專利名稱：：乙型肝炎病毒核心抗體IgM化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及免疫診斷
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體地，本發(fā)明提供了一種乙型肝炎病毒核心抗體IgM(抗HBc-IgM)化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒及其制備方法。
背景技術(shù)：
：乙型肝炎是一種發(fā)病率較高，對(duì)人類有著巨大危害的傳染性疾病。機(jī)體感染乙型肝炎病毒(HBV)后，體液免疫反應(yīng)首先產(chǎn)生以IgM為主的免疫球蛋白，隨后IgM抗體滴度下降，IgG效價(jià)迅速上升。因此，抗HBc-IgM的檢測(cè)可作為HBV感染早期診斷的指標(biāo)，尤其是對(duì)乙肝表面抗原(HBsAg)陰性的急性肝炎病人有鑒別診斷意義。同時(shí)抗HBc-IgM與HBV在體內(nèi)活動(dòng)性復(fù)制成正相關(guān)，抗HBc-IgM陽(yáng)性提示患者近期有乙型肝炎病毒感染或慢性乙型肝炎患者的乙型肝炎病毒有活動(dòng)性復(fù)制，患者血液有很強(qiáng)的傳染性。有報(bào)道指出，在急性乙型肝炎病毒感染后抗HBc-IgM可持續(xù)存在多年，在慢性乙型肝炎病程中，抗HBc-IgM的出現(xiàn)與病情急性活動(dòng)的高峰一致或者稍晚，并認(rèn)為隨著病情的控制而好轉(zhuǎn)，部分患者的抗HBc-IgM可能陰轉(zhuǎn)，所以抗HBc-IgM陽(yáng)性還要結(jié)合臨床癥狀具體分析。隨著醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)水平的提高，對(duì)乙肝患者進(jìn)行抗HBc-IgM的檢測(cè)對(duì)于乙肝的分型及治療有著重要的意義。目前用于^r測(cè)乙型肝炎病毒核心抗體IgM的免疫方法主要有酶免疫測(cè)定(enzymeimmunoassay,EIA)、放射免疫測(cè)定(radioimmunoassay,RIA)、免疫萸光測(cè)定(enzyme-linkedfluorescenceassay,ELFA)、微粒子酶免發(fā)光分析(microparticleenzymeimmunoassay,MEIA)以及直接標(biāo)記化學(xué)發(fā)光免疫效']定(chemiluminescenceimmunoassay,CLIA)。這些超微量檢測(cè)技術(shù)的基本理論大體相同，但是所用示蹤劑及所發(fā)出的信號(hào)各不相同。根據(jù)大量的試驗(yàn)結(jié)果及臨床應(yīng)用資料，從實(shí)用性、穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性及發(fā)展前景來(lái)看，依次為化學(xué)發(fā)光免疫分析、熒光免疫分析、放射免疫分析以及酶免疫分析。放射免疫分析技術(shù)因其使用放射性元素作為標(biāo)記物，因此對(duì)環(huán)境有一定污染性，并存在操作復(fù)雜，測(cè)定結(jié)果不穩(wěn)定，試劑保存時(shí)間短等缺點(diǎn)。酶免疫分析法靈敏度低，影響因素較多，易造成假陰性和假陽(yáng)性?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析法是一種較先進(jìn)而有效的方法，可使檢測(cè)靈敏度達(dá)到10"s摩爾水平，而且檢測(cè)范圍可達(dá)6個(gè)數(shù)量級(jí)，又因?yàn)槊笜?biāo)記物穩(wěn)定，可長(zhǎng)期使用，因而得到了越來(lái)越多的關(guān)注。用酶促化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測(cè)乙型肝炎病毒核心抗體IgM是先進(jìn)而有效的方法，有助于促進(jìn)化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)在臨床檢驗(yàn)、檢測(cè)中的應(yīng)用與發(fā)展。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明將化學(xué)發(fā)光技術(shù)與乙型肝炎病毒核心抗體IgM的免疫分析有效結(jié)合，通過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)沖企^r及臨床研究表明本發(fā)明的試劑盒具有較高的特異性、敏感性和重復(fù)性，為臨床診斷、各級(jí)血站、采漿站和科研工作提供了一種非常有價(jià)值的檢測(cè)手段。本發(fā)明的目的是提供一種乙型肝炎病毒核心抗體IgM的化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒及其制備方法。根據(jù)本發(fā)明的試劑盒包括乙型肝炎病毒核心抗體IgM陰陽(yáng)性對(duì)照品；抗人IgM包被的載體；酶標(biāo)記的乙型肝炎病毒核心抗體；中和抗原；上述酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物和濃縮洗滌液。才艮據(jù)本發(fā)明的試劑盒，其中，所述乙型肝炎病毒核心抗體IgM陽(yáng)性對(duì)照品以新生牛血清為基質(zhì)；所迷抗人IgM包被的載體為微孔板或塑料管；所迷標(biāo)記乙型肝炎病毒核心抗體的酶為堿性磷酸酶或辣根過(guò)氧化物酶；所述中和抗原為乙肝病毒核心抗原；所述濃縮洗滌液為含吐溫20的Tris-HCl緩沖液或含吐溫20的磷酸鹽緩沖液(PBST)。根據(jù)本發(fā)明的試劑盒，所述堿性磷酸酶或辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記乙型肝炎病毒核心抗體的工作濃度為1:1000-5000，其中，堿性磷酸酶稀釋液采用的是含10%新生牛血清，0.1%生物防腐劑Proclin300,150mMNaCl的0.10MTris-HCl緩沖液(pH7.5);辣根過(guò)氧化物酶稀釋液采用的是含20%新生牛血清，0.1%生物防腐劑Proclin300的0.02M磷酸鹽緩沖液(pH7.4)。所述乙肝病毒核心抗原的工作濃度為1:4000-9000,其中所用稀釋液同上所述。根據(jù)本發(fā)明的試劑盒，其中，所述化學(xué)發(fā)光底物為堿性磷酸酶作用的底物或辣根過(guò)氧化物酶作用的底物，其中，堿性磷酸酶作用的底物可以為(金剛烷)-l,2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金剛烷)-4-曱氧基-4-(3"-磷酰氧基)苯基-1,2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star;辣根過(guò)氧化物酶作用的底物包含A液和B液，其中，A液是0.2MpH8.7硼酸-硼砂緩沖液，包括10mM魯米諾、0.3mM4-羥基聯(lián)苯、0.05mM4-碘苯硼酸；B液是0.2MpH7.2磷酸鹽緩沖液，包括3.5mM過(guò)氧化脲、0.1%Tween20。根據(jù)本發(fā)明制備上述試劑盒的方法包括以下步驟1)以乙型肝炎病毒核心抗體IgM陰性、陽(yáng)性人血清配制陰陽(yáng)性對(duì)照品；2)以抗人IgM包被載體；3)用酶標(biāo)記乙型肝炎病毒核心抗體；4)配制中和抗原；5)配制酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物；6)配制濃縮洗涂液；7)分裝上述陰陽(yáng)性對(duì)照品、包被載體、酶標(biāo)記物、中和抗原、化學(xué)發(fā)光底物和濃縮洗滌液；8)組裝為成品。根據(jù)本發(fā)明的方法，抗人IgM包被的栽體為微孔板或塑料管；根據(jù)本發(fā)明的方法，抗人IgM包被載體是通過(guò)直接物理吸附法將抗人IgM包被在載體上；根據(jù)本發(fā)明的方法，酶標(biāo)記乙型肝炎病毒核心抗體中的酶可以為堿性磷酸酶或辣根過(guò)氧化物酶。如用堿性磷酸酶進(jìn)行標(biāo)記則采用的是戊二醛法；如用辣根過(guò)氧化物酶進(jìn)行標(biāo)記則采用改良的過(guò)硤酸鈉法。根據(jù)本發(fā)明的方法，所述化學(xué)發(fā)光底物可以為堿性磷酸酶作用的底物或辣根過(guò)氧化物酶作用的底物，其中，堿性磷酸酶作用的底物可以為(金剛烷)-l,2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金剛烷)-4-曱氧基-4-(3"-磷酰氧基)苯基-l,2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star;辣根過(guò)氧化物酶作用的底物包含A液和B液，其中，A液是0.2MpH8.7硼酸-硼砂緩沖液，包括10mM魯米諾、0.3mM4-鞋基聯(lián)苯、0.05mM4-碘苯硼酸；B液是0.2MpH7.2磷酸鹽緩沖液，包括3.5mM過(guò)氧化脲、0.1%Tween20。具體的上述試劑盒可以包括抗HBc-IgM陰陽(yáng)性對(duì)照品、抗人IgM包被板、酶標(biāo)記物、中和抗原、化學(xué)發(fā)光底物與濃縮洗滌液等。其中，所述抗HBc-IgM陽(yáng)性對(duì)照的原料為抗HBc-IgM陽(yáng)性人血清；抗人IgM包被板為48或96孔的微孔板條；標(biāo)記抗HBc-IgM的酶為辣根過(guò)氧化物酶；中和抗原為乙肝核心抗原；化學(xué)發(fā)光底物為魯米諾體系；濃縮洗滌液為20倍PBST洗液。本發(fā)明"乙型肝炎病毒核心抗體IgM化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒，，采用的是捕獲法反應(yīng)模式，既有效地利用了化學(xué)發(fā)光技術(shù)原理、又確保了檢測(cè)的靈敏性。它具有特異性強(qiáng)，重復(fù)性好、穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，且各項(xiàng)指標(biāo)均達(dá)到同類試劑盒的分析水平，為臨床提供了一種檢測(cè)乙肝病毒核心抗體IgM的更準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、快速的方法，有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1制備本發(fā)明的乙型肝炎病毒核心抗體IgM化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒一、抗HBc-IgM陰陽(yáng)性對(duì)照品的制備陽(yáng)性對(duì)照品經(jīng)確切方法確定的高滴度抗HBc-IgM陽(yáng)性人血清混合成陽(yáng)性血漿(血漿份數(shù)大于5),56。Cl小時(shí)加溫滅活后，然后使用新生牛血清進(jìn)行適當(dāng)稀釋，加入生物防腐劑和萬(wàn)分之一(W/V)的食品紅使之成為紅色，除菌過(guò)濾，2-8'C保存。陰性對(duì)照品選用抗HBc-IgM檢測(cè)為陰性的人血清混合(血漿份數(shù)大于10)56。Cl小時(shí)加溫滅活后，除菌過(guò)濾，2-8。C保存。二、固相包被板的制備將0.05MpH9.6的碳酸鹽包被緩沖液與抗人IgM混合，然后加入微孔板各孔中，每孔IOOPL,4'C放置24h。然后用PBST洗三次，在吸水紙上拍干，再用含1.0%BSA,0.1%Proclin300,0.9%NaCl,3.8mMNaH2P042H20,16.2mMNa2HP0412H20的封閉液進(jìn)行封閉，每孔分別加入封閉液180pL，室溫放置2小時(shí)后，甩掉封閉液，在吸水紙上拍干。室溫除濕干燥24小時(shí)后，立即進(jìn)行封袋，貼簽后置28'C保存。三、酶標(biāo)乙型肝炎病毒核心抗體的制備乙型肝炎病毒核心抗體采用改良的過(guò)碘酸鈉氧化標(biāo)記法與辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)。經(jīng)PBS緩沖液充分透析后，加等體積甘油，-20°C以下保存?zhèn)溆?。用含?0%新生牛血清，0.1%生物防腐劑Proclin300的0.02M磷酸鹽緩沖液(pH7.4)酶標(biāo)記物稀釋液按照一定的稀釋度進(jìn)行稀釋。采用方陣法選擇酶標(biāo)記物的工作濃度范圍為1:1000-5000。四、中和抗原制備本發(fā)明使用辣根過(guò)氧化物酶時(shí)，配制中和抗原所用的稀釋液為含有20%新生牛血清，0.1%生物防腐劑Proclin300的0.02M磷酸鹽緩沖液(pH7.4)。采用方陣法選擇中和抗原的工作濃度范圍為1:4000-9000。五、化學(xué)發(fā)光底物本發(fā)明所使用的辣根過(guò)氧化物酶的化學(xué)發(fā)光底物液的配制方法A液是0.2MpH8.7硼酸-硼砂緩沖液，包括10mM魯米諾、0.3mM4-羥基聯(lián)苯、0.05mM4-碘苯硼酸；B液是0.2MpH7.2磷酸鹽緩沖液，包括3.5mM過(guò)氧化脲、0.1%Tween20。使用方法使用前A液與B液根據(jù)使用量等體積混合。六、濃縮;先滌、液洗滌液是含有0.1~0.5%Tween-20，0.2%Proclin-300生物防腐劑的0.02M磷酸鹽緩沖液(PBST),pH值為7.4,使用時(shí)用蒸餾水稀釋20倍。七、半成品及成品組成將上迷組分進(jìn)行分裝即為半成品。對(duì)半成品進(jìn)行質(zhì)量檢定，合格后才能組裝為成品，即乙型肝炎病毒核心抗體IgM化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒。成品盒還需進(jìn)行抽檢，其特異性、敏感性、精密性及穩(wěn)定性等指標(biāo)檢驗(yàn)合格后方可出廠。實(shí)施例2制備本發(fā)明抗HBc-IgM化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒除以戊二醛法將乙肝核心抗體與堿性磷酸酶標(biāo)偶聯(lián)，以AMPPD作為化學(xué)發(fā)光底物，用含10%新生牛血清，0.1%生物防腐劑Proclin300,150mMNaCl的0.10MTris-HCl緩沖液(pH7.5)作為酶標(biāo)物及中和抗原的稀釋液，用含0.5%Tween-20,0.2%Proclin-300生物防腐劑，150mMNaCl的0.05MTris-HCl緩沖液(pH7.5)為洗滌液外，其余均以與實(shí)施例1相同的方法制備抗HBc-IgM化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒。實(shí)施例3~4制備本發(fā)明抗HBc-IgM化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒除以塑料管作為栽體外，其余均以與實(shí)施例1,2相同的方法制備抗HBc-IgM化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒。實(shí)施例5本發(fā)明的試劑盒的使用方法以實(shí)施例1制備的抗HBc-IgM化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的具體操作如下1.自4。C冰箱中取出試劑盒，室溫平衡15分鐘；2.設(shè)置空白對(duì)照一孔，陰、陽(yáng)性對(duì)照各兩孔，每孔加對(duì)照品各100iaL，將待測(cè)血清樣品用生理鹽水進(jìn)行1:1000稀釋，每孔加入稀釋后的待測(cè)標(biāo)本100充分混勻，封板，置37。C溫育30分鐘；3.棄孔內(nèi)液體，用稀釋后的洗滌液洗板5次，最后在干凈的濾紙上扣干；4.每孔加酶標(biāo)抗體結(jié)合物、中和抗原各50juL(空白對(duì)照孔除外)，充分混勻，封板，置37。C溫育30分鐘；5.棄孔內(nèi)液體，用稀釋后的洗滌液洗板5次，最后在干凈的濾紙上扣干；6.每孔加等體積混合后的化學(xué)發(fā)光底物IOOiuL，必須于加化學(xué)發(fā)光底物液后的第5—30分鐘內(nèi)測(cè)量各孔的發(fā)光強(qiáng)度(RLU),測(cè)量時(shí)間1秒/孔；7.將各孔的RLU值與CUTOFF比較，樣品測(cè)定值>陽(yáng)性對(duì)照孔平均RLU值/30+陰性對(duì)照孔平均RLU值，則判斷為陽(yáng)性，否則為陰性。實(shí)施例6本發(fā)明的試劑盒的方法學(xué)檢定按照本領(lǐng)域中常規(guī)的制造及檢定規(guī)程對(duì)實(shí)施例1中制備的試劑盒進(jìn)行檢定，結(jié)果如下1、試劑盒特異性測(cè)定按照實(shí)施例1的試劑盒檢測(cè)中國(guó)藥品生物制品檢定所抗HBc-IgM參考品血清盤，考察陰性及陽(yáng)性參考品的符合率，結(jié)果如表1所示，表明實(shí)施例1的試劑盒陰陽(yáng)性參考品的符合率達(dá)100%。表1實(shí)施例1的試劑盒檢測(cè)參考品血清盤結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>2、試劑盒靈敏度測(cè)定使用中國(guó)藥品生物制品檢定所抗HBc-IgM參考品血清盤中的3份系列稀釋的靈敏度參考品血清，考察試劑盒的靈敏度。結(jié)果如表2所示，表明實(shí)施例1的試劑盒的靈敏度良好。表2實(shí)施例1的試劑盒的靈敏度<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>3、試劑盒精密性測(cè)定用中國(guó)藥品生物制品4企定所抗HBc-IgM參考品血清盤中國(guó)家參考品中的精密度血清，考察試劑盒的精密性。按照實(shí)施例5的方法重復(fù)至少IO孔進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算變異系數(shù)。經(jīng)檢測(cè)，精密性血清發(fā)光強(qiáng)度平均值為266246,標(biāo)準(zhǔn)偏差為23681,計(jì)算變異系數(shù)CV。/。為9%,表明所制備的乙型肝炎病毒核心抗體IgM化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒的精密性良好。4、試劑盒穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)將實(shí)施例1的試劑盒于37'C放置3天、7天、15天后，結(jié)果表明試劑盒的各項(xiàng)指標(biāo)均能符合標(biāo)準(zhǔn)。以上說(shuō)明"乙型肝炎病毒核心抗體IgM化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒"的靈敏度、精密度、準(zhǔn)確性、特異性和穩(wěn)定性是完全符合臨床要求的。實(shí)施例7本發(fā)明的試劑盒臨床應(yīng)用與酶免試劑盒比較使用實(shí)施例1的抗HBc-IgM測(cè)定試劑盒和市售乙肝核心抗體IgM酶聯(lián)免疫試劑盒對(duì)1350例臨床血清樣品同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)本發(fā)明試劑盒進(jìn)行臨床檢測(cè)評(píng)估。一、臨床血清標(biāo)本的來(lái)源經(jīng)臨床確診的乙肝大三陽(yáng)病人血清150例；小三陽(yáng)病人血清200例；丙型肝炎病毒(HCV)陽(yáng)性血樣78例；曱型肝炎病毒IgM(抗HAV-IgM)陽(yáng)性血樣54例；戊型肝炎病毒IgM(抗HEV-IgM)陽(yáng)性血樣23例；慢性遷延性肝炎病人血清36例；類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病人血清43例；HBsAg攜帶者血清200例；正常人血清566例。二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果本發(fā)明試劑盒與酶免試劑盒檢測(cè)乙肝及其他疾病及正常人群血清結(jié)果比較如表3所示表3本發(fā)明試劑盒與酶聯(lián)免疫試劑盒臨床血樣測(cè)值比對(duì)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>試驗(yàn)結(jié)果表明經(jīng)檢測(cè)1350例臨床血清樣本，本發(fā)明的"乙型肝炎病毒核心抗體IgM化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒"與酶聯(lián)抗HBc-IgM檢測(cè)試劑盒的結(jié)果總符合率為99.78%,酶聯(lián)抗HBc-IgM才金測(cè)試劑盒對(duì)566例正常人血清檢測(cè)時(shí)出現(xiàn)3份灰區(qū)陽(yáng)性結(jié)果。綜上，利用本發(fā)明的試劑盒進(jìn)行;險(xiǎn)測(cè)，靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好，無(wú)放射性污染，可用于臨床乙肝病人血清學(xué)檢查，對(duì)于乙型肝炎的臨床診斷、治療效果評(píng)價(jià)、嚴(yán)格篩選供血血源、阻斷乙型肝炎的傳播等有一定的參考價(jià)值。權(quán)利要求1.一種乙型肝炎病毒核心抗體IgM化學(xué)發(fā)光測(cè)定試劑盒，其特征在于，所述試劑盒主要由乙型肝炎病毒核心抗體IgM陰陽(yáng)性對(duì)照品；抗人IgM包被的載體；酶標(biāo)記的乙型肝炎病毒核心抗體；中和抗原；上述酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物；以及濃縮洗滌液組成。2、如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述乙型肝炎病毒核心抗體IgM陽(yáng)性對(duì)照品以新生牛血清為基質(zhì)；所述抗人IgM包被的載體為微孔板或塑料管；所述標(biāo)記乙型肝炎病毒核心抗體的酶為堿性磷酸酶或辣根過(guò)氧化物酶；所述中和抗原為乙肝病毒核心抗原；所述化學(xué)發(fā)光底物為堿性磷酸酶作用的底物或辣根過(guò)氧化物酶作用的底物；所述濃縮洗滌液為含吐溫20的Tris-HCl緩沖液或含吐溫20的磷酸鹽緩沖液(PBST)。3、如權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述堿性磷酸酶或辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記乙型肝炎病毒核心抗體的工作濃度為1:1000-5000,其中，堿性磷酸酶稀釋液采用的是含10%新生牛血清，0.1%生物防腐劑Proclin300,150mMNaCl的0.10MTris-HCl緩沖液(pH7.5);辣根過(guò)氧化物酶稀釋液采用的是含20%新生牛血清，0.1%生物防腐劑Proclin300的0.02M磷酸鹽緩沖液(pH7.4)。4、如權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述乙肝病毒核心抗原的工作濃度為1:4000-9000，其中，酶標(biāo)記物為堿性磷酸酶時(shí)，乙肝病毒核心抗原的稀釋液采用的是含10%新生牛血清，0.1%生物防腐劑Proclin300,150mMNaCl的0.10MTris-HCl緩沖液(pH7.5);酶標(biāo)記物為辣根過(guò)氧化物酶時(shí)，乙肝病毒核心抗原的稀釋液采用的是含20%新生牛血清，0.1%生物防腐劑Proclin300的0.02M磷酸鹽緩沖液(pH7.4)。5、如權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述堿性磷酸酶作用的底物為(金剛烷)-l，2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金剛烷)-4-曱氧基-4-(3"-磷酰氧基)苯基-1，2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star;所述辣根過(guò)氧化物酶作用的底物包含A液和B液，其中，A液是0.2MpH8.7硼酸-硼砂緩沖液，包括10mM魯米諾、0.3mM4-羥基聯(lián)苯、0.05mM4-械苯硼酸；B液是0.2MpH7.2磷酸鹽緩沖液，包括3.5mM過(guò)氧化脲、0.1%Tween20。6、一種制備權(quán)利要求1所述試劑盒的方法，其特征在于，以乙型肝炎病毒核心抗體IgM陰性、陽(yáng)性人血清配制陰陽(yáng)性對(duì)照品；以抗人IgM(y鏈)包被載體；用酶標(biāo)記乙型肝炎病毒核心抗體；配制中和抗原；配制酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物；配制濃縮洗滌液，然后分裝上述陰陽(yáng)性對(duì)照品、包被載體、酶標(biāo)記物、中和抗原、化學(xué)發(fā)光底物和濃縮洗滌液半成品，最后組裝為成品。全文摘要本發(fā)明公開了一種乙型肝炎病毒核心抗體IgM化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒及其制備方法，屬于免疫診斷
技術(shù)領(lǐng)域：
。所述試劑盒主要由乙型肝炎病毒核心抗體IgM陰陽(yáng)性對(duì)照品，抗人IgM(μ鏈)包被的載體，乙型肝炎病毒核心抗體酶標(biāo)記物，中和抗原，化學(xué)發(fā)光底物及濃縮洗滌液組成。所述試劑盒的制備方法包括以下步驟以乙型肝炎病毒核心抗體IgM陰性、陽(yáng)性人血清配制陰陽(yáng)性對(duì)照品；以抗人IgM(μ鏈)包被載體；用酶標(biāo)記乙型肝炎病毒核心抗體；配制中和抗原；配制酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物；配制濃縮洗滌液，然后分裝上述陰陽(yáng)性對(duì)照品、包被載體、酶標(biāo)記物、中和抗原、化學(xué)發(fā)光底物和濃縮洗滌液半成品，最后組裝為成品。經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)室及臨床研究，顯示本發(fā)明試劑盒具有較高的特異性、敏感性和重復(fù)性，為臨床診斷、各級(jí)血站、采漿站和科研工作提供了一種非常有價(jià)值的檢測(cè)手段。文檔編號(hào)G01N21/76GK101368958SQ20081010326公開日2009年2月18日申請(qǐng)日期2008年4月2日優(yōu)先權(quán)日2008年4月2日發(fā)明者唐寶軍,應(yīng)希堂,坤張,黎張,胡國(guó)茂,鄭金來(lái)申請(qǐng)人:北京科美東雅生物技術(shù)有限公司