專利名稱：大腸菌群復(fù)合快速顯色診檢試劑及其研發(fā)工藝流程的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及食品安全快速診檢試劑，具體涉及一種大腸菌群復(fù)合快速顯色診檢試劑及其研發(fā)工藝流程。

背景技術(shù)：
由德國科學(xué)家科赫所創(chuàng)立的微生物純培養(yǎng)方法因其費(fèi)用低廉、靈敏度高，能夠?qū)ξ⑸镞M(jìn)行定性、定量的特異鑒定，因此時至今日仍為世界微生物學(xué)界所普遍接受為甄別微生物的權(quán)威方法。但純培養(yǎng)的缺點(diǎn)也十分明顯，從制備培養(yǎng)基、培養(yǎng)微生物、直到形成肉眼可辨的生長特征以及對微生物進(jìn)行確證其種屬特征的生理生化指標(biāo)的檢測，這一系列過程不僅浪費(fèi)資源，耗時超長，且由于人員對儀器的操作使用以及操作手法的異同都可能造成結(jié)果的誤判，因此開發(fā)一項(xiàng)既能快速準(zhǔn)確的鑒別微生物的種屬特性、又可以降低成本、同時減少檢測遲滯的微生物快速診檢試劑早已經(jīng)成為國內(nèi)外微生物檢測領(lǐng)域科研人員的迫切愿望，而今各種快速檢測試劑盒、紙片、旋轉(zhuǎn)平板法等皿膜法，電阻抗法，生物熒光法，免疫學(xué)法，基因探針，分子雜交，基因芯片方法等等層出不窮。但縱觀國內(nèi)外快速診檢技術(shù)領(lǐng)域的發(fā)展情態(tài)，可以看出，無論是傳統(tǒng)的以純培養(yǎng)方法為主的檢測技術(shù)，還是實(shí)時檢測技術(shù)，國外都已經(jīng)有了比較成熟的發(fā)展模式，以美國的3M、BD公司和法國的科瑪嘉、梅里埃公司為代表的一批企業(yè)，在快速診檢技術(shù)領(lǐng)域的探索方面已經(jīng)走在了世界的前列。
但是從這類公司購買快速檢測試劑價格昂貴，應(yīng)用成本過高，我國難以承受普及型應(yīng)用，僅一些科研院所、高校、及有實(shí)力的大型企業(yè)可以嘗試，普通中小型企業(yè)、工商業(yè)者難以接受，而結(jié)合儀器進(jìn)行實(shí)時檢測的方法國內(nèi)落后的步伐更大，購買一臺普通的快速檢測設(shè)備動輒幾十萬美金。


發(fā)明內(nèi)容
為了克服上述缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種滿足食品藥品安全快速顯色診檢試劑。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案 大腸菌群復(fù)合快速顯色診檢試劑研發(fā)工藝流程 1、首先通過大腸菌群、質(zhì)控菌株(沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌)的活化及生化鑒定確定質(zhì)控手段； 2、根據(jù)目的菌株的需要篩選基本營養(yǎng)成分； 3、通過生長譜法驗(yàn)證微生物的生長繁殖需要適宜的營養(yǎng)環(huán)境，碳源、氮源、礦物質(zhì)、微量元素、生長因子等等都為微生物生長所必需，缺少其中任意一種，微生物就不能正常生長、代謝、繁殖； 5、顯示劑、掩蔽劑及增效劑的遴選； 6、復(fù)合遴選； 7、通過快速顯色培養(yǎng)基各項(xiàng)指標(biāo)測試驗(yàn)證試驗(yàn)，其包括特異性試驗(yàn)、靈敏度試驗(yàn)、實(shí)際樣品檢驗(yàn)、假陰性、假陽性菌株鑒定、穩(wěn)定性試驗(yàn)、可重復(fù)性試驗(yàn)、競爭菌株及雜菌干擾試驗(yàn)、檢出時間、檢出率的試驗(yàn)驗(yàn)證復(fù)合遴選配方的可行性； 8、通過因素水平正交組合試驗(yàn)遴選出最適配方。
大腸菌群復(fù)合快速顯色診檢試劑，其快速顯色鑒別培養(yǎng)基各項(xiàng)成分的篩選配方為 快速顯色鑒別培養(yǎng)基各項(xiàng)成分 1、碳源 乳糖； 2、氮源 蛋白胨； 3、礦物質(zhì) 氯化鈉、磷酸氫二鉀； 4、掩蔽劑(需遴選) 牛膽鹽、煌綠、龍膽紫、孔雀綠、十二烷基磺酸鈉； 5、指示劑(需遴選) 氯化三苯四氮唑、伊紅、玫紅酸、中性紅； 6、增效劑 溴甲酚紫、羧甲基纖維素鈉 外界條件對菌體生長的影響 一、PH值A(chǔ)＝600nm
由上表可以看出大腸菌群的最適PH值范圍在6.7～7.5。
當(dāng)培養(yǎng)時長為12小時時PH值＝6.9時菌種啟動生長速度最快； 當(dāng)培養(yǎng)時長為24小時時PH值＝7.3時大腸菌群菌體濃度最高。
原因 當(dāng)培養(yǎng)基內(nèi)PH值過低時大腸菌群乳糖操縱子容易受到信息反饋抑制，菌體能量供應(yīng)不足，導(dǎo)致遲緩期增加，對數(shù)生長期延后并縮短； 當(dāng)培養(yǎng)基內(nèi)PH值過高時，菌體內(nèi)源蛋白合成受到抑制，誘導(dǎo)酶與合成酶的合成受阻。
因此我們選擇PH＝6.9做為快速檢測試劑的理想PH值。
二、溫度為37℃ 本發(fā)明的目的為快速顯色檢測大腸菌群，大腸菌群的的最適生長溫度為37℃，因此我們選定37℃為檢測溫度。
培養(yǎng)基主要成分對菌體生長的影響 我們根據(jù)微生物的特異種屬特征，分別就快速顯色檢測試劑的顯色劑、掩蔽劑以及增效劑這三個主要方面進(jìn)行針對性遴選 1、選擇四種顯色劑進(jìn)行配伍，進(jìn)行靈敏度和準(zhǔn)確度試驗(yàn)并以生長譜法做為初篩根據(jù)； 2、選擇四種掩蔽劑進(jìn)行配伍，以質(zhì)控菌株為標(biāo)準(zhǔn)做雜菌干擾試驗(yàn)； 3、復(fù)合配伍顯色劑及掩蔽劑，做因素水平正交試驗(yàn)，縮短反映時間、提高靈敏度、降低偽現(xiàn)概率，最終求得優(yōu)化配比配方。
培養(yǎng)基檢測所需主要成分對檢測效果的影響 一、掩蔽劑 掩蔽劑為快速檢測試劑屏蔽雜菌干擾，凸現(xiàn)目標(biāo)菌群的關(guān)鍵因素，我們遴選的原則是 (1)能夠特異的徹底抑制非目標(biāo)菌株的生長； (2)不影響目標(biāo)菌株的生長； 備選成分牛膽鹽、煌綠、龍膽紫、豬膽鹽 備選理由 因大腸菌群為一群能發(fā)酵乳糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌的總稱。因此遴選合適掩蔽劑的原則是能夠完全抑制革蘭氏陽性菌的生長，并且不會影響革蘭氏陰性細(xì)菌的生長的物質(zhì)做為培養(yǎng)基的屏蔽基礎(chǔ)。
作用機(jī)理及結(jié)果與討論 1、龍膽紫 龍膽紫即甲紫，又名晶紫，是一種堿性染料。是氯化四甲基對玫瑰苯胺、氯化五甲基對玫瑰苯胺、氯化六甲基對玫瑰苯胺的混合物。抑菌機(jī)理是以氯化五甲基對玫瑰苯胺為主，在水中溶解后呈紫色溶液，龍膽紫儲存過久容易變質(zhì)。它的陽離子能與細(xì)菌蛋白質(zhì)的羥基相結(jié)合，影響其代謝而起到抑菌作用，對革蘭氏陽性菌有選擇作用，特別是葡萄球菌、白喉?xiàng)U菌等，對白色念珠菌也有較好的抗菌作用。
即配即用質(zhì)控檢驗(yàn) 室溫密閉儲藏15天后質(zhì)控檢驗(yàn) 通過以上表格可以看出，龍膽紫在剛剛配制即時使用效果很好，但是當(dāng)儲藏時間超過15天之后，龍膽紫的抑菌效果大大降低。
2、牛膽鹽 牛膽鹽的抑菌機(jī)理破壞革蘭氏陽性細(xì)菌菌體細(xì)胞外壁膜，致使菌體內(nèi)物質(zhì)泄漏，從而殺死細(xì)菌。
牛膽鹽與人膽鹽的成分十分相似，我們的目標(biāo)菌群恰恰來源于人類，因此我們選擇牛膽鹽做為掩蔽劑的主屏蔽材料，大腸菌群為條件致病菌，正常情況下健康人體內(nèi)的膽鹽濃度在0.03％～0.3％之間，在這一濃度范圍內(nèi)大腸菌群能夠被較好的抑制。因此我們選擇如上表所示膽鹽濃度，以大腸菌群、金黃色葡萄球菌為質(zhì)控菌遴選出較為合適的濃度梯度做為復(fù)配參考參數(shù)。
從上表可以看出，牛膽鹽的抑菌效果很好，在達(dá)到一定濃度的條件下可以殺滅幾乎所有革蘭氏陽性菌株。而對大腸菌群的影響幾乎沒有，因此我們將其做為優(yōu)選配方中的主掩蔽劑。
3、豬膽鹽 豬膽鹽的作用機(jī)理與牛膽鹽相似，不同之處在于豬膽鹽中含有雜質(zhì)較多，抑菌效能難以比肩牛膽鹽，豬膽鹽的市場價格相對牛膽鹽要低一些。
從上表可以看出豬膽鹽的抑菌效果相對牛膽鹽有很大差距，盡管我們將豬膽鹽的量提高幾倍甚至是十幾倍，但是還是難于達(dá)到牛膽鹽的效果。
4、煌綠 煌綠的抑菌機(jī)理與牛膽鹽相似，但煌綠不僅能夠抑制革蘭氏陽性菌，對革蘭氏陰性細(xì)菌也有一定的殺滅作用，且對沙門氏菌和志賀氏菌有一定的增菌作用，我們以大腸菌群和金黃色葡萄球菌為質(zhì)控菌株做檢出限及檢出率試驗(yàn)。
從上表可以看出，煌綠在殺滅革蘭氏陽性菌的同時，對革蘭氏陰性桿菌也有一定的抑制作用，而且煌綠本身并不能夠完全屏蔽革蘭氏陽性菌的生長。
綜合以上試驗(yàn)結(jié)果，我們揀選所選掩蔽劑中的牛膽鹽為我們的主掩蔽劑。
二、顯色劑 顯色劑是快速檢測試劑讀取結(jié)果的關(guān)鍵，遴選的原則是 (1)變色范圍與目標(biāo)菌株特異反應(yīng)的發(fā)生數(shù)量與發(fā)生程度相一致； (2)不影響目標(biāo)菌株的代謝、生長、繁殖；； (3)能夠在一定程度上輔助主掩蔽劑殺滅非目標(biāo)菌。
備選試劑氯化三苯四氮唑、伊紅、玫紅酸、中性紅 1、氯化三苯四氮唑(TTC) TTC是一種氧化還原能力很強(qiáng)的物質(zhì)，能夠在接受氫(被還原)后形成非水溶性的紅色三苯甲酯，完成呼吸過程。
通過上表我們可以看出，TTC過量則大腸菌群生長受到抑制，過少則靈敏度降低。
2、伊紅鈉鹽 伊紅鈉鹽含有一個(-COOH)助色基團(tuán)，在水中電離時放出氫離子，本身帶負(fù)電荷，當(dāng)溶液中氫離子濃度增高到一定范圍后，伊紅即與氫離子相結(jié)合并顯示明艷的亮紅色。
伊紅對微生物的影響較小，無選擇作用。
3、玫紅酸 玫紅酸在酸性環(huán)境中呈黃色，在堿性環(huán)境中呈淡紅色，玫紅酸的變色范圍為6.8(黃)～8.2(紅)，且變色程度隨著PH值的變化而規(guī)律性的按照紅～橙～黃的方式發(fā)生變化。
由上表可以看出，玫紅酸還能抑制革蘭氏陽性菌的生長，并且有助于縮短革蘭氏陰性細(xì)菌的遲緩期，并維持較長時間的對數(shù)生長期，因此可以加快菌體生長速度，有助于快速顯色。
4、中性紅 中性紅是弱堿性染料，呈紅色粉末狀，能溶于水(溶解度4％)和酒精(溶解度1.8％)。它在堿性溶液中呈現(xiàn)黃色，在強(qiáng)堿性溶液中呈藍(lán)色，而在弱酸性溶液中呈紅色變色范圍為6.8(紅)～8.0(黃)。
從上表可以看出，中性紅基本無選擇能力。
三、增效劑 1、溴甲酚紫 溴甲酚紫為一種生物適應(yīng)性良好的指示劑，變色范圍為PH＝6.8時顯示紫紅色，當(dāng)PH值降至5.2時顯示黃色，同玫紅酸的顯色方式相同，因此可以輔助玫紅酸實(shí)現(xiàn)快速、準(zhǔn)確、特異的甄別環(huán)境中的專屬微生物族群。
2、羧甲基纖維素鈉 羧甲基纖維素鈉是用途很廣的一種工業(yè)原料，它具備超強(qiáng)的保水能力，并能夠形成完整，致密的凝膠，加快培養(yǎng)基對樣品混懸液的吸收，利于菌體的固定。
復(fù)合遴選的配方通過快速顯色培養(yǎng)基各項(xiàng)指標(biāo)測試驗(yàn)證試驗(yàn)五因素四水平正交因子表 從上述測試驗(yàn)證試驗(yàn)得大腸菌群復(fù)合快速顯色診檢試劑的配方為乳糖、蛋白胨、牛膽鹽、瓊脂、顯色劑為玫紅酸、溴甲酚紫、羧甲基纖維素鈉、氯化鈉、磷酸氫二鉀； 優(yōu)選配比為(g/L) 乳糖25、蛋白胨15、牛膽鹽1.5、瓊脂15、顯色劑0.02、增效一0.02、增效二0.08、鹽一3、鹽二4； 其中增效一為溴甲酚紫； 增效二為羧甲基纖維素鈉； 鹽一為氯化鈉； 鹽二為磷酸氫二鉀； 顯色劑為玫紅酸。
四驗(yàn)證試驗(yàn) 1、特異性試驗(yàn) 將金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌、單增李斯特菌置腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時；將大腸菌群、沙門氏菌、志賀氏菌分置營養(yǎng)瓊脂或其他專用培養(yǎng)基上培養(yǎng)24小時，之后劃線接種于各專屬培養(yǎng)基質(zhì)及顯色培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)12小時，觀察并記錄菌落形態(tài)特征； 由上表可以判斷本顯色培養(yǎng)基能夠有效屏蔽雜菌，抑制其生長，保護(hù)目標(biāo)菌群快速生長繁殖，并特異顯色。
2、靈敏度試驗(yàn) 挑取適量大腸菌群接入到10毫升0.85％的生理鹽水中振搖均勻，制成母體菌懸液。接下來取1毫升母體菌懸液置含有9毫升0.85％生理鹽水中制成10-1稀釋液，依此類推進(jìn)行10倍梯度濃度稀釋至10-9止，取各濃度稀釋液各0.1毫升均勻涂布于營養(yǎng)瓊脂平板及顯色劑平板； 3、抗干擾試驗(yàn) 取各稀釋度已知濃度的大腸菌群菌懸液2毫升，分別接入已知濃度的金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌、單增李斯特菌、沙門氏菌、志賀氏菌各2毫升，振搖均勻，取0.1毫升混合菌懸液分別涂布于各專屬培養(yǎng)基質(zhì)，營養(yǎng)瓊脂及顯色培養(yǎng)基上。取各稀釋度純菌懸液分別涂布于各專屬培養(yǎng)基，營養(yǎng)瓊脂和顯色培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)6小時、12小時、18小時、24小時、36小時、48小時計(jì)數(shù)大腸菌群菌落數(shù)，比較目標(biāo)菌株在受到強(qiáng)干擾的條件下顯色培養(yǎng)基的靈敏度；
由上表可以判讀顯色培養(yǎng)基對大腸菌群的顯色靈敏度十分精確，可以達(dá)到2.66×10-5cfu。
4實(shí)際樣品檢驗(yàn) 來源1、市場購買； 2、餐飲業(yè)主的用餐環(huán)境實(shí)地抽取樣品； 3、陰溝、馬桶提取。
制備分別制取各稀釋度菌懸液于無菌狀態(tài)下取其0.1毫升混懸液涂布接種于伊紅美藍(lán)平板、營養(yǎng)瓊脂、顯色培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)培養(yǎng)6小時、12小時、18小時、24小時、36小時、48小時計(jì)數(shù)大腸菌群菌落數(shù)，檢驗(yàn)大腸菌群檢出限及檢出率； 從上表可以判讀顯色培養(yǎng)基可以明顯縮短檢測時長，并且高度靈敏的反映實(shí)際樣品帶菌狀態(tài)。
5、假陰性、假陽性菌株鑒定 將可疑菌落分離純化，結(jié)合傳統(tǒng)生理生化方法進(jìn)行種屬間鑒定，試驗(yàn)結(jié)果證表明，假陰性概率為0.014％，假陽性概率為0。
6、穩(wěn)定性試驗(yàn) 檢驗(yàn)包裝成型產(chǎn)品在37℃條件下和2～4℃冰箱中的保藏期限； 7、可重復(fù)性試驗(yàn) 選取不同試驗(yàn)人員，不同實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行結(jié)果再現(xiàn)試驗(yàn)。



圖1為大腸菌群復(fù)合快速顯色診檢試劑研發(fā)工藝流程圖； 圖2為PH值對目標(biāo)微生物啟動生長速度以及菌體累計(jì)數(shù)量的影響。
具體實(shí)施方案 下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明 參照圖1所示 1、首先通過大腸菌群、質(zhì)控菌株即沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌的活化及生化鑒定確定質(zhì)控手段； 2、根據(jù)目的菌株的需要篩選基本營養(yǎng)成分； 3、通過生長譜法驗(yàn)證微生物的生長繁殖需要適宜的營養(yǎng)環(huán)境，碳源為乳糖，氮源為蛋白胨，礦物質(zhì)為氯化鈉、磷酸氫二鉀，微量元素，生長因子為微生物生長所必需，缺少其中任意一種，微生物就不能正常生長、代謝、繁殖； 5、顯示劑氯化三苯四氮唑、伊紅、玫紅酸、中性紅，掩蔽劑牛膽鹽、煌綠、龍膽紫、豬膽鹽，增效劑溴甲酚紫、羧甲基纖維素鈉，上述顯示劑、掩蔽劑及增效劑的遴選； 6、復(fù)合遴選； 7、通過快速顯色培養(yǎng)基各項(xiàng)指標(biāo)測試驗(yàn)證試驗(yàn)，其包括特異性試驗(yàn)、靈敏度試驗(yàn)、實(shí)際樣品檢驗(yàn)、假陰性、假陽性菌株鑒定、穩(wěn)定性試驗(yàn)、可重復(fù)性試驗(yàn)、競爭菌株及雜菌干擾試驗(yàn)、檢出時間、檢出率的試驗(yàn)驗(yàn)證復(fù)合遴選配方的可行性； 8、通過因素水平正交組合試驗(yàn)遴選出最適配方。
大腸桿菌復(fù)合快速顯色診檢試劑的配方為乳糖、蛋白胨、牛膽鹽、瓊脂、溴甲酚紫、羧甲基纖維素鈉、氯化鈉、磷酸氫二鉀、顯色劑為玫紅酸；優(yōu)選配比為(g/L) 乳糖25、蛋白胨15、牛膽鹽1.5、瓊脂15、顯色劑0.02、溴甲酚紫0.02、羧甲基纖維素鈉0.08、氯化鈉3、磷酸氫二鉀4； 如圖2所示，由上表可以看出大腸菌群的最適PH值范圍在6.7～7.5。
當(dāng)培養(yǎng)時長為12小時時PH值＝6.9時菌種啟動生長速度最快； 當(dāng)培養(yǎng)時長為24小時時PH值＝7.3時大腸菌群菌體濃度最高。
原因 當(dāng)培養(yǎng)基內(nèi)PH值過低時大腸菌群乳糖操縱子容易受到信息反饋抑制，菌體能量供應(yīng)不足，導(dǎo)致遲緩期增加，對數(shù)生長期延后并縮短； 當(dāng)培養(yǎng)基內(nèi)PH值過高時，菌體內(nèi)源蛋白合成受到抑制，誘導(dǎo)酶與合成酶的合成受阻。
因此我們選擇PH＝6.9做為快速檢測試劑的理想PH值。
最后，應(yīng)當(dāng)指出，以上實(shí)例僅是本發(fā)明較有代表性的例子。顯然，本發(fā)明的技術(shù)方案并不限于上述實(shí)施例，還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開的內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1、大腸桿菌復(fù)合快速顯色診檢試劑研發(fā)工藝流程，其特征在于該流程為
1、首先通過大腸菌群、質(zhì)控菌株(沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌)的活化及生化鑒定確定質(zhì)控手段；
2、根據(jù)目的菌株的需要篩選基本營養(yǎng)成分；
3、通過生長譜法驗(yàn)證微生物的生長繁殖需要適宜的營養(yǎng)環(huán)境，碳源、氮源、礦物質(zhì)、微量元素、生長因子等等都為微生物生長所必需，缺少其中任意一種，微生物就不能正常生長、代謝、繁殖；
5、顯示劑、掩蔽劑及增效劑的遴選；
6、復(fù)合遴選；
7、通過快速顯色培養(yǎng)基各項(xiàng)指標(biāo)測試驗(yàn)證試驗(yàn)，其包括特異性試驗(yàn)、靈敏度試驗(yàn)、實(shí)際樣品檢驗(yàn)、假陰性、假陽性菌株鑒定、穩(wěn)定性試驗(yàn)、可重復(fù)性試驗(yàn)、競爭菌株及雜菌干擾試驗(yàn)、檢出時間、檢出率的試驗(yàn)驗(yàn)證復(fù)合遴選配方的可行性；
8、通過因素水平正交組合試驗(yàn)遴選出最適配方。
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的大腸桿菌復(fù)合快速顯色診檢試劑，其特征在于大腸桿菌復(fù)合快速顯色診檢試劑的配方為乳糖、蛋白胨、牛膽鹽、瓊脂、溴甲酚紫、羧甲基纖維素鈉、氯化鈉、磷酸氫二鉀、顯色劑為玫紅酸；優(yōu)選配比為(g/L)
乳糖25、蛋白胨15、牛膽鹽1.5、瓊脂15、顯色劑0.02、溴甲酚紫0.02、羧甲基纖維素鈉0.08、氯化鈉3、磷酸氫二鉀4。
3、根據(jù)權(quán)利要求二所述的大腸桿菌復(fù)合快速顯色診檢試劑，其特征在于顯色劑為玫紅酸、溴甲酚紫、掩蔽劑為牛膽鹽、玫紅酸，增效劑為羧甲基纖維素鈉、溴甲酚紫及與基本成分的相關(guān)配比。
全文摘要
本發(fā)明涉及大腸桿菌復(fù)合快速顯色診檢試劑研發(fā)工藝流程，其特征在于1.首先通過大腸菌群、沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌的活化及生化鑒定確定質(zhì)控手段；2.根據(jù)目的菌株的需要篩選基本營養(yǎng)成分；3.通過生長譜法驗(yàn)證微生物的生長繁殖需要適宜的營養(yǎng)環(huán)境，碳源、氮源、礦物質(zhì)、微量元素、生長因子等等都為微生物生長所必需，缺少其中任意一種，微生物就不能正常生長、代謝、繁殖；4.顯示劑、掩蔽劑及增效劑的遴選；5.復(fù)合遴選；6.通過快速顯色培養(yǎng)基各項(xiàng)指標(biāo)測試驗(yàn)證試驗(yàn)，其包括特異性試驗(yàn)、靈敏度試驗(yàn)、實(shí)際樣品檢驗(yàn)、假陰性、假陽性菌株鑒定、穩(wěn)定性試驗(yàn)、可重復(fù)性試驗(yàn)、競爭菌株及雜菌干擾試驗(yàn)、檢出時間、檢出率的試驗(yàn)驗(yàn)證復(fù)合遴選配方的可行性；7.通過因素水平正交組合試驗(yàn)遴選出最適配方。
文檔編號G01N21/77GK101294190SQ20071015716
公開日2008年10月29日 申請日期2007年12月5日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月5日
發(fā)明者姚毓才 申請人:姚毓才