢測到的自身抗體的水平比基線"正常"存在量升高約10%或更多。在一些實施方案中，在所述測試受試者中檢測到的自身抗體的水平升高約20%或更多，在一些實施方案中，在所述測試受試者中檢測到的自身抗體的水平升高約25%或更多，以及在一些實施方案中，在所述測試受試者中檢測到的自身抗體的水平升高約50%或更多，上述這些情形是自身抗體存在量的升高，這種升高可與所述受試者中存在所述障礙相關聯(lián)。而且，在本申請公開的主題的一些實施方案中，提供了一種用于表征受試者中的一種與自身抗體產生相關的障礙的方法。本文使用的"表征"可指，檢測一種障礙的存在或測定一種障礙的嚴重度，例如確定一種癌癥的階段。在一些實施方案中，所述方法包括提供一個來自受試者的包含自身抗體的生物樣品；將一種抗原與所述樣品接觸，其中所述抗原包括一種自身抗體免疫反應肽；檢測所述樣品中對所述抗原產生免疫反應的自身抗體；并對自身抗體針對所述抗原的免疫反應性水平定量，從而表征所述受試者中的所述障礙。本文使用的術語"免疫反應"和"免疫反應性"在用于抗體結合時是指，抗體的可變區(qū)與抗原的特定表位的特異性結合。術語"肽"、"多肽"和"蛋白"在本文中可互換使用，是指20種蛋白氨基酸或氨基酸類似物的聚合物，而不考慮其大小或功能。雖然"蛋白"經常被用于言及相對較大的多肽，"肽，，經常被用于言及較小的多肽，但是這些術語在本領域中的用法可有重疊及變化。除非另外指出，否則本文使用的術語"肽"是指肽、多肽和蛋白。本文中的術語"蛋白"、"多肽"和"肽"在提及基因產物時可互換使用。因此，示例性的多肽包括基因產物、天然存在的蛋白、前兩者的同源物、直系同源物(ortholog)、旁系同源物(paralog)、片段以及其他等價物、變體和類似物。在本文公開的方法的一些實施方案中，檢測所述樣品中的所述自身抗體可包括，將所述自身抗體與一種抗原結合，然后檢測分離自所述生物樣品的自身抗體的結合事件或者存在情況。用于檢測所述自身抗體的示例性技術包括但不限于酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)、放射免疫測定(RIA)、多重免疫測定、免疫沉淀法和免疫印跡法(包括例如蛋白質印跡法和斑點印跡法)。多種有用的免疫檢測方法已被記載于科學文獻中，例如Nakam腦etal.(見HandbookofExperimentalImmunology(4thEd.)，Weiretal.(eds).Vol.1，Chapter27，BlackwellScientificPubl"Oxford,1987;通過引用的方式將其納入本文)。最簡單直接層面上的免疫測定是指結合測定。示例性免疫測定包括多種類型的ELISA、RIA和多重免疫測定。使用組織切片的免疫組織化學檢測也是特別有用的。然而，容易理解的是，檢測并不限于這些技術，蛋白質印跡、斑點印跡、FACS分析、沉淀素反應等也可以用于本申請公開的主題。關于本申請的方法，免疫結合方法通常包括，獲得疑似包含一種抗體的一個樣品，并將所述樣品在使免疫復合體有效形成的條件下與一種15根據(jù)本申請主題的抗原(例如一種自身抗體免疫反應肽)相接觸。將所選生物樣品在使免疫復合體(一級免疫復合體)形成的有效條件和足夠時長下與所述抗原相接觸，通常是將所述組合物添加至所述樣品中，并將所述混合物孵育這樣的一段時間，即在該時間段內所述抗體與存在的抗原足以形成免疫復合體。在這之后，可將所述抗原-抗體混合物洗滌，以去除任何非特異性結合的抗體分子，使得僅那些特異性結合于所述一級免疫復合體中的抗體被檢測。通常，對免疫復合體形成的檢測可通過應用多種方法實現(xiàn)。這些方法通?；趯σ环N標簽或標記物的檢測，例如本領域中標準使用的任何放射性的、熒光的、生物的或酶的標簽或標記。有關這些標記的使用的美國專利包括3，817，837;3，850，752;3,939,350;3,996,345;4,277,437;4,275,149;4,302,534;4,366,241;4，637，988;4,786,594;5，108，896;5，229，302;5,629,164和5,691,154，以上每一篇文獻均通過引用的方式納入本文。當然，如本領域中公知的，通過使用二級結合配體例如第二抗體或生物素/親和素配體結合方案可實現(xiàn)另外的優(yōu)點。在一些實施方案中，對所述一級免疫復合體的檢測可通過一種這樣的二級結合配體實現(xiàn)，即該二級結合配體具有與存在于所述樣品中的抗原或抗體的結合親和性(特異性或非特異性(例如對所述自身抗體Fc區(qū)的反應性))。在這些情況下，所述二級結合配體可連接一個可檢測的標記。所述二級結合配體自身常為一種抗體，因此所述抗體被稱為"二級，，抗體。在使二級免疫復合體形成的有效條件和足夠時長下，將所述一級免疫復合體與所述標記的二級結合配體或抗體相接觸。然后，通常將所述二級免疫復合體洗滌，以去除任何未結合的標記的二級抗體或配體，然后檢測剩下的所述二級免疫復合體的標記。其他方法包括通過兩步法檢測一級免疫復合體。如上述，對所述抗原或自身抗體有結合親和性的二級結合配體(例如一種抗體)被用于形成二級免疫復合體。所述二級結合配體包括一種這樣的酶，即該酶能夠將底物加工成可檢測產物，從而隨時間放大信號。在洗滌后，將所述二級免疫復合體與底物相接觸，使得可進行檢測。竟爭性免疫檢測也可以被用于檢測對所述測試抗原特異的自身抗體的存在。在該技術中，一種標記的抗體首先在溶液中與所述抗原一起孵育。所述標記發(fā)出的信號被測量。然后將該抗原/抗體復合體與含有或疑似含有目的抗體的樣品相接觸。如果所述樣品含對所述抗原特異的抗體，那么它們將結合所述抗原并竟爭性置換所述的標記的抗體。這可檢測為所述標記的信號強度的下降。在本申請公開的主題的一些但非全部實施方案中，用于捕獲來自所述生物樣品的所述自身抗體的抗原分離自外來體。術語"分離的"在用于多肽時是指該多肽基本上脫離它在天然狀態(tài)所聯(lián)系的其他細胞部分或外來體部分。外來體是內體源的小泡，在晚期內體多泡體與質膜融合后分泌至細胞外環(huán)境中。來自多種組織類型的細胞已經被發(fā)現(xiàn)可分泌外來體，例如樹突細胞、B淋巴細胞、腫瘤細胞和肥大細胞。不同來源的外來體呈現(xiàn)出多個獨立系列的蛋白質和脂質部分。值得注意的是，它們均包含參與抗原呈遞和免疫調節(jié)的蛋白質，表明外來體在引起免疫反應調節(jié)的細胞-細胞通訊中起作用。事實上，來自以源自腫瘤抗原的肽脈沖的樹突細胞(DC)的外來體可在使用匹配肺瘤的動物模型中誘發(fā)抗肺瘤反應。然而，源自包含癌抗原的癌細胞的外來體已經顯示包含免疫抑制性多肽，使得源自腫瘤的未修飾外來體直接用在疫苗中是不適宜的并有可能是不安全的。本申請公開的主題的外來體十分適合于產生可與自身抗體發(fā)生免疫反應以從受試者的生物樣品捕獲出所述自身抗體的抗原，這是因為它們由細胞產生而不是由人工合成，從而可提供"天然的"抗原。也就是說，由這些細胞產生并存在于所述外來體中的抗原可以是這樣的全長肽，即它由所述細胞加工(如糖基化等)并折疊成類似于受試者中免疫細胞經歷過的抗原。由此，所述外來體抗原可用于這樣的測定中，即該測定用于檢測可能存在于患有障礙(例如癌癥和不孕障礙)的患者中的自身抗體。因此，在一些實施方案中，所述一種或多種抗原的每一種均可以包含一種癌細胞抗原和/或不孕障礙抗原。用于提供在本申請公開的方法中使用的抗原的外來體可分離自產生外來體的細胞。在一些實施方案中，所述細胞為一種培養(yǎng)的細胞，即一種在培養(yǎng)基中離體繁殖的細胞。所述培養(yǎng)的細胞可以(但不必須)是被永生化的，以利于連續(xù)繁殖。在一些實施方案中，所述細胞為癌細胞，例如最初從腫瘤分離、然后在培養(yǎng)物中繁殖的癌細胞，這在本領域中通常是公知的。在一些實施方案中，所述癌細胞可為一種上皮癌或一種腺癌。例如，在一些實施方案中，所述癌細胞可為卵巢癌細胞、宮頸癌細胞、乳腺癌細胞、子宮內膜癌細胞、結腸癌細胞、前列腺癌細胞、肺癌細胞、黑色素瘤細胞、胰腺癌細胞或絨毛膜癌細胞。在一些實施方案中，所述細胞為原代培養(yǎng)細胞，例如一種從受試者中分離的胎盤細胞。在具體的實施方案中，所述細胞為選自但不限于UL-1細胞、UL-2細胞、UL-3細胞和UL-6細胞的培養(yǎng)細胞系。在本發(fā)明人的實驗室中，已經從卵巢具有mc期囊腺癌的女性建立了所有這些原代的人卵巢腫瘤細胞系(被命名為UL-1、UL-2、UL-3和UL-6)。UL-2和UL-3來自遺傳性卵巢癌，而UL-l和UL-6來自自發(fā)癌。UL-1細胞來自一位63歲女性患者，UL-2細胞來自一位34歲女性患者，UL-3細胞來自一位42歲女性患者，且UL-6細胞來自一位72歲女性患者。這些細胞系在棵鼠中是致肺瘤的，在棵鼠中可產生與嚢腺癌一致的腫瘤。這些細胞系的EpCAM、PLAP、FasL、PD-L1和II類MHC都是陽性。在一些實施方案中，可通過以下方式將所述抗原分離用于本文公開的方法中收獲培養(yǎng)所述細胞的培養(yǎng)基，并從所述培養(yǎng)基選擇性取出所述外來體，例如通過離心。然后，根據(jù)需要，可通過常規(guī)的蛋白質分離和純化的方法進一步分離所述抗原，這在本領域中是^^知的。進一步，對于本申請公開的主題的診斷方法，優(yōu)選的受試者是脊推動物受試者。優(yōu)選的脊推動物是溫血動物；優(yōu)選的溫血脊推動物是哺乳動物。優(yōu)選的哺乳動物最優(yōu)選人。如本文中使用的，術語"受試者"包括人受試者和動物受試者。因此，根據(jù)本申請公開的主題提供了獸醫(yī)的治療用途。由此，本申請公開的主題提供了對哺乳動物的治療，所述哺乳動物例如人以及那些由于瀕臨滅絕而重要的哺乳動物，例如東北虎(Siberiantiger);具有重要經濟學價值的哺乳動物，例如在農場中飼養(yǎng)用于人消費的動物；以t或者在社會關系上對人來說重要的動物，例如作為寵物或在動物園中的動物。這些動物的實例包括但不限于食肉動物例如貓和狗；豬類(swine)，包括豬(pig)、閹豬(hog)和野豬(wildboar);反芻動物及/或有蹄動物例如牛(cattle)、公牛(ox)、綿羊、長頸鹿、鹿、山羊、野牛和駱駝；以及馬。還提供了對鳥類的治療，不但包括對禽類特別是家養(yǎng)禽(即家禽，例如火雞、雞、鴨、鵝、珍珠雞(guineafowl)等)的治療方法，而且包括對那些瀕臨滅絕和/或在動物園中的鳥種類的治療方法，這是因為它們對人也有著重要的經濟學價值。因此，還提供了對家畜的治療方法，所述家畜包括但不限于家養(yǎng)的豬、反芻動物、有蹄動物、馬(包括竟賽馬)、家禽等。iL用于it斷癌癥的方法本申請公開的主題進一步提供了一種用于診斷和表征受試者的癌癥的方法。在美國，癌癥是第二大死亡原因。在1999年，據(jù)估計有563,100例癌癥死亡，并且每年診斷出約1,222,000例新的癌癥病例。其中，實體瘤癌癥例如肺癌、乳腺癌、前列腺癌和結腸直腸癌最為常見。癌癥的診斷和分類依賴于對通過肉眼獲得的臨床和組織病理學信息的主觀解釋，從而基于腫瘤的起源組織將腫瘤分成公認的類別。然而，臨床信息可能是不完備的或者有誤導的?，F(xiàn)行對癌癥的診斷測定最常見的是以抗原為基礎。這些測定依賴于由腫瘤細胞主動分泌或流出或者因細胞死亡(壞死或凋亡)而產生的特定蛋白質的表達、合成及釋放。這些抗原蛋白質必須"逃離"疾病的原始位點、使個體的免疫組分的抗原加工容量飽和、進入循環(huán)系統(tǒng)并達到足以由基于酶或放射性標記的免疫測定進行檢測的穩(wěn)態(tài)濃度。這些事件通常在致瘤性轉化事件和腫瘤灶發(fā)生最初確立后才出現(xiàn)。對于更早檢測癌癥的改善主要集中在提高敏感性和高通量能力；然而，這些診斷測定表現(xiàn)出數(shù)個基本的局限。循環(huán)系統(tǒng)抗原直至腫瘤確立后才出現(xiàn)；現(xiàn)行的抗原不是特異地針對癌癥；以及沒有單個抗原在100%的癌癥病例中都表達。最近，以對患者血清的蛋白組學模式的分析作為早期的檢測方法被研究(Liottaetal.，GynecolOncol88:S25-S28,2003.)。令人遺憾的是，這種基于質譜(MS)的方法具有數(shù)個缺陷。除了與基于抗原的測定系統(tǒng)相關的循環(huán)系統(tǒng)抗原延遲出現(xiàn)之外，MS蛋白組分析的敏感性居中，且隨蛋白質分子量增大效果逐漸降低，它不能識別這些標記物蛋白質，并且必須要使用高端先進的分析儀器，例如SELDI-TOF質譜儀和生物信息學工具。除了癌癥相關的蛋白質差異之外，血清蛋白組學模式可能呈現(xiàn)出個體差異，并且這種"MS-診斷指紋法，，的結果依賴于與血清的"訓練集，，的比較及隨后對所產生的模式的解析。因此，在MS蛋白組學分析可臨床應用之前，需要解決可行性、再現(xiàn)性和標準化的問題。對癌癥患者的免疫能力的評估已被用于確定腫瘤是否已危害宿主的免疫性，從而識別出具有預后價值的特定免疫參數(shù)并為免疫療法評估提供一個基準(Hellstrometal"見DeVitaVT，HellmanS，andRosenbergSA，eds.Biologictherapyofcancer.NewYork:Lippincott，1991:35-52.)。雖然許多癌癥(包括例如卵巢癌)患者中的免疫細胞的功能受到損害——這通過無法根除所述腫瘤確定——，但是研究表明對腫瘤抗原的免疫識別仍完好。腫瘤反應性自身抗體可在腫瘤發(fā)生和進展的早期被檢測到。研究已表明在癌癥患者中存在腫瘤反應性免疫球蛋白，所述患者包括黑色素瘤患者(Merimskyetal.,TumourBiol15:188-202，1994)、肺癌患者(Niklinskaetal"FoliaHistochemCytobiol39:51-56，2001;Brichoryetal"CancerRes61:7908-7912，2001)、乳腺癌患者(Conroyetal"Lancet345:126，1995;Barboucheetal"EuropJClinChemClinBiochem32:511-514，1994)、頭頸癌患者(Vlocketal，CancerRes49:1361-1365，1989)和卵巢癌患者(Kuttehetal"JSocGynecolInvest3:216-222，1996;Tayloretal"AmJR印rodImmunol6:179-184,1984;Vogletal"BritJCancer83:1338-1343，2000)。謙導體液應答背后的機制在癌癥患者中似乎是多方面的，包括引起氨基酸序列變化的點突變(JungandSchluesener,JExpMed173:273-276，1991;Winteretal"CancerRes52:4168-4174，1992;Lubinetal.，CancerRes53:5872-5876，1993)、擴增或蛋白質穩(wěn)定性增加引起的過表達(Peoplesetal"ProcNatlAmerSciUSA92:432-436，1995;Labrecqueetal"CancerRes53:3468-3471，1993)、翻譯后#"飾的變化(Koteraetal"Humoralimmunityagainstatandemrepeatepitopeofhumanmucinmuc-1inserafrombreast,pancreaticandcoloncancerpatients,C"wcer54<i/>:2S56-6<,7994;AnderssonE.HenderikxP.KrambovitisE.HoogenboomHR.BorrebaeckCA.AtandemrepeatofMUC1coreproteininducesaweakinvitroimmuneresponseinhumanBcells.CViwce尸7iim6>/0§j，47(5,*2^^-56，795^5Chinnietal.，ClinCancerRes3:1557-1564，1997)或加工中的錯誤。細胞內蛋白質的細胞外出現(xiàn)通?？梢鹱陨砜贵w的生成。抗異常細胞抗原(例如c-myb、c-myc、p53和p21ras)的自身抗體已經在顯著比例的癌癥患者中被發(fā)現(xiàn)，即便在循環(huán)系統(tǒng)中不存在可檢測的抗原(Canevarietal.,AnnalsOncol7:227-232,1996;Yamamotoetal"Oncology56:129-133，1999;Abu-Shakraetal"AnnalsRheumDis60:433-440，2001.)。在診斷時檢測到對抗這些細胞內蛋白質的抗體似乎與不良預后相關。在以前的分析p53的自體抗體的誘導的研究中，與蛋白質過表達相關的自身免疫反應傾向于針對氨基端和羧基端。相反，抗相關蛋白質p73的自身抗體似乎針對內部的突變熱點。在使用化學誘導的或可移植的自發(fā)肺瘤的實驗動物研究中，可證明循環(huán)系統(tǒng)腫瘤反應性IgG先于可觸知腫瘤或循環(huán)系統(tǒng)腫瘤抗原出現(xiàn)。本發(fā)明人及同事以前開發(fā)了"自體分型，，，以鑒定腫瘤反應性IgG的存在，并且將癌癥患者的抗原識別模式確定為一種診斷工具(TaylorandDoellgast，AnalyticalBiochemistry,98:53-59，1979.)。然而，直至最近，對誘發(fā)這種體液應答的特定抗原的分子鑒定仍不清楚?，F(xiàn)在，可將最近改進的"自體分型，，用于分析腫瘤抗原。這種被命名為SEREX的改進版本是使用對人肺瘤的重組cDNA表達庫的血清學分析鑒定免疫識別的耙標(Old,JExpMed187:1163-1167，1998)。這種技術具有數(shù)個局限，包括與細菌或噬菌體組分的高交叉反應性、源自存在于原始腫瘤中的正常組織(包括淋巴樣細胞)的cDNA的共表達，以及由于該cDNA在細菌系統(tǒng)中表達，因而不存在出現(xiàn)于腫瘤細胞中的癌癥相關的翻譯后修飾和加工，這會引起這些"基因工程的"蛋白質靶標的免疫反應性喪失。血清學分析技術已被用于為癌癥診斷確定新的靶抗原，但仍有限制其應用的缺陷。現(xiàn)在用于檢測自身抗體的抗原靶標是重組野生型蛋白質——例如p53的自身抗體的檢測已僅使用野生型p53蛋白質。野生型蛋白質的使用排除了對抗突變熱點的自身抗體的檢測。對于p53而言，大多數(shù)研究表明，自身抗體結合于氨基端或羧基端。重組野生型p53與針對突變位點的自身抗體無反應性可能說明，在卯巢癌中p53自身抗體頻率低于p53突變頻率。本申請公開的主題提供了一種診斷癌癥的新方法，所述方法克服了上文詳述的現(xiàn)有技術的局限。使用源自"天然"腫瘤細胞的蛋白質抗原(例如源自癌癥細胞的外來體)，癌癥患者的肺瘤反應性體液應答在本文公開的蛋白質陣列中的新應用提供了一種創(chuàng)新性的快速方法，來鑒定受試者中與癌癥發(fā)病和進展相關的變化(例如突變、截短和翻譯后修飾)的出現(xiàn)情況?；加袗盒约膊〉幕颊呖尚纬勺陨砻庖邩蝇F(xiàn)象，這是抗多種自身21抗原的自身抗體生成的結果，所述自身抗原包括癌蛋白、肺瘤抑制基因、增殖相關抗原和癌癥/睪丸抗原。具有同樣腫瘤類型的患者共有的特定蛋白質中的異?？纱砘镜男律锏耐?，且這些共有的變化可被用于診斷和表征癌癥，包括確定腫瘤的類型和階段。由此，在一些實施方案中，本申請公開的主題提供了一種診斷受試者的一種癌癥的方法。在一些實施方案中，所述方法包括提供來自受試者的包含或疑似包含自身抗體的一個生物樣品；將一種抗原與所述樣品接觸，其中所述抗原包括一種自身抗體免疫反應肽；檢測在所述樣品中對所述抗原產生免疫反應的自身抗體；并將自身抗體對所述抗原的免疫反應性水平與一個參考水平對比，以診斷所述受試者的所述癌癥。而且，在本申請公開的主題的一些實施方案中，提供了一種用于表征受試者中與自身抗體產生相關的癌癥的方法。例如，對所述癌癥的進一步表征可通過檢測來自所述受試者的樣品中的自身抗體并且/或者對該自身抗體定量來進行，例如通過基于定量測量存在于所述樣品中的特定自身抗體的水平來確定癌癥階段。在一些實施方案中，所述方法包括提供來自受試者的包含自身抗體的一個生物樣品；將一種抗原與所述樣品接觸，其中所述抗原包括一種自身抗體免疫反應肽；檢測在所述樣品中對所述抗原產生免疫反應的自身抗體；并對自身抗體針對所述抗原產生的免疫反應性水平定量，從而表征所述受試者中的所述癌癥。實施例部分將提供另外的用于表征存在于受試者的癌癥階段的示例性實施方案的細節(jié)。在用于診斷和/或表征受試者的癌癥的方法的一些實施方案中，所述自身抗體免疫反應肽可分離自一種外來體。本文使用的術語"癌癥"是指動物中出現(xiàn)的所有類型的癌癥、新生物或惡性肺瘤，包括白血病、癌(carcinomas)和肉瘤。癌癥的實例有腦癌、膀胱癌、乳腺癌、宮頸癌、結腸癌、頭頸癌、腎癌、肺癌、非小細胞肺癌、黑色素瘤、間皮瘤、卵巢癌、前列腺癌、肉瘤、胃癌、子宮癌和髓母細胞瘤。"白血病"是指造血器官的廣泛進行性惡性疾病，其特征通常在于血液和骨髓中的白細胞及其前體異常的增殖及發(fā)育。白血病包括，例如急性非淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、急性粒細胞性白血病、慢性粒細胞性白血病、急性前髓細胞性白血病、成人T細胞性白血病、非白血性白血病(aleukemicleukemia)、白細胞不增多性白血病(aleukocythemicleukemia)、嗜威性白血病(basophylicleukemia)、母細胞性白血病、牛白血病、慢性髓細胞性白血病、皮膚白血病、胚胎白血病(embryonalleukemia)、嗜酸性白血病(eosinophilicleukemia)、格羅斯白血病(Gross，leukemia)、毛細胞性白血病、成血性白血病(hemoblasticleukemia)、成血細胞性白血病(h柳ocytoblasticleukemia)、組織細胞性白血病、干細胞性白血病、急性單核細胞性白血病、白細胞減少性白血病、淋巴白血病(lymphaticleukemia)、成'淋巴細胞性白血病(lymphoblasticleukemia)、'淋巴細胞性白血病、成'淋巴性白血病(lymphogenousleukemia)、淋巴樣白血病(lymphoidleukemia)、淋巴肉瘤細胞性白血病、肥大細胞性白血病、巨核細胞性白血病、小成髄細胞性白血病、單核細胞性白血病、成髄性白血病(myeloblastsleukemia)、髓細胞'性白血病、髓樣粒細胞'性白血病(myeloidgranulocyticleukemia)、髓單核細胞性白血病(myelomonocyticleukemia)、Naegeli白血病、漿細胞'性白血病(plasmacellleukemia)、漿細胞'性白血病(plasmacyticleukemia)、前髓細胞'性白血病、李德爾細胞小生白血病(Riedercellleukemia)、希林氏白血病(Schilling'sleukemia)、干細胞性白血病、亞白血性白血病和未分化細胞性白血病。術語"癌"是指由傾向于浸潤周圍組織并發(fā)生轉移的上皮細胞組成的惡性新生物。示例性的癌包括，例如腺泡癌(acinarcarcinoma)、腺泡癌(acinouscarcinoma)、腺嚢性癌(adenocysticcarcinoma)、腺樣嚢性癌(adenoidcysticcarcinoma)、腺癌(carcinomaadenomatosum)、腎上腺皮質癌、肺泡癌、肺泡細胞癌、基底細胞癌(basalcellcarcinoma)、基底細胞癌(carcinomabasocellulare)、基底細胞樣癌(basaloidcarcinoma)、基底鱗狀細胞癌(basosquamouscellcarcinoma)、細支氣管肺泡癌(bronchioalveolarcarcinoma)、支氣管癌(bronchiolarcarcinoma)、支氣管源性癌(bronchogeniccarcinoma)、腦樣癌(cerebriformcarcinoma)、膽管細胞癌(cholangiocellularcarcinoma)、絨毛膜癌(chorioniccarcinoma)、股樣癌(colloidcarcinoma)、粉刺狀癌(comedocarcinoma)、子宮體癌(corpuscarcinoma)、篩狀癌(cribriformcarcinoma)、胸廓癌(carcinomaencuirasse)、皮跌癌(carcinomacutaneum)、柱狀細胞癌(cylindricalcarcinoma)、柱狀細胞癌(cylindricalcellcarcinoma)、導管癌、硬癌(carcinomadurum)、胚胎性癌(embryonalcarcinoma)、體樣癌(encephaloidcarcinoma)、epiennoid癌(epiennoidcarcinoma)、腺樣上皮癌(carcinomaepithelialeadenoides)、夕卜植癌(exophyticcarcinoma)、潰瘍性癌(carcinomaexulcere)、硬癌(carcinomaf!brosum)、股狀癌(gelatiniformcarcinoma)、股樣癌(gelatinouscarcinoma)、巨大細胞癌(giantcellcarcinoma)、巨細胞癌(carcinomagigantocellulare)、腺癌(glandularcarcinoma)、顆粒細胞癌(granulosacellcarcinama)、毛母質癌(hair-matrixcarcinoma)、多血癌(hematoidcarcinoma)、肝細胞癌(hepatocellularcarcinoma)、大嗜酸細胞癌(Hurthlecellcarcinoma)、透明質癌(hyalinecarcinoma)、hypemephroid癌(hypemephroidcarcinoma)、幼稚型胚月臺性癌(infantileembryonalcarcinoma)、原位癌、表皮內癌(intraepidermalcarcinoma)、上皮內癌(intraepithelialcarcinoma)、克龍》泉切爾癌(Krompecher'scarcinoma)、Kulchitzky細胞癌(Kulchitzky-cellcarcinoma)、大細胞癌(large-cellcarcinoma)、豆狀癌(lenticularcarcinoma)、豆狀癌(carcinomalenticulare)、月旨瘤癌(lipomatouscarcinoma)、淋巴上皮癌(lymphoepithelialcarcinoma)、髓樣癌(carcinomamedullare)、號樣癌(medullarycarcinoma)、黑色素癌(melanoticcarcinoma)、軟癌(carcinomamolle)、粘液癌(mucinouscarcinoma)、粘液癌(carcinomamuciparum)、粘液細胞癌(carcinomamucocellulare)、粘液表皮樣癌(mucoepidermoidcarcinoma)、粘液癌(carcinomamucosum)、粘液癌(mucouscarcinoma)、粘液瘤樣癌(carcinomamyxomatodes)、鼻咽癌(naspharyngealcarcinoma)、燕麥細胞癌(oatcellcarcinoma)、骨化性癌(carcinomaossificans)、類骨質癌(osteoidcarcinoma)、乳頭狀癌(papillarycarcinoma)、門脈周癌(periportalcarcinoma)、原位癌(preinvasivecarcinoma)、棘細胞癌(pricklecellcarcinoma)、軟糊狀癌(pultaceouscarcinoma)、腎的腎細胞癌(renalcellcarcinomaofkidney)、儲備細胞癌(reservecellcarcinoma)、肉瘤樣癌(carcinomasarcomatodes)、施奈德癌(schneideriancarcinoma)、硬癌(scirrhouscarcinoma)、陰嚢癌(carcinomascroti)、印戒細胞癌(signet-ringcellcarcinoma)、單純癌(carcinomasimplex)、小細胞癌(small-cellcarcinoma)、硬癌(solanoidcarcinoma)、球狀細胞癌(spheroidalcellcarcinoma)、梭形細胞癌(spindlecellcarcinoma)、號樣癌(carcinomaspongiosum)、鱗癌(squamouscarcinoma)、蜂狀細胞癌(squamouscellcarcinoma)、繩捆癌(stringcarcinoma)、血管擴張性癌(carcinomatelangieetatieum)、血管擴張性癌(carcinomatelangiectodes)、移行細胞癌(transitionalcellcarcinoma)、結節(jié)性皮癌(carcinomatuberosum)、結節(jié)性皮癌(tuberouscarcinoma)、疾狀癌(verrucouscarcinoma)和絨毛狀癌(carcinomavillosum)。術語"肉瘤"通常是指這樣的肺瘤，即這種腫瘤由胚胎結締組織之類的物質構成，并且通常由嵌于纖維物質或同質物質中壓實的細胞組成。肉瘤包括，例如軟骨肉瘤、纖維肉瘤、淋巴肉瘤、黑素肉瘤、粘液肉瘤、骨肉瘤、Abemethy肉瘤(Abemethy'ssarcoma)、月旨肪肉瘤(adiposesarcoma)、月旨肪肉瘤(liposarcoma)、腺泡狀軟組織肉瘤(alveolarsoftpartsarcoma)、成釉細胞肉瘤、葡萄狀肉瘤(botryoidsarcoma)、綠色瘤肉瘤、絨毛膜癌、胚胎性肉瘤(embryonalsarconm)、Wilns肺瘤肉瘤(Wilns'tumorsarcoma)、子宮內膜肉瘤(endometrialsarcoma)、間質肉瘤(stromalsarcoma)、尤因肉瘤(Ewing'ssarcoma)、筋膜肉瘤(fascialsarcoma)、纖維母細胞肉瘤(fibroblasticsarcoma)、巨細胞肉瘤(giantcellsarcoma)、粒細胞肉瘤(granulocyticsarcoma)、霍奇金肉瘤(Hodgkin'ssarcoma)、特發(fā)性多發(fā)性色素沉著出血性肉瘤(idiopathicmultiplepigmentedhemorrhagicsarcoma)、B細胞免疫母細胞肉瘤(immunoblasticsarcomaofBcells)、淋巴瘤、T細胞免疫母細胞肉瘤(immunoblasticsarcomaofT-cells)、詹森肉瘤(Jensen'ssarcoma)、卡》皮西肉瘤(Kaposi'ssarcoma)、肝巨喧細胞肉瘤(Kupffercellsarcoma)、血管肉瘤(angiosarcoma)、白血病'性肉瘤(leukosarcoma)、惡'性間葉肉瘤(malignantmesenchymomasarcoma)、骨膜外肉瘤(parostealsarcoma)、網(wǎng)織紅細胞肉瘤(reticulocyticsarcoma)、勞斯肉瘤(Roussarcoma)、漿液嚢'性肉瘤(serocysticsarcoma)、滑膜肉瘤和毛細血管擴張'性肉瘤(telangiectaticsarcoma)。術語"黑色素瘤"用以指一種起源于皮膚和其他器官的黑色素細胞體系的腫瘤。黑色素瘤包括，例如肢端雀斑樣痣黑色素瘤25(acral-lentiginousmelanoma)、無黑色素性黑色素瘤(amelanoticmelanoma)、良性幼年黑色素瘤(benignjuvenilemelanoma)、克勞德曼黑色素瘤(Cloudman'smelanoma)、S91黑色素瘤、哈-帕二氏黑色素瘤(Harding畫Passeymelanoma)、幼年黑色素瘤(juvenilemelanoma)、惡性雀斑樣痣黑色素瘤(lentigomalignamelanoma)、惡性黑色素瘤(malignantmelanoma)、結節(jié)性黑色素瘤(nodularmelanoma)、曱下黑色素瘤(subungalmelanoma)和淺表擴散性黑色素瘤(superflcialspreadingmelanoma)。另外的癌癥包括例如，霍奇金病(Hodgkin'sDisease)、非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin'sLymphoma)、多發(fā)性骨髓瘤、神經母細胞瘤、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、橫紋肌肉瘤、原發(fā)性血小板增多癥(primarythrombocytosis)、原發(fā)性巨球蛋白血癥、小細胞肺癌腫瘤(small-celllungtumors)、原發(fā)性腦腫瘤、胃癌、結腸癌、惡性胰島素瘤(malignantpancreaticinsulanoma)、惡性類癌(malignantcarcinoid)、癌前皮跌病變(premalignantskinlesions)、睪丸癌、淋巴瘤、甲狀腺癌、神經母細胞瘤、食管癌、生殖泌尿道癌(genitourinarytractcancer)、惡性高釣血癥、宮頸癌、子宮內膜癌和腎上腺皮質癌。在一些實施方案中，所述癌癥為一種上皮癌或一種腺癌。例如，在一些實施方案中，所述障礙可為起源自上皮組織的卵巢癌或宮頸癌。再例如，在一些實施方案中，所述障礙可為選自但不限于卵巢癌、宮頸癌、乳腺癌、子宮內膜癌、結腸癌、前列腺癌、肺癌、黑色素瘤和胰腺癌的一種腺癌。在一些實施方案中，可選擇一種或多種用于檢測已與癌癥(以及在一些實施方案中，癌癥的具體階段)關聯(lián)的自身抗體的抗原。與癌癥相關的自身抗體發(fā)生免疫反應并且可與本申請的方法一起使用的抗原的非限制性實例在下文的表中列出。作為一個實例，可應用癌癥抗原肽，例如凋亡蛋白抑制物(IAP)家族的成員(例如生存素)。生存素在大多數(shù)胰臟腺癌中表達(Sarelaetal.Expressionofsurvivin，anovelinhibitorofapoptosisandcellcycleregulatoryprotein,inpancreaticadenocarcinoma.BrJCancer.2002Mar18;86(6):886-92)。可用于本申請方法的其他抗原包括粘蛋白(例如CA125(MUC-16)、TAG-72和MUC-1)。許多腺癌中會出現(xiàn)粘蛋白產生的增多，包括胰腺癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、結腸癌等。腫瘤相關的抗原MUC-1在多種來源的人腺癌中過表達且糖基化不足，所述多種來源例如乳房、卵巢和結腸(Henderikxetal.Humansingle-chainFvantibodiestoMUC-1corepeptideselectedfromphagedisplaylibrariesrecognizeuniqueepitopesandpredominantlybindadenocarcinoma.CancerRes.1998Oct1;58(19):4324-32)。另外，腫瘤相關的糖蛋白TAG-72在大多數(shù)人腺癌中表達，但^艮少在大部分正常組織中表達(Yoonetal.Construction,affinitymaturation,andbiologicalcharacterizationofananti-tumor-associatedglycoprotein-72humanizedantibody.JBiolChem.2006Mar17;281(ll):6985-92)?？捎糜诒旧暾埛椒ǖ钠渌乖ò?睪丸抗原(例如NY-ESO-l、SSX-1、SSX-2、SSX-4和SCP-1)。作為一個實例，現(xiàn)已證明癌-睪丸抗原在卵巢漿液性新生物中的表達可與其惡性的程度直接相關。可用于本申請方法的其他抗原包括熱休克蛋白(例如HSP27、HSP60、HSP卯和GRP78)。例如，現(xiàn)已證明HSP在肺腺癌中的表達較高。而且，HSP70和HSP90可能與子宮內膜癌的發(fā)生和預后相關聯(lián)。亦見例如Crouteetal.Expressionofstress-relatedgenesinacadmium-resistantA549humancellline.JournalofToxicology&EnvironmentalHealthPartA.68(9):703-18,2005;Liangetal.Mislocalizationofmembraneproteinsassociatedwithmultidrugresistanceincisplatin-resistantcancercelllines.CancerResearch.63(18):5909醫(yī)16，2003;Lee.GRP78inductionincancer:therapeuticandprognosticimplications.CancerResearch.67(8):3496-9，2007;和Leeetal.GRP78asanovelpredictorofresponsivenesstochemotherapyinbreastcancer.CancerResearch.66(16):7849畫53，2006?？捎糜诒旧暾埛椒ǖ目乖硪粚嵗ㄩg皮素，它是存在于正常間皮細胞上并在多種人腫瘤中過表達的分化抗原，所述人肺瘤包括間皮瘤、卵巢腺癌和胰腺癌(Hassanetal.Mesothelin:anewtargetforimmunotherapy.ClinCancerRes.2004Jim15;10(12Pt1):3937-42;Baruchetal.lmmunocytochemicalstudyoftheexpressionofmesothelininfine-needleaspirationbiopsyspecimensofpancreaticadenocarcinoma.DiagnosticCytopathology.35(3》143-7，2007Puetal.UtilityofWT-l，p63，MOC31,mesothelin,andcytokeratin(K903andCK5/6)immunostainsindifferentiatingadenocarcinoma,squamouscellcarcinoma,andmalignantmesotheliomaineffusions.DiagnosticCytopathology.36(1):20國5，2008;Arganietal.Mesothelinisoverexpressedinthevastmajorityofductaladenocarcinomasofthepancreas:identificationofanewpancreaticcancermarkerbyserialanalysisofgeneexpression(SAGE).ClinicalCancerResearch.7(12》3862-8，2001;和Dennisetal.Markersofadenocarcinomacharacteristicofthesiteoforigin:developmentofadiagnosticalgorithm.ClinicalCancerResearch.11(10):3766誦72，2005)。<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>HSP-90胞質GRP-78胞質前溶酶體酶家親組織蛋胞質族的酶前體白酶-DPLAP質膜粘附分子EpCAM質膜粘蛋白TAG-72胞質和質膜CA125質膜Muc-1Mel誦CAM質膜Muc-16質膜粘附相關的蛋間皮素質膜白質(糖蛋白)激酶家族EGF激酶胞質監(jiān)用于診斷不孕障礙的方法本申請公開的主題進一步提供了用于診斷和表征受試者中的不孕障礙的方法。不孕障礙是常見的醫(yī)學病癥，每年有大約730萬美國人患此癥。據(jù)估計，約10%-15%的嘗試懷孕的已婚夫婦在一年后仍沒有懷孕。不孕障礙包括女性不孕癥，這是一個由健康保健提供者針對如下這樣的女性所使用的術語，即這些女性在嘗試至少一年后仍不能懷孕或者能懷孕但不能維持妊娠至足月。女性不孕癥的大多數(shù)病例由排卵的問題引起。一些影響生育能力(fecundity)和生育(fertility)的不孕障礙包括卵巢功能早衰(POF)，其中卵巢在自然絕經前停止工作；多嚢性卵巢綜合征(PCOS)，其中卵巢不能有規(guī)律地釋放卵子或不能釋放活的健康卵子；以及由子宮內膜異位癥引起的生殖病理。其他不孕障礙可包括子宮內膜異位癥、先兆子癇、早產、子宮內發(fā)育受限和反復妊娠丟失。目前，健康保健專家通過以下方式診斷不孕癥進行由評估排卵狀態(tài)組成的病情檢查，進行鑒定子宮或輸卵管病理學或者其他成因性因素的檢查。在許多情況下，經排除常見的根本病因學并且在兩個月經周期后完成臨床診斷。生殖衰竭，一一包括反復自然流產和其他不孕障礙一一可由多種原因引起。29自身免疫機制參與到不孕障礙中，例如子宮內膜異位癥和卵巢衰竭，并且可能是先兆子癇或自然流產的病理生理學的原因。在33-61%的原因不明性不孕癥患者中已檢測到抗卵巢的自身抗體，表明該病理學可代表早期階段的自身免疫性卵巢衰竭。如在其他自身免疫病理學(例如l型糖尿病和曱狀腺炎)中那樣，抗卵巢的抗體可在發(fā)生臨床癥狀之前數(shù)月或數(shù)年出現(xiàn)，因此它們可在患有原因不明性不孕癥的女性中預測未來的卯巢衰竭。子宮內膜異位癥是一種折磨多達10%的育齡女性的疾病，其特征在于激素調節(jié)的子宮外的子宮內膜組織生長。已知子宮內膜異位癥可造成30-50%患病女性的女性不孕障礙。已表明自身免疫機制可能參與其中，抗不同候選自身抗原的抗體在這些患者中已被證實。雖然子宮內膜異位癥中的不孕機制還不完全清楚，但是在多達三分之二的患者中已發(fā)現(xiàn)子宮內膜異位癥與自身抗體和/或其他自身免疫疾病有關。已有報道，在患有子宮內膜異位癥的患者中100%的存在抗子宮內膜的抗體，62%的存在抗卵巢的抗體。已在POF中研究了自身免疫的參與，自身免疫形式的POF的總比例估計為20-70%。在多種情形下，人卵巢可作為自身免疫攻擊的靶標，所述情形包括多種器官特異性或全身性自身免疫疾病。在臨床上，隨后的卵巢功能障礙經常會引起POF,而涉及卵巢的其他病理學例如原因不明性不孕癥、PCOS和子宮內膜異位癥已與抗卵巢的自身免疫相關聯(lián)。對這些病理學中的自身免疫機制的診斷有賴于對抗卵巢的自身抗體的檢測，但最近特別的關注還集中在自身免疫反應的細胞組分上。然而，對自身免疫效應物的分子靶標的了解很少，并且真正被鑒定的自身抗原很少。對針對多種卵巢靶標的自身抗體的檢測可支持POF的自身免疫病因學的假設。對抗卵巢的抗體的最初報道主要包括患有POF和相關的腎上腺自身免疫疾病的患者。這些患者具有這樣的抗體，即該抗體可識別腎上腺皮質、睪丸、胎盤和卵巢的產生類固醇的多種類型細胞，并且被稱為類固醇細胞抗體(SCA)。SCA的流行依賴于這樣的臨床特征它們可在大約60%的APS-I患者和25-40%的APS-II患者中被檢測到，但最常(78-100%)出現(xiàn)于患POF的患者中。還已表明，33-43%的患多內分泌病和SCA的正常周期的女性將在8-15年內發(fā)生卵巢衰竭。生殖衰竭的另一種常見原因是PCOS，其特征在于與多種臨床癥狀相關的高雄激素長期無排卯狀態(tài)，并影響5-10%的生育年齡的女性。雖然PCOS以及無該綜合征的多嚢卵巢與激素失調有關，但是已表明有自身免疫失調。已報道了具有與抗卵巢的血清抗體相關的嚢方面的自身免疫卯巢炎的組織病理學特征。多位研究人員已描述了非器官特異性和器官特異性自身抗體的普遍存在，并且已在50-60%的PCOS患者中證明有抗卵巢的抗體。Timg報道了在鼠模型中產生卵母細胞自身抗體可引起卵巢衰竭。無臨床癥狀的患者中的自身免疫功能障礙還可引起反復的自然流產。事實上，某些反復流產者具有一種或多種異常自身抗體。在反復流產中已涉及抗磷脂的抗體、抗DNA的抗體和抗核的抗體。一種自然流產的機制被認為是胎盤血管的血栓形成和胎盤梗死，它們由自身抗體抗p2-糖蛋白I、凝血酶原(prothrombin)和/或膜聯(lián)蛋白V(annexinV)的反應所致。另一個可能的原因是自身抗體直接結合于細胞滋養(yǎng)層細胞，通過阻止分化成合體滋養(yǎng)層減少滋養(yǎng)層侵入至母體蛻膜和植入。免疫系統(tǒng)已顯示在卵巢功能早衰、多嚢卵巢綜合征、子宮內膜異位癥、反復妊娠丟失和其他不孕障礙的發(fā)病機制中起到重要作用。本申請公開的主題提供了免疫反應性的標記物(例如與一種不孕障礙相關的自身抗體)作為不孕障礙診斷輔助工具的用途，所述不孕障礙包括但不限于POF、PCOS、子宮內膜異位癥、先兆子癇、早產、子宮內發(fā)育受限和反復妊娠丟失。而且，如本申請公開的主題提供的，對于抗生殖道上特定組分的自身免疫的評估是一種用于不孕癥治療的預后工具。由此，在本申請公開的主題的一些實施方案中，提供了一種診斷受試者中的不孕障礙的方法。在一些實施方案中，所述方法包括提供來自受試者的包含或疑似包含自身抗體的一個生物樣品；將一種抗原與所述樣品接觸，其中所述抗原包括一種自身抗體免疫反應肽；在所述樣品中檢測對所述抗原產生免疫反應的自身抗體；并將自身抗體對所述抗原的免疫反應性水平與一個參考水平比較，以在診斷所述受試者中的所述不孕障礙。而且，在本申請公開的主題的一些實施方案中，提供了一種用于表征受試者中的與自身抗體產生相關的不孕障礙的方法。在一些實施方案中，所述方法包括提供來自受試者的包含自身抗體的一個生物樣品；將一種抗原與所述樣品接觸，其中所述抗原包括一種自身抗體免疫反應肽；在所述樣品中檢測對所述抗原發(fā)生免疫反應的自身抗體；并對自身抗體針對所述抗原產生的免疫反應性水平定量，從而表征所述受試者中的所述不孕障礙。例如，在一些實施方案中，所述不孕障礙選自但不限于卵巢功能早衰(POF)、多嚢性卵巢綜合征(PCOS)、子宮內膜異位癥、先兆子癇、早產、子宮內發(fā)育受限和反復妊娠丟失(自然流產)。而且，在一些實施方案中，所檢測的自身抗體對源自卵巢、子宮內膜、胎盤或它們的結合的抗原有免疫反應性。在用于診斷和/或表征受試者中的不孕障礙的方法的一些實施方案中，所述自身抗體免疫反應肽可分離自一種外來體。在一些實施方案中，所述自身抗體免疫反應肽為選自以下的肽抗原分子量約50kD和80kD的核抗原以及分子量約10kD、30kD、45kD、90kD和125kD的膜抗原。膜蛋白質識別由所有不孕癥共有；然而，核蛋白質識別似乎是子宮內膜異位癥所特有的。IL用于檢測自身抗體的試劑盒在另一些實施方案中，本申請公開的主題提供了用于檢測生物樣品中的自身抗體的免疫試劑盒。這類試劑盒一般可包含一種或多種本文公開的可與測試自身抗體發(fā)生免疫反應的抗原。在一些實施方案中，所述抗原分離自外來體，正如本文所公開的那樣。因此，更具體地，所述免疫檢測試劑盒將在合適的容器中包含一種或多種自身抗體免疫反應性肽抗原。在一些實施方案中，所述試劑盒進一步包含與所述抗原結合的抗體和/或經例如Fc部分與其他抗體(例如目標自身抗體)結合的抗體。在某些實施方案中，所提供的抗原可結合于一種固體支持物上，例如柱基質或微量滴定板的孔、膜(例如硝酸纖維素、PVDF或類似材料)、珠子或者浸漬片。或者，所述支持物可作為所述試劑盒的單獨組分提供。所述試劑盒的免疫檢測試劑可包含與所給定的檢測抗體或所述32抗原本身相關聯(lián)或者連接的可檢測標記。與一種第二結合配體相關聯(lián)或者連接的可檢測標記也被考慮。這種可檢測標記包括染料、半抗原、化學發(fā)光分子或熒光分子(羅丹明、熒光素、綠色熒光蛋白、螢光素酶)、生物素、放射標簽(3H、35S、32P、"C、1311)或酶(堿性磷酸酶、辣根過氧化物酶)。所述試劑盒可進一步包含合適的設定量的標準品，同時包括抗體和抗原。它們可用于制備檢測測定的標準曲線。不管本申請公開的主題的試劑盒的類型如何，它通常均可包含裝有合適分裝的所述生物試劑的一個或多個容器。所述試劑盒的組分可以水性介質的形式或以凍干的形式包裝。本申請公開的主題的組合物可被有利地包裝于這樣的一個試劑盒中，即該試劑盒包含所述一種或多種活性試劑、一個合適的容器以及還有使用所述試劑盒的說明書。所述試劑盒的一種或多種試劑可以一種附著于一種固體支持物的液體溶液形式提供或以一種干粉形式提供。如果以一種液體溶液形式提供所述試劑，那么所述液體溶液可以是一種水性溶液。如果所提供的試劑附著于一種固體支持物，那么所述固體支持物可為層析介質(chromatographmedia)、具有多個孔的測試板或顯微鏡載玻片。如果所提供的試劑為干粉，那么通過添加一種合適溶劑可將所述粉體復水，所述溶劑可被提供。所述試劑盒的容器一般可包括所述抗原可置于其中且可根據(jù)需要適當?shù)胤盅b的至少一個微量滴定板孔、載玻片、玻璃瓶、試管、燒瓶、瓶子、或者甚至注射器或其他容器。如果提供了第二或第三結合配體或另外的組分，那么所述試劑盒通常還可包含這種配體或組分可置于其中的第二個、第三個或其他另外的容器。本申請的主題試劑盒一般還可包含一種結構，用于在商業(yè)銷售時以密封方式包含所述抗原容器及任何其他試劑容器。這種結構可包括注模或吹模塑料包裝體，所需容器被保持于其中。實施例引入以下的實施例來說明本申請公開的主題的實施方式?？紤]到本申請的公開內容及本領域中的一般技術水平，本領域技術人員應了解，以下的實施例僅旨在示例，并且只要不偏離本申請公開的主題的范圍進行多種改變、修飾和修改。實施例1反應性抗體與癌癥關聯(lián)自身反應性抗體已被證明普遍存在于所有受測試的癌癥患者中。在卵巢癌患者(11=28)和無腫瘤的年齡匹配女性志愿者(n=32)中分析了腫瘤反應性自身抗體的出現(xiàn)情況。通過ELISA定量測定了卵巢癌患者血清中IgG的存在及其與源自卵巢腫瘤的細胞抗原的反應性。將來自對數(shù)生長期的UL-1卵巢腫瘤細胞的腫瘤來源細胞抗原以1:25稀釋到由100mM碳酸鈉和0.5MNaCl組成的偶聯(lián)緩沖液(pH8.3)中。將等份試樣添加至96-孔Immulon4微量滴定板的孔中，并在37。C下孵育過夜。將所述板以5%脫脂奶粉封閉，然后在4。C下與來卵巢癌患者和年齡匹配的正常對照的以1/200稀釋的200jil血清孵育過夜。將所述板洗滌并與過氧化物酶綴合的人IgG的抗體(以1/5000稀釋)孵育，通過以下方式測量存在的結合抗體將所述孔與含OPD(0.4mg/ml)的50mM檸檬酸鹽緩沖液孵育，在490nm測量吸光度。所有卵巢癌患者都表現(xiàn)出識別出卵巢腫瘤來源蛋白質的自身抗體水平，該水平顯著高于其不攜帶癌的對應者(p<0.0001)。對照群體血清中觀察到的IgG結合水平代表背景水平。在所述癌癥患者和對照組之間在IgG與腫瘤抗原結合方面沒有出現(xiàn)重疊。由于癌癥患者呈現(xiàn)了一個升高的腫瘤反應性抗體水平，并且這些自身抗體的水平呈現(xiàn)了顯著的差異性，所以在這些腫瘤反應性IgG的相對吸光度和疾病階段之間進行統(tǒng)計學比較。關于與UL-1卵巢腫瘤分開(圖1)。反應性i:G的水平隨疾病階段的發(fā)展出、現(xiàn)升高。來自I期癌癥患者(n=8)的血清在如下背景之上呈現(xiàn)出顯著的升高正常血清的背景(n=32，p<0.001)或患良性卯巢疾病女性的血清的背景(n=8，p<0.01)。在來自I期卵巢癌和低惡性可能性的卵巢腫瘤的血清中檢測的免疫反應性沒有出現(xiàn)顯著差異。11期患者(11=10)中出現(xiàn)的免疫反應性水平顯著高于I期患者中出現(xiàn)的水平(p<0.001),并顯著低于m期患者(n=8)的血清中檢測的水平(P<o.oi)。m期患者中出現(xiàn)的免疫反應性水平顯著低于IV期患者(n=8)中出現(xiàn)的水平(p<0.001)。因此，卵巢癌患者呈現(xiàn)了與疾病階段相關的腫瘤反應性抗體。實施例2腫瘤反應性IgG的特異性抗原耙標識別由于獲自卵巢癌患者血清的自身抗體對卵巢肺瘤抗原的反應性基于疾病的階段可表現(xiàn)出量的差異，由此也使用蛋白質免疫印跡和密度測定研究了性質上的差異。使用來自對數(shù)生長期的3個卵巢肺瘤細胞系(UL-1、UL-3和UL-6)的細胞蛋白抗原，通過蛋白質免疫印跡評估了與卵巢癌患者的體液免疫應答反應的組分的存在(圖2,代表性的印跡)。使用患者血清(1:100稀釋)作為第一抗體源進行蛋白質免疫印跡。先使用過氧化物酶綴合的人IgG的抗體，然后使用ECL顯示源自患者的抗體與源自腫瘤細胞的抗原的結合。通過密度測定定量測定免疫反應性。分析了所識別的抗原及該識別的強度上的差異。分析了十(10)個I期血清、十(10)個II期血清、十(10)個m期血清和十二(12)個IV期血清。對于所有卯巢癌患者，這些蛋白質免疫印跡鑒定了分子量介于10-140kD的多條帶，但在患者中免疫相互作用的數(shù)量和強度是不同的。信號在所述免疫印跡上的強度變化與疾病的階段有關(每條帶的總像素，相關系數(shù)r-0.906)。雖然，晚期癌癥患者通常識別更大強度的更多條帶，但是來自卵巢癌患者的IgG在這些蛋白質免疫印跡上出現(xiàn)了階段特異性的差異識別模式。除了階段相關的定量差異之外，早期階段的患者還呈現(xiàn)出對分子量大于100kD的數(shù)種抗原所特有的強烈識別(圖A中的框示出)，而晚期患者還呈現(xiàn)出對分子量小于40kD的抗原所特有的識別(圖B中的框示出)。作為一個對照，還測試了正常血清對這些蛋白質的反應性，以及所述癌癥患者血清對正常卵巢上皮的反應性。通過蛋白質免疫印跡沒有發(fā)現(xiàn)來自正常(不攜帶腫瘤)女性對照的血清會識別蛋白質，而癌癥患者的血清僅呈現(xiàn)與正常卵巢上皮的幾個條帶的反應性。由于一些抗原可被早期血清識別，并繼續(xù)被來自晚期患者的血清35識別，這可表明這些抗原性蛋白質在早期表達并且其表達在整個腫瘤進展中得以保持。一些蛋白質似乎僅在腫瘤進展的晚期被識別，表明它們在后來發(fā)生改變和/或后來才出現(xiàn)。然而，由于它們在患者中的識別情況相同，因此在這些患者中它們可代表共同的變化。一些抗原性蛋白質似乎優(yōu)先在早期被識別，表明早期腫瘤發(fā)生的關鍵蛋白質出現(xiàn)了改變。對這些階段特異性改變的蛋白質的鑒定提供了對腫瘤發(fā)生和進展的每個階段均很重要的改變的進一步了解。其他研究人員使用蛋白質印跡或基于源自腫瘤的抗原的ELISA的工作已在所有受試患者中檢測到了腫瘤反應性抗體:然而，對特異性抗原蛋白質的識別的評估還沒有在100%的患者中鑒定出單一組分，大多數(shù)單一蛋白質僅在10-40%的患者#皮識別出。這種有限的識別可能是由于大多數(shù)肺瘤反應性自身抗體的研究使用了重組蛋白質(在許多情況中是野生型蛋白質)，所述蛋白質缺乏可修改抗原表位的癌癥相關的翻譯后修飾，這可能會低估真實的免疫反應性水平。自身抗體對在正常及癌癥組織中廣泛表達的抗原的應答似乎可歸因于腫瘤特異性突變或翻譯后修飾。雖然在所有癌癥中均可檢測到腫瘤反應性自身抗體，但是腫瘤反應性IgG識別這些來自不攜帶癌癥的志愿者的特異性抗原的事件很罕見(<1%),并且在本申請公開的測定系統(tǒng)中沒有檢測到這種事件。實施例3標記物鑒定的治療響應由于在晚期疾病的患者中出現(xiàn)了反應性模式的差異，因而檢查了這種差異和化學抗性之間的相關性。通過2維電泳分離細胞組分并隨后進行蛋白質免疫印跡，使得這些差異中的一些可被評估。使用來自對順鉑治療無最初響應的患者及呈現(xiàn)最初響應并>12個月保持無疾病的患者的血清，鑒定了對與順鉑抗性相關的3個點的一簇的識別(圖3)。利用這些細胞抗原作為本文公開的診斷陣列的一部分可使抗性腫瘤被及早地鑒定。實施例4對體內識別的抗原蛋白質進行鑒定36由于患者的體液應答是針對與卵巢腫瘤相關的特定階段相關的蛋白質，所以對這些免疫反應性抗原的鑒定通過開發(fā)一種蛋白質陣列開始。為了使分析的總蛋白質的數(shù)目最少，通過免疫沉淀將免疫反應性蛋白質分離。IgG分離自3名患晚期卵巢癌的女性的血清，分離使用的是lmlHITRAPPROTEING-SEPHAROSE⑧柱(GEHealthcare)。將結合的IgG級分以IMMUNPURE⑧洗脫緩沖液(GEHealthcare)洗脫，在280nm監(jiān)測。將含IgG的級分合并并濃縮，然后依照生產商的說明書偶聯(lián)至HITRAPNHSTM柱(GEHealthcare)。將來自UL-1卵巢肺瘤細胞的細胞蛋白質溶解并澄清。將固定的患者IgG的等分試樣在4。C與所述細胞蛋白質制品孵育過夜，然后將結合的復合物洗脫。將這些免疫純化的細胞蛋白質在4.6x250mmC8(300fi)柱上通過RP-HPLC色諳法分級分離。將所得到的級分通過speed-vac干燥，用于開發(fā)蛋白質陣列。將所述蛋白質溶液(2.5nl)手工加載至單個斑點上。將一個過氧化物酶綴合的Ig樣品點至每個膜上作為陽性對照并用于所述陣列的定位(在圖4A和4B中顯示為C道)。將來自晚期卵巢癌患者的血清(1:100稀釋)在4。C與所述膜孵育過夜，然后將膜與過氧化物酶綴合的人IgG的抗體孵育，通過ECL顯像。將所形成的膜成像，并使用用于斑點識別和定量的柯達分析軟件(Kodakanalysissoftware)分析。每個被分析的卵巢癌患者均識別了多個蛋白質；然而，所有患者都識別一些蛋白質。使用該陣列系統(tǒng)，對照(非癌癥患者)血清(11=10)未識別任何蛋白質靶標。為了鑒定引起這種觀察到的與患者自身抗體的免疫反應的特異性蛋白質，將對應于這些被卵巢癌患者的體液免疫應答所識別的蛋白質的一部分進行基質輔助激光解吸-飛行時間(MALDI-TOF)質譜，接著進行胰蛋白酶消化。將所產生的肽在熔融二氧化珪微細管柱(75x200nm，PolymicroTechnologies,Inc.)上通過HPLC分級分離，并使用0-80%線性梯度乙腈的0.1M乙酸溶液(140B溶劑送遞系統(tǒng))直接洗脫至三重四極質鐠儀(TSQ70，F(xiàn)innigaiiMAT)的電噴霧離子源中。獲得每個峰的質譜并將對每種蛋白質產生的分子量片段與其他已知蛋白質的數(shù)據(jù)庫比較，用于鑒定蛋白質。還分析了另外的常見峰(11、19、44和49);然而，這些本申請的方法可鑒定一組僅被患卵巢癌的患者識別的抗原(圖5)。本文公開的數(shù)據(jù)表明與疾病的存在、階段和化學抗性相關的反應性組分的存在。數(shù)個小組已提出，蛋白質在癌癥發(fā)生早期表達，以及它們中的多種已被發(fā)現(xiàn)可誘發(fā)自身抗體。Disis等人(Globalroleoftheimmunesysteminidentifyingcancerinitiationandlimitingdiseaseprogression.0/C7/w/c/(9"co/ogj;'23(35"S9Z-5，2卵5Z)ec.)證明，癌癥患者在疾病早期階段出現(xiàn)對腫瘤相關抗原的血清抗體反應。抗p53的自身抗體已在患早期階段的卵巢癌、結直腸癌和口腔癌的患者中被報道。本申請的結果表明免疫反應性相對于階段的顯著差異，甚者，在早期階段癌癥中的識別也不同于正常和良性卵巢疾病。這些差異表示出定量的差異(結合強度或效價)，而不是定性的差異；然而，本申請公開的診斷陣列的設計使得能同時地鑒定自身抗體的存在并且對它們的結合(強度)定量。因此，本發(fā)明人已證明在腫瘤反應性抗體結合(強度)中存在的定量差異可充分區(qū)分癌癥狀態(tài)和階段，從而用于診斷。實施例5對具有確立的蛋白質靶的蛋白質陣列進行評估使用抗本發(fā)明人以前鑒定的自身抗原蛋白質的市售抗體(表1)，通過免疫沉淀從溶解的UL-1卯巢癌細胞分離蛋白質。將這些分離的蛋白質用于確立一個蛋白質陣列，以確定本申請的方法的效力。將這些免疫純化的細胞蛋白質用于開發(fā)一個蛋白質陣列，所述蛋白質陣列由1.5x2cm的總尺寸上的12個點組成。將12種蛋白質溶液的每一種(2.5jU)手工加載至單個的點上。將過氧化物酶綴合的IgG點至每張膜上作為陽性對照并用于所述陣列的定位。將以1:100稀釋的來自正常女性對照(n=20)、患良性卵巢疾病的女性(n=20)和患侵襲性卵巢癌的女性(n=20)的血清在4。C與所述膜孵育過夜。然后將膜與過氧化物酶綴合的人IgG的抗體孵育，通過ECL顯像。將所形成的膜成像，并使用用于斑點識別和定量的柯達分析軟件分析。將大于900像素的吸光度設置為陽性，并比較免疫反應性陽性的血清的百分數(shù)。來自所有患侵襲性卵巢癌的女性的血清識別至少2/12的受測抗原；然而，來自對照和患良性疾病的女性的血清也表現(xiàn)出對至少一種抗原的顯著識別。相反，對4種或更多種的這些抗原的識別局限于來自患侵襲性卵巢癌的女性的血清。將對4種或更多種抗原的識別設置為截止值產生了一種這樣的測定，即該測定具有區(qū)分患侵襲性卵巢癌和患良性卵巢疾病的患者的能力，并且敏感性=100%、特異性=76%且陽性預測值=100%。見圖6。表l:從卵巢癌細胞分離、用于所述陣列的細胞抗原，以及具有抗所述陣列中每種蛋白質的自身抗體的卵巢癌患者的百分比。;抗原蛋白靶標i具有自體反應性IgG的患者(％);同源框基因家族<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>A114(EGFR激酶)固(22.2%)其他胎盤型堿性磷酸酶19/36(52.8%)NY-ES0117/36(47.2%)EpCAM27/36(75.0%)為了確定另外的參數(shù)，在區(qū)分良性和惡性卯巢結塊之外，檢查了另外的源自肺瘤的蛋白質。圖7顯示的圖像來自一個36種蛋白質的陣列。基于這些結果，該陣列形式可區(qū)分與早期和晚期卵巢癌相關的抗原識別。圖7中顯示的數(shù)據(jù)基于來自單個卵巢細胞系(UL-1)的抗原。來自其他肺瘤細胞系的某些抗原可呈現(xiàn)更強的反應性。在所有卵巢癌患者中呈現(xiàn)最大交叉反應性的來自不同卵巢肺瘤系的最佳抗原可被特別地測定，用在早期疾病的診斷中。實施例6對分離自不同癌癥的蛋白質的陣列進行評估下表顯示了一個陣列的布局，顯示從4種不同卵巢癌分離的20種抗原(產生一共80Ag)，與對照比較評估了這些抗原檢測癌癥患者中自身抗體的能力。所使用的4種卵巢癌細胞系為A-UL-1、B=UL-2、C-UL-3和D-UL-6，它們在具體實施方式中被詳細公開。表2:用于檢測自身抗體的抗原陣列的布局<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>(其中procathD為親組織蛋白酶-D)對于宮頸癌，對以下16名受試者的每一名的血清進行評估，以檢測對分離自所述宮頸癌細胞系的蛋白質應答的抗體的存在。這包括12名患宮頸癌(腺鱗、鱗狀細胞和腺癌)的受試者和4名對照者(無宮頸癌的受試者)。還在以視黃酸處理細胞培養(yǎng)物后評估所述反應性。大多數(shù)反應性在所有細胞系(ME180、SiHa、CaSki和C33A)的可溶級分中被檢測到，并且是統(tǒng)計學顯著的(p<0.05)(圖8A和8B)。最少反應性在所有細胞系的膜級分中被檢測到。所述反應性以像素定量。總體來說，CaSki(HPV16和18)表現(xiàn)最大反應性，并且在與其他細胞系相比時，在所述外來體級分和溶解級分中有最大反應性(p<0.05)。無HPV的細胞系C33A在膜級分中表現(xiàn)最大反應性。Mel80(HPV-39)表現(xiàn)最小量的反應性。相似的抗原識別跨各個細胞系被檢測到。在不同細胞系之間有著有差異的抗原識別。對照血清沒有表現(xiàn)出任何反應性。在以視黃酸處理的血清中，可溶的細胞相關抗原在所有細胞系中的反應性均降低(p<0.05)(圖9)。用所述細胞相關抗原記錄到了升高的反應性。這在以下級分中被檢測到所有細胞系的膜級分(p<0.05)、C33A和SiHa細胞系的核級分(p<0.05)及SiHa細胞系的胞質溶膠級分(p<0.05)(圖10)。實施例7對跨多個不同癌癥的診斷測定進行評估實施例7的方法腫瘤反應性IgG對特異性抗原靶標的識別。由于獲自卵巢癌患者血清的自身抗體對卵巢腫瘤抗原的反應性基于疾病的階段表現(xiàn)出有定量差異，所以隨后使用ELISA免疫印跡研究定性的差異，以定量測定與特異性抗原免疫反應的水平。外來體分離自3個對數(shù)生長的卵巢腫瘤細胞系(UL-1、UL-3和UL-6)條件培養(yǎng)基。特異性反應性抗原的制備。通過免疫吸附色譜從純化的外來體分離用于測定靶標的反應性蛋白質。獲得每種目的蛋白質的市售抗體。將這些抗體依照生產商的說明書固定于lml的HITRAPNHSTM柱(GEHealthcare)。在以lOO，OOOxg離心外來體后，將沉淀物溶解于在水上的含以下成分的50mMTris-HCl(pH7.5)中0.3%SDS、2mM原釩酸鈉、200mMDTT、lmM氟化鈉、lmM焦磷酸鈉、1jig/ml亮肽素(leupeptin)、ljig/ml抑肽酶(aprotinin)、1pg/ml胃蛋白酶抑制劑(pepstatin)和1mMPMSF。所述裂解物經聲處理，并以lOO，OOOxg離心15分鐘。所溶解的蛋白質通過與蛋白質G-瓊脂糖(SigmaChemicalCo.,St.Louis，MO)孵育1小時使之澄清。將該澄清的溶解蛋白質材料應用于免疫吸附柱并在4。C下孵育過夜。將結合的材料以含1%TritonX-100的PBS洗滌3次，所述特異性抗原蛋白質由0.1M甘氨酸-HCl(pH2.8)釋放，由lMTris中和。將該抗原制品應用于在TBS中平衡的MACROSPHEREGPCTM150/60柱(4.6x500)(Grace,Deerfield，IL)并進行無梯度洗脫。通過蛋白質免疫印跡評估洗脫物的等分試樣，以確證合適的分子級分。在4.6x250mmC8(300n)柱上通過RP-HPLC色譜進一步分離合適的抗原級分。將蛋白質峰通過真空離心干燥、重新懸浮于TBS中并通過蛋白質測定定量。ELISA確定的自身抗體反應性。為了確定源自患者的自身抗體對源自腫瘤的外來體的反應性的水平，進行了ELISA測定。將從每個免疫吸附制品分離的蛋白質以1:25稀釋于由100mM碳酸鈉和0.5MNaCl組成的偶聯(lián)緩沖液(pH8.3)中。將等分試樣(2jig/孔)添加至96-孔IMMULON4TM微量滴定板(Chantilly，VA)的孔中，并在37。C孵育過夜。將所述板以5%脫脂奶粉的PBS液封閉1小時，隨后以PBS加0.2。/oTweeii-20和5。/o脫脂奶粉洗滌3次。然后，將所述板與來自患者和正常對照的以1/100稀釋的200jil血清在4。C孵育過夜。將所述板洗滌并與過氧化物酶綴合的人IgG的抗體(1/5000稀釋)醉育1小時。在洗滌后，通過以下方式測量存在的結合抗體將所述孔與含鄰苯二胺二鹽酸鹽(0.4mg/ml)(OPD，SigmaChemicalCo.,St.Louis，MO)的50mM檸檬酸鹽緩沖液孵育，在490nm測量吸光度。實施例7的結果使用免疫吸附純化的抗原，構建了用于每個測定的微量滴定板。將以1:100稀釋的來自正常女性對照(n=10)、患良性卵巢疾病的女性(n=10)和患卵巢癌的女性(1-1￥期各11=10)的血清在4。C下與平行雙孔孵育過夜。將所述孔以TBS洗滌3次，然后與過氧化物酶綴合的人IgG的抗體孵育。在490nm測量每個孔的吸光度。確定每個患者的平均吸光度并對其作圖。正常對照和患良性疾病的女性的免疫反應性都處于基線水平，并被認為相對于所有測試抗原是陰性的(圖11)。圖ll中曲線上的每個點均代表每個患者的平均值。在所有病例中，整個組的平均值與對照和良性病例是有統(tǒng)計差異的。為了評估本申請公開的方法作為一般性癌癥診斷的方法的可用性，重復進行這一研究，所不同的是使用來自患晚期胰腺癌、肺癌、乳腺癌和結腸癌的女性的血清。所有受測癌癥患者似乎都生成識別核磷蛋白、組織蛋白酶D(cathepsinD)、p53和SSX抗原的自身抗體。僅患卵巢癌的女性識別胎盤型堿性磷酸酶(PLAP)?；加蟹伟┖徒Y腸癌的患者更強地識別生存素(圖12)。實施例8對重組蛋白質與天然蛋白質上的抗原表位進行確定通過十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)將一份(20jig)每種特異性天然抗原及其重組對應物分離。在電泳后，通過考馬斯藍染色法顯示條帶并將每個條帶切下。以SDS電泳緩沖液平衡凝膠。將包含所述特定蛋白質的凝膠塊應用至20%丙烯酰胺凝膠的孔中。將所述凝膠塊切成更小的小塊，并插入至SDS-PAGE濃縮膠的樣品孔中。將100jU電極溶液加入至干的凝膠塊上。在孵育1h后，將含溶于去離子水的10jil金黃色葡萄球菌(Aa/7卸/ococc附fl""ws)V8蛋白酶(Pierce，Rockford，IL，USA)(0.1ug/mL)的20fil稀釋的SDS樣品緩沖液加于所述樣品溶液上。進行電泳至所述樣品和蛋白酶在上層凝膠中堆積，中斷1h以消化所述蛋白質。然后繼續(xù)電泳，并將所分離的消化物電印跡于PVDF膜上。然后，將所述膜與1:100稀釋的患者血清孵育過夜。在以TBS洗滌3次后，將所述膜與作為二抗的過氧化物酶綴合的人IgG的抗體孵育1小時。通過增強的化學發(fā)光顯示所結合的免疫復合體(ECL，AmershamLifeSciences,ArlingtonHeights,IL)。對于p53,患者l和3都識別所述源自肺瘤的蛋白質中的一條中間肽條帶，所述肽條帶不出現(xiàn)于所述重組蛋白質的肽中(圖13)。對于GRP78，所有患者都識別所述源自腫瘤的蛋白質中的3-5條另外的肽條帶，所述肽條帶不出現(xiàn)于所述重組蛋白質的肽中(圖13)。對于核磷蛋白，所有患者都呈現(xiàn)出與所述源自肺瘤的蛋白質的反應性強于與所述重組體蛋白質的反應性(圖13)?；颊?識別所述源自肺瘤的核磷蛋白中的3條另外的條帶，患者3識別與所述重組蛋白質相比分子量更低的l條條帶。這些結果表明，這些源自外來體的天然腫瘤來源的蛋白質與重組蛋白質相比呈現(xiàn)了另外的抗原表位。43實施例9對不孕障礙的診斷測定為了定量測定源自不孕障礙患者的自身抗體的免疫反應性水平，通過ELISA定量測定了患子宮內膜異位癥的患者血清中的IgG的存在及其對源自子宮內膜、核和胞質溶膠的細胞抗原的反應性。將從每種亞細胞級分分離的蛋白質以1:25稀釋于由100mM碳酸鈉和0.5MNaCl組成的偶聯(lián)緩沖液(pH8.3)中。將等分試樣添加至96-孔IMMULON4TM微量滴定板(Chantilly，VA)的孔中，并在37'C孵育過夜。將所述板以5%脫脂奶粉的PBS液封閉1小時，隨后以PBS加0.2。/。Tween-20和5。/。脫脂奶粉洗滌3次。然后，將所述板與來自患者和正常對照的以1/100稀釋的200jil血清在4。C孵育過夜。將所述板洗滌并與過氧化物酶綴合的人IgG的抗體(1/5000稀釋)孵育1小時。在洗滌后，通過以下方式測量結合抗體的存在將所述孔與含鄰苯二胺二鹽酸鹽(0.4mg/ml)(OPD，SigmaChemicalCo.,St.Louis,MO)的50mM檸檬酸鹽緩沖液孵育，并在490nm測量吸光度。血清樣品獲自年齡在21-34歲并且被診斷為不孕的女性，所述不孕由子宮內膜異位癥、卵巢功能早衰(POF)和反復妊娠丟失引起。對照受試者為年齡匹配的無痛癥狀、無骨盆異常且以前無骨盆手術的女性。依照修訂的美國生殖醫(yī)學協(xié)會(rASRM)分類確定子宮內膜異位癥的階段。樣品獲自格里維爾健康系統(tǒng)(GreenvilleHealthSystem)和路易斯維爾大學(UniversityofLouisville)的生殖內分泌學和不孕癥系(DivisionsofReproductiveEndocrinologyandInfertility)。25個標本獲自對照、25個均來自II期子宮內膜異位癥和m期子宮內膜異位癥的女性患者、18個經歷反復妊娠丟失的患者以及11個患卵巢功能早衰的患者。樣品的收集經GHS和路易斯維爾大學的人類研究委員會(HumanStudiesCommittee)的知情同意審查。將靜脈血樣品收集至肝素化的管中并在凝固后分離血清。將血清保存于-70'C至使用。雖然有變化，但是所有具有不孕障礙的測試患者與正常對照患者相比都表現(xiàn)出了顯著的自身抗體水平(p<0.0001)。由于患者呈現(xiàn)出提高的自身抗體水平，且這些自身抗體的水平呈現(xiàn)出顯著的變化性，所以在這些IgG的相對吸光度和疾病的階段之間進行了統(tǒng)計學比較。反應性IgG的水平隨疾病的階段出現(xiàn)升高，來自ii期患者的血清呈現(xiàn)出顯著高于正常血清(p<0.001)(圖14)。對于所有來源的抗原，在m期中存在的免疫反應性水平顯著高于在n期患者的血清中檢測的水平(p<0.01)。為了表征這些自身抗體與來自子宮內膜的抗原的反應性，通過蛋白質免疫印跡進一步分析了來自正常對照和患子宮內膜異位癥(n期和m期)的女性的血清樣品。所述患者組的代表性免疫印跡顯示于圖15中。對照患者(無子宮內膜異位癥)對任何細胞抗原均未表現(xiàn)出顯著的識別?；糿期子宮內膜異位癥的患者與來自子宮內膜和卵巢的細胞抗原都呈現(xiàn)出強反應性。在這些組織中，最強的反應出現(xiàn)于來自子宮內膜的膜級分的抗原，接下來是來自卵巢的膜抗原。來自患ni期子宮內膜異位癥的患者的血清呈現(xiàn)出類似的反應性模式；然而，與所有來源的膜抗原呈現(xiàn)出更大的強度。在子宮內膜膜抗原中，所有患子宮內膜異位癥的患者均識別80和140kD的蛋白質，而患m期疾病的患者識別另外的IO、28和40kD的條帶。共同識別的140kD膜蛋白質為卵巢膜抗原所共有。通常，患子宮內膜異位癥的患者還呈現(xiàn)出強的對90和iookD蛋白質的共同識別，而患ni期疾病的患者還識別另外的50和78kD的條帶。與源自胞質溶膠的抗原幾乎沒有出現(xiàn)反應性。由于所述反應性的強度，通過以二維電泳分離子宮內膜膜抗原進一步分析了所述抗體結合(圖16A和16B)。該方法使得膜抗原被進一步分離。與ii期相比，在m期子宮內膜異位癥患者中出現(xiàn)的反應性水平升高似乎是由于升高的與相同組分的反應性和對另外的組分的識別兩者所致?；谠撗芯康慕Y果，針對特定細胞蛋白質的子宮內膜自身抗體及/或對nk激活的抑制的評估可作為子宮內膜異位癥的診斷指示物。與特定子宮內膜膜抗原存在反應的自身抗體的存在似乎是子宮內膜異位癥發(fā)生所特有的，并且與疾病的階段有關。單獨對nk激活進行評估對于診斷標記物的使用可能不具有特異性，但可與自身抗體的存在相結合；它們可為子宮內膜異位癥的確診提供掙異性和敏感性。為了評估該方法對不孕癥病因的區(qū)分，所述蛋白質陣列模板由4x8cm的總尺寸上的34個斑點組成，寬度上4個斑點及長度上80個斑點。該模板被用作標桿，以將溶液點于MAGNAGRAPH膜(MSI)上。為了將捕獲的蛋白質點至所述膜上，將所述模板至于光盒上，并將MAGNAGRAPH膜置于所述模板之上。外來體分離自Hec-1A子宮內膜細胞的培養(yǎng)物。將所分離的外來體溶解，然后使用0.25%SSA沉淀。然后，將所沉淀的外來體蛋白質重新懸浮于TBS中，并進行聲處理。然后以如下方式將該蛋白質溶液分級分離使用C18反相HPLC柱，以0-100%的乙腈梯度洗脫。將所產生的32個蛋白質峰濃縮，并通過真空離心去除溶劑。將每種蛋白質重新懸浮于TBS中，并測定蛋白質濃度。將每種蛋白質溶液(0.25nl)手工上樣至單斑點上。將每種蛋白質溶液在溴酚藍(用于示蹤)中稀釋成100網(wǎng)/ml的初始濃度。對于每種蛋白質，制備2ng的斑點。以5。/。BSA的0.1MTris-HCl(pH7.6)、0.15MNaCl溶液(TBS)將所述膜在室溫下封閉1小時。然后將膜以TBS加0.1%Tween-20洗滌3次，并以TBS洗滌2次。然后將所述膜保存于封口袋中并冷凍至使用。對于診斷測試，以血清進行測定。使用本申請公開的蛋白質陣列測試了來自已知患者和有正常生育能力的非妊娠對照的稀釋血清(1:100)，以確定最佳的血清稀釋度，與靶蛋白質的稀釋液結合，以鑒定具有特定病因學的不孕癥的患者。在使用所述陣列膜之前將其以TBS-Tween-20洗滌，并且在TBS中制備10倍連續(xù)稀釋的患者血清。將所稀釋的血清在4。C與膜孵育過夜。以TBS加0.1%Tween-20洗滌所述膜3次。然后將膜與過氧化物酶綴合的人IgG的抗體孵育，以TBS洗滌3次，并通過ECL顯像。將所形成的膜以柯達D290相機成像，并使用用于斑點識別和定量的柯達分析軟件分析(圖17)。出現(xiàn)了不同的免疫反應性模式?；谶@種對子宮內膜的蛋白質抗原的差異識別，可區(qū)分并診斷子宮內膜異位癥引起的不孕障礙的患者與卵巢功能早衰引起的不孕障礙的患者。以類似的方法，使用蛋白質免疫印跡，還對經歷反復妊娠丟失的女性檢查了抗胎盤來源抗原的自身抗體的存在情況(圖18)。妊娠可引起自身抗體的產生，這來自于從Thl至Th2免疫應答的正常偏移。然而，經歷反復妊娠丟失的女性同時呈現(xiàn)出增加的總體免疫反應性和對特有組分的識別。以后經歷反復妊娠丟失的無癥狀患者可識別分子量小于45,000道爾頓且大于130,000道爾頓的另外的蛋抗原。參考文獻Abu-Shakraetal.，Cancerandautoimmunity:autoimmuneandrheumaticfeaturesinpatientswithmalignancies.AnnalsRheumDis60:433-440,2001.Barboucheetal.，Prognosticsignificanceofautoantibodiestolamininintheseraofbreastcancerpatients.EuropJClinChemClinBiochem32:5"-514'1994.Brichoryetal.'Proteomics-basedidentificationofproteingeneproduct9.5asatumorantigenthatinducesahumoralimmuneresponseinlungcancer.CancerRes61:7908-7912,2001.serologicalresponse:Biologicalsignificanceandclinicalimplications.AnnalsOncol7:227-232，1996.Chinnietal.,CathepsinDandglucose-regulatedprotein78recognizedbythehumoralresponseofovariancancerpatients.ClinCancerRes3:1557-1564，1997.Conroyetal.'Autoantibodiesto90kDheat-shockproteininseraofbreastcancerpatients.Lancet345:126，1995.Hellstrometal.，Principlesoftumorimmunity:Tumorantigens.In:DeVitaVT，HellmanS，andRosenbergSA，eds.Biologictherapyofcancer.NewYork:Uppincott，1991:35-52.JungandSchluesener,JExpMed173:273-276，1991.KoteraYetal"Humoralimmunityagainstatandemrepeatepitopeofhumanmucinmuc-1inserafrombreast,pancreaticandcoloncancerpatients.Kuttehetal.，Immunologiccharacterizationoftumormarkersinhumanovariancancerce卄lines.JSocGynecolInvest3:216-222，1996.Labrecqueetal"Analysisoftheanti國p53antibodyresponseincancerpatients.CancerRes53:3468-3471，1993.Liottaetal.,Proteomicpatternsinseraserveasbiomarkersofovariancancer.GynecolOncol88:S25-S28,2003.Lubinetal.，Analy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，其中所述不孕障礙選自卵巢功能早衰(POF)、多嚢性卵巢綜合征(PCOS)、子宮內膜異位癥、先兆子癇、早產、子宮內發(fā)育受限和反復妊娠丟失。52.權利要求50的方法，其中所述生物樣品包括乳汁、血液、血清、血漿、腹水、嚢內液、胸膜液、淚液、尿液、唾液、組織或它們的結合物。53.權利要求50的方法，其中所述自身抗體對卵巢、子宮內膜、胎盤或它們的結合有反應性。54.權利要求50的方法，其中所述受試者為一種哺乳動物。55.權利要求50的方法，其中所述抗原分離自一種培養(yǎng)的細胞。56.權利要求55的方法，其中所述培養(yǎng)的細胞為一種胎盤細胞。57.權利要求50的方法，其中所述抗原分離自胎盤、卵巢、子宮內膜或它們的結合。58.權利要求50的方法，其中所述檢測包括一種選自以下的技術ELISA、RIA、多重免疫測定、免疫沉淀法和蛋白質印跡法。全文摘要提供了用于檢測受試者中的自身抗體水平并且/或者對該水平進行定量的方法。進一步提供了用于診斷和/或表征一種與自身抗體產生相關的障礙的方法。在一些實施方案中，所診斷和/或表征的障礙可以是一種癌癥或一種不孕癥。文檔編號G01N31/00GK101657719SQ200880009096公開日2010年2月24日申請日期2008年1月28日優(yōu)先權日2007年1月26日發(fā)明者C·格塞歐-泰勒,D·D·泰勒申請人:路易斯維爾大學研究基金會公司