專利名稱：：檢測生物毒素的膠體金免疫層析試紙及其檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于生物毒素檢測
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其涉及一種檢測生物毒素的膠體金免疫層析試紙及其檢測方法。
背景技術(shù)：
：生物毒素是一種存在于飼料和飼料原料中的抗營養(yǎng)因子，是由不同類屬的真菌所產(chǎn)生的次級有毒代謝產(chǎn)物。動物飼料中生物毒素的污染是一個全球性問題，生物毒素既可在作物田間生長時產(chǎn)生也可在倉儲期間產(chǎn)生，或兩方面都有，用生物毒素污染的飼料飼喂動物會引起急、慢性中毒癥狀甚至死亡,而且還會在動物的肉、蛋、奶中殘留，威脅到人類自身的健康。動物飼料中生物毒素主要為霉菌毒素，霉菌毒素是由中溫型霉菌產(chǎn)生，在谷物及飼料中常見的產(chǎn)毒素霉菌主要有曲霉屬(aspergi1lus)、青霉屬(penici11ium)、鐮孢菌屬(fusarium)和麥角菌屬(clavic印s)等。各種霉菌可以產(chǎn)生多達數(shù)百種霉菌毒素，然而危害畜禽生產(chǎn)的霉菌毒素主要有嘔吐毒素(Vomitoxin，或稱脫氧雪腐鐮刀菌烯醇Deoxynivalenol，DON)、玉米赤霉烯酮(zearalenone，ZEA)、伏馬菌素B1(fumonisinBl，F(xiàn)BI)、黃曲霉毒素Bl(aflatoxinBl，AFB1)、赭曲霉素A(OchratoxinA，OTA)等。黃曲霉毒素由于毒性最強很早便受到人們的關(guān)注，但現(xiàn)己并非主要的霉菌毒素，目前我國的飼料和原料中，赭曲霉素A、嘔吐毒素、伏馬毒素B1和玉米赤霉烯酮的污染最為嚴重，而由多種原料配制的配合飼料受多種霉菌毒素污染的危險也就大大增加。研究表明，低劑量的霉菌毒素會導致動物免疫抑制，引起疫苗免疫后反應強、抗體水平上不去、影響疫苗的免疫效果，增加疾病感染機率和治療難度，同時干擾營養(yǎng)物質(zhì)的利用，極大影響動物的生產(chǎn)性能，如飼料轉(zhuǎn)化率下降、生產(chǎn)速度減慢，繁殖性能降低等。高劑量的霉菌毒素會導致動物中毒發(fā)病甚至死亡，其產(chǎn)生的臨床中毒癥狀會因在飼料中的毒素種類、劑量、飼喂時間、毒素間的相互影響以及動物本身的品種、年齡及健康狀況而有所不同。在生豬詞養(yǎng)方面，霉菌毒素超標會引起豬輕微的反應，而小豬更為敏感。豬對玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素、伏馬毒素B1、黃曲霉毒素、赭曲霉毒素等多種霉菌毒素均較為敏感，其臨床癥狀通常是患豬不吃，中毒輕者表現(xiàn)生長緩慢，營養(yǎng)不良等慢性征兆以及持續(xù)發(fā)生輕度傳染病，嚴重者出現(xiàn)持續(xù)或間歇性發(fā)熱，全身皮膚有紅點，嘔吐，咳嗽，氣喘關(guān)節(jié)腫，蹄部壞疽，頑固性拉稀，便秘，脫肛，流產(chǎn)，假發(fā)情，休情，死胎等。鑒于霉菌毒素的危害性，世界范圍內(nèi)80多個國家依據(jù)不同物品制定了各自的限量或推薦限量。目前，我國GB2715-2005糧食衛(wèi)生標準中對小麥、玉米、大麥中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮做了限量，要求D0N《1000ug/kg，ZEA《6"g/kg，GB13078.2-2006飼料衛(wèi)生標準中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的允許量分別為100lig/kg、500ug/kg。目前，關(guān)于霉菌毒素的檢測方法主要有三種生物學檢測法、免疫化學檢測法和理化檢測方法。但這些方法均存在著一定局限性生物檢測法較為簡單、成本低，但其所需時間較長、專一性較差；酶聯(lián)免疫法(ELISA)是目前被公認為是測定霉菌毒素的最佳方法之一(公開號為CN1963506A、CN1877332A的中國發(fā)明專利申請)，靈敏度高、特異性強、無需貴重儀器設備、對樣品純度要求不高、適用于大批量樣品的檢測，但該方法仍需要在實驗室內(nèi)完成，耗時l-2小時，無法實現(xiàn)現(xiàn)場快速檢測的需求；理化檢測方法主要有薄層色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜法以及色譜-質(zhì)譜聯(lián)用等，但薄層色譜法檢測靈敏度低且該法需要大量接觸標準品、不利于保護操作者的健康，高效液相色譜法、氣相色譜法以及色譜-質(zhì)譜聯(lián)用等方法靈敏準確，但是儀器昂貴、樣品處理煩瑣費時、成本高、且需專業(yè)人員操作。因此，霉菌毒素在動物飼料中快速、穩(wěn)定可靠殘留檢測方法的建立成為國內(nèi)外亟待解決的技術(shù)難題。為了保證我國生豬安全生產(chǎn)的可持續(xù)發(fā)展和保障豬肉食品的安全性，建立生豬飼料中霉菌毒素快速、精確和靈敏的檢測方法具有迫切性和必要性。
發(fā)明內(nèi)容為了解決上述的技術(shù)問題，本發(fā)明的第一個目的是在于提供一種簡便、靈敏、價格低廉的生物毒素膠體金免疫層析試紙，本發(fā)明的另外一個目的是提供使用上述的免疫層析試紙進行生物毒素檢測的方法。為了實現(xiàn)上述的第一個目的，本發(fā)明采用了以下的技術(shù)方案檢測生物毒素的膠體金免疫層析試紙，其包括在底板上依次粘貼的樣品吸收墊、膠體金標記墊、檢測反應區(qū)及吸收墊，檢測反應區(qū)上設有包被有檢測用抗原的檢測線和包被有二抗的質(zhì)控線，膠體金標記墊所包被物質(zhì)為一種生物毒素抗體或多種生物毒素抗體的膠體金標記物的混合物，所述的檢測線的條數(shù)與膠體金標記墊包被生物毒素抗體的數(shù)目相應，每條檢測線上分別包被有與膠體金標記抗體相應的單一的生物毒素檢測用抗原。作為優(yōu)選，上述的生物毒素抗體為霉菌毒素抗體，上述的生物毒素檢測用抗原為霉菌毒素檢測用抗原。作為再優(yōu)選，上述的生物毒素抗體分別為玉米赤霉烯酮、伏馬菌素B1、赭曲霉毒素A或嘔吐毒素的多克隆抗體或單克隆抗體中的一種或多種，檢測用抗原相應的分別為玉米赤霉烯酮、伏馬菌素B1、赭曲霉毒素A或嘔吐毒素的檢測用抗原中的一種或多種。作為優(yōu)選，上述的試紙為嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A和伏馬菌素B1四聯(lián)檢測試紙，膠體金標記墊包被物質(zhì)為嘔吐毒素抗體、玉米赤霉烯酮抗體、赭曲霉毒素A抗體和伏馬菌素B1抗體膠體金標記物的混合，檢測線的條數(shù)為4條，每條檢測線上分別包被嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A和伏馬菌素B1的檢測用抗原。或者，上述的試紙為嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮和伏馬菌素B1三聯(lián)檢測試紙，膠體金標記墊包被物質(zhì)為嘔吐毒素抗體、玉米赤霉烯酮抗體和伏馬菌素B1抗體膠體金標記物的混合，檢測線的條數(shù)為3條，每條檢測線上分別包被嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮和伏馬菌素Bl的檢測用抗原?；蛘?，上述的試紙為嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A三聯(lián)檢測試紙，膠體金標記墊包被物質(zhì)為嘔吐毒素抗體、玉米赤霉烯酮抗體和赭曲霉毒素A抗體膠體金標記物的混合，檢測線的條數(shù)為3條，每條檢測線上分別包被嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A的檢測用抗原?；蛘撸鲜龅脑嚰垶閲I吐毒素、赭曲霉毒素A和伏馬菌素B1三聯(lián)檢測試紙，膠體金標記墊包被物質(zhì)為嘔吐毒素抗體、赭曲霉毒素A抗體和伏馬菌素B1抗體膠體金標記物的混合，檢測線的條數(shù)為3條，每條檢測線上分別包被嘔吐毒素、赭曲霉毒素A和伏馬菌素B1的檢測用抗原?；蛘?，上述的試紙為赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮和伏馬菌素B1三聯(lián)檢測試紙，膠體金標記墊包被物質(zhì)為玉米赤霉烯酮抗體、赭曲霉毒素A抗體和伏馬菌素Bl抗體膠體金標記物的混合，檢測線的條數(shù)為3條，每條檢測線上分別包被玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A和伏馬菌素B1的檢測用抗原?；蛘撸鲜龅脑嚰垶閲I吐毒素和玉米赤霉烯酮二聯(lián)檢測試紙，膠體金標記墊包被物質(zhì)為嘔吐毒素抗體和玉米赤霉烯酮抗體膠體金標記物的混合，檢測線的條數(shù)為2條，每條檢測線上分別包被嘔吐毒素和玉米赤霉的檢測用抗原?；蛘撸鲜龅脑嚰垶閲I吐毒素和伏馬菌素B1二聯(lián)檢測試紙，膠體金標記墊包被物質(zhì)為嘔吐毒素抗體和伏馬菌素B1抗體膠體金標記物的混合，檢測線的條數(shù)為2條，每條檢測線上分別包被嘔吐毒素和伏馬菌素B1的檢測用抗原?；蛘?，上述的試紙為伏馬菌素B1和玉米赤霉烯酮二聯(lián)檢測試紙，膠體金標記墊包被物質(zhì)為伏馬菌素B1抗體和玉米赤霉烯酮抗體膠體金標記物的混合，檢測線的條數(shù)為2條，每條檢測線上分別包被伏馬菌素Bl和玉米赤霉烯酮的檢測用抗原?；蛘撸鲜龅脑嚰垶榉R菌素B1和赭曲霉毒素A二聯(lián)檢測試紙，膠體金標記墊包被物質(zhì)為伏馬菌素B1抗體和赭曲霉毒素A抗體膠體金標記物的混合，檢測線的條數(shù)為2條，每條檢測線上分別包被伏馬菌素Bl和赭曲霉毒素A的檢測用抗原?；蛘?，上述的試紙為赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮二聯(lián)檢測試紙，膠體金標記墊包被物質(zhì)為赭曲霉毒素A抗體和玉米赤霉烯酮抗體膠體金標記物的混合，檢測線的條數(shù)為2條，每條檢測線上分別包被赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的檢測用抗原?；蛘?，上述的試紙為嘔吐毒素和赭曲霉毒素A二聯(lián)檢測試紙，膠體金標記墊包被物質(zhì)為嘔吐毒素抗體和赭曲霉毒素A抗體膠體金標記物的混合，檢測線的條數(shù)為2條，每條檢測線上分別包被嘔吐毒素和赭曲霉毒素A的檢測用抗原。或者，上述的試紙為玉米赤霉烯酮檢測試紙，膠體金標記墊包被物質(zhì)為玉米赤霉烯酮抗體膠體金標記物，檢測線的條數(shù)為1條，檢測線上包被玉米赤霉烯酮的檢測用抗原?；蛘撸鲜龅脑嚰垶榉R菌素B1檢測試紙，膠體金標記墊包被物質(zhì)為伏馬菌素B1抗體膠體金標記物，檢測線的條數(shù)為l條，檢測線上包被伏馬菌素B1的檢測用抗原?；蛘?，上述的試紙為赭曲霉毒素A檢測試紙，膠體金標記墊包被物質(zhì)為赭曲霉毒素A抗體膠體金標記物，檢測線的條數(shù)為l條，檢測線上包被赭曲霉毒素A的檢測用抗原。作為優(yōu)選，上述的生物毒素抗體可以采用生物毒素單克隆抗體。作為優(yōu)選，檢測用抗原為生物毒素與載體物質(zhì)偶聯(lián)形成的偶合物，其中載體物質(zhì)選自蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)片段中的一種，如血清白蛋白、球蛋白、脂蛋白。作為再優(yōu)選，載體物質(zhì)選自牛血清白蛋白、卵清白蛋白、血藍蛋白與甲狀腺球蛋白中的一種。本發(fā)明的膠體金免疫層析試紙?zhí)禺愋詮姡?-4(TC都可使用；操作簡單方便，對牛奶、動物尿液可直接檢測，詞料、小麥、玉米、大麥等樣品簡單處理后即可檢測，3-5min以后便可觀察結(jié)果。本方法適用面寬，能滿足食品安全、飼料安全及政府檢測機構(gòu)快速檢測生物毒素殘留的需求。圖l為生物毒素膠體金免疫層析試紙的結(jié)構(gòu)示意圖，其中附圖標記l為地板，附圖標記2為吸收墊、附圖標記3為C帶、附圖標記4為T帶、附圖標記5為硝酸纖維素膜、附圖標記6膠體金墊、附圖標記7為樣品吸收墊。圖2為四聯(lián)檢測試紙檢測結(jié)果示意圖，結(jié)果有效圖示。圖3為四聯(lián)檢測試紙檢測結(jié)果示意圖，結(jié)果無效圖示。圖4為三聯(lián)檢測試紙檢測結(jié)果示意圖，結(jié)果有效圖示。圖5為三聯(lián)檢測試紙檢測結(jié)果示意圖，結(jié)果無效圖示。圖6為二聯(lián)檢測試紙檢測結(jié)果示意圖，結(jié)果有效圖示。圖7為二聯(lián)檢測試紙檢測結(jié)果示意圖，結(jié)果無效圖示。圖8為單一生物毒素檢測試紙檢測結(jié)果示意圖。具體實施例方式1、生物毒素偶合抗原合成(1)玉米赤霉烯酮偶合抗原合成-取10-20mg載體蛋白溶于lmL的水中，取ZEA(玉米赤霉烯酮，zearalenone)半抗原0.01-0.04mrno1溶于二氧六環(huán)中，將上述兩種溶液緩慢混合。取碳化二亞胺0.02-0.04mmol，溶于lmL水中，逐滴加到混合液中，在20-25。C下，攪拌反應過夜，用鹽酸調(diào)PH二6.0，再次加入0.01-0.02ramo1碳化一.亞胺，后放于4°C冰箱內(nèi)24-28h，反應完成后將反應液裝入透析袋，4°C下，pH二7.4的PBS中透析，分裝，-2CTC保存?zhèn)溆谩?2)嘔吐毒素抗原的合成將10-40mgDON(嘔吐毒素)溶解在0.1-0.8ml吡啶中，加入到10ml的反應瓶中，在反應瓶中加入30-120mg的硼酸?；旌衔镌谑覝叵聰嚢柽^夜，再加入30-120mg琥珀酸酐，并通入氮氣，密封反應瓶，混合物在沸水浴中攪拌2-3h。將吡啶在室溫吹十后，加入5mL乙酸乙酯溶解殘余物，離心，取上清液，室溫吹干后。加入NHS、DCC溶于盡可能少的DMF中，室溫振蕩30-60min，離心，取上清液。將上清液緩慢滴加到載體蛋白液屮，在4'C振蕩反應4h。然后，在0.01MPBSPH7.4中透析，分裝，-2(TC保存?zhèn)溆谩?3)伏馬菌素B1抗原的合成取10-40mg載體蛋白，伏馬菌素B10.01-0.04咖o1溶于0.02MPBSPH^7.4中，室溫下攪拌混勻。再緩慢加入0.02-0.06mmol的戊二醛，混合物在室溫下攪拌過夜，反應完成后將反應液裝入透析袋，4°C下，pH=7.4的PBS中透析，加入0.01-0.04mmol的伏馬菌素B1，后放于4'C冰箱內(nèi)24h，再加入0.01MTris繼續(xù)攪拌4h,反應完成后將反應液裝入透析袋，在4'C下透析，分裝，-2(TC保存?zhèn)溆谩?4)赭曲霉毒素A抗原的合成取20-40mg載體蛋白，赭曲霉毒素A0.02-0.04mmol溶于0.02MPBSPH=7.4中，室溫下攪拌混勻；再緩慢加入0.03-0.06mmol的戊二醛，混合物在室溫下攪拌過夜，反應完成后將反應液裝入透析袋，4'C下，pH=7.4的PBS中透析，透析完成后，分裝，-2(TC保存?zhèn)溆谩?、生物毒素單克隆抗體制備(1)免疫動物取健康6-IO周齡雌性二級Balb/c小鼠6只進行免疫。第一次基礎(chǔ)免疫將0.5-1.0mg/mL生物毒素免疫用抗原與等量完全弗氏佐劑用攪拌器充分混勻乳化，進行皮下多點注射，注射量0.1-0.3mL/點。三周后開始進行加強免疫，劑量同上，佐劑換為不完全弗氏佐劑，二免后，定期測定抗體效價，每隔三周加強免疫一次，末次免疫3d后取脾臟融合。(2)脾細胞懸液的制備效價高的小鼠，拉頸處死，70%酒精浸泡消毒10min，用手術(shù)剪將小鼠腹部剪開一小口，剝開皮膚，露出腹腔，在無菌條件下取出脾臟，用不完全的培養(yǎng)液洗一次，置平皿中不銹鋼篩網(wǎng)上，用注射器針芯研磨成細胞懸液后計數(shù)。(3)細胞融合和克隆化取對數(shù)生長的骨髓瘤細胞，1000rpm離心5分鐘，棄上清，用不完全培養(yǎng)液混懸細胞后計數(shù)，取所需的細胞數(shù)，用不完全培養(yǎng)液洗滌2次。同時制備免疫脾細胞懸液，用不完全培養(yǎng)液洗滌2次。將骨髓瘤細胞與脾細胞按1:10或1:5的比例混合在一起，在50ml塑料離心管內(nèi)用不完全培養(yǎng)液洗l次，1200rpm,5-10分鐘。棄上清，輕輕彈擊離心管底，使細胞沉淀略加松動。在室溫下融合:加入預熱的lml50%PEG，邊加邊攪拌；加預熱的不完全培養(yǎng)液，終止PEG作用。離心，棄上清，先用6ml左右20X小牛血清輕輕混懸。將融合后細胞懸液加入含有飼養(yǎng)細胞的96孔板，100yl/孔，37°C、5XC02條件下培養(yǎng)。融合一天后，加HAT選擇培養(yǎng)液。融合后7d，用HT培養(yǎng)液換液1次，在13d后根據(jù)增殖情況改用20%NBS的完全培養(yǎng)液。待集落長至孔底1/3時，可取上清檢測相應的特異性抗體。細胞完全克隆化后，將細胞注入小鼠腹腔，將腹水用蛋白A免疫親和層析純化后，即得到生物毒素單克隆抗體。3、樣品吸收墊處理將醋酸纖維紙浸入pH7.4的PBS中10min，取出，5(TC烘干或其他方式干燥。4、吸收墊處理將吸水紙室溫干燥后，即作為吸收墊。5、試紙組裝在試紙的底板上依次粘貼有樣品吸收墊、膠體金標記墊、檢測反應區(qū)及吸收墊，即成生物毒素膠體金免疫檢測試紙。本發(fā)明所描述的試紙的各部分處理與功能如下底板為一面涂有不干膠的不吸水的韌性材料，如PVC板，起固定支持試紙其他組成部分的作用。樣品吸收墊制備將醋酸纖維紙浸入pH7.4的PBS中10min,取出，5(TC烘干或其他方式干燥。膠體金標記墊的制備膠體金溶膠的制備、膠體金標記生物毒素抗體、膠體金標記墊處理。(1)膠體金溶膠的制備取250ml三角瓶一個，加IOOml超純水及l(fā)mll。/。氯化金，加熱沸騰；取2ml的W檸檬酸鈉加入上述溶液中?；靹?，再保持沸騰30min，溶液顏色首先變黑，再逐漸變紅，即為膠體金溶膠。(2)膠體金標記生物毒素抗體磁力攪拌下，用0.lM碳酸鉀調(diào)膠體金的pH值至8.2，按10-20ug抗體/ml膠體金加入生物毒素抗體，繼續(xù)攪拌混勻30min，加入10%BSA至終濃度為0.5%，靜置30min。12000rpm、4。C離心30min，棄上清，沉淀用1/20初始膠體金體積的0.02MpH9.0的硼酸鹽緩沖液(配方硼酸O.1237g，PEG-20000lg，用超純水水定容至1L，調(diào)pH至9.0)重懸，置4。C備用，有效期60天。(3)膠體金標記墊處理將標記好的抗體倒入一槽中，將玻璃纖維紙浸入lmin，取出，室溫干燥。檢測反應區(qū)制備硝酸纖維膜上邊包被生物毒素檢測用抗原線作為檢測線(如圖2，圖3中的T1、T2、T3)，同時包被羊抗鼠IgG線作為質(zhì)控線(如圖2，圖3中的C線)。此即為檢測反應區(qū)，該部分主要作用是將反應結(jié)果以肉眼可見的顏色表征出來。吸收墊制備將吸水紙室溫干燥后，作為吸收墊，作用在于將移動上來的多余的樣品溶液吸收。試紙組裝在試紙的底板上依次粘貼有樣品吸收墊、膠體金標記墊、檢測反應區(qū)及吸收墊，即成生物毒素檢測試紙。檢測原理膠體金標記墊的標記對象為生物毒素抗體，如果樣品中含有生物毒素，樣品溶液被試紙的樣品吸收墊吸收并通過毛細作用上移到達膠體金標記部分，樣品溶液中的生物毒素與膠體金標記的生物毒素抗體反應形成結(jié)合物，結(jié)合物繼續(xù)上移到檢測線，因膠體金標記的生物毒素抗體只有一個結(jié)合位點，樣品溶液中的相應的生物毒素與之結(jié)合后，檢測線上的相應的檢測用抗原就不能再與膠體金標記的生物毒素抗體結(jié)合，于是檢測線無色，如圖2所示；當樣品中沒有或低于檢測限的相應生物毒素時，膠體金標記的生物毒素抗體到達檢測線時被相應的檢測用抗原捕獲，則形成肉眼可見紅色，此即為陰性，如圖2所示；無論有無生物毒素，質(zhì)控線(C線)都顯紅色；如果都不顯色或者質(zhì)控線(C線)不顯紅色則表明該試紙已經(jīng)變質(zhì)失效，如圖3所示。6、檢測方法(1)牛奶、尿樣直接滴3滴牛奶或尿于樣品墊上，3-5min后，觀察顏色。(2)小麥、玉米、大麥、飼料等樣品準確稱取lg充分研磨的樣品，加入2mLPBS(O.Olmol/LpH7.4)中，充分混勻，5000rpm離心10min，取上清液用于檢測(注意不要吸到表面的脂肪層)。直接滴3滴于樣品墊上，3-5min后，觀察顏色。7、試紙保質(zhì)期試驗試紙的保存條件為4-4(TC，在常溫條件下經(jīng)過6個月的測定，樣品的在試紙上的層析速度、陰性的顯色深度、檢測靈敏度、實際樣品檢測準確度均在正常范圍內(nèi)?？紤]到冬季和夏季的溫度條件，將試紙在40。C和4。C的保存條件下放置6個月，進行穩(wěn)定性加速試驗，結(jié)果試紙的各項指標都符合要求。將試紙在7(TC條件下可以放置2周，結(jié)果試紙的各項指標正常。以上結(jié)果表明該試紙可以在常溫下的保存時間為2年左右，在4(TC和4'C的保存條件下放置6個月以上。實施例1嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A和伏馬菌素B1四聯(lián)檢測試紙試紙檢測線包被有濃度為0.5-2.Omg/mL的生物毒素檢測用抗原，如圖2所示，T4距離檢測區(qū)底部4-6mm;質(zhì)控線包被有濃度為0.5_1.5mg/mL的羊抗鼠IgG，距離檢測區(qū)頂部4-6mm;C線與Tl，Tl與T2，T2與T3，T3與T4兩條線之間間隔2-4mm。檢測結(jié)果判定1、如圖2中A所示檢測線Tl、T2、T3、T4和質(zhì)控線C都顯紅色，表示檢測結(jié)果為陰性，表明被檢測樣品中嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A和伏馬菌素B1三種生物毒素含量低于檢測限。2、如圖2中B所示檢測線T1、T2、T3和質(zhì)控線C顯紅色，檢測線T4不顯色，檢測結(jié)果為伏馬菌素B1陽性，嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A陰性，表明被檢測樣品中伏馬菌素B1含量高于檢測限，嘔吐毒素、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮含量低于檢測限。3、如圖2中C所示檢測線T1、T2和質(zhì)控線C顯紅色，檢測線T4、T3不顯色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮陰性，赭曲霉毒素A和伏馬菌素B1陽性，表明被檢測樣品中嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮含量低于檢測限，赭曲霉毒素A和伏馬菌素Bl含量高于檢測限。4、如圖2中D所示檢測線T1和質(zhì)控線C顯紅色，檢測線T2、T4、T3不顯色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素陰性，玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A和伏馬菌素B1陽性，表明被檢測樣品中嘔吐毒素含量低于檢測限，玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A和伏馬菌素B1含量高于檢測限。5、如圖2中E所示檢測線T1、T2、T3、T4都不顯色，質(zhì)控線C顯紅色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A和伏馬菌素B1陽性，表明被檢測樣品中嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A和伏馬菌素Bl含量高于檢測限。6、如圖2中F所示檢測線T2不顯色，檢測線T1、T3、T4和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為玉米赤霉烯酮陽性，赭曲霉毒素A、嘔吐毒素和伏馬菌素B1陰性，表明被檢測樣品玉米赤霉烯酮含量高于檢測限，赭曲霉毒素A、嘔吐毒素和伏馬菌素B1含量低于檢測限。7、如圖2中G'所示檢測線Tl不顯色，檢測線T2、T3、T4和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素陽性，赭曲霉毒素A、伏馬菌素B1和玉米赤霉烯酮陰性，表明被檢測樣品嘔吐毒素含量高于檢測限，赭曲霉毒素A、伏馬菌素B1和玉米赤霉烯酮含量低于檢測限。8、如圖2中H所示檢測線T3不顯色，檢測線Tl、T2、T4和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果赭曲霉毒素A為陽性，伏馬菌素B1、嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮陰性，表明被檢測樣品赭曲霉毒素A含量高于檢測限，伏馬菌素B1、嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮含量低于檢測限。9、如圖2中I所示檢測線T3、T2不顯色，檢測線T1、T4和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮陽性，嘔吐毒素和伏馬菌素B1陰性，表明被檢測樣品赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮含量高于檢測限，嘔吐毒素和伏馬菌素Bl含量低于檢測限。10、如圖2中K所示檢測線Tl、T2不顯色，檢測線T3、T4和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮陽性，赭曲霉毒素A和伏馬菌素B1陰性，表明被檢測樣品嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮含量高于檢測限，赭曲霉毒素A和伏馬菌素Bl含量低于檢測限。11、如圖2中L所示檢測線T4、T2不顯色，檢測線T3、Tl和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為伏馬菌素Bl和玉米赤霉烯酮陽性，嘔吐毒素和赭曲霉毒素A陰性，表明被檢測樣品伏馬菌素B1和玉米赤霉烯酮含量高于檢測限，嘔吐毒素和赭曲霉毒素A含量低于檢測限。12、如圖2中M所示檢測線Tl、T4不顯色，檢測線T2、T3和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素和伏馬菌素B1陽性，赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮陰性，表明被檢測樣品嘔吐毒素和伏馬菌素Bl含量高于檢測限，赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮含量低于檢測限。13、如圖2中N所示檢測線T1、T3、T4不顯色，檢測線T2和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為玉米赤霉烯酮陽性，赭曲霉毒素A、嘔吐毒素和伏馬菌素B1陰性，表明被檢測樣品玉米赤霉烯酮含量高于檢測限，赭曲霉毒素A、嘔吐毒素和伏馬菌素B1含量低于檢測限。14、如圖2中0所示檢測線T3不顯色，檢測線T1、T2、T4和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為赭曲霉毒素A陽性，伏馬菌素B1、嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮陰性，表明被檢測樣品赭曲霉毒素A含量高于檢測限，伏馬菌素B1、嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮含量低于檢測限。15、如圖2中P所示檢測線T4不顯色，檢測線Tl、T2、T3和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為伏馬菌素B1陽性，赭曲霉毒素A、嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮陰性，表明被檢測樣品伏馬菌素B1含量高于檢測限，赭曲霉毒素A、嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮含量低于檢測限。16、如圖3所示檢測線T1、T2、T3、T4和質(zhì)控線C都不顯色，或者質(zhì)控線C不顯紅色，檢測結(jié)果無效。靈敏度試驗用PBS配制標準品梯度0、10、20、50、100ng/ml。用生產(chǎn)的試紙1三批來檢測，每批每個濃度重復試驗5次。得到的試驗結(jié)果是以生物毒素試紙l檢測玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素和伏馬菌素Bl的檢測限為20ng/ml，具體結(jié)果見表1、表2、表3、表4。表1嘔吐毒素試紙1靈敏度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注"-"表示檢測結(jié)果陰性，"+"表示檢測結(jié)果陽性。試紙的準確度試驗在牛奶、尿樣、伺料、玉米、大麥、小麥等經(jīng)確證為陰性樣品中添加生物毒素使樣品中的生物毒素濃度為10ng/g、20ng/g、50ng/g、100ng/g。經(jīng)過前處理后檢測，每個樣品重復5次，檢測結(jié)果與標準品溶液檢測結(jié)果的檢測限符合率100%。具體結(jié)果見表5、表6、表7、表8。表5嘔吐毒素試紙1準確度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表6玉米赤霉烯酮試紙1準確度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表7伏馬菌素Bl試紙1準確度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>表8赭曲霉毒素A試紙1準確度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>注"-"表示檢測結(jié)果陰性，"+"表示檢測結(jié)果陽性。實施例2嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮和伏馬菌素Bl三聯(lián)檢測試紙試紙檢測線包被有濃度為0.5-2.Omg/mL的生物毒素檢測用抗原，如圖4所示，T3距離檢測區(qū)底部6-8mm;質(zhì)控線包被有濃度為0.5-1.5mg/mL的羊抗鼠IgG，距離檢測區(qū)頂部6-8腿；C線與T1，T1與T2，T2與T3兩條線之間間隔2-4mm。檢測結(jié)果判定1、如圖4中A所示檢測線T1、T2、T3和質(zhì)控線C都顯紅色，表示檢測結(jié)果為陰性，表明被檢測樣品中嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮和伏馬菌素Bl三種生物毒素含量低于檢測限。2、如圖4中B所示檢測線T1、T2和質(zhì)控線C顯紅色，檢測線T3不顯色，檢測結(jié)果為伏馬菌素B1陽性，嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮陰性，表明被檢測樣品中伏馬菌素B1含量高于檢測限，嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮含量低于檢測限。3、如圖4中C所示檢測線T1和質(zhì)控線C顯紅色，檢測線T2、T3不顯色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素陰性，玉米赤霉烯酮和伏馬菌素B1陽性，表明被檢測樣品中嘔吐毒素含量低于檢測限，玉米赤霉烯酮和伏馬菌素B1含量高于檢測限。4、如圖4中D所不檢測線T1、T2、T3不顯色，質(zhì)控線C顯紅色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮和伏馬菌素B1陽性，表明被檢測樣品中嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮和伏馬菌素B1含量高于檢測限。5、如圖4中E所示檢測線Tl、T2不顯色，檢測線T3和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮陽性，伏馬菌素B1陰性，表明被檢測樣品嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮含量高于檢測限，伏馬菌素B1含量低于檢測限。6、如圖4中F所示檢測線Tl不顯色，檢測線T2、T3和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素陽性，玉米赤霉烯酮和伏馬菌素B1地西泮陰性，表明被檢測樣品中嘔吐毒素含量高于檢測限，玉米赤霉烯酮和伏馬菌素B1含量低于檢測限。7、如圖4中G所示檢測線T2不顯色，檢測線Tl、T3和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素和伏馬菌素B1陰性，玉米赤霉烯酮陽性，表明被檢測樣品中嘔吐毒素和伏馬菌素Bl含量低于檢測限，玉米赤霉烯酮含量高于檢測限。8、如圖4屮H所示檢測線Tl、T3不顯色，檢測線T2和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為玉米赤霉烯酮陰性，嘔吐毒素和伏馬菌素B1陽性，表明被檢測樣品中玉米赤霉烯酮含量低于檢測限，嘔吐毒素和伏馬菌素B1含量高于檢測限。9、如圖5所示檢測線Tl、T2、T3和質(zhì)控線C都不顯色，或者質(zhì)控線C不顯紅色，檢測結(jié)果無效。靈敏度試驗用PBS配制標準品梯度0、10、20、50、100ng/ml。用生產(chǎn)的試紙2三批來檢測，每批每個濃度重復試驗5次。得到的試驗結(jié)果是以生物毒素試紙2檢測玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素和伏馬菌素B1的檢測限為20ng/ml，具體結(jié)果見表l-l、表2_1、表3-1。表1-1嘔吐毒素試紙2靈敏度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>表2-1玉米赤霉烯酮試紙2靈敏度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>表3-1伏馬菌素Bl試紙2靈敏度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>注"-"表示檢測結(jié)果陰性，"+"表示檢測結(jié)果陽性。試紙的準確度試驗在牛奶、尿樣、飼料、玉米、大麥、小麥等經(jīng)確證為陰性樣品中添加生物毒素使樣品中的生物毒素濃度為10ng/g、20ng/g、50ng/g、100ng/g。經(jīng)過前處理后檢測，每個樣品重復5次，檢測結(jié)果與標準品溶液檢測結(jié)果的檢測限符合率100%。具體結(jié)果見表4-l、表5-l、表6-1。表4-l嘔吐毒素試紙2準確度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>表5-1玉米赤霉烯酮試紙2準確度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>表6-1伏馬菌素Bl試紙2準確度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>注"_"表示檢測結(jié)果陰性，"+"表示檢測結(jié)果陽性。實施例3赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮和伏馬菌素B1三聯(lián)檢測試紙試紙檢測線包被有濃度為0.5-2.Omg/mL的生物毒素檢測用抗原，如圖4所示，T3距離檢測區(qū)底部6-8ram;質(zhì)控線包被有濃度為0.5-1.5mg/mL的羊抗鼠IgG，距離檢測區(qū)頂部6-8mm;C線與T1，T1與T2，T2與T3兩條線之間間隔2-4mm。檢測結(jié)果判定1、如圖4中A所示檢測線T1、T2、T3和質(zhì)控線C都顯紅色，表示檢測結(jié)果為陰性，表明被檢測樣品中赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮和伏馬菌素Bl三種生物毒素含量低于檢測限。2、如圖4中B所示檢測線Tl、T2和質(zhì)控線C顯紅色，檢測線T3不顯色，檢測結(jié)果為伏馬菌素B1陽性，赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮陰性，表明被檢測樣品中伏馬菌素B1含量高于檢測限，赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮含量低于檢測限。3、如圖4中C所示檢測線T1和質(zhì)控線C顯紅色，檢測線T2、T3不顯色，檢測結(jié)果為赭曲霉毒素A陰性，玉米赤霉烯酮和伏馬菌素Bl陽性，表明被檢測樣品中赭曲霉毒素A含量低于檢測限，玉米赤霉烯酮和伏馬菌素B1含量高于檢測限。4、如圖4中D所示檢測線T1、T2、T3不顯色，質(zhì)控線C顯紅色，檢測結(jié)果為赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮和伏馬菌素B1陽性，表明被檢測樣品中赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮和伏馬菌素Bl含量高于檢測限。5、如圖4中E所示檢測線T1、T2不顯色，檢測線T3和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮陽性，伏馬菌素B1陰性，表明被檢測樣品赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮含量高于檢測限，伏馬菌素B1含量低于檢測限。6、如圖4中F所示檢測線Tl不顯色，檢測線T2、T3和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為赭曲霉毒素A陽性，玉米赤霉烯酮和伏馬菌素B1地西泮陰性，表明被檢測樣品中赭曲霉毒素A含量高于檢測限，玉米赤霉烯酮和伏馬菌素Bl含量低于檢測限。7、如圖4中G所示檢測線T2不顯色，檢測線Tl、T3和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為赭曲霉毒素A和伏馬菌素B1陰性，玉米赤霉烯酮陽性，表明被檢測樣品中赭曲霉毒素A和伏馬菌素B1含量低于檢測限，玉米赤霉烯酮含量高于檢測限。8、如圖4中H所示檢測線Tl、T3不顯色，檢測線T2和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為玉米赤霉烯酮陰性，赭曲霉毒素A和伏馬菌素B1陽性，表明被檢測樣品中玉米赤霉烯酮含量低于檢測限，赭曲霉毒素A和伏馬菌素Bl含量高于檢測限。9、如圖5所示檢測線T1、T2、T3和質(zhì)控線C都不顯色，或者質(zhì)控線C不顯紅色，檢測結(jié)果無效。靈敏度試驗用PBS配制標準品梯度0、10、20、50、100ng/ml。用生產(chǎn)的試紙3三批來檢測，每批每個濃度重復試驗5次。得到的試驗結(jié)果是以生物毒素試紙3檢測玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A和伏馬菌素B1的檢測限為20ng/ml，具體結(jié)果見表1-2、表2-2、表3-2。表1-2赭曲霉毒素A試紙3靈敏度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>表2-2玉米赤霉烯酮試紙3靈敏度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>注"-"表不檢測結(jié)果陰性，"+"表示檢測結(jié)果陽性。試紙的準確度試驗在牛奶、尿樣、飼料、玉米、大麥、小麥等經(jīng)確證為陰性樣品中添加生物毒素使樣品中的生物毒素濃度為10ng/g、20ng/g、50ng/g、100ng/g。經(jīng)過前處理后檢測，每個樣品重復5次，檢測結(jié)果與標準品溶液檢測結(jié)果的檢測限符合率100%。具體結(jié)果見表4-2、表5-2、表6—2。表4-2赭曲霉毒素A試紙3準確度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>表5-2玉米赤霉烯酮試紙3準確度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>表6-2伏馬菌素Bl試紙3準確度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>注"-"表示檢測結(jié)果陰性，"+"表示檢測結(jié)果陽性。實施例4嘔吐毒素、赭曲霉毒素A和伏馬菌素Bl三聯(lián)檢測試紙試紙檢測線包被有濃度為0.5-2.Omg/mL的生物毒素檢測用抗原，如圖4所示，T3距離檢測區(qū)底部6-8mm;質(zhì)控線包被有濃度為0.5_i.5mg/mL的羊抗鼠IgG，距離檢測區(qū)頂部6-8mm;C線與T1，T1與T2，T2與T3兩條線之間間隔2-4mm。檢測結(jié)果判定1、如圖4中A所示檢測線T1、T2、T3和質(zhì)控線C都顯紅色，表示檢測結(jié)果為陰性，表明被檢測樣品中嘔吐毒素、赭曲霉毒素A和伏馬菌素Bl三種生物毒素含量低于檢測限。2、如圖4中B所示檢測線Tl、T2和質(zhì)控線C顯紅色，檢測線T3不顯色，檢測結(jié)果為伏馬菌素B1陽性，嘔吐毒素、赭曲霉毒素A陰性，表明被檢測樣品中伏馬菌素B1含量高于檢測限，嘔吐毒素和赭曲霉毒素A含量低于檢測限。3、如圖4中C所示檢測線Tl和質(zhì)控線C顯紅色，檢測線T2、T3不顯色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素陰性，赭曲霉毒素A和伏馬菌素Bi陽性，表明被檢測樣品中嘔吐毒素含量低于檢測限，赭曲霉毒素A和伏馬菌素B1含量高于檢測限。4、如圖4中D所示檢測線T1、T2、T3不顯色，質(zhì)控線C顯紅色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素、赭曲霉毒素A和伏馬菌素B1陽性，表明被檢測樣品中嘔吐毒素、赭曲霉毒素A和伏馬菌素B1含量高于檢測限。5、如圖4中E所示檢測線Tl、T2不顯色，檢測線T3和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素和赭曲霉毒素A陽性，伏馬菌素B1陰性，表明被檢測樣品嘔吐毒素和赭曲霉毒素A含量高于檢測限，伏馬菌素B1含量低于檢測限。6、如圖4中F所示檢測線T1不顯色，檢測線T2、T3和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素陽性，赭曲霉毒素A和伏馬菌素B1地西泮陰性，表明被檢測樣品中嘔吐毒素含量高于檢測限，赭曲霉毒素A和伏馬菌素Bl含量低于檢測限。7、如圖4中G所示檢測線T2不顯色，檢測線T1、T3和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素和伏馬菌素B1陰性，赭曲霉毒素A陽性，表明被檢測樣品中嘔吐毒素和伏馬菌素Bl含量低于檢測限，赭曲霉毒素A含量高于檢測限。8、如圖4中H所示檢測線Tl、T3不顯色，檢測線T2和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為赭曲霉毒素A陰性，嘔吐毒素和伏馬菌素B1陽性，表明被檢測樣品中赭曲霉毒素A含量低于檢測限，嘔吐毒素和伏馬菌素B1含量高于檢測限。9、如圖5所示檢測線Tl、T2、T3和質(zhì)控線C都不顯色，或者質(zhì)控線C不顯紅色，檢測結(jié)果無效。靈敏度試驗用PBS配制標準品梯度0、10、20、50、100ng/ml。用生產(chǎn)的試紙4三批來檢測，每批每個濃度重復試驗5次。得到的試驗結(jié)果是以生物毒素試紙4檢測赭曲霉毒素A、嘔吐毒素和伏馬菌素B1的檢測限為20ng/ml，具體結(jié)果見表1_3、表2-3、表3-3。表1-3嘔吐毒素試紙4靈敏度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>表2-3赭曲霉毒素A試紙4靈敏度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>表3-3伏馬菌素Bl試紙4靈敏度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>"-"表示檢測結(jié)果陰性，"+"表示檢測結(jié)果陽性。試紙的準確度試驗在牛奶、尿樣、飼料、玉米、大麥、小麥等經(jīng)確證為陰性樣品中添加生物毒素使樣品中的生物毒素濃度為10ng/g、20ng/g、50ng/g、100ng/g。經(jīng)過前處理后檢測，每個樣品重復5次，檢測結(jié)果與標準品溶液檢測結(jié)果的檢測限符合率100%。具體結(jié)果見表4-3、表5-3、表6—3。表4-3嘔吐毒素試紙4準確度試驗結(jié)果<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>赭曲霉毒素A陽性，嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮陰性，表明被檢測樣品中赭曲霉毒素A含量高于檢測限，嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮含量低于檢測限。3、如圖4中C所示檢測線T1和質(zhì)控線C顯紅色，檢測線T2、T3不顯色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素陰性，玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A陽性，表明被檢測樣品中嘔吐毒素含量低于檢測限，玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A含量高于檢測限。4、如圖4中D所示檢測線T1、T2、T3不顯色，質(zhì)控線C顯紅色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A陽性，表明被檢測樣品中嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A含量高于檢測限。5、如圖4中E所示檢測線Tl、T2不顯色，檢測線T3和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮陽性，赭曲霉毒素A陰性，表明被檢測樣品嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮含量高于檢測限，赭曲霉毒素A含量低于檢測限。6、如圖4中F所示檢測線Tl不顯色，檢測線T2、T3和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素陽性，玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A地西泮陰性，表明被檢測樣品中嘔吐毒素含量高于檢測限，玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A含量低于檢測限。7、如圖4中G所示檢測線T2不顯色，檢測線Tl、T3和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素和赭曲霉毒素A陰性，玉米赤霉烯酮陽性，表明被檢測樣品中嘔吐毒素和赭曲霉毒素A含量低于檢測限，玉米赤霉烯酮含量高于檢測限。8、如圖4中H所示檢測線Tl、T3不顯色，檢測線T2和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為玉米赤霉烯酮陰性，嘔吐毒素和赭曲霉毒素A陽性，表明被檢測樣品中玉米赤霉烯酮含量低于檢測限，嘔吐毒素和赭曲霉毒素A含量高于檢測限。9、如圖5所示檢測線T1、T2、T3和質(zhì)控線C都不顯色，或者質(zhì)控線C不顯紅色，檢測結(jié)果無效。靈敏度試驗用PBS配制標準品梯度0、10、20、50、100ng/ml。用生產(chǎn)的試紙5三批來檢測，每批每個濃度重復試驗5次。得到的試驗結(jié)果是以生物毒素試紙5檢測玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素和赭曲霉毒素A的檢測限為20ng/ml，具體結(jié)果見表1_4、表2-4、表3-4。表1-4嘔吐毒素試紙5靈敏度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>表2-4玉米赤霉烯酮試紙5靈敏度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>表3-4赭曲霉毒素A試紙5靈敏度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>注"-"表示檢測結(jié)果陰性，"+"表示檢測結(jié)果陽性。試紙的準確度試驗在牛奶、尿樣、飼料、玉米、大麥、小麥等經(jīng)確證為陰性樣品中添加生物毒素使樣品中的生物毒素濃度為10ng/g、20ng/g、50ng/g、100ng/g。經(jīng)過前處理后檢測，每個樣品重復5次，檢測結(jié)果與標準品溶液檢測結(jié)果的檢測限符合率100%。具體結(jié)果見表4-4、表5-4、表6—4。表4-4嘔吐毒素試紙5準確度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>"-"表示檢測結(jié)果陰性，"+"表示檢測結(jié)果陽性。實施例6赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮二聯(lián)檢測試紙-試紙檢測線包被有濃度為0.5-2.Omg/mL的生物毒素檢測用抗原，如圖6所示，T2距離檢測區(qū)底部6-8mm;質(zhì)控線包被有濃度為0.5-1.5mg/mL的羊抗鼠IgG，距離檢測區(qū)頂部6-8mm;C線與T1，T1與T2兩條線之間間隔2-4隱。檢測結(jié)果判定1、如圖6中A所示檢測線T1、T2和質(zhì)控線C都顯紅色，表示檢測結(jié)果為陰性，表明被檢測樣品中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮含量低于檢測限。2、如圖6中B所示檢測線T1和質(zhì)控線C顯紅色，檢測線T2不顯色，檢測結(jié)果為赭曲霉毒素A陰性，玉米赤霉烯酮陽性，表明被檢測樣品中赭曲霉毒素A含量低于檢測限，玉米赤霉烯酮含量高于檢測限。3、如圖6中C所示檢測線T1、T2不顯色，質(zhì)控線C顯紅色，檢測結(jié)果為赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮陽性，表明被檢測樣品中赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮含量高于檢測限。4、如圖6中D所示檢測線Tl不顯色，檢測線T2和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為赭曲霉毒素A陽性，玉米赤霉烯酮陰性，表明被檢測樣品赭曲霉毒素A含量高于檢測限，玉米赤霉烯酮含量低于檢測限。5、如圖7所示檢測線T1、T2和質(zhì)控線C都不顯色，或者質(zhì)控線C不顯紅色，檢測結(jié)果無效。靈敏度試驗用PBS配制標準品梯度0、10、20、50、100ng/ml。用生產(chǎn)的試紙6三批來檢測，每批每個濃度重復試驗5次。得到的試驗結(jié)果是以生物毒素試紙6檢測玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A的檢測限為20ng/ml，具體結(jié)果見表7-1、表8-1。表7-1赭曲霉毒素A試紙6靈敏度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>注"-"表示檢測結(jié)果陰性，"+"表示檢測結(jié)果陽性。試紙的準確度試驗在牛奶、尿樣、伺料、玉米、大麥、小麥等經(jīng)確證為陰性樣品中添加生物毒素使樣品中的生物毒素濃度為10ng/g、20ng/g、50ng/g、100ng/g。經(jīng)過前處理后檢測，每個樣品重復5次，選用生產(chǎn)的試紙6中的其中一批用于檢測，檢測結(jié)果與標準品溶液檢測結(jié)果的檢測限符合率100%。具體結(jié)果見表9-l、表10-1。表9-l赭曲霉毒素A試紙2準確度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>注"-"表示檢測結(jié)果陰性，"+"表示檢測結(jié)果陽性。實施例7赭曲霉毒素A和伏馬菌素Bl二聯(lián)檢測試紙試紙檢測線包被有濃度為0.5-2.Onig/mL的生物毒素檢測用抗原，如圖6所示，T2距離檢測區(qū)底部6-8mm;質(zhì)控線包被有濃度為0.5-1.5mg/mL的羊抗鼠IgG，距離檢測區(qū)頂部6-8mm;C線與T1，T1與T2兩條線之間間隔2-4咖。檢測結(jié)果判定1、如圖6中A所示檢測線T1、T2和質(zhì)控線C都顯紅色，表示檢測結(jié)果為陰性，表明被檢測樣品中赭曲霉毒素A和伏馬菌素Bl含量低于檢測限。2、如圖6中B所示檢測線T1和質(zhì)控線C顯紅色，檢測線T2不顯色，檢測結(jié)果為赭曲霉毒素A陰性，伏馬菌素B1陽性，表明被檢測樣品中赭曲霉毒素A含量低于檢測限，伏馬菌素B1含量高于檢測限。3、如圖6中C所示檢測線T1、T2不顯色，質(zhì)控線C顯紅色，檢測結(jié)果為赭曲霉毒素A、伏馬菌素B1陽性，表明被檢測樣品中赭曲霉毒素A、伏馬菌素B1含量高于檢測限。4、如圖6中D所示檢測線T1不顯色，檢測線T2和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為赭曲霉毒素A陽性，伏馬菌素B1陰性，表明被檢測樣品赭曲霉毒素A含量高于檢測限，伏馬菌素B1含量低于檢測限。5、如圖7所示檢測線Tl、T2和質(zhì)控線C都不顯色，或者質(zhì)控線C不顯紅色，檢測結(jié)果無效。靈敏度試驗用raS配制標準品梯度0、10、20、50、100ng/m]。用生產(chǎn)的試紙7三批來檢測，每批每個濃度重復試驗5次。得到的試驗結(jié)果是以生物毒素試紙7檢測赭曲霉毒素A和伏馬菌素Bl的檢測限為20ng/ml，具體結(jié)果見表7-2、表8-2。表7-2赭曲霉毒素A試紙7靈敏度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>表8-2伏馬菌素Bl試紙7靈敏度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>注"_"表示檢測結(jié)果陰性，"+"表示檢測結(jié)果陽性。試紙的準確度試驗在牛奶、尿樣、飼料、玉米、大麥、小麥等經(jīng)確證為陰性樣品中添加生物毒素使樣品中的生物毒素濃度為10ng/g、20ng/g、50ng/g、100ng/g。經(jīng)過前處理后檢測，每個樣品重復5次，選用生產(chǎn)的試紙7中的其中一批用于檢測，檢測結(jié)果與標準品溶液檢測結(jié)果的檢測限符合率100%。具體結(jié)果見表9-2、表10-2。表9-2赭曲霉毒素A試紙7準確度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>注"-"表示檢測結(jié)果陰性，"+"表示檢測結(jié)果陽性。實施例8伏馬菌素Bl和玉米赤霉烯酮二聯(lián)檢測試紙試紙檢測線包被有濃度為0.5-2.Omg/mL的生物毒素檢測用抗原，如圖6所示，T2距離檢測區(qū)底部6-8mm;質(zhì)控線包被有濃度為0.5-1.5mg/mL的羊抗鼠IgG，距離檢測區(qū)頂部6-8mm;C線與Tl，Tl與T2兩條線之間間隔2-4隨。檢測結(jié)果判定1、如圖6中A所示檢測線T1、T2和質(zhì)控線C都顯紅色，表示檢測結(jié)果為陰性，表明被檢測樣品中伏馬菌素Bl和玉米赤霉烯酮含量低于檢測限。2、如圖6中B所示檢測線T1和質(zhì)控線C顯紅色，檢測線T2不顯色，檢測結(jié)果為伏馬菌素B1陰性，玉米赤霉烯酮陽性，表明被檢測樣品中伏馬菌素B1含量低于檢測限，玉米赤霉烯酮含量高于檢測限。3、如圖6中C所示檢測線T1、T2不顯色，質(zhì)控線C顯紅色，檢測結(jié)果為伏馬菌素B1、玉米赤霉烯酮陽性，表明被檢測樣品中伏馬菌素B1、玉米赤霉烯酮含量高于檢測限。4、如圖6中D所示檢測線Tl不顯色，檢測線T2和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為伏馬菌素B1陽性，玉米赤霉烯酮陰性，表明被檢測樣品伏馬菌素B1含量卨'于檢測限，玉米赤霉烯酮含量低于檢測限。5、如圖7所示檢測線Tl、T2和質(zhì)控線C都不顯色，或者質(zhì)控線C不顯紅色，檢測結(jié)果無效。靈敏度試驗用PBS配制標準品梯度0、10、20、50、100ng/ml。用生產(chǎn)的試紙8三批來檢測，每批每個濃度重復試驗5次。得到的試驗結(jié)果是以牛物毒素試紙8檢測玉米赤霉烯酮、伏馬菌素Bl的檢測限為20ng/ml，具體結(jié)果見表7-3、表8-3。表7-3伏馬菌素Bl試紙8靈敏度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>注"-"表示檢測結(jié)果陰性，"+"表示檢測^S陽性。試紙的準確度試驗在牛奶、尿樣、飼料、玉米、大麥、小麥等經(jīng)確證為陰性樣品中添加生物毒素使樣品中的生物毒素濃度為10ng/g、20ng/g、50ng/g、100ng/g。經(jīng)過前處理后檢測，每個樣品重復5次，選用生產(chǎn)的試紙8中的其中一批用于檢測，檢測結(jié)果與標準品溶液檢測結(jié)果的檢測限符合率100%。具體結(jié)果見表9-3、表10-3。表9-3赭曲霉毒素A試紙8準確度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>表10-3玉米赤霉烯酮試紙8準確度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>注"-"表示檢測結(jié)果陰性，"+"表示檢測結(jié)果陽性。實施例9嘔吐毒素和伏馬菌素Bl二聯(lián)檢測試紙試紙檢測線包被有濃度為0.5-2.Omg/mL的生物毒素檢測用抗原，如圖6所示，T2距離檢測區(qū)底部6-8mm;質(zhì)控線包被有濃度為0.5-1.5mg/mL的羊抗鼠IgG，距離檢測區(qū)頂部6-8腿;C線與T1，T1與T2兩條線之間間隔2-4mm。檢測結(jié)果判定1、如圖6中A所示檢測線T1、T2和質(zhì)控線C都顯紅色，表示檢測結(jié)果為陰性，表明被檢測樣品中嘔吐毒素和伏馬菌素Bl含量低于檢測限。2、如圖6中B所示檢測線Tl和質(zhì)控線C顯紅色，檢測線T2不顯色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素陰性，伏馬菌素B1陽性，表明被檢測樣品中嘔吐毒素含量低于檢測限，伏馬菌素B1含量高于檢測限。3、如圖6中C所示檢測線T1、T2不顯色，質(zhì)控線C顯紅色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素、伏馬菌素B1陽性，表明被檢測樣品中嘔吐毒素、伏馬菌素B1含量高于檢測限。4、如圖6中D所示檢測線Tl不顯色，檢測線T2和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素陽性，伏馬菌素B1陰性，表明被檢測樣品嘔吐毒素含量高于檢測限，伏馬菌素B1含量低于檢測限。5、如圖7所示檢測線T1、T2和質(zhì)控線C都不顯色，或者質(zhì)控線C不顯紅色，檢測結(jié)果無效。靈敏度試驗用PBS配制標準品梯度0、10、20、50、100ng/ml。用生產(chǎn)的試紙9三批來檢測，每批每個濃度重復試驗5次。得到的試驗結(jié)果是以生物毒素試紙9檢測嘔吐毒素和伏馬菌素Bl的檢測限為20ng/ml,具體結(jié)果見表7-4、表8-4。表7-4嘔吐毒素試紙9靈敏度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>注"_"表示檢測結(jié)果陰性，"+"表示檢測結(jié)果陽性。試紙的準確度試驗在牛奶、尿樣、詞料、玉米、大麥、小麥等經(jīng)確證為陰性樣品中添加生物毒素使樣品中的生物毒素濃度為10ng/g、20ng/g、50ng/g、100ng/g。經(jīng)過前處理后檢測，每個樣品重復5次，選用生產(chǎn)的試紙9中的其中一批用于檢測，檢測結(jié)果與標準品溶液檢測結(jié)果的檢測限符合率100%。具體結(jié)果見表9-4、表10-4。表9-4嘔吐毒素試紙9準確度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>表10-4伏馬菌素Bl試紙9準確度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>注"_"表示檢測結(jié)果陰性，"+"表示檢測結(jié)果陽性。實施例10嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮二聯(lián)檢測試紙試紙檢測線包被有濃度為0.5-2.Omg/mL的生物毒素檢測用抗原，如圖6所示，T2距離檢測區(qū)底部6-8mm;質(zhì)控線包被有濃度為0.5_1.5mg/mL的羊抗鼠IgG，距離檢測區(qū)頂部6-8mm;C線與T1，T1與T2兩條線之間間隔2-4mm。檢測結(jié)果判定1、如圖6中A所示檢測線T1、T2和質(zhì)控線C都顯紅色，表示檢測結(jié)果為陰性，表明被檢測樣品中嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮含量低于檢測限。2、如圖6中B所示檢測線T1和質(zhì)控線C顯紅色，檢測線T2不顯色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素陰性，玉米赤霉烯酮陽性，表明被檢測樣品中嘔吐毒素含量低于檢測限，玉米赤霉烯酮含量高于檢測限。3、如圖6中C所示檢測線Tl、T2不顯色，質(zhì)控線C顯紅色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮陽性，表明被檢測樣品中嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮含量高于檢測限。4、如圖6中D所示檢測線T1不顯色，檢測線T2和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素陽性，玉米赤霉烯酮陰性，表明被檢測樣品嘔吐毒素含量高于檢測限，玉米赤霉烯酮含量低于檢測限。5、如圖7所示檢測線T1、T2和質(zhì)控線C都不顯色，或者質(zhì)控線C不顯紅色，檢測結(jié)果無效。靈敏度試驗用PBS配制標準品梯度0、10、20、50、100ng/ml。用生產(chǎn)的試紙10三批來檢測，每批每個濃度重復試驗5次。得到的試驗結(jié)果是以生物毒素試紙10檢測玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素的檢測限為20ng/ml，具體結(jié)果見表7-5、表8_5。表7-5嘔吐毒素試紙10靈敏度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>注"_"表示檢測結(jié)果陰性，"+"表示檢測結(jié)果陽性。試紙的準確度試驗在牛奶、尿樣、詞料、玉米、大麥、小麥等經(jīng)確證為陰性樣品中添加生物毒素使樣品中的生物毒素濃度為10ng/g、20ng/g、50ng/g、100ng/g。經(jīng)過前處理后檢測，每個樣品重復5次，選用生產(chǎn)的試紙10中的其中一批用于檢測，檢測結(jié)果與標準品溶液檢測結(jié)果的檢測限符合率100%。具體結(jié)果見表9-5、表10-5。表9-5嘔吐毒素試紙10準確度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>表10-5玉米赤霉烯酮試紙10準確度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>注"-"表示檢測結(jié)果陰性，"+"表示檢測結(jié)果陽性。實施例11嘔吐毒素和赭曲霉毒素A二聯(lián)檢測試紙試紙檢測線包被有濃度為0.5-2.Omg/mL的生物毒素檢測用抗原，如圖6所示，T2距離檢測區(qū)底部6-8mm;質(zhì)控線包被有濃度為0.5-1.5mg/mL的羊抗鼠IgG，距離檢測區(qū)頂部6-8mm;C線與T1，T1與T2兩條線之間間隔2-4。檢測結(jié)果判定1、如圖6中A所示檢測線T1、T2和質(zhì)控線C都顯紅色，表示檢測結(jié)果為陰性，表明被檢測樣品中嘔吐毒素和赭曲霉毒素A含量低于檢測限。2、如圖6中B所示檢測線Tl和質(zhì)控線C顯紅色，檢測線T2不顯色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素陰性，赭曲霉毒素A陽性，表明被檢測樣品中嘔吐毒素含量低于檢測限，赭曲霉毒素A含量高于檢測限。3、如圖6中C所示檢測線T1、T2不顯色，質(zhì)控線C顯紅色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素、赭曲霉毒素A陽性，表明被檢測樣品中嘔吐毒素、赭曲霉毒素A含量高于檢測限。4、如圖6中D所示檢測線Tl不顯色，檢測線T2和質(zhì)控線C都顯紅色，檢測結(jié)果為嘔吐毒素陽性，赭曲霉毒素A陰性，表明被檢測樣品嘔吐毒素含量高于檢測限，赭曲霉毒素A含量低于檢測限。5、如圖7所示檢測線Tl、T2和質(zhì)控線C都不顯色，或者質(zhì)控線C不顯紅色，檢測結(jié)果無效。靈敏度試驗用PBS配制標準品梯度0、10、20、50、100ng/ml。用生產(chǎn)的試紙11三批來檢測，每批每個濃度重復試驗5次。得到的試驗結(jié)果是以生物毒素試紙11檢測赭曲霉毒素A、嘔吐毒素的檢測限為20ng/ml，具體結(jié)果見表7-6、表8-6。表7-6嘔吐毒素試紙11靈敏度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>表8-6赭曲霉毒素A試紙11靈敏度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>注"_"表示檢測結(jié)果陰性，"+"表示檢測結(jié)果陽性。試紙的準確度試驗在牛奶、尿樣、飼料、玉米、大麥、小麥等經(jīng)確證為陰性樣品中添加生物毒素使樣品中的生物毒素濃度為10ng/g、20ng/g、50ng/g、100ng/g。經(jīng)過前處理后檢測，每個樣品重復5次，選用生產(chǎn)的試紙ll中的其中一批用于檢測，檢測結(jié)果與標準品溶液檢測結(jié)果的檢測限符合率100%。具體結(jié)果見表9-6、表10-6。表9-6嘔吐毒素試紙11準確度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>注"_"表示檢測結(jié)果陰性，"+"表示檢測結(jié)果陽性。實施例12赭曲霉毒素A檢測試紙試紙檢測線包被有濃度為0.5-2.Omg/mL的生物毒素檢測用抗原，如圖8所不，檢測線(T線)距離檢測區(qū)底部8-10mm;質(zhì)控線包被有濃度0.5-1.5mg/mL的羊抗鼠1gG，距離檢測區(qū)頂部8-10mm;兩條線之間間隔4-6mm。檢測結(jié)果判定1、如圖8中A所示檢測線T和質(zhì)控線C都顯紅色，表示檢測結(jié)果為陰性，表明被檢測樣品中赭曲霉毒素A含量低于檢測限。2、如圖8中B所示質(zhì)控線C顯紅色，檢測線T不顯色，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中赭曲霉毒素A含量高丁檢測限。3、如圖8中C、D所示檢測線T和質(zhì)控線C都不顯色，或者質(zhì)控線C不顯紅色，檢測結(jié)果無效。靈敏度試驗用PBS配制標準品梯度0、10、20、50、100ng/ml。用生產(chǎn)的試紙12三批來檢測，每批每個濃度重復試驗5次。得到的試驗結(jié)果是以生物毒素試紙12檢測赭曲霉毒素A的檢測限為20ng/ml，具體結(jié)果見表ll。表11赭曲霉毒素A試紙12靈敏度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>注"-"表示檢測結(jié)果陰性，"+"表示檢測結(jié)果陽性。試紙的準確度試驗在牛奶、尿樣、飼料、玉米、大麥、小麥等經(jīng)確證為陰性樣品中添加生物毒素使樣品中的生物毒素濃度為10ng/g、20ng/g、50ng/g、100ng/g。經(jīng)過前處理后檢測，每個樣品重復5次，選用生產(chǎn)的試紙5中的其中一批用于檢測，檢測結(jié)果與標準品溶液檢測結(jié)果的檢測限符合率100%。具體結(jié)果見表12。表12赭曲霉毒素A試紙5準確度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>注"-"表示檢測結(jié)果陰性，"+"表示檢測結(jié)果陽性。實施例13玉米赤霉烯酮檢測試紙試紙檢測線包被有濃度為0.5-2.Omg/mL的生物毒素檢測用抗原，如圖8所示，檢測線(T線)距離檢測區(qū)底部8-10mm;質(zhì)控線包被有濃度0.5-1.5mg/mL的羊抗鼠IgG，距離檢測區(qū)頂部8-10mm;兩條線之間間隔4-6皿。檢測結(jié)果判定1、如圖8中A所示檢測線T和質(zhì)控線C都顯紅色，表示檢測結(jié)果為陰性，表明被檢測樣品中玉米赤霉烯酮含量低于檢測限。2、如圖8中B所示質(zhì)控線C顯紅色，檢測線T不顯色，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中玉米赤霉烯酮含量高于檢測限。3、如圖8中C、D所示檢測線T和質(zhì)控線C都不顯色，或者質(zhì)控線C不顯紅色，檢測結(jié)果無效。靈敏度試驗用PBS配制標準品梯度0、10、20、50、100ng/ml。用生產(chǎn)的試紙13三批來檢測，每批每個濃度重復試驗5次。得到的試驗結(jié)果是以生物毒素試紙13檢測玉米赤霉烯酮的檢測限為20ng/ml，具體結(jié)果見表13。表13玉米赤霉烯酮試紙13靈敏度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>注"-"表示檢測結(jié)果陰性，"+"表示檢測結(jié)果陽性。試紙的準確度試驗在牛奶、尿樣、飼料、玉米、大麥、小麥等經(jīng)確證為陰性樣品中添加生物毒素使樣品中的生物毒素濃度為10ng/g、20ng/g、50ng/g、100ng/g。經(jīng)過前處理后檢測，每個樣品重復5次，選用生產(chǎn)的試紙13中的其中一批用于檢測，檢測結(jié)果與標準品溶液檢測結(jié)果的檢測限符合率100%。具體結(jié)果見表14。表14玉米赤霉烯酮試紙13準確度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>注"-"表示檢測結(jié)果陰性，"+"表示檢測結(jié)果陽性。實施例14伏馬菌素Bl檢測試紙試紙檢測線包被有濃度為0.5-2.Omg/mL的生物毒素檢測用抗原，如圖8所示，檢測線(T線)距離檢測區(qū)底部8-10mm;質(zhì)控線包被有濃度0.5-1.5mg/mL的羊抗鼠IgG，距離檢測區(qū)頂部8-10mm;兩條線之間間隔4-6mm。檢測結(jié)果判定1、如圖8中A所示檢測線T和質(zhì)控線C都顯紅色，表示檢測結(jié)果為陰性，表明被檢測樣品中伏馬菌素Bl含量低于檢測限。2、如圖8中B所示質(zhì)控線C顯紅色，檢測線T不顯色，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中伏馬菌素Bl含量高于檢測限。3、如圖8中C、D所示檢測線T和質(zhì)控線C都不顯色，或者質(zhì)控線C不顯紅色，檢測結(jié)果無效。靈敏度試驗用PBS配制標準品梯度0、10、20、50、100ng/ml。用生產(chǎn)的試紙14三批來檢測，每批每個濃度重復試驗5次。得到的試驗結(jié)果是以生物毒素試紙14檢測伏馬菌素Bl的檢測限為20ng/ml，具體結(jié)果見表15。表15伏馬菌素Bl試紙14靈敏度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>注"_"表示檢測結(jié)果陰性，"+"表示檢測結(jié)果陽性。權(quán)利要求1.檢測生物毒素的膠體金免疫層析試紙，其包括在底板上依次粘貼的樣品吸收墊、膠體金標記墊、檢測反應區(qū)及吸收墊，檢測反應區(qū)上設有包被有檢測用抗原的檢測線和包被有二抗的質(zhì)控線，其特征在于膠體金標記墊所包被的物質(zhì)為一種生物毒素抗體或多種生物毒素抗體的膠體金標記物的混合物，所述的檢測線的條數(shù)與膠體金標記墊包被生物毒素抗體的數(shù)目相應，每條檢測線上分別包被有與膠體金標記抗體相應的單一的生物毒素檢測用抗原。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測生物毒素的膠體金免疫層析試紙，其特征在于生物毒素抗體分別為玉米赤霉烯酮、伏馬菌素B1、赭曲霉毒素A或嘔吐毒素的多克隆抗體或單克隆抗體中的一種或多種，檢測用抗原相應的分別為玉米赤霉烯酮、伏馬菌素B1、赭曲霉毒素A或嘔吐毒素的檢測用抗原中的一種或多種。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測生物毒素的膠體金免疫層析試紙，其特征在于所述試紙為嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A和伏馬菌素B1四聯(lián)檢測試紙；嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A三聯(lián)檢測試紙；嘔吐毒素、赭曲霉毒素A和伏馬菌素B1三聯(lián)檢測試紙；赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮和伏馬菌素B1三聯(lián)檢測試紙；嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮和伏馬菌素Bl三聯(lián)檢測試紙；赭曲霉毒素A和伏馬菌素Bl三聯(lián)檢測試紙；嘔吐毒素和赭曲霉毒素A二聯(lián)檢測試紙；玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A二聯(lián)檢測試紙；嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮二聯(lián)檢測試紙；嘔吐毒素和伏馬菌素B1二聯(lián)檢測試紙；伏馬菌素B1和玉米赤霉烯酮二聯(lián)檢測試紙；赭曲霉毒素A檢測試紙；玉米赤霉烯酮檢測試紙；伏馬菌素B1檢測試紙中的一種。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測生物毒素的膠體金免疫層析試紙，其特征在于生物毒素抗體為生物毒素單克隆抗體。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測生物毒素的膠體金免疫層析試紙，其特征在于所述的生物毒素單克隆抗體制備的方法如下a、免疫動物培養(yǎng)；取健康6-10周齡小鼠進行免疫；第一次基礎(chǔ)免疫將0.5-1.0mg/mL生物毒素免疫用抗原與等量完全弗氏佐劑用攪拌器充分混勻乳化，進行皮下多點注射；三周后開始進行加強免疫，劑量同上，佐劑換為不完全弗氏佐劑，二免后，定期測定抗體效價，每隔三周加強免疫一次1_b、脾細胞懸液的制備取效價高的小鼠，處死，酒精浸泡消毒10min，在無菌條件下取出脾臟，用不完全的培養(yǎng)液洗一次，置平皿中不銹鋼篩網(wǎng)上，用注射器針芯研磨成細胞懸液后計數(shù)；C、細胞融合和克隆化取對數(shù)生長的骨髓瘤細胞，1000rpm離心37分鐘，離心，棄上清，用不完全培養(yǎng)液混懸細胞后計數(shù)，取所需的細胞數(shù)，用不完全培養(yǎng)液洗滌；同時制備免疫脾細胞懸液，用不完全培養(yǎng)液洗滌；將骨髓瘤細胞與脾細胞按比例混合在一起，在塑料離心管內(nèi)用不完全培養(yǎng)液洗，1200rpm，510分鐘離心；棄上清，并使細胞沉淀略加松動；在室溫下融合加入預熱的PEG，邊加邊攪拌；加預熱的不完全培養(yǎng)液，終止PEG作用；離心，棄上清，先用小牛血清輕輕混懸；將融合后細胞懸液加入含有飼養(yǎng)細胞的微孔板中培養(yǎng)；融合天后，加HAT選擇培養(yǎng)液；融合后68天，用HT培養(yǎng)液換液12次，在1114天后根據(jù)增殖情況改用NBS的完全培養(yǎng)液；待集落長至孔底1/41/2時，可取上清檢測相應的特異性抗體；細胞完全克隆化后，將細胞注入小鼠腹腔，將腹水用蛋白A免疫親和層析純化后，即得到生物毒素單克隆抗體。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測生物毒素的膠體金免疫層析試紙，其特征在于檢測用抗原為生物毒素與載體物質(zhì)偶聯(lián)形成的偶合物，其中，所述的載體物質(zhì)選自蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)片段中的一種。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測生物毒素的膠體金免疫層析試紙，其特征在于載體物質(zhì)選自牛血清白蛋白、卵清白蛋白、血藍蛋白與甲狀腺球蛋白中的一種。8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測生物毒素的膠體金免疫層析試紙，其特征在于檢測用抗原分別為玉米赤霉烯酮、伏馬菌素B1、赭曲霉毒素A或嘔吐毒素的檢測用抗原中的一種或多種，其中a、玉米赤霉烯酮偶合抗原的合成方法如下取10-20mg載體蛋白溶于lmL的水中，取玉米赤霉烯半抗原0.01-0.04mmol溶于二氧六環(huán)中，將上述兩種溶液緩慢混合；取碳化二亞胺0.02-0.04mmo1，溶于lmL水中，逐滴加到混合液中，在20-25。C下，攪拌反應過夜，用鹽酸調(diào)1^=6.0，再次加入0.01-0.02mmo1碳化二亞胺，后放于4'C冰箱內(nèi)2428h，反應完成后將反應液裝入透析袋，4'C下，pH=7.4的PBS中透析，分裝，冷凍保存?zhèn)溆茫籦、嘔吐毒素抗原的合成方法如下將10-40mg嘔吐毒素溶解在0.1-0.8ml吡啶中，加入到10ml的反應瓶中，在反應瓶中加入30-120mg的硼酸，混合物在室溫下攪拌過夜，再加入30-120mg琥珀酸酐，并通入氮氣，密封反應瓶，混合物在沸水浴中攪拌2-3h，將吡啶在室溫吹干后，加入5mL乙酸乙酯溶解殘余物，離心，取上清液，室溫吹干后，加入NHS、DCC溶于DMF中，室溫振蕩30-60min，離心，取上清液，將上清液緩慢滴加到載體蛋白液中，在4。C振蕩反應4h，然后，在0.01MPBSPH7.4中透析，分裝，冷凍保存?zhèn)溆?；c、伏馬菌素B1抗原的合成方法如下取10-40mg載體蛋白，伏馬菌素B10.01-0.04咖o1溶于0.02MPBSPH=7.4中，室溫下攪拌混勻；再緩慢加入0.02-0.06mmol的戊二醛，混合物在室溫下攪拌過夜，反應完成后將反應液裝入透析袋，4r下，p&7.4的PBS中透析，加入0.01-0.04mmo1的伏馬菌素B1，后放于4°C冰箱內(nèi)24h，再加入0.01MTris繼續(xù)攪拌4h，反應完成后將反應液裝入透析袋，在4'C下透析，分裝，冷凍保存?zhèn)溆?。d、赭曲霉毒素A抗原的合成方法如下取20-40mg載體蛋白，赭曲霉毒素A0.02-0.04歸1溶于0.02MPBSPH=7.4中，室溫下攪拌混勻；再緩慢加入0.03-0.06mmol的戊二醛，混合物在室溫下攪拌過夜，反應完成后將反應液裝入透析袋，4°C下，pt^7.4的PBS中透析，透析完成后，分裝，_20°(3冷凍保存?zhèn)溆谩?.檢測生物毒素的檢測方法，其特征在于被檢樣品為牛奶或尿樣，采用如權(quán)利要求18任意一項權(quán)利要求所述的膠體金免疫層析試紙，直接滴牛奶或尿于樣品墊上，35min后，觀察顏色。10.檢測生物毒素的檢測方法，其特征在于被檢樣品為小麥、玉米、大麥或詞料，稱取充分研磨的樣品，加入PBS中，充分混勻，離心，取上清液，采用如權(quán)利要求18任意一項權(quán)利要求所述的膠體金免疫層析試紙，直接滴于樣品墊上，35min后，觀察顏色。全文摘要本發(fā)明屬于生物毒素檢測
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，尤其涉及一種檢測生物毒素的膠體金免疫層析試紙及其檢測方法。檢測生物毒素的膠體金免疫層析試紙，其包括膠體金標記墊、檢測線，膠體金標記墊所包被物質(zhì)為一種生物毒素抗體或多種生物毒素抗體的膠體金標記物的混合物，檢測線的條數(shù)與膠體金標記墊包被生物毒素抗體的數(shù)目相應，每條檢測線上分別包被有與膠體金標記抗體相應的單一的生物毒素檢測用抗原。本發(fā)明的膠體金免疫層析試紙?zhí)禺愋詮姡徊僮骱唵畏奖?，對牛奶、動物尿液可直接檢測，飼料、小麥、玉米、大麥等樣品簡單處理后即可檢測，3-5min以后便可觀察結(jié)果。本方法適用面寬，能滿足食品安全、飼料安全及政府檢測機構(gòu)快速檢測生物毒素殘留的需求。文檔編號G01N33/577GK101281195SQ200810061598公開日2008年10月8日申請日期2008年5月19日優(yōu)先權(quán)日2008年5月19日發(fā)明者儲國華,軍劉,張明洲,施明華,胡華軍,郭瑞忠,陳宗倫申請人:中國計量學院;寧波科瑞特動物藥業(yè)有限公司