專利名稱：：測定母乳中合成麝香濃度的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種可穩(wěn)定檢測母乳中合成麝香濃度的方法，通過凝膠色譜柱化學(xué)預(yù)處理方法以及氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)相結(jié)合的方法來達到測定母乳中合成麝香濃度的目的。本發(fā)明屬有機化學(xué)物質(zhì)的物理化學(xué)分析測定
技術(shù)領(lǐng)域：
。
背景技術(shù)：
：合成麝香作為人工合成的有機化合物，以其優(yōu)雅的芳香氣味、優(yōu)良的定香能力及低廉的價格，取代了天然麝香，廣泛應(yīng)用于化妝品、洗滌用品、護膚品、香水等產(chǎn)品中，成為香精香料行業(yè)中主要成分之一。中國是世界上合成麝香生產(chǎn)大國之一，從70年代就開始研制合成麝香，于1993年獲衛(wèi)生部批準(zhǔn)為一類新藥并進行試生產(chǎn)，到2000年底己以銷定產(chǎn)的形式銷售數(shù)千千克，其中2000年一年的銷售量即達1000Kg，占全國麝香市場年總供應(yīng)量的1/31/2,但是目前關(guān)于合成麝香在國內(nèi)環(huán)境中的存在和分布的研究還非常少，因此對于開展環(huán)境以及人體中合成麝香含量水平的研究是非常必要的。人工合成麝香可以分為3類硝基麝香化合物、多環(huán)麝香化合物和大環(huán)麝香化合物。其中硝基麝香包括麝香酮(MK)和二甲苯麝香(MX)等，由于硝基麝香具有潛在的致癌性，許多國家已禁止使用；多環(huán)麝香又包括薩利麝香(ADBI)、粉檀麝香(AHMI)、特拉斯(ATII)、佳樂麝香(HHCB)、吐納麝香(AHTN)等；大環(huán)麝香化合物主要有2類，分別為酮類物質(zhì)和內(nèi)酯類物質(zhì)，由于成本較高使用得較少。本發(fā)明主要測定的是母乳中硝基麝香以及多環(huán)麝香的濃度。合成麝香化合物廣泛分布于各個領(lǐng)域，具有較強的生物富集能力和一定的毒副作用，其在環(huán)境中的分布、遷移轉(zhuǎn)化及對環(huán)境生態(tài)和人類健康潛在的危險引起了環(huán)境工作者的關(guān)注。繼1994年首次在環(huán)境中檢測到多環(huán)麝香后，在隨后的10多年里，先后在表層水，水體懸浮顆粒物，沉積物，污水處理廠的源水、出水和污泥，大氣，以及魚、蝦、貝類等生物體內(nèi)均檢測出合成麝香，飲用水中也檢測到了佳樂麝香和吐納麝香，甚至在人體的脂肪組織、血液和母乳中也有上述兩種物質(zhì)的存在。有研究表明，人工合成麝香能誘導(dǎo)其它毒性物質(zhì)使其毒性增強。Liickenbach等(2004)的研究發(fā)現(xiàn)，人工合成麝香能抑制貽貝對有毒物質(zhì)的自然抵抗力，而且這種影響在暴露發(fā)生很長時間后還能持續(xù)。早在1994年，Rimkus(1994)就指出，人工麝香化合物能在包括人乳在內(nèi)的脂肪組織中蓄積，并且在暴露后仍能在人體組織中滯留很長時間。許多研究表明，合成麝香具有環(huán)境激素效應(yīng)和遺傳毒性效應(yīng)，有報道指出，硝基麝香化合物(麝香酮和二甲苯麝香)以及多環(huán)麝香化合物(佳樂麝香和吐吶麝香)是內(nèi)分泌干擾物質(zhì)。Seinen(1999)對老鼠每隔4d注射140ngl7b-雌二醇(一種雌激素)，持續(xù)2周，發(fā)現(xiàn)母體老鼠子宮質(zhì)量增加了2倍，胸腺的質(zhì)量卻減為原來的50%;而當(dāng)老鼠每天服用15或50mg七"吐納麝香，或者服用50或300mg七—H圭樂麝香2周時，老鼠的體重、子宮質(zhì)量、胸腺質(zhì)量與對照沒有顯著差異；當(dāng)老鼠受到50mg'L"吐納麝香禾B300mg丄"佳樂麝香處理時，肝臟的質(zhì)量顯著增加。人工合成麝香的遺傳毒性，首先表現(xiàn)在影響生殖能力方面。Carlsson等(2000)研究雌性斑馬魚先與未暴露麝香酮的雄性魚交配產(chǎn)卵，然后攝入麝香酮8周，共設(shè)2個濃度處理(低處理濃度為O.lmg，g",高處理濃度為10mgf1)，以檢測麝香酮在魚體內(nèi)的生物蓄積性及其對生殖能力的影響。結(jié)果表明，雌性斑馬魚的體重、體長、肝臟指數(shù)和性腺指數(shù)均減少；生殖能力與污染物的濃度存在劑量——效應(yīng)關(guān)系，即隨著污染物濃度增加產(chǎn)卵能力逐漸下降，以上研究表明合成麝香化合物可以對母體產(chǎn)生強烈的毒性，繼而通過母乳傳遞到孩子體內(nèi)，因此有必要檢測母乳中合成麝香物質(zhì)的含量。目前，對于人體中合成麝香的研究在我國還處于初級階段，還未有文獻明確發(fā)表過關(guān)于母乳中合成麝香測定方法，因此，本發(fā)明對于研究人體中合成麝香的水平以及評價合成麝香對人體的影響有著積極的意義。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種能夠穩(wěn)定檢測母乳中合成麝香濃度的方法。本發(fā)明，一種測定母乳中合成麝香濃度的方法，其特征在于具有以下的過程和步驟A、液液萃取和恒重脂肪量取5ml母乳樣品放入分液漏斗中，加入0.01嗎回收率指示物D10-菲，隨后加入811118%的草酸鉀和10ml乙醇充分搖勻，再加入5ml的乙醚振蕩，將上述混合液進行液液萃??；先加入20ml正己垸，充分振蕩，靜置分層，待液面分層后，進行分液，取上層清液倒入雞心瓶中，待用；將收集到的下層渾濁液再倒入分液漏斗中，加入10ml正己烷，充分振蕩，靜置分層，取上層清液倒入原待用的雞心瓶中；下層渾濁液按上述同樣方法逐級重復(fù)萃取兩次，之后棄去下層渾濁液；將并和收集于原雞心瓶中的澄清液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進行旋蒸，旋蒸至體積2~3ml;然后轉(zhuǎn)移至事先稱重的棕色小瓶中，用氮氣柔和氮吹至干，放于千燥器中恒重2天，將恒重的脂肪稱量，記錄下脂肪重量；B、上凝膠色譜柱(GPC柱)處理將上述恒重的脂肪用少量正己烷和二氯甲垸的混合液溶解，兩者的體積比即正己烷二羞甲烷=1:1;然后過凝膠色i普柱(GPC柱)；該柱填料為—Jio-BeadsS-X3凝膠，其作用是使母乳通過GPC柱而分離去除其中的脂肪；淋洗液為165ml的正己垸和二氯甲烷(v/v=l:l)的混合液，用量筒接取前65ml的淋洗液，棄去，然后用100ml的量筒接取剩余的100ml淋洗液，將該淋洗液轉(zhuǎn)移至雞心瓶中，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進行旋蒸，旋蒸至2ml，待用；C、過硅膠小柱處理將上述待用的2ml溶液過硅膠小柱處理，該柱中主要裝有一定高度的硅膠，其作用主要是去除溶液中的雜質(zhì)；先加入15ml正己垸進行淋洗，棄去淋洗液，再加入30ml二氯甲烷進行淋洗，用量筒接取30ml二氯甲烷淋洗液，轉(zhuǎn)移至雞心瓶中，將該淋洗液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進行旋蒸，旋蒸至2ml，將溶液轉(zhuǎn)移到棕色小瓶中，用氮氣柔和氮吹至干，待用；D、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)檢測在上述棕色小瓶中加入1^110ppm六甲基苯作為內(nèi)標(biāo)，以及49nl的正己垸，進入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)檢測；色譜儀條件及質(zhì)譜儀條件分別如下色譜條件DB-5G0mx0.25mmi.d"0.25|im)或HP-5(30mx0.25mmi.d.,0.25)xm)毛細管柱；載氣為氦氣，恒流，柱流量為1.0ml/min，無分流進樣，進樣量為1^1;進樣口溫度290'C;柱始溫100。C(lmin)，7'C/min升至16CTC，3'C/min升至180°C，rc/min升至190°C，10°C/min升至280。C，后運行300。C(5min);質(zhì)譜條件電子電離(EI)源；離子源溫度20(TC，界面溫度280'C;選擇性離子分段掃描(SIM)，六甲基苯的掃描離子為m/z147、162;佳樂麝香(HHCB)243、258、213;吐納麝香(AHTN)243、258、201、159;酮麝香(MK)279、294;二甲苯麝香(MX)282、297;D10-菲188;溶劑切除時間8min;E、濃度計算a、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線分別用混標(biāo)配制不同濃度的溶液；用四種目標(biāo)合成麝香化合物，即佳樂麝香(HHCB)、吐納麝香(AHTN)、酮麝香(MK)、二甲苯麝香(MX)四種目標(biāo)化合物及回收率指示物DlO-菲，配制成濃度分別為10^g/l、20pg/l、40ng/l、100ng/l、200pg/l、500|ig/l、1000叫/1七個不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液；并加入濃度為10(Hig/1的內(nèi)標(biāo)六甲基苯；將上述標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液進入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)檢測，測得各濃度點相應(yīng)值；讀出標(biāo)準(zhǔn)樣品中這四個目標(biāo)化合物的峰面積(S標(biāo)目)以及內(nèi)標(biāo)化合物的峰面積(S標(biāo)內(nèi))，將兩者的比值，即相對響應(yīng)值R二S標(biāo)巨/S標(biāo)內(nèi)，并以R作為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)，作為四個目標(biāo)麝香化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線；b、濃度計算主要采用內(nèi)標(biāo)法進行計算；通過前述母乳液的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)的分離和分析，讀出母乳液中各個目標(biāo)化合物的峰面積(HHCB、AHTN、MK、MX)B卩S目，以及內(nèi)標(biāo)六甲基苯的峰面積即Sft，S目與SA的比值即為響應(yīng)值R，再根據(jù)對應(yīng)的目標(biāo)化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率a，求出對應(yīng)的目標(biāo)麝香化合物濃度C5fe際；具體計算公式如下C=R/a式中C——濃度(單位嗎/1)R——相對響應(yīng)值，R=Sg/S內(nèi)a~~相對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率為了保證消除背景干擾，根據(jù)上述公式，先計算出空白實驗的濃度Ce白，將C實際減去C空白的值，乘以樣品定容的體積，再除以母乳脂肪恒重后所稱得的重量，最終所得的結(jié)果就是母乳中合成麝香的濃度，艮P:C樣品濃f(C實際一C空白)x定容的體積(ml)/脂肪重量(g)?？瞻讓嶒灱从谜麴s水代替前述母乳進行上述四個步驟的預(yù)處理過程。本發(fā)明方法結(jié)合各類文獻中檢測PBDEs、PCBs等處理方法能有效穩(wěn)定檢測母乳中合成麝香的濃度，是一種較合適的較高正確度的方法。圖1.為本發(fā)明中合成麝香標(biāo)樣的圖譜圖2.為本發(fā)明中基質(zhì)加標(biāo)中合成麝香物質(zhì)的圖譜圖3.為母乳樣品中合成麝香的圖譜圖4.為實驗例中AHTN的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖具體實施方式現(xiàn)將本發(fā)明的具體實施例敘述于后。實施例1:本實施例中，測定方法的過程和步驟如下1、液液萃取和恒重脂肪量取5ml母乳樣品放入分液漏斗中，加入0.01(xg回收率指示物D10-菲，隨后加入8ml8%的草酸鉀和10ml乙醇充分搖勻，再加入5ml的乙醚振蕩，將所述混合液進行液液萃??；先加入20ml正己垸，充分振蕩，靜置分層，待液面分層后，進行分液，取上層清液倒入雞心瓶中，待用；將收集到的下層渾濁液再倒入分液漏斗中，加入10ml正己烷，充分振蕩，靜置分層，取上層清液倒入原待用的雞心瓶中；下層渾濁液按上述同樣方法逐級重復(fù)萃取兩次，之后棄去下層渾濁液；將并和收集于原雞心瓶中的澄清液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進行旋蒸，旋蒸至體積23ml;然后轉(zhuǎn)移至事先稱重的棕色小瓶中，用氮氣柔和氮吹至干，放于干燥器中恒重2天，將恒重的脂肪稱量，記錄下脂肪重量；2、上凝膠色譜柱(GPC柱)處理將上述恒重的脂肪用少量正己烷和二氯甲烷的混合液溶解，兩者的體積比即正己垸二氯甲烷=1:1;然后過凝膠色譜柱(GPC柱)；該柱填料為Bio-BeadsS-X3凝膠；其作用是使母乳通過GPC柱而分離其中的脂肪；淋洗液為165ml的正己垸和二氯甲垸(v/v=l:l)的混合液；用量筒接取前65ml的淋洗液，棄去，然后用100ml的量筒接取剩余的100ml淋洗液，將該淋洗液轉(zhuǎn)移至雞心瓶中，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進行旋蒸，旋蒸至2ml，待用；3、過硅膠小柱處理將上述待用的2ml溶液過硅膠小柱處理，該柱中主要裝有一定高度的硅膠，其作用主要是去除溶液中的雜質(zhì)；先加入15ml正己垸進行淋洗，棄去淋洗液，再加入30ml二氯甲烷進行淋洗，用量筒接取30ml淋洗液，轉(zhuǎn)移至雞心瓶中，將該淋洗液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進行旋蒸，旋蒸至2ml，將溶液轉(zhuǎn)移到棕色小瓶中，用氮氣柔和氮吹至干，待用；4、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)檢測在上述棕色小瓶中加入lnllOppm六甲基苯作為內(nèi)標(biāo)，以及49pl的正己烷，進入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)檢測；色譜儀及質(zhì)譜儀條件分別如下色譜條件DB-5G0mx0.25mmi.d.,0.25pm)毛細管柱；載氣為氦氣，恒流，柱流量為1.0ml/min，無分流進樣，進樣量為1^1;進樣口溫度290。C;柱始溫IO(TC(lmin)，7°C/min升至160。C，3。C/min升至180°C，l°C/min升至190°C，10°C/min升至280°C，后運行300°C(5min);質(zhì)譜條件電子電離(EI)源；離子源溫度20(TC，界面溫度28(TC;選擇性離子分段掃描(SIM)，六甲基苯的掃描離子為m/z147、162;佳樂麝香(HHCB)243、258、213;吐納麝香(AHTN)243、258、201、159;酮麝香(MK)279、294;二甲苯麝香(MX)282、297;D10-菲188;溶劑切除時間8min;5、濃度計算a、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線分別用混標(biāo)配制不同濃度的溶液；用四種目標(biāo)合成麝香化合物，即佳樂麝香(HHCB)、吐納麝香(AHTN)、酮麝香(MK)、二甲苯麝香(MX)四種目標(biāo)化合物及回收率指示物DlO-菲，配制成濃度分別為10嗎/1、20pg/1、40pg/1、100嗎/1、200嗎/1、500嗎/1、1000嗎/1七個不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液；并加入濃度為100嗎/1的內(nèi)標(biāo)六甲基苯；將上述標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液進入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)檢測，測得各濃度點相應(yīng)值；讀出標(biāo)準(zhǔn)樣品中這四個目標(biāo)化合物的峰面積(S標(biāo)H)以及內(nèi)標(biāo)化合物的峰面積(Ss內(nèi))，將兩者的比值，即相對響應(yīng)值I^S標(biāo)目/S標(biāo)內(nèi)，并以R作為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)，作為四個目標(biāo)麝香化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線；b、濃度計算主要采用內(nèi)標(biāo)法進行計算，通過前述母乳液的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)的分離和分析，讀出母乳液中各個目標(biāo)化合物的峰面積(HHCB、AHTN、MK、MX)即Sg，以及內(nèi)標(biāo)六甲基苯的峰面積即S內(nèi)，Ss與S內(nèi)的比值即為響應(yīng)值R，再根據(jù)對應(yīng)的目標(biāo)化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率a，求出對應(yīng)的目標(biāo)麝香化合物濃度C實際；具體計算公式如下OR/a式中C——濃度(單位Hg/1)R——相對響應(yīng)值，R=S目/S內(nèi)a——相對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率為了保證消除背景干擾，根據(jù)上述公式，先計算出空白實驗的濃度C空白，將C實際減去C空S的值，乘以樣品定容的體積，再除以母乳脂肪恒重后所稱得的重量，最終所得的結(jié)果就是母乳中合成麝香的濃度，艮P:C樣品濃f(C實際一C空白)x定容的體積(ml)/脂肪重量(g)?？瞻讓嶒灱从谜麴s水代替前述母乳進行上述四個步驟的預(yù)處理過程。本發(fā)明中關(guān)于合成麝香標(biāo)樣的圖譜參見圖1。圖1的質(zhì)譜圖中羅列了四種合成麝香的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，包括有佳樂麝香(HHCB)、吐納麝香(AHTN)、酮麝香(MK)、二甲苯麝香(MX)。本發(fā)明中關(guān)于基質(zhì)加標(biāo)中合成麝香物質(zhì)的圖譜參見圖2。圖2的質(zhì)譜圖是在基質(zhì)母乳中人為地加入四種合成麝香ADBI、AHMI、HHCB、AHTN，并經(jīng)前述四個步驟的預(yù)處理過程后所得的曲線圖。圖中的內(nèi)標(biāo)HMB為六甲基苯；D10-菲為回收率指示物。本發(fā)明中關(guān)于母乳樣品中合成麝香的圖譜參見圖3。母乳樣品為待測的實際母乳試樣，在經(jīng)過前述四個步驟的預(yù)處理過程后，測得的質(zhì)譜曲線圖。圖3中右側(cè)的小圖是AHTN、MX、MK麝香的局部放大的曲線圖。本發(fā)明中實施例的一個舉例示出的AHTN標(biāo)準(zhǔn)曲線圖參見圖4。在圖中，AHTN標(biāo)準(zhǔn)曲線，y=0.0017x，得知其斜率a=0.0017。母乳樣品中麝香濃度的測定根據(jù)上述的計算公式，對10個母乳樣品進行檢測，得出的結(jié)果見下表l:表l10個母乳樣品中合成麝香的濃度(單位ng/g脂肪)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注N.D——表示未檢測出該物質(zhì)據(jù)美國EPA規(guī)定回收率在80%-120%之間是正常的可以接受的范圍，本發(fā)明母乳中的合成麝香的回收率均在此范圍內(nèi)，說明本實驗方法是可靠的。濃度計算舉例-在母乳樣品6中，內(nèi)標(biāo)HMB響應(yīng)值的峰面積為Sft=1106024，AHTN則為Ss=46105，則其相對響應(yīng)值R=46105/1106024=0.0417,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線R=0.0017x，得濃度C5=x=R/a=0.0417/0.0017=24.52|ag/l相對應(yīng)該樣品同批次的空白中，內(nèi)標(biāo)HMB響應(yīng)值的峰面積為S空內(nèi)=1539673，AHTN則為S空目=10482，則其相對響應(yīng)值r=10482/1539673=0.0068,則濃度CM=x=r/a=0.0068/0,0017=4.00嗎/1由于樣品都定容到0.05ml，則濃度轉(zhuǎn)化到相對應(yīng)的脂肪重量為(母乳樣品1中提取的脂肪恒重為0.0247g)，C樣品濃度-(C實際一C空。)x定容的體積(ml)/脂肪重量(g)=(24.524)x0,05/0.0247=42ng/g(脂肪)，其余的目標(biāo)化合物以相同的方式計算其濃度。權(quán)利要求1.一種測定母乳中合成麝香濃度的方法，其特征在于具有以下的過程和步驟A、液液萃取和恒重脂肪量取5ml母乳樣品放入分液漏斗中，加入0.01μg回收率指示物D10-菲，隨后加入8ml8％的草酸鉀和10ml乙醇充分搖勻，再加入5ml的乙醚振蕩，將所述混合液進行液液萃取；先加入20ml正己烷，充分振蕩，靜置分層，待液面分層后，進行分液，取上層清液倒入雞心瓶中，待用；將收集到的下層渾濁液再倒入分液漏斗中，加入10ml正己烷，充分振蕩，靜置分層，取上層清液倒入原待用的雞心瓶中；下層渾濁液按上述同樣方法逐級重復(fù)萃取三次，之后棄去下層渾濁液；將并和收集于原雞心瓶中的澄清液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進行旋蒸，旋蒸至體積2～3ml；然后轉(zhuǎn)移至事先稱重的棕色小瓶中，用氮氣柔和氮吹至干，放于干燥器中恒重2天，將恒重的脂肪稱量，記錄下脂肪重量；B、上凝膠色譜柱(GPC柱)處理將上述恒重的脂肪用少量正己烷和二氯甲烷的混合液溶解，兩者的體積比即正己烷∶二氯甲烷＝1∶1；然后過凝膠色譜柱(GPC柱)；該柱填料為Bio-BeadsS-X3凝膠，其作用是使母乳通過GPC柱而分離其中的脂肪，淋洗液為165ml的正己烷和二氯甲烷(v/v＝1∶1)的混合液，用量筒接取前65ml的淋洗液，棄去，然后用100ml的量筒接取剩余的100ml淋洗液，將該淋洗液轉(zhuǎn)移至雞心瓶中，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進行旋蒸，旋蒸至2ml，待用；C、過硅膠小柱處理將上述待用的2ml溶液過硅膠小柱處理，該柱中主要裝有一定高度的硅膠，其作用主要是去除溶液中的雜質(zhì)；先加入15ml正己烷進行淋洗，棄去淋洗液，再加入30ml二氯甲烷進行淋洗，用量筒接取30ml淋洗液，轉(zhuǎn)移至雞心瓶中，將該淋洗液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進行旋蒸，旋蒸至2ml，將溶液轉(zhuǎn)移到棕色小瓶中，用氮氣柔和氮吹至干，待用；D、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)檢測在上述棕色小瓶中加入1μl10ppm六甲基苯作為內(nèi)標(biāo)，以及49μl的正己烷，進入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)檢測；色譜儀條件及質(zhì)譜儀條件分別如下色譜條件DB-5(30m×0.25mmi.d.，0.25μm)或HP-5(30m×0.25mmi.d.，0.25μm)毛細管柱；載氣為氦氣，恒流，柱流量為1.0ml/min，無分流進樣，進樣量為1μl；進樣口溫度290℃；柱始溫100℃(1min)，7℃/min升至160℃，3℃/min升至180℃，1℃/min升至190℃，10℃/min升至280℃，后運行300℃(5min)。質(zhì)譜條件電子電離(EI)源；離子源溫度200℃，界面溫度280℃；選擇性離子分段掃描(SIM)，六甲基苯的掃描離子為m/z147、162；佳樂麝香(HHCB)243、258、213；吐納麝香(AHTN)243、258、201、159；酮麝香(MK)279、294；二甲苯麝香(MX)282、297；D10-菲188；溶劑切除時間8min；E、濃度計算a、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線分別用混標(biāo)配制不同濃度的溶液；用四種目標(biāo)合成麝香化合物，即佳樂麝香(HHCB)、吐納麝香(AHTN)、酮麝香(MK)、二甲苯麝香(MX)四種目標(biāo)化合物回收率指示物D10-菲，配制成濃度分別為10μg/l、20μg/l、40μg/l、100μg/l、200μg/l、500μg/l、1000μg/l七個不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液；并加入濃度為100μg/l的內(nèi)標(biāo)六甲基苯；將上述標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液進入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)檢測，測得各濃度點相應(yīng)值；讀出標(biāo)準(zhǔn)樣品中這四個目標(biāo)化合物的峰面積(S標(biāo)目)以及內(nèi)標(biāo)化合物的峰面積(S標(biāo)內(nèi))，將兩者的比值，即相對響應(yīng)值R＝S標(biāo)目/S標(biāo)內(nèi)，并以R作為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)，作為四個目標(biāo)麝香化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線；b、濃度計算主要采用內(nèi)標(biāo)法進行計算；通過前述母乳液的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)的分離和分析，讀出母乳液中各個目標(biāo)化合物的峰面積(HHCB、AHTN、MK、MX)即S目，以及內(nèi)標(biāo)六甲基苯的峰面積即S內(nèi)，S目與S內(nèi)的比值即為響應(yīng)值R，再根據(jù)對應(yīng)的目標(biāo)化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率a，求出對應(yīng)的目標(biāo)麝香化合物濃度C實際；具體計算公式如下C＝R/a式中C——濃度(單位μg/l)R——相對響應(yīng)值，R＝S目/S內(nèi)a——相對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率為了保證消除背景干擾，根據(jù)上述公式，先計算出空白實驗的濃度C空白，將C實際減去C空白的值，乘以樣品定容的體積，再除以母乳脂肪恒重后所稱得的重量，所得的結(jié)果就是母乳中合成麝香的濃度，即C樣品濃度＝(C實際-C空白)×定容的體積(ml)/脂肪重量(g)；空白實驗即用純凈水代替前述母乳進行上述四個步驟的預(yù)處理過程。全文摘要本發(fā)明涉及一種可穩(wěn)定檢測母乳中合成麝香濃度的方法，通過凝膠色譜柱化學(xué)預(yù)處理方法以及氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)相結(jié)合的方法來達到測定母乳中合成麝香濃度的目的。本發(fā)明屬有機化學(xué)物質(zhì)的物理化學(xué)分析測定
技術(shù)領(lǐng)域：
。本發(fā)明方法中，母乳預(yù)處理過程包括液液萃取、過凝膠色譜柱，淋洗液濃縮后的溶液過硅膠小柱處理，最后進入色譜儀-質(zhì)譜儀(GC-MS)進行檢測，得到母乳試樣中含有各種合成麝香的質(zhì)譜曲線圖，然后利用特定公式進行計算母乳中含有的麝香濃度。本發(fā)明方法是一種穩(wěn)定的、較高精確度的有效測定方法。文檔編號G01N30/88GK101334391SQ20081004062公開日2008年12月31日申請日期2008年7月16日優(yōu)先權(quán)日2008年7月16日發(fā)明者靜周,張曉嵐,梁高鋒,珺王,郭亞文申請人:上海大學(xué)