專利名稱：：作為肺癌標(biāo)記物的nnmt的應(yīng)用的制作方法作為肺癌標(biāo)記物的NNMT的應(yīng)用本發(fā)明涉及與肺有關(guān)的癌癥或肺癌(=LC)的評(píng)價(jià)并且尤其是非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的評(píng)價(jià)的輔助方法。本文公開了作為L(zhǎng)C，尤其是NSCLC的標(biāo)記物的蛋白質(zhì)煙酰胺N-曱基轉(zhuǎn)移酶(-NNMT)的用途。再有，本文特別涉及通過檢測(cè)源自患者的液體樣品中的NNMT評(píng)價(jià)肺癌的方法。NNMT的檢測(cè)可例如用于肺癌的早期探測(cè)或用于經(jīng)受手術(shù)的患者的監(jiān)測(cè)。盡管在探測(cè)和治療方面取得進(jìn)展，癌癥仍然是主要的公共衛(wèi)生挑戰(zhàn)性問題。在多種類型的癌癥中，LC是西方世界常常發(fā)生的癌癥并且是癌癥相關(guān)死亡率的最常死因一。這大部分是由于用于疾病的早期探測(cè)的診斷空白(diagnosticgap)。LC在其早期很大程度上是無癥狀的。所有肺癌中的大多數(shù)在晚期被探測(cè)到，此時(shí)該疾病已經(jīng)變得不宜手術(shù)治愈。大多數(shù)LC腫瘤可分為小細(xì)胞肺癌(SCLC)和非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)。SCLC占所有肺癌病例的約20-25°/。。SCLC是具侵襲性的神經(jīng)內(nèi)分泌型LC，并且即使被早期探測(cè)到預(yù)后也很差。SCLC是罕見的易于通過切除術(shù)根治的疾病。由于該疾病的發(fā)展迅速，通常僅用兩期，即局限型(limiteddisease)和擴(kuò)散型疾病(extensivedisease)對(duì)SCLC進(jìn)行分類，而不是更復(fù)雜的TNM分期系統(tǒng)(見下文)。約75-80。/。的LC病例被類分為包括鱗狀細(xì)胞癌(癌-CA)、腺-CA(包括腺泡CA、乳頭狀CA、支氣管胂瘤、實(shí)體瘤和混合的亞型的亞類)和大細(xì)胞癌(包括巨大細(xì)胞腫瘤、清亮細(xì)胞CA、腺鱗狀CA和未分化CA的亞類)的NSCLC類別中。如果在晚期探測(cè)到NSCLC,預(yù)后也很差。癌癥的分期是根據(jù)擴(kuò)散、侵襲性和嚴(yán)重性對(duì)該疾病的分類。將癌癥患者分組以便對(duì)預(yù)后和療法的選擇進(jìn)行概括?，F(xiàn)今，TNM系統(tǒng)是最廣泛應(yīng)用的基于癌癥的解剖學(xué)范疇的分類系統(tǒng)。其代表國(guó)際上可接受的、統(tǒng)一的分期系統(tǒng)。有三個(gè)基本變化T(原發(fā)腫瘤的范圍)、N(局部淋巴結(jié)的狀況)和M(存在或缺乏遠(yuǎn)程轉(zhuǎn)移)。TNM標(biāo)準(zhǔn)由UICC(國(guó)際抗癌聯(lián)合會(huì)(InternationalUnionAgainstCancer))在惡性腫瘤的TNM分類(TNMClassificationofMalignantTumours),第五版，Sobin，L.H.和Wittekind，Ch.(編輯)，Wiley-Liss(1997)，第1803-1804頁(yè))上公布。原發(fā)性肺瘤的外科切除術(shù)是廣泛可接受的用于早期NSCLC的治療選擇。隨著NSCLC的進(jìn)展，特別是從IIIa期(T3NlM0、T1N2M0、T2N2M0、T3N2M0)轉(zhuǎn)變至IIIb期(T4N0M0、T4N1M0、T4N2M0),內(nèi)科醫(yī)師的重要的應(yīng)急辦法顯著下降。然而，如果在更早期(Ia-IIIa;優(yōu)選最早至T3N1M0期)探測(cè)癌癥，則五年生存率在35%和80%之間不等。在Ia期((T1N0M0);腫瘤尺寸小，未轉(zhuǎn)移)探測(cè)，明顯具有五年生存率最高至80%的最好預(yù)后。即使有的話，也幾乎很少使用外科干預(yù)NSCLC的IIIb-rV期。IV期相應(yīng)于遠(yuǎn)程轉(zhuǎn)移，即疾病的蔓延遠(yuǎn)離肺和局部淋巴結(jié)。較晚期(ni-IV)的五年生存率降至小于1%和15%之間。特別重要的是，NSCLC的早期診斷使預(yù)后轉(zhuǎn)變得更好。早在Ia(T1N0M0)、Ib(T2N0M0)、IIa(TlNlMO)、IIb，(T3N0M0)和IIIa(T3N1M0)期診斷的患者，如果治療得當(dāng)，診斷后具有最高至80%的5年生存機(jī)會(huì)。對(duì)于被診斷的患者而言，一旦已經(jīng)存在遠(yuǎn)程轉(zhuǎn)移，則不得不與小于1%的5年生存率作比較。在本發(fā)明看來，LC的早期評(píng)〗介指在腫瘤T1N0M0期或T1-3N0-1M0期進(jìn)4亍評(píng)價(jià)。優(yōu)選的是，在T1-3N0-1M0(-Tl-3N0-lM0)期評(píng)價(jià)LC。大多數(shù)肺癌在它們變得有癥狀時(shí)被探測(cè)到?，F(xiàn)行的探測(cè)方法包括胸部x-光透視、螺旋計(jì)算機(jī)X線斷層攝影術(shù)、痰液細(xì)胞學(xué)纟企查和支氣4管鏡檢。然而，有關(guān)將這些方法用于群體篩查的適宜性存在爭(zhēng)論。許多用于肺癌的血清腫瘤標(biāo)記物在臨床應(yīng)用。細(xì)胞角蛋白(Cytoceratin)19(CYFRA21-1)的可溶性的30kDa片革爻、癌胚胎發(fā)生抗原(CEA)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)和鱗狀細(xì)胞癌抗原(SCC)是最突出的LC標(biāo)記物。然而，它們中沒有一個(gè)滿足篩查工具所需要的靈每l度和特異性的標(biāo)準(zhǔn)(Thomas,L.，LaborundDiagnose,THBooksVerlagsgesellschaft,Frankfbrt/Main,Germany(2000》。為了具有臨床用途，作為單一標(biāo)記物的新的診斷標(biāo)記物應(yīng)該與本領(lǐng)域已知的其它標(biāo)記物具有可比性或更好。或者，即使單獨(dú)使用或者與一種或多種其它標(biāo)記物組合，新的標(biāo)記物分別應(yīng)該導(dǎo)致"^斷的靈每丈度和/或特異性有所提高。試驗(yàn)的診斷靈敏度和/或特異性最好由將在以下詳細(xì)描述的其受試者工作特征評(píng)價(jià)。全血、血清或血漿是臨床常規(guī)中最廣泛使用的樣品源。在可靠的癌癥探測(cè)或提供早期預(yù)測(cè)信息中應(yīng)該有所幫助的早期LC腫瘤標(biāo)記物的鑒別，可導(dǎo)致產(chǎn)生在該疾病的診斷和處理中應(yīng)該大有幫助的方法。因此，臨床上存在急需的是改善LC的體外評(píng)價(jià)。特別重要的是改進(jìn)LC的早期診斷，因?yàn)閷?duì)于早期診斷的患者而言，其對(duì)于生存機(jī)會(huì)的要求比那些在疾病的進(jìn)展階段診斷的患者更高。生化標(biāo)記物在肺癌中的臨床應(yīng)用最近已有評(píng)述(Duffy,M丄，Crit.Rev.Clin.Lab.Sci.38(2001)225-262)。CYFRA21-1普遍凈皮認(rèn)為是目前已知最好的用于肺癌的腫瘤標(biāo)記物。盡管不具器官特異性，其主要在肺組織中被發(fā)現(xiàn)。在對(duì)于其它良性肺部疾病的特異性為95%時(shí)，CYFRA21-1對(duì)于肺癌的靈敏度經(jīng)描述為46-61°/。。升高的CYFRA21-1的血清水平也與顯著的良性肝病、腎功能不全和侵襲性膀胱癌相關(guān)。CYFRA21-1試驗(yàn)被推薦用于術(shù)后治療監(jiān)測(cè)。CEA屬于通常在胚胎發(fā)生過程中產(chǎn)生的癌胚抗原的組別。CEA不具器官特異性，其主要用于結(jié)腸直腸癌的監(jiān)測(cè)。除了惡性腫瘤外，5幾種良性疾病，諸如石更化、支氣管炎、胰腺炎和自身免疫疾病也與升高的CEA血清水平相關(guān)。在對(duì)于良性肺部疾病的特異性為95%時(shí)，其對(duì)于肺癌的靈敏度報(bào)告為29-44%。CEA的優(yōu)選的應(yīng)用是肺癌的治療監(jiān)測(cè)。NSE是用于SCLC的肺瘤標(biāo)記物。一般地，升高的NSE血清水平被發(fā)現(xiàn)與神經(jīng)外胚層和神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤相關(guān)。升高的血清水平也在良性肺部疾病和腦部疾病，諸如腦膜炎或腦部其它炎癥性疾病以及頭部創(chuàng)傷的患者中發(fā)現(xiàn)。當(dāng)對(duì)于SCLC的靈敏度為95%時(shí)，報(bào)告的特異性是60-87%,對(duì)于NSCLC,NSE試驗(yàn)的表現(xiàn)差(7-25%)。NSE被推薦用于SCLC的治療監(jiān)測(cè)。最初在子宮頸鱗狀細(xì)胞CA中鑒定SCC。對(duì)于LC而言SCC的靈敏度通常低(18-27%)。因此，SCC試驗(yàn)被認(rèn)為不適宜篩查。然而，由于對(duì)于鱗狀細(xì)胞CA有比較高的靈敏度，SCC的優(yōu)選應(yīng)用是治療監(jiān)測(cè)，盡管CYFRA21-1通常表現(xiàn)更好。至于標(biāo)記物的分布和針對(duì)改善的肺癌診斷，公開了一種方法(Schneider,J.等，Int.J.Clin.Oncol.7(2002)145-151),該方法采用基于模糊邏輯學(xué)的分類運(yùn)算法則，將CYFRA21-1、NSE和為一般的炎癥標(biāo)記物的C-反應(yīng)性蛋白質(zhì)(CRP)的血清水平合并。作者報(bào)告特異性為95%時(shí)的靈敏度為92%。本發(fā)明的任務(wù)是研究生化標(biāo)記物是否可被鑒別，可被用于評(píng)價(jià)LC。令人驚奇的是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，使用標(biāo)記物NNMT可至少部分地克服目前現(xiàn)有技術(shù)已知的標(biāo)記物的某些問題。本發(fā)明涉及用于體外評(píng)價(jià)肺癌的方法，該方法包括4全測(cè)樣品中的NNMT濃度，并且將該測(cè)定的濃度用在肺癌評(píng)價(jià)中。令人驚奇的是，可以確定的是，升高的樣品中的NNMT水平，例如預(yù)示在患者中存在肺癌。本發(fā)明也涉及通過生化標(biāo)記物體外評(píng)價(jià)LC的方法，該方法包括;險(xiǎn)測(cè)樣品中的NNMT和LC的一種或多種其它標(biāo)記物的濃度，并且將該測(cè)定的濃度用在LC評(píng)價(jià)中。優(yōu)選的是，LC的一種或多種其它標(biāo)記物選自CYFRA21-1、CEA、NSE和SCC。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明也涉及將包含至少NNMT和CYFRA21-1的標(biāo)記板(markerpanel)用在LC的評(píng)價(jià)中。本發(fā)明也涉及將包含至少NNMT和CEA的標(biāo)記板用在LC的評(píng)價(jià)中。本發(fā)明也涉及將包含至少NNMT和SCC的標(biāo)記板用在LC的評(píng)價(jià)中。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及用于體外評(píng)價(jià)肺癌的方法，該方法包括檢測(cè)樣品中的a)NNMT的濃度，b)任選一種或多種其它肺癌標(biāo)記物的濃度，和c)將步驟(a)和任選的步驟(b)中測(cè)定的濃度用于肺癌的評(píng)價(jià)中。NNMT(煙酰胺N-甲基轉(zhuǎn)移酶，EC2丄1.1)催化煙酰胺和其它吡啶的N-甲基化。蛋白質(zhì)NNMT(Swiss-PROT:P40261)的特征是在已給出的序列表中為SEQIDN0:1。NNMT的表觀分子量為29.6kDa和等電點(diǎn)為5.56。NNMT活性對(duì)于許多藥物和異種生物化合物的生物轉(zhuǎn)化是重要的。已有報(bào)道，該蛋白質(zhì)主要在肝中表達(dá)并且定位于細(xì)胞質(zhì)中。NNMT自人肝的cDNA克隆并且含編碼264-個(gè)氨基酸蛋白質(zhì)的792-個(gè)核苷開放讀碼框，其經(jīng)計(jì)算的分子量為29.6kDa(Aksoy,S.等，J.Biol.Chem.269(1994)14835-14840)。文獻(xiàn)中有關(guān)該酶在人癌癥中的潛在作用知之甚少。在一篇論文中，據(jù)報(bào)道，升高的肝NNMT酶活性作為小鼠中癌癥惡病質(zhì)的標(biāo)記物(Okamura，A.等，Jpn.J.CancerRes.89(1998)649-656)。在近期的報(bào)道中，NNMT基因響應(yīng)射線的向下調(diào)節(jié)作用在在射線敏感細(xì)胞系中得到證實(shí)(Kassem，H.，等，Int.J.Cancer101(2002)454-460)。在US2006/0024692中，發(fā)現(xiàn)NNMTm-RNA-水平在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中比在非-癌癥組織中低。WO02/082076描述了NNMT蛋白質(zhì)作為腎癌亞型的標(biāo)記物。如在本文中使用的，以下每一個(gè)術(shù)語(yǔ)均有與其所在下文段節(jié)相關(guān)聯(lián)的含義。本文中使用的冠詞"一"和"一個(gè)"指一個(gè)或多于一個(gè)(即指至少一個(gè))的文章的語(yǔ)法上的賓語(yǔ)。例如，"標(biāo)記物"指一個(gè)標(biāo)記物或多于一個(gè)標(biāo)記物。如在本文中使用的，術(shù)語(yǔ)"標(biāo)記物，，或"生化標(biāo)記物，，指將要在患者樣品的分析中用作靶標(biāo)的分子。這樣的分子靶標(biāo)的實(shí)例為蛋白質(zhì)或多肽本身以及針對(duì)如存在于樣品中的此類靶標(biāo)的抗體。表達(dá)"一個(gè)或多個(gè)"指1至20個(gè)，優(yōu)選1至10個(gè)，優(yōu)選1至5個(gè)，更優(yōu)選3或4個(gè)。在本發(fā)明中用作標(biāo)記物的蛋白質(zhì)或多肽期望包括所述蛋白質(zhì)的天然存在的變量以及所述蛋白質(zhì)或所述變量的天然存在的片段或復(fù)合物，尤其分別是可免疫探測(cè)的片段或復(fù)合物。如對(duì)于專業(yè)技術(shù)人員而言明白的是，本發(fā)明應(yīng)該不被解釋為限制SEQIDNO:1的全長(zhǎng)蛋白質(zhì)NNMT的檢測(cè)。在實(shí)施本發(fā)明時(shí)，NNMT的生理片段可也被檢測(cè)到并且用作肺癌的標(biāo)記物。可免疫探測(cè)的片段優(yōu)選包含至少6、7、8、10、12、15或20個(gè)所述標(biāo)記物多肽的鄰近的氨基酸。本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，由細(xì)胞釋放的或存在于細(xì)胞基質(zhì)中的蛋白質(zhì)可例如在炎癥期間被破壞，并且可變得被降解或裂解為這樣的片段。如專業(yè)技術(shù)人員應(yīng)該認(rèn)識(shí)的，NNMT或其片段也可作為復(fù)合物的部分存在。這樣的復(fù)合物也可用作本發(fā)明意義上的標(biāo)記物。另外，或作為選擇，NNMT多肽可帶有翻譯后修飾，優(yōu)選糖基化、?；?或磷酸化作用，并且這樣的經(jīng)過修飾的NNMT也可作為L(zhǎng)C的標(biāo)記物。術(shù)語(yǔ)"評(píng)價(jià)肺癌"用于指明，依據(jù)本發(fā)明的方法將(單獨(dú)或與其它標(biāo)記物或變量，如由UICC設(shè)立的標(biāo)準(zhǔn)(見上面)一起)如，輔助醫(yī)師建立或確定LC的缺乏或存在或在預(yù)后中輔助醫(yī)師，探測(cè)康復(fù)(手術(shù)后的患者隨訪)和/或治療監(jiān)測(cè)，尤其是化療監(jiān)測(cè)。8如在本文中使用的術(shù)語(yǔ)"樣品"，指用于體外評(píng)價(jià)的目的而獲得的生物樣品。在本發(fā)明的方法中，樣品或患者樣品優(yōu)選可包括任何體液。優(yōu)選樣品分別為全血、血清、血漿、支氣管灌洗液或痰液，而血漿或血清最優(yōu)選。令人驚奇的是，本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)能夠在源于LC的患者的具顯著意義百分比的樣品中探測(cè)標(biāo)記物NNMT。甚至更令人驚奇的是，他們已經(jīng)能夠證實(shí)，在得自患者的這樣的液體樣品中NNMT的存在可用于肺癌評(píng)價(jià)中。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及通過檢測(cè)樣品的NNMT濃度評(píng)價(jià)LC和使用測(cè)定的濃度評(píng)價(jià)LC的方法。如專業(yè)的技術(shù)人員認(rèn)識(shí)到的，任何這樣的檢測(cè)都在體外進(jìn)行。過后丟棄患者樣品。患者樣品單獨(dú)用于本發(fā)明的體外診斷方法并且患者樣品的材料并不轉(zhuǎn)移進(jìn)入患者身體中去。作為特色地，樣品為液體樣品，如全血、血清或血漿。如專業(yè)的技術(shù)人員從描述的實(shí)施例中認(rèn)識(shí)到的，通過在免疫分析中檢測(cè)已經(jīng)鑒別NNMT為用于LC的診斷的標(biāo)記物，可使用備選的途徑實(shí)現(xiàn)與本發(fā)明的成就相比擬的結(jié)果?？赏ㄟ^任何適當(dāng)?shù)姆椒ㄌ綔y(cè)標(biāo)記物蛋白質(zhì)NNMT并將其用作LC的標(biāo)記物。這樣的優(yōu)選的適當(dāng)方法包括通過免疫分析程序探測(cè)NNMT、通過任何其它形式的結(jié)合試驗(yàn)、通過4企測(cè)其酶的活性、通過液相色譜，尤其是高效液相色譜、通過電泳，尤其是與蛋白質(zhì)印跡結(jié)合的SDS-PAGE以及通過質(zhì)譜進(jìn)行。用于診斷的理想的方案應(yīng)該是其中單個(gè)事件或過程應(yīng)該引起各自的疾病的情形，如在感染性疾病中。在所有的其它病例中，正確的診斷可以是非常困難的，特別是當(dāng)疾病的病因?qū)W沒有完全被了解為L(zhǎng)C的病例時(shí)。如專業(yè)的技術(shù)人員認(rèn)識(shí)到的，沒有生化標(biāo)記物，例如在LC更合適地，生化標(biāo)記物如，CYFRA21-1、CEA、NSE、SCC或如在本文所顯示的NNMT可用于用某些可能的和預(yù)兆性的值評(píng)價(jià)疾病的存在或缺乏。因此，在常規(guī)臨床診斷中，通常多種臨床癥狀和生物標(biāo)記物在潛在的疾病的診斷、治療和處理中被一同考慮。生化標(biāo)記物可或者^f皮個(gè)別測(cè)定，或者在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施方案中，它們可同時(shí)采用基于陣列技術(shù)的芯片或磁珠檢測(cè)。然后或者使用對(duì)于每一標(biāo)記物的個(gè)別的臨界值(cut-off)對(duì)生物標(biāo)記物的濃度進(jìn)行獨(dú)立解釋，或者將它們合并用于解釋。在進(jìn)一步的優(yōu)選的實(shí)施方案中，在以下方法中實(shí)施依據(jù)本發(fā)明的LC的評(píng)價(jià)，所述方法包括檢測(cè)樣品中的a)NNMT的濃度，b)—種或多種其它肺癌標(biāo)記物的濃度和c)將在步驟(a)和步驟(b)中測(cè)定的濃度用于肺癌評(píng)價(jià)中。如為專業(yè)技術(shù)人員明白的，可備選地自等份樣品或自不同等份的樣品實(shí)施NNMT的檢測(cè)和一種或多種其它肺癌標(biāo)記物的斗企測(cè)。依據(jù)在實(shí)施例部分顯示的數(shù)據(jù)，在實(shí)施的單因素分析和在多因素分析中的標(biāo)記物NNMT,對(duì)于LC均具有(特異性為約95%)顯著的差不多為50。/。的靈敏度，并且在這一方面發(fā)現(xiàn)是可比較的甚或在比較時(shí)高于所研究的其它LC標(biāo)記物。在LC的評(píng)價(jià)中，標(biāo)記物NNMT在以下一個(gè)或多個(gè)方面將是有優(yōu)勢(shì)的篩查；診斷輔助；預(yù)后；治療監(jiān)測(cè)，諸如化療、放療法和免疫療法的監(jiān)測(cè)。篩查篩查^皮定義為測(cè)試在沒有由于LC的癥狀而就診的人中的系統(tǒng)性應(yīng)用以確定有罹患LC的足夠的風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體，從進(jìn)一步研究或直接的預(yù)防行動(dòng)中得到益處。如在實(shí)施例部分所給出的數(shù)據(jù)證實(shí)，NNMT單獨(dú)將不足以例如對(duì)LC的風(fēng)險(xiǎn)人群的一般性篩查。最可能的是，在循環(huán)中沒有單一的生化標(biāo)記物將在任何時(shí)候符合為篩查的目的所需的靈每文度和特異性標(biāo)準(zhǔn)。寧愿不得不期望，在LC篩查中將不得不使用標(biāo)記板。本發(fā)明中確定的數(shù)據(jù)指出，標(biāo)記物NNMT將形成適宜篩查目的的標(biāo)記板的整體部分。因此，本發(fā)明涉及作為用于LC篩查目的的LC標(biāo)記^fr反的一個(gè)標(biāo)記物的NNMT的應(yīng)用。NNMT的升高的水平指示LC的存在。本文數(shù)據(jù)還指出，標(biāo)記物的某些組合在LC的篩查中將是有優(yōu)勢(shì)的。因此，本發(fā)明還涉及包含NNMT和CYFRA21-1的標(biāo)記板，或包含NNMT和CEA的標(biāo)記板，或包含NNMT和NSE的標(biāo)記板，或包含NNMT和SCC的標(biāo)記板，或包含NNMT和兩個(gè)選自CYFRA21-1、CEA、NSE和SCC的標(biāo)記物的標(biāo)記板于LC篩查目的中的應(yīng)用。診斷輔助標(biāo)記物可或者輔助特定器官的良性與惡性疾病的鑒別診斷，或者幫助區(qū)別腫瘤的不同組織類型。如由Molina,R.等，TumorBiol.24(2003)209-218報(bào)告的，CEA、CA125、CYFRA21陽(yáng)1、SSC和NSE被用作血清標(biāo)記物以輔助LC的組織學(xué)診斷。該研究的結(jié)果還指出，在所測(cè)試的標(biāo)記物中，CYFRA21-1是肺癌中最敏感的標(biāo)記物，但與組織學(xué)無關(guān)。依據(jù)本發(fā)明的資料，由于作為單一標(biāo)記物的NNMT可優(yōu)于其它LC標(biāo)記物如CEA或NSE，必須期望NNMT將被用作診斷輔助，特別在通過建立手術(shù)前的基線值中。因而，本發(fā)明也涉及使用NNMT建立LC手術(shù)前的基線值。預(yù)后預(yù)后指標(biāo)可被定義為癌癥患者及其腫瘤的預(yù)測(cè)疾病轉(zhuǎn)歸的臨床、病理學(xué)或生化特征。它們的主要應(yīng)用是幫助合理計(jì)劃患者干預(yù)，即避免對(duì)具發(fā)展性疾病的治療不足和對(duì)惰性不再發(fā)展的疾病的過度治療。MolinaR.等，TumorBiol，(2003)24:209-218評(píng)價(jià)了CEA、CA125、CYFRA21-1、SSC和NSE在NSCLC中的預(yù)后值。如評(píng)價(jià)了患者的全部生存狀況，籍此標(biāo)記物NSE、CEA和LDH(乳酸脫氫酶)的異常的血清水平似乎表示生存期更短。由于NNMT單用對(duì)區(qū)分LC患者與健康對(duì)照者已有顯著貢獻(xiàn)，必須期望它將在評(píng)價(jià)罹患LC的患者的預(yù)后中起輔助作用。手術(shù)前的NNMT水平最有可能與LC的一種或多種其它標(biāo)記物和/或TNM分期ii系統(tǒng)聯(lián)合使用。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，NNMT被用于LC患者的預(yù)后?；煴O(jiān)測(cè)Merle，P.等，Int.J.ofBiologicalMarkers19(2004)310-315已經(jīng)評(píng)價(jià)用誘導(dǎo)性化療治療的局部晚期NSCLC患者中的CYFRA21-1血清水平變化。他們推斷，CYFRA21-1血清水平的早期監(jiān)測(cè)可以是用于III期NSCLC患者中的腫瘤應(yīng)答和生存的有用的預(yù)測(cè)工具。另外，報(bào)告描述了CEA在LC患者的治療監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用(Fukasawa，T,等，GantoKagakuRyoho.Cancer&Chemotherapy13(1986)1862-1867(用日文寫的)；Zhang，H.等，ShandongYikeDaxueXuebao39(2001)537-538，541(用中文寫的))。這些中的大多數(shù)是回顧性的、非隨機(jī)的和包括少數(shù)的患者。如在用CYFRA21-1研究的病例中那樣，CEA研究提示a)具有CEA水平降低的患者，當(dāng)其在接受化療時(shí)，與那些CEA水平未能下降的患者相比，通常具有比較好的轉(zhuǎn)歸。和(b)對(duì)于幾乎所有患者而言，CEA水平的升高與疾病的進(jìn)展相關(guān)。由于在實(shí)施例部分所顯示的資料，必須期望NNMT應(yīng)該至少為與CYFRA21-1或CEA同樣好的用于化療監(jiān)測(cè)的標(biāo)記物。因此本發(fā)明也涉及NNMT在監(jiān)測(cè)進(jìn)行化療的LC患者中的應(yīng)用。隨訪大部分的經(jīng)歷外科切除術(shù)的LC患者，其目標(biāo)是完全去除癌癥組織、后期發(fā)展的復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移性疾病(Wagner,H.,Chest117(2000)110-116;Buccheri，G.等，Ann.Thorac.Surg.75(2003)973-980)。這些復(fù)發(fā)的大多數(shù)發(fā)生在手術(shù)后的最初2-3年內(nèi)。因?yàn)閺?fù)發(fā)/轉(zhuǎn)移性疾病總是致命的，相當(dāng)多的研究集中在早期并且由此潛在可治療階段的LC鑒別。因此，許多LC患者經(jīng)歷手術(shù)后監(jiān)測(cè)程序，其常常包括用CEA的常規(guī)監(jiān)測(cè)。外科切除術(shù)后使用CEA的連續(xù)監(jiān)測(cè)一年已經(jīng)顯示，用靈敏度約29%的方法探測(cè)早期手術(shù)后的復(fù)發(fā)/轉(zhuǎn)移性疾病，其特異性為約97%,即使是在缺乏可疑的癥狀或體征的情況下(Buccheri,G.等，Ann.Thorac.Surg.75(2003)973-980)。因而，手術(shù)后對(duì)LC患者的隨訪是適宜的生化標(biāo)記物應(yīng)用中的一個(gè)最重要的領(lǐng)域。由于NNMT在被研究的LC患者中的高靈敏度，期望NNMT單獨(dú)或與一種或多種其它標(biāo)記物聯(lián)合將在隨訪LC患者，尤其是手術(shù)后的LC患者中大有幫助。包含NNMT和LC的一種或多種其它標(biāo)記物的標(biāo)記板在隨訪LC患者中的應(yīng)用代表本發(fā)明更優(yōu)選的實(shí)施方案。在優(yōu)選的實(shí)施方案中本發(fā)明涉及NNMT分別在LC的診斷領(lǐng)域或在LC的評(píng)價(jià)中的應(yīng)用。還在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及NNMT作為用于肺癌的標(biāo)記物分子在與用于肺癌的一種或多種標(biāo)記物分子聯(lián)合在從得自患者液體樣品中評(píng)價(jià)肺癌中的應(yīng)用。因而，本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案是NNMT作為用于肺癌的標(biāo)記物分子在與用于肺癌的一種或多種標(biāo)記物分子聯(lián)合在從得自患者液體樣品中評(píng)價(jià)肺癌中的應(yīng)用。優(yōu)選可與NNMT的檢測(cè)組合的經(jīng)選擇的其它LC標(biāo)記物是CYFRA21-1、CEA、NSE和SCC。仍然更優(yōu)選的是，用于LC的評(píng)價(jià)的標(biāo)記板包含NNMT和至少一種選自CYFRA21-1和的其它標(biāo)記物分子。如專業(yè)技術(shù)人員將會(huì)認(rèn)識(shí)到的，有許多方法應(yīng)用兩個(gè)或更多個(gè)標(biāo)記物的檢測(cè)，以改善研究中的診斷問題。在十分簡(jiǎn)單，但雖然如此經(jīng)常是有效的手段中，如果樣品對(duì)于至少一個(gè)被研究的標(biāo)記物是陽(yáng)性的，則假定陽(yáng)性結(jié)果。這可能是例如當(dāng)診斷感染性疾病如AIDS時(shí)的情形。然而，經(jīng)常地，評(píng)價(jià)標(biāo)記物的組合。優(yōu)選地，對(duì)于標(biāo)記板的標(biāo)記物，如，對(duì)于CYFRA和CEA的檢測(cè)值是算術(shù)上合并，并且該合并值與潛在的診斷問題相關(guān)?？赏ㄟ^本領(lǐng)域數(shù)學(xué)方法的任何適宜的規(guī)定合并標(biāo)記物值。用于將標(biāo)記物組合與疾病關(guān)聯(lián)的熟悉的數(shù)學(xué)方法使用方法，如判別分析(DA)(即線性-、二次方程式-、調(diào)整的-DA)、Kernel方法(即SVM)、非參數(shù)的方法(即k-最近鄰域分類器13(k-Nearest-NeighborClassifiers))、PLS(偏最小二乘(PartialLeastSquares))、基于樹狀(tree-Based)的方法(即邏輯回歸(LogicRegression),CART、隨機(jī)Forest方法、Boosting/Bagging方法)、廣義線性模型(GeneralizedLinearModels)(即Logistic回歸)、基于主要成分的(PrincipalComponentsbased)方法(即SIMCA)、廣義相加才莫型(GeneralizedAdditiveModels)、基于才莫糊邏輯的(FuzzyLogicbased)方法、基于神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)和遺傳算法的(NeuralNetworksandGeneticAlgorithmsbased)方法。專業(yè)技術(shù)人員在選擇適宜的評(píng)價(jià)本發(fā)明標(biāo)記物組合的方法時(shí)將不存在問題。優(yōu)選地，使本發(fā)明的標(biāo)記物組合，如，與缺乏或存在LC相關(guān)的所使用的方法選自DA(即線性-、二次方程式-、調(diào)整的判別分析)、Kernel方法(即SVM)、非參數(shù)的方法(即k-最近鄰域分類器)、PLS(偏最小二乘)、基于樹狀的方法(即邏輯回歸、CART、隨機(jī)Forest方法、助推法(Boosting)方法)或廣義線性模型(即邏輯回歸)。有關(guān)這些統(tǒng)計(jì)方法的詳細(xì)資料在以下參考資料中發(fā)現(xiàn)Ruczinski,I.等，計(jì)算和繪圖統(tǒng)計(jì)學(xué)雜志(J.ofComputationalandGraphicalStatistics)12(2003)475-511;Friedman,J.H"美國(guó)統(tǒng)計(jì)學(xué)學(xué)會(huì)雜志(J.oftheAmericanStatisticalAssociation)84(1989)165-175;Hastie，T.等，統(tǒng)計(jì)學(xué)知識(shí)原理(TheElementsofStatisticalLearning),Springer統(tǒng)計(jì)學(xué)系列叢書(SpringerSeriesinStatistics)(2001);Breiman,L.等,分類和回歸樹(ClassificationandRegressionTrees),Wadsworth國(guó)際集團(tuán)，貝爾蒙(Belmont),加利福尼亞(1984);Breiman,L.,隨機(jī)Forests,機(jī)械學(xué)習(xí)(RandomForests,MachineLearning),45(2001)5-32;P印e，M.S.,用于分類和預(yù)測(cè)的醫(yī)學(xué)試驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)評(píng)估(TheStatistical科學(xué)系列叢書(OxfordStatisticalScienceSeries),28(2003);和Duda,R.O.等，模式分類(PatternClassification),WileyInterscience，第2版(2001)。本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施方案是，使用對(duì)于潛在的生物標(biāo)記物組合的最優(yōu)化多變量的臨界值并區(qū)別狀態(tài)A與狀態(tài)B,如，區(qū)別疾病與健康。在該類分析中，標(biāo)記物不再獨(dú)立存在而形成標(biāo)記才反?？纱_定的是，將NNMT的4企測(cè)分別與CYFRA21-1或CEA的一企測(cè)耳關(guān)合，與健康對(duì)照者比較，顯著改善對(duì)于LC的診斷的準(zhǔn)確性。診斷方法的準(zhǔn)確性被其受試者工作特征(ROC)最優(yōu)描述(特別參見Zweig,M.H.和Campbell,G.,Clin.Chem.39(1993)561-577)。ROC圖是所有靈敏度/特異性對(duì)的繪圖，所述靈敏度/特異性對(duì)是由對(duì)所觀察數(shù)據(jù)的整個(gè)范圍連續(xù)地改變其決定閾值所得到的。實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)的臨床表現(xiàn)取決于其診斷的準(zhǔn)確性或?qū)⒒颊邷?zhǔn)確地類分為臨床有關(guān)的亞組的能力。診斷的準(zhǔn)確性檢測(cè)試驗(yàn)的準(zhǔn)確地區(qū)別被研究的患者的兩種不同病癥的能力。這樣的情況是例如健康和疾病或良性對(duì)惡性疾病。在各種情況下，ROC圖通過以靈敏度對(duì)1-特異性作圖描述兩個(gè)分布之間的交迭，用于決定閾的全部范圍。在y-軸上是靈牽文度或真陽(yáng)性部分[被定義為(真陽(yáng)性試驗(yàn)結(jié)果的數(shù)量)/(真陽(yáng)性的數(shù)量+假陰性試驗(yàn)結(jié)果的數(shù)量)]。此也被稱為疾病或病癥存在下的陽(yáng)性。從受侵襲的亞組單獨(dú)計(jì)算。在x-軸上是假陽(yáng)性部分或l-特異性[被定義為(假陽(yáng)性結(jié)果的數(shù)量)/(真陰性的數(shù)量+假陽(yáng)性結(jié)果的數(shù)量)]。其為特異性的指數(shù)并且完全從未受侵襲亞組計(jì)算。因?yàn)檎骊?yáng)性和假陽(yáng)性部分完全分開計(jì)算，通過使用來自兩個(gè)不同亞組的試驗(yàn)結(jié)果，ROC圖獨(dú)立于樣本中的疾病的發(fā)病率。ROC圖上的每一點(diǎn)表示相應(yīng)于具體決定閾的靈壽文度/1-特異性對(duì)。具有完美區(qū)別的試驗(yàn)(在兩個(gè)結(jié)果的分布中沒有交迭)具有遍及左上角的ROC圖，在那里真陽(yáng)性部分是1.0或100%(準(zhǔn)確的靈敏度)和假陽(yáng)性部分是0(準(zhǔn)確的特異性)。沒有區(qū)別的試驗(yàn)的理論圖(兩組有同樣的結(jié)果分布)是從左下角至右上角的45。斜線。大多數(shù)圖落在此兩極之間。(如果ROC圖完全落在45。斜線之下，易于矯正，通過將用于"陽(yáng)性，，的標(biāo)準(zhǔn)倒轉(zhuǎn)，從"大于"至"小于"或反之亦然)。在質(zhì)量上，圖越靠近左上角，試驗(yàn)的整體精確度越高。定量實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)的診斷準(zhǔn)確性的一個(gè)便利目標(biāo)是，用單個(gè)數(shù)字表達(dá)其表現(xiàn)。這樣的完全參數(shù)，如，是所謂的"總誤差"或作為選擇地"曲線下面積-AUC"。最常見的全面測(cè)量是ROC圖下的面積。按慣例，該面積總是^0.5(如果不是，任何人可倒轉(zhuǎn)此決定規(guī)則以使其符合)。值的范圍在1.0(兩個(gè)組的試驗(yàn)值全然分開)和0.5(兩組試驗(yàn)值之間沒有明顯的分布差異)之間。面積不僅取決于圖的具體部分，諸如最靠近斜線的點(diǎn)或在90%特異性時(shí)的靈敏度，但在全圖上。此為定量的、描述性的表達(dá)，即該ROC圖是最接近完美的一個(gè)(面積=1.0)。將NNMT的檢測(cè)與其它標(biāo)記物如CYFRA21-1或CEA的檢測(cè)耳關(guān)合，或與至今仍待發(fā)現(xiàn)的LC的其它標(biāo)記物的檢測(cè)聯(lián)合，NNMT導(dǎo)致并且將會(huì)導(dǎo)致對(duì)LC的評(píng)價(jià)的進(jìn)一步改善。兩個(gè)標(biāo)記物NNMT和CYFRA21-1的組合顯著性地改善對(duì)LC的診斷的準(zhǔn)確性。兩個(gè)標(biāo)記物NNMT和CEA的組合也顯著性地改善對(duì)LC的診斷的準(zhǔn)確性。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及用于改善對(duì)LC相對(duì)于健康對(duì)照者的診斷準(zhǔn)確性的方法，該方法通過一企測(cè)樣品中至少NNMT分別和CYFRA21-1、CEA、NSE或SCC的濃度，和使測(cè)定的濃度與LC的存在或缺乏相關(guān)，與基于被單獨(dú)研究的任何單個(gè)標(biāo)記物的分類比較，該改善導(dǎo)致更多的患者被正確地類分為罹患LC與健康對(duì)照者。在依據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選的方法中，分別測(cè)定至少生物標(biāo)記物NNMT和CYFRA21-1的濃度，以及該標(biāo)記物組合用于LC的評(píng)價(jià)。在依據(jù)本發(fā)明的更優(yōu)選的方法中，分別測(cè)定至少生物標(biāo)記物NNMT和CEA的濃度，以及該標(biāo)記物組合用于LC的評(píng){介。在依據(jù)本發(fā)明的又一個(gè)更優(yōu)選的方法中，分別測(cè)定至少生物標(biāo)記物NNMT、CYFRA21-1和CEA的濃度，以及該標(biāo)記物組合用于LC的評(píng)價(jià)。在依據(jù)本發(fā)明的又一個(gè)更優(yōu)選的方法中，分別測(cè)定至少生物標(biāo)記物NNMT、CYFRA21-1和SCC的濃度，以及該標(biāo)記物組合用于LC16的評(píng)價(jià)。提供以下實(shí)施例以幫助理解本發(fā)明，在隨附的權(quán)利要求書中列出其真實(shí)的范疇。應(yīng)該理解，可在不背離本發(fā)明的精神下對(duì)列出的方法進(jìn)行修飾。實(shí)施例1對(duì)肺癌標(biāo)記物蛋白質(zhì)NNMT的抗體的產(chǎn)生為了通過免疫探測(cè)分析，如蛋白質(zhì)印跡和ELISA，進(jìn)一步將抗體應(yīng)用在血清和血漿以及血液水平的NNMT的檢測(cè)中，產(chǎn)生對(duì)肺癌標(biāo)記物蛋白質(zhì)NNMT的多克隆抗體。在大腸桿菌(E.coli)中表達(dá)重組蛋白質(zhì)為了產(chǎn)生對(duì)NNMT的抗體，實(shí)施蛋白質(zhì)的重組表達(dá)獲得免疫原。應(yīng)用RTS100表達(dá)系統(tǒng)和在E.coli中表達(dá)的組合進(jìn)行表達(dá)。在第一步中，使用"ProteoExpertRTSE.coliHY"系統(tǒng)分析DNA序列和得到推薦高產(chǎn)率的cDNA沉默突變變量以及各自的PCR-引物序列。此為基于網(wǎng)絡(luò)的商業(yè)服務(wù)(www.proteoexpert.com)。使用推薦的引物對(duì)，"RTS100E.coli線性才莫才反發(fā)生裝置(LinearTemplateGenerationSet,His-tag)，，(RocheDiagnosticsGmbH,曼海姆，德國(guó)，目錄號(hào)3186237)系統(tǒng)，自cDNA產(chǎn)生線性PCR才莫板并且為了核苷的體外轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，使用編碼NNMT蛋白質(zhì)的序列。對(duì)于蛋白質(zhì)印跡(Westemblot)探測(cè)和隨后的純化，表達(dá)的蛋白質(zhì)含有His-標(biāo)記物(His-tag)。確定最佳表達(dá)變量。依據(jù)制造商的說明書實(shí)施從PCR至表達(dá)和探測(cè)的所有步驟。依據(jù)制造商的說明書，將各自的包含所有必需的T7調(diào)節(jié)區(qū)域的PCR產(chǎn)物(啟動(dòng)子、核醣體的結(jié)合位點(diǎn)和T7終止子)克隆進(jìn)pBADTOPO載體(Invitrogen,卡爾斯魯厄，德國(guó)，目錄號(hào)K4300/01)。為了表達(dá)，使用T7調(diào)節(jié)序列，將構(gòu)造物轉(zhuǎn)化為E.coliBL21(DE3)(Studier，F(xiàn).W.等，MethodsEnzymol.185(1990)60-89并將轉(zhuǎn)化的細(xì)菌在1l批次中培養(yǎng)用于蛋白質(zhì)表達(dá)。按照標(biāo)準(zhǔn)程序在鎳-螯合物柱上純化His-NNMT融合蛋白。簡(jiǎn)要17地說，經(jīng)離心4吏含有表達(dá)用于His-NNMT融合蛋白的載體的11細(xì)菌培養(yǎng)液沉淀。將細(xì)胞沉淀再懸浮于含磷酸鹽(pH8.0)、7M氯化胍輸、咪唑和巰基丙三醇的細(xì)胞裂解緩沖液中，隨后使用111"&-1\^^乂@勻漿。通過高速離心使不可溶性物質(zhì)沉淀并將上清液施用于鎳-螯合物層析柱上。用幾個(gè)床體積的細(xì)胞裂解緩沖液，隨后用含磷酸鹽(pH8.0)和尿素的緩沖液洗滌柱。最后，用含SDS的磷酸鹽緩沖液在酸性條件下洗脫結(jié)合的抗原。多克隆抗體的產(chǎn)生a)免疫為了免疫，制備1:1比例的蛋白質(zhì)溶液(IOO|ig/ml蛋白質(zhì)NNMT)的新鮮乳液和完全弗氏佐劑(completeFreund，sadjuvant)。用1ml乳液在第1、7、14和30、60和90天免疫每一只兔。抽取血液和將得到的抗-NNMT血清用于在實(shí)施例3和4中描述的下一步實(shí)驗(yàn)中。b)通過用己酸和硫酸銨連續(xù)沉淀從兔血清純化IgG(免疫球蛋白G)用4體積的乙酸鹽緩沖液(60mM，pH4.0)稀釋1體積的兔血清。用2MTris-堿調(diào)節(jié)pH至4.5。于劇烈攪拌下逐滴加入辛酸(25|al/ml的稀釋樣品)。30min后將樣品離心(13000xg，30min,4。C),棄去沉淀物和收集上清液。通過加2MTris^威調(diào)節(jié)上清液的pH至7.5并且過濾(0.2jim)。通過于劇烈攪拌下逐滴加入4M硫酸銨溶液至終濃度為2M，使上清液中的免疫球蛋白沉淀。通過離心(8000xg，15min，4。C)收集沉淀的免疫球蛋白。棄去上清液。將沉淀物溶解于10mMNaH2PO4/NaOH,pH7.5，30mMNaCl中并徹底透析。將透析液離心(13000xg,15min,4。C)并過濾(0.2,)。多克隆兔IgG的生物素化將多克隆兔IgG溶于10mMNaH2P04/NaOH,pH7.5,30mMNaCl每mlIgG溶液中加入50pl生物素-N-羥基琥珀酰亞胺(3.6mg/ml于DMSO中)。室溫下30min后，樣品于Superdex200上經(jīng)層析(IOmMNaH2P04/NaOH,pH7.5，30mMNaCl)。收集含生物素化的IgG部分。依據(jù)同樣的規(guī)程使單克隆抗體生物素化。多克隆兔IgG的地高辛配基化(digoxygenvlation)將多克隆兔IgG溶于10mMNaH2P04/NaOH、30mMNaCl,pH7.5中制成10mg/ml。向每mlIgG溶液中加入50pi地高辛配基-3-0-甲基羰基-s-氨基己酸-N-羥基琥珀酰亞胺酯(RocheDiagnostics,曼海姆，德國(guó)，目錄號(hào)1333054)(3.8mg/ml于DMSO中)。室溫下30min后，樣品于Superdex200上經(jīng)層析(IOmMNaH2P04/NaOH,pH7.5,30mMNaCl)。收集含地高辛配基化的IgG部分。依據(jù)同樣的規(guī)程使單克隆抗體標(biāo)記地高辛配基。實(shí)施例2用于人血清和血漿樣品中NNMT的檢測(cè)的ELISA。為了探測(cè)人血清或血漿中的NNMT，開發(fā)了夾心ELISA。為了捕獲和探測(cè)抗原，將抗-NNMT多克隆抗體(見實(shí)施例2)的等分試樣分別與生物素和地高辛配基軛合。將鏈親合素包被的96-孔微滴定板，用在10mM磷酸鹽，pH7.4,1%BSA、0.9%NaCl和0.1%土溫20中，10pg/ml下的100jil生物素化的抗-NNMT多克隆抗體孵育60min。孵育后，用0.9%NaCl、0.1%土溫20洗滌板三次。然后用或者作為標(biāo)準(zhǔn)抗原的系列稀釋的重組蛋白質(zhì)(見實(shí)施例2)或者得自患者的^奮飾的血漿樣品孵育孔2h。結(jié)合NNMT后，用0.9。/。NaCl、0.1%土溫20洗滌板三次。為了特異性地探測(cè)結(jié)合的NNMT,用在10mM磷酸鹽，pH7.4,1%BSA、0.9%NaCl和0.1%土溫20中，10jig/ml下的100pl的地高辛配基化的抗-NNMT多克隆抗體孵育孔60min。此后，洗滌板三次去除未結(jié)合的抗體。在下一步中，用在10mM磷酸鹽，pH7.4,1%BSA、0.9%NaCl和0.1%土溫20中，20mU/ml的抗-地高辛配基-POD共軛體(RocheDiagnostics19GmbH,曼海姆，德國(guó)，目錄號(hào)1633716)孵育孔60min。隨后用同樣的緩沖液洗滌板三次。為了探測(cè)抗原-抗體復(fù)合物，用100plABTS溶液(RocheDiagnosticsGmbH，曼海姆，德國(guó)，目錄號(hào)11685767)孵育孑L,并于30-60min后用ELISA讀板器在405nm處檢測(cè)OD。實(shí)施例3研究I:研究人群在第一項(xiàng)研究中，采用源自示于表l的按照UICC分類法的56個(gè)經(jīng)充分特征鑒定的LC患者的樣本。這組患者集中在NSCLC(50個(gè)樣本)，因?yàn)樵撔偷腖C具有比SC型好的預(yù)后，并且因而其早期探測(cè)特別重要。表l研究I:LC樣本和相應(yīng)的UICC分類<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>對(duì)比從121個(gè)沒有任何已知惡性肺病的明顯健康的個(gè)體(-對(duì)照組)中獲得的對(duì)照樣本，評(píng)價(jià)表1的LC樣本。實(shí)施例4研究I:單一標(biāo)記物的靈敏度在對(duì)于待測(cè)的每一單個(gè)標(biāo)記物，在共同的95%的特異性水平上，計(jì)算每一標(biāo)記物的靈敏度。表2以百分比給出每一個(gè)最有前途的LC標(biāo)記物的靈敏度。表2研究I:單一標(biāo)記物的靈敏度標(biāo)記物NNMTCEANSECYFRA21-1于95%特異性的靈敏度(％)50.042.912.569.6如易于從表2中明白的，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)標(biāo)記物NNMT對(duì)于LC具有第二高的靈敏度，在所有被研究的標(biāo)記物中僅次于CYFRA21-1。標(biāo)記物CEA似乎具有顯著比較低的靈敏度，而NSE似乎表現(xiàn)相當(dāng)差。實(shí)施例5研究I:標(biāo)記物組合如果各自的組合的標(biāo)記物中至少一個(gè)超過某一閾值，則將該個(gè)體分類為患有LC。這些臨界值被定義為，諸如在對(duì)照組上得到95%的特異性。表3表示相對(duì)于健康對(duì)照者，診斷為L(zhǎng)C患者的分類結(jié)果。21表3研究I:相對(duì)健康對(duì)照者，診斷為L(zhǎng)C的一批患者的分類結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>標(biāo)記物NNMT和Cyfra21-1的組合在該分析中得到在95%特異性水平時(shí)最高的靈敏度。評(píng)價(jià)與NNMT組合的多種其它標(biāo)記物。如在表3中所示的，與NNMT組合的CEA也導(dǎo)致在靈敏度上的顯著改善。實(shí)施例6研究II:研究人群第二項(xiàng)研究總體而言獨(dú)立于第一項(xiàng)研究，集中在主要類型的NSCLC,腺癌和鱗狀細(xì)胞癌。表4a描述癌癥組的類型和分期分布。表4a研究II:LC樣本的類型和分期<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>如在表4b所描述的，在該項(xiàng)研究中的對(duì)照組被定義為對(duì)吸煙者和非吸煙者的某些樣本更具特異性。對(duì)每個(gè)患者實(shí)施肺功能試驗(yàn)(肺活量測(cè)定法，Miller，M.R.,等，Eur.Respir.J.26(2005)319-338)。只有如果供體的肺功能試驗(yàn)的結(jié)果在正常范圍內(nèi)，樣本才被納入對(duì)照組中。表4b研究n:對(duì)照組的組成<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>實(shí)施例7研究II:單一標(biāo)記物的靈敏度如前基于表4b中描述的樣本，計(jì)算每一標(biāo)記物的靈敏度。在對(duì)于每一個(gè)體受試標(biāo)記物的共同的95%特異性水平上，得出靈敏度(以百分比表示)。表5分別描述腺癌和鱗狀細(xì)胞癌的靈敏度，以及每一標(biāo)記物的總的靈敏度。表5研究II:單一標(biāo)記物于95%特異性時(shí)的靈敏度(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>清楚地，在這種情況下，NNMT有兩個(gè)理由優(yōu)于Cyfra21-1:首先NNMT的總靈敏度顯著更好。第二也是非常重要的，Cyfra21-1適應(yīng)腺癌的功效比鱗狀細(xì)胞癌低，而NNMT對(duì)此兩種類型癌癥的表現(xiàn)相似。實(shí)施例8研究II:標(biāo)記物組合研究II中標(biāo)記物組合的結(jié)果示于表6中。組合的類型與在上文研究I中描述的相同。表6研究II:標(biāo)記物組合在肺癌的兩個(gè)主要亞型上的表現(xiàn)。在95%特異性時(shí)給出的靈敏度<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>與單用標(biāo)記物時(shí)得到的靈敏度相比，將任何兩個(gè)受試標(biāo)記物組合導(dǎo)致標(biāo)記物組合的靈敏度的顯著改善(為了闡明，見標(biāo)記物組號(hào)#7對(duì)#1和#2)。通過加入第三個(gè)標(biāo)記物得到某些利益(參考，組號(hào)#8對(duì)#10)。然而，所有四個(gè)標(biāo)記物的組合(組號(hào)#14)得到不比最好的三重組合(組號(hào)#10)更高的靈敏度表現(xiàn)。包含NNMT的二重組合和三重組合總是比相應(yīng)的由卩壬《可其它標(biāo)記物替代NNMT的標(biāo)記物好。概要地說，證實(shí)NNMT單用在探測(cè)兩個(gè)主要類型的NSC肺癌中具有好的靈敏度。使用NNMT分別與Cyfra21-1和/或CEA組合得到給人非常深刻印象的結(jié)果。使用包含所有三個(gè)標(biāo)記物的組合，將93%的癌癥樣本和95。/o的對(duì)照^^本正確分類。權(quán)利要求1.一種用于體外評(píng)價(jià)肺癌的方法，該方法包括檢測(cè)樣品中的a)煙酰胺N-甲基轉(zhuǎn)移酶(NNMT)的濃度，b)任選一種或多種其它肺癌標(biāo)記物的濃度，和c)將在步驟(a)和任選的步驟(b)中測(cè)定的濃度用在肺癌的評(píng)價(jià)中。2.依據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述一種或多種其它標(biāo)記物選自CYFRA21畫1、CEA、NSE和SCC。3.依據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中所述一種或多種其它標(biāo)記物是CYFRA21-1。4.依據(jù)^5L利要求2的方法，其中所述一種或多種其它標(biāo)記物是CEA。5.依據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中所述一種或多種其它標(biāo)記物是scc。6.NNMT在肺癌的評(píng)價(jià)中的應(yīng)用。7.包含NNMT和一種或多種適于肺癌的其它標(biāo)記物的標(biāo)記板在肺癌的評(píng)^t中的應(yīng)用。8.依據(jù)權(quán)利要求7的標(biāo)記板的應(yīng)用，其中所述一種或多種其它標(biāo)記物選自CYFRA21-1、CEA、NSE和SCC。9.依據(jù)權(quán)利要求8的標(biāo)記板的應(yīng)用，所述標(biāo)記板至少包含NNMT和CYFRA21-1。全文摘要本發(fā)明涉及肺癌的評(píng)價(jià)。其公開了蛋白質(zhì)NNMT在肺癌評(píng)價(jià)中的應(yīng)用。本發(fā)明也涉及用于通過體外檢測(cè)源自患者的液體樣品中的NNMT評(píng)價(jià)肺癌的方法。NNMT的檢測(cè)可，如被用于肺癌患者的早期檢測(cè)或隨訪。文檔編號(hào)G01N33/574GK101495870SQ200780028554公開日2009年7月29日申請(qǐng)日期2007年7月30日優(yōu)先權(quán)日2006年8月1日發(fā)明者J·卡爾,M·-L·哈格曼恩,M·塔科,M·羅斯勒,T·科特,W·羅林格申請(qǐng)人:霍夫曼-拉羅奇有限公司