專利名稱：：用于檢測與膜通道相互作用的分子的分析系統(tǒng)和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及用于檢測與細(xì)胞膜通道相互作用的分子的分析系統(tǒng)和方法。更具體地，本發(fā)明涉及用于檢測離子通道的調(diào)節(jié)劑的閃爍迫近分析(SPA)系統(tǒng)和方法。
背景技術(shù)：
：細(xì)胞膜包括很多分子例如營養(yǎng)物、廢棄物和小分子可以通過的通道。離子通道是在所有細(xì)胞的膜中都可以發(fā)現(xiàn)的膜通道的一個例子。典型的離子通道包括跨膜蛋白或一組選擇性地使離子通過膜的脂雙層的蛋白質(zhì)。按照通過通道的主要離子，離子通道的例子包括鈉離子(Na+)通道、鉀離子(K+)通道、氯離子(Cl-)通道、和鈣離子(Ca2+)通道。離子通道可以是一直開放的，例如在鉀離子滲漏通道中發(fā)現(xiàn)的那樣。離子通道也可以是電壓門控性的，一個例子是鈉離子通道?？商娲?，離子通道可以是配體門控性的。配體門控性通道是離子的滲透性對于與特定配體例如神經(jīng)遞質(zhì)的結(jié)合敏感的離子通道。神經(jīng)遞質(zhì)的例子包括但不限于，乙酰膽堿、谷氨酸、甘氨酸、或γ-氨基丁酸。膜通道的類別可以包括非離子傳導(dǎo)，但卻允許其他分子通過來進(jìn)入和/或透出細(xì)胞的膜通道。在通道家族中，離子通道的結(jié)構(gòu)是相同的。每個通道包括不同的蛋白質(zhì)亞單位，其中該蛋白質(zhì)亞單位是由可以選擇性地在某些細(xì)胞類型中或在生物體發(fā)展和生長的某個時期表達(dá)的不同基因編碼的。離子通道在形成神經(jīng)和肌肉細(xì)胞的電活動性，以及控制神經(jīng)遞質(zhì)和激素的分泌方面發(fā)揮關(guān)鍵性的作用。由于在脊椎動物中與各種生理過程，例如肌收縮、胰島素從胰臟中的釋放和神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)遞質(zhì)的釋放之間的相關(guān)性，離子通道的研究對于制藥工業(yè)越來越重要。特別地，鈣通道是近來研究的重要靶點(diǎn)，因?yàn)樗鼈兪翘囟ǖ卣{(diào)節(jié)Ca2+進(jìn)出細(xì)胞的普遍存在的離子通道。Ca2+通過電壓控制進(jìn)入細(xì)胞，Ca2+通道發(fā)揮電信號的第二信使的作用起始事件例如收縮、分泌、突觸傳遞和基因表達(dá)。鈣通道可以分類為L-型(長效)、T-型(短暫)、N-型(既不是長效也不短暫，或者用于神經(jīng)元)、P-型(浦肯野細(xì)胞)、Q-型和R-型(抗性的)，這是根據(jù)各種因素例如激活和失活動力學(xué)、離子特異性和對藥物和毒素的敏感性分類的。除了低電壓激活(LVA)通道-T-型通道外，L-、N-、P-、Q-、和R-型通道都是高電壓激活的(HVA)。換句話說，HVA通道的激活閾值一般在-40mv以上。盡管據(jù)報(bào)道L-型和T-型Ca2+電流是范圍廣泛的細(xì)胞類型，但是在神經(jīng)元中N-、P-、Q-、和R-型電流才是最主要的。設(shè)計(jì)分析法來鑒定對離子通道特異性調(diào)節(jié)的新藥物會受到下列事實(shí)的干擾離子通道是由多種蛋白質(zhì)亞單位構(gòu)成的，僅僅是在通道處于膜的脂雙層中時才能評價(jià)離子通道的功能。特別地，該離子通道調(diào)節(jié)的化合物鑒定分析法會由于下列的因素而變得復(fù)雜1)低密度的天然通道表達(dá)；2)通過經(jīng)典的電壓箝位法難以固定(由于它們復(fù)雜的內(nèi)折結(jié)構(gòu)，許多候選的用于研究的離子通道占據(jù)了難以鉗住的細(xì)胞，這些細(xì)胞的例子包括樹突狀細(xì)胞、神經(jīng)末稍細(xì)胞和肌細(xì)胞)；和3)許多其他通道的電流會掩蔽離子通道較小的電流?，F(xiàn)有的鑒定離子通道調(diào)節(jié)劑的技術(shù)是產(chǎn)量、生理學(xué)關(guān)聯(lián)性、敏感性和堅(jiān)韌性之間妥協(xié)的產(chǎn)物。研究離子通道的一種廣泛接受的分析法是膜片鉗位術(shù)(Neher(1992)，Neuron，8605-612)。盡管一些公司試圖將膜片鉗過程自動化，但由于當(dāng)前該實(shí)驗(yàn)程序的電流復(fù)雜性和再現(xiàn)性使得其不適合用于高效篩選(HTS)應(yīng)用。使用電壓敏感性染料或放射性同位素的光學(xué)記錄法在電壓門控性離子通道包括鈣通道的研究中變得越來越流行。這些方法更容易自動化，并且為藥物篩選應(yīng)用提供了更高的效率(當(dāng)前，高達(dá)每天100,000個化合物)，可以為離子通道活性提供更靈敏的分析法(Xu，等人(2001)，DrugDiscoveryToday，61278-12887)。但是，這些分析經(jīng)常要求藥理學(xué)介入以激活所研究的通道，導(dǎo)致可能產(chǎn)生假陽性結(jié)果(Denyer等人(1998)，DrugDiscoveryToday，3323-332)。適合HTS的另一種分析技術(shù)是競爭性結(jié)合測定。典型地，真空過濾法用于定量放射性標(biāo)記的特定配體與離子通道的結(jié)合。配體與留在過濾器上的通道結(jié)合，用沖洗緩沖液洗去未結(jié)合的游離配體。該方法是比較麻煩的，因?yàn)樗ㄙM(fèi)了較長的時間，而且需要較大體積的沖洗緩沖液。此外，分離方法包括用沖洗緩沖液反復(fù)洗滌，依次產(chǎn)生了大量的放射性液體廢棄物，不僅處理昂貴，而且對于進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的人也有潛在的健康危險(xiǎn)。發(fā)明簡述本發(fā)明提供一種用于檢測預(yù)細(xì)胞膜通道相互作用的分子的分析系統(tǒng)和方法。更具體地，本發(fā)明涉及一種檢測離子通道的調(diào)節(jié)劑的閃爍迫近分析系統(tǒng)和方法。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的分析系統(tǒng)和方法可以提供下列優(yōu)點(diǎn)，例如較高效、降低所需來源和試劑的成本，和減少廢物。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供可以在單個反應(yīng)混合物中進(jìn)行的同質(zhì)分析。此外，本發(fā)明優(yōu)選提供一種系統(tǒng)，其減少了假陽性結(jié)果和/或背景，因此產(chǎn)生了可靠的和可再現(xiàn)的分析結(jié)果。在一個方面，本發(fā)明提供一種檢測與細(xì)胞膜通道相互作用的分子的分析系統(tǒng)，該分析系統(tǒng)包括a.包括一種或多種膜通道的細(xì)胞膜；b.載體，包含閃爍體和與細(xì)胞膜連接的偶聯(lián)劑；c.選擇與膜通道結(jié)合的配體，該配體包含激活閃爍體的標(biāo)記物，其中載體與細(xì)胞膜的連接和配體與膜通道的結(jié)合導(dǎo)致了從載體的閃爍體中發(fā)射，其中，當(dāng)與膜通道相互作用的受試分子存在時，改變了從載體的閃爍體中的發(fā)射。另一方面，本發(fā)明提供一種鑒定與細(xì)胞膜通道相互作用的分子的方法，該方法包括下列步驟a.提供包括一種或多種膜通道的細(xì)胞膜；b.在允許偶聯(lián)劑與細(xì)胞膜結(jié)合的條件下，培養(yǎng)細(xì)胞膜和包含閃爍體和偶聯(lián)劑的載體；c.在允許配體和膜通道結(jié)合的條件下，培養(yǎng)細(xì)胞膜和包含激活閃爍體的標(biāo)記物的配體；d.培養(yǎng)細(xì)胞膜和懷疑與膜通道相互作用的受試分子；e.在受試分子存在時和在受試分子不存在時，測定載體的閃爍體中的發(fā)射；和f.比較當(dāng)受試分子存在時從載體的閃爍體中的發(fā)射和當(dāng)受試分子不存在時從載體的閃爍體中的發(fā)射。附圖簡述加入并構(gòu)成本說明書一部分的附屬的附圖對本發(fā)明的若干方面進(jìn)行了解釋說明，其與優(yōu)選實(shí)施方案的描述一起，用于解釋本發(fā)明的原理。對附圖的簡要描述如下附圖1的曲線圖，說明的是在各小時里(X-軸)培養(yǎng)時間對于[125I]GVIA與離子通道結(jié)合的影響，用每分鐘計(jì)數(shù)(cpm)來表示(Y-軸)，其中離子通道是在從大鼠腦中分離的細(xì)胞膜中，空方格非特異性結(jié)合(NSB)；填充格總結(jié)合。附圖2的曲線圖，說明的是mg/孔(X-軸)的珠濃度對于[125I]GVIA與離子通道結(jié)合的影響，用cpm來表示(Y-軸)，其中離子通道是在從大鼠腦中分離的細(xì)胞膜中，空方格非特異性結(jié)合(NSB)；填充格總結(jié)合。附圖3的曲線圖，說明的是μg//孔(X-軸)的細(xì)胞膜濃度對于[125I]GVIA與離子通道結(jié)合的影響，用cpm來表示(Y-軸)，其中離子通道是在從大鼠腦中分離的細(xì)胞膜中，空方格非特異性結(jié)合(NSB)；填充格總結(jié)合。附圖4的曲線圖，說明的是微微摩爾，pM(X-軸)的配體濃度對于[125I]GVIA與離子通道結(jié)合的影響，用cpm來表示(Y-軸)，其中離子通道是在從大鼠腦中分離的細(xì)胞膜中，空方格非特異性結(jié)合(NSB)；黑方格總結(jié)合；黑三角背景(BKG)。附圖5的曲線圖，說明的是pM(X-軸)的配體濃度對于[125I]GVIA與離子通道結(jié)合的影響，用cpm來表示(Y-軸)。該附圖中的數(shù)據(jù)是附圖4數(shù)據(jù)的重繪圖。附圖6的曲線圖，說明的是競爭性配體的存在對于[125I]GVIA與離子通道結(jié)合的影響，其中離子通道是在從大鼠腦中分離的細(xì)胞膜中。競爭性配體濃度的log值在X-軸中表示，[125I]GVIA的結(jié)合，單位為cpm在Y軸表示，方格CTX-GVIA；圓CTX-MVIIA；黑三角CTX-MVIIC；空三角ω-Agatoxin。附圖7的曲線圖，說明的是GVIA與細(xì)胞膜中[125I]的膜通道的總結(jié)合(用方格表示)，和從大鼠中分離的細(xì)胞膜的非特異性結(jié)合(用三角表示)，用z因素來評價(jià)。樣本數(shù)在X軸表示，[125I]GVIA的結(jié)合，單位為cpm在Y軸表示。附圖8的曲線圖，說明的是使用本發(fā)明的一個實(shí)施方案，[125I]MVIIA或[125I]MVIIC與離子通道的結(jié)合，其中離子通道是在從大鼠腦中分離的細(xì)胞膜中?？偨Y(jié)合用灰色條來表示，非特異性結(jié)合用白色條來表示。附圖9的曲線圖，說明的是使用本發(fā)明的一個實(shí)施方案，[125I]GVIA或[125I]MVIIA與離子通道的結(jié)合，其中離子通道從IMR32細(xì)胞中分離出來的。總結(jié)合用灰色條來表示，非特異性結(jié)合用白色條來表示。附圖10的曲線圖，說明的是[125I]MVIIA與細(xì)胞膜中的離子通道的結(jié)合，其中該細(xì)胞膜與用麥胚凝集素(WGA-Ysi)或聚賴氨酸(PL-Ysi)包被的硅酸釔珠預(yù)偶聯(lián)?？偨Y(jié)合用灰色條來表示，非特異性結(jié)合用白色條來表示。發(fā)明詳述將引用的所有出版物都通過參考引入本文。除非另有說明，本文使用的所有技術(shù)和科技術(shù)語都與本發(fā)明所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
普通技術(shù)人員的一般理解具有同樣的含義。本文使用的術(shù)語“包含”、“含有”、“具有”和“包括”都是開放的和非限制性的。本文使用的“受試分子”是指懷疑與細(xì)胞膜通道相互作用的分子，將其用于本文所描述的分析系統(tǒng)和方法?！笆茉嚪肿印薄ⅰ笆茉嚮衔铩?、和“懷疑與膜通道相互作用的分子”在本文中是可以互換使用的。本發(fā)明的分析系統(tǒng)和方法可以用于檢測與膜通道以任何方式相互作用的受試分子，其中該方式影響了膜通道結(jié)合配體的能力，根據(jù)對該教導(dǎo)的回顧上述含義將是可以理解的。本文使用的離子通道“調(diào)節(jié)劑”包括以影響離子通道活性的方式與離子通道相互作用的分子。調(diào)節(jié)劑的示范性例子包括降低、阻斷、阻止、延遲激活，使其失活，失敏或向下調(diào)節(jié)通道活性，或者加速或增強(qiáng)離子通道失活的分子，例如通道抑制劑或阻滯劑。調(diào)節(jié)劑的其他示范性例子包括增加、開放、激活、促進(jìn)、增強(qiáng)激活，敏化或向上調(diào)節(jié)通道活性，或延遲或減緩?fù)ǖ朗Щ畹姆肿?，例如通道激活劑或開放劑。離子通道“調(diào)節(jié)劑”與感興趣的膜通道的相互作用可以是直接或間接的。直接相互作用的例子包括分子與膜通道的配體結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合。間接相互作用包括以影響膜通道與配體結(jié)合的方式，與膜通道的其他任意位點(diǎn)之間的相互作用。這些間接的相互作用可以包括例如具有抑制劑或激活劑功能的分子。本文使用的“載體”是包含閃爍體和偶聯(lián)劑的物理顆粒?？梢蕴峁┤我膺m當(dāng)結(jié)構(gòu)的載體以摻入閃爍體和偶聯(lián)劑，使得閃爍體可用于接受和發(fā)射能量，偶聯(lián)劑可用于與細(xì)胞膜連接。載體的例子是閃爍迫近分析珠(SPA珠)、其可以是商業(yè)購買的，例如來自PharmaciaAmersham。也可以考慮其他形式的載體，例如乳膠顆?；蚱渌Y(jié)構(gòu)。任選地，載體可以進(jìn)一步包括波長移動劑，例如1，4-二(5-苯基-2-唑基)苯；9，10-二苯基蒽；1，4-二(2-甲基苯乙烯基)-苯等等。當(dāng)存在時，波長移動劑的功能是吸收閃爍體發(fā)射的光，和再發(fā)射波長更長的光，其可以與在閃爍計(jì)數(shù)器中使用的光敏監(jiān)測器更好地匹配。載體的“閃爍體”是一種對射線敏感的試劑，其在射線照射下會閃爍(例如，發(fā)射光能)。閃爍體可以是物理或化學(xué)地?fù)饺氲捷d體中的。當(dāng)用放射標(biāo)記的反應(yīng)試劑刺激時，受激的閃爍體釋放出可以由閃爍計(jì)數(shù)器或其他監(jiān)測裝置例如光電倍增管檢測的光能。閃爍體的例子包括但不限于，載有鈰的玻璃，基于稀土鯨蠟醇的物質(zhì)例如硅酸釔、鑭系稀土金屬化合物，或閃爍聚合物例如聚(乙烯基甲苯)。閃爍體的例子也包括熒光物質(zhì)，當(dāng)將其與放射性標(biāo)記的反應(yīng)試劑緊密靠近時，其會被刺激而發(fā)出光能。在本發(fā)明中有用的熒光材料包括在閃爍計(jì)數(shù)領(lǐng)域公知的任意的有機(jī)熒光物。一般地，可以選擇適當(dāng)?shù)臒晒馕镔|(zhì)，例如從OrganicScintillationDetection，E.SchramandR.Lombaert，ElsevierPublishingCo.，1963的“有機(jī)熒光物”和“有機(jī)閃爍體”中選擇。熒光物質(zhì)的例子包括2，5-二苯唑(PPO)；唑和1，3，4-二唑的衍生物，例如2-(4-叔丁基苯基)-5-(4-聯(lián)二苯基)-1-3，4-二唑和2，5-二苯基唑；蒽；9，10-二苯基蒽；對-聯(lián)三苯基、對四聯(lián)苯基和它們的衍生物；2-(4-聯(lián)二苯基)-5-(4-叔丁基-苯基)-1，3，4-二唑(丁基PBD)；PBD；2-(1-萘基)-5-苯基唑(α-NPO)；等等?？梢耘cβ射線形式(例如從14C、35S、33p和125I中發(fā)射的)的射線使用的優(yōu)選閃爍體的例子是二苯基唑(PPO)。許多物質(zhì)可以為載體的閃爍體提供粘合劑、基質(zhì)或其他載體。適當(dāng)?shù)恼澈衔镔|(zhì)的例子包括聚丙烯酰胺、丙烯酰胺、瓊脂糖、聚苯乙烯、聚丙烯、聚碳酸酯、Sepharose等等。珠，例如Sepharose4B珠是商業(yè)可用的(來自PharmaciaFineChemicals，Uppsala，Sweden)。將閃爍體摻入到載體中的方法將取決于下列因素，例如用于形成載體的物質(zhì)、閃爍體、在載體中需要的閃爍體的負(fù)載密度等等。在一種摻入方法中，例如，將閃爍體吸附到形成載體的物質(zhì)中。根據(jù)該特別的實(shí)施方案，可以選擇閃爍體的可溶性溶劑。優(yōu)選地，閃爍體在水中是不溶的，在這些實(shí)施方案中，所選擇的溶劑與水是可混溶的。形成載體的物質(zhì)在溶劑中培養(yǎng)，以使該物質(zhì)脫水。然后，在能將閃爍體吸附到該物質(zhì)的條件下，該物質(zhì)可以在包含閃爍體的溶劑中培養(yǎng)，因此形成了包含閃爍體的載體。排出過量的溶劑，加入水或緩沖鹽水溶液使閃爍體沉淀出來，因此，將閃爍體固定在載體的物質(zhì)中。將閃爍體集中到載體例如珠中的適當(dāng)方法在U.S.4,568,649和EP154,734中進(jìn)行了描述。載體的“偶聯(lián)劑”是與細(xì)胞膜，例如通過與細(xì)胞膜結(jié)合而連接的分子。這些連接可以是非特異性的或特異性的。例如，當(dāng)連接是非特異性時，該連接依賴于細(xì)胞膜的一般性質(zhì)，例如其負(fù)電荷。在非特異性連接的一個例子中，聚-L-賴氨酸可以與帶負(fù)電荷的細(xì)胞膜結(jié)合。當(dāng)是特異性連接時，該連接取決于，例如位于細(xì)胞膜表面內(nèi)或上的特異性蛋白質(zhì)。例如，麥胚凝集素與在膜表面包含低聚糖的N-乙?；?β-D-葡糖胺結(jié)合；抗生物素蛋白鏈菌素與生物素化的蛋白質(zhì)、肽和寡核苷酸結(jié)合；金黃色釀膿葡萄球菌蛋白A可以用于與抗體-抗原絡(luò)合物結(jié)合；和可以選擇在細(xì)胞膜的特異性位點(diǎn)結(jié)合的抗體。偶聯(lián)劑的例子包括聚-L-賴氨酸、麥胚凝集素、抗生物素蛋白鏈菌素、金黃色釀膿葡萄球菌蛋白A、抗體等等。盡管文獻(xiàn)已經(jīng)報(bào)道了偶聯(lián)劑與細(xì)胞膜結(jié)合的能力，但本發(fā)明并不要求在偶聯(lián)劑和細(xì)胞膜本質(zhì)上有結(jié)合作用。相反，在偶聯(lián)劑和在其表面保留有載體的細(xì)胞膜之間任意連接，以進(jìn)行本發(fā)明的分析，對于本發(fā)明都是合適的。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，偶聯(lián)劑與細(xì)胞膜的親和力的范圍是約50nM到約1pM?？梢杂萌我膺m當(dāng)?shù)姆椒▽⑴悸?lián)劑與載體連接，這取決于下列因素例如用于形成載體的物質(zhì)、閃爍體、所選擇的特定偶聯(lián)劑、偶聯(lián)劑的需要的負(fù)載密度等等。在一些實(shí)施方案中，用連接劑例如溴化氰、碳二亞胺、鞣酸、戊二醛、或聚乙二醇將偶聯(lián)劑摻入到載體中?？梢詫⑦B接劑摻入到載體中，以與需要的偶聯(lián)劑共價(jià)結(jié)合。在摻入偶聯(lián)劑后，可以使用阻滯劑(例如甘氨酸)來阻斷珠上剩余的激活位點(diǎn)，因此減少了細(xì)胞膜與載體的直接結(jié)合，而不是與偶聯(lián)劑的結(jié)合。可以將偶聯(lián)劑摻入到載體的物質(zhì)中。所述摻入可以是物理(例如，嵌入)或化學(xué)的(例如，化學(xué)結(jié)合)?？商娲?，偶聯(lián)劑可以包被到載體的表面。將偶聯(lián)劑摻入到載體中的方式并不是關(guān)鍵性的，只要根據(jù)本發(fā)明的分析方法，偶聯(lián)劑可以有效地與細(xì)胞膜連接即可。在一個說明性的實(shí)施方案中，用溴化氰激活Sepharose4B珠，通過將載體置于包含蛋白A或抗體的溶液和適當(dāng)?shù)木彌_液中，以便將金黃色釀膿葡萄球菌蛋白A或細(xì)胞膜蛋白質(zhì)的特異性抗體形式的偶聯(lián)劑摻入到載體中。然后，洗去過量的蛋白A(或抗體)，用適當(dāng)?shù)淖铚├绺拾彼嶙钄鄾]有與蛋白A(或抗體)連接的載體剩余的激活位點(diǎn)。本文中使用的“激活閃爍體的標(biāo)記物”是一種能激活閃爍體并與膜通道的配體連接的的試劑。根據(jù)在載體中包括的閃爍體的類型來選擇激活閃爍體的標(biāo)記物。例如，激活閃爍體的標(biāo)記物可以包含放射性同位素。優(yōu)選的放射性同位素在水中僅有有限的放射性，以使得在大部分情況下僅僅是結(jié)合到膜通道的標(biāo)記的配體上的放射性同位素在實(shí)際上激活了在其上結(jié)合的載體的閃爍體。適當(dāng)?shù)姆派湫酝凰氐睦影?25I、3H、14C、59Fe、33P、35S、38Sr等等。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，當(dāng)所選擇的閃爍體是PPO時，可以使用發(fā)射β射線的同位素或γ射線發(fā)射中的俄歇電子。用適當(dāng)?shù)姆椒▽⒓せ铋W爍體的標(biāo)記物摻入到配體中，該方法基本上不會影響配體結(jié)合膜通道的能力(例如特異性)。用于標(biāo)記的方法可以根據(jù)所使用的激活閃爍體的標(biāo)記物的類型而不同。例如，放射性同位素的標(biāo)記可以通過用相應(yīng)的放射性同位素取代配體的一個原子而實(shí)現(xiàn)。根據(jù)該特別的實(shí)施方案，例如用氘(3H)取代一個或多個氫原子，用碳-14(14C)取代一個或多個碳原子，或用鍶-38(Sr)取代一個或多個鍶原子。在另一個實(shí)施方案中，與在配體中取代原子相反，可以將同位素加入到配體中。一般使用的放射性同位素的例子是碘-125(125I)和鐵-59(59Fe)。在生物學(xué)有機(jī)體或者這些有機(jī)體的一部分能合成蛋白質(zhì)時，可以通過將有機(jī)體和適當(dāng)?shù)姆派湫詷?biāo)記前體例如蛋氨酸-35(35S)一起培養(yǎng)來進(jìn)行標(biāo)記，以使得有機(jī)體將同位素?fù)饺氲狡洚a(chǎn)物中。本發(fā)明提供檢測與膜通道相互作用的分子的系統(tǒng)和方法，在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及檢測與離子通道相互作用的分子的系統(tǒng)和方法。為了解釋說明，本發(fā)明也將其描述成了離子通道調(diào)節(jié)劑。但是，根據(jù)本發(fā)明的顯而易見地，利用所述技術(shù)，本發(fā)明的分析系統(tǒng)和方法可以用于鑒別許多不同類型的分子，其與任意類型的膜通道相互作用。本發(fā)明的分析系統(tǒng)和方法用于檢測與細(xì)胞膜通道相互作用的分子。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的分析系統(tǒng)和方法用于鑒定離子通道的調(diào)節(jié)劑。本發(fā)明提供一種鑒定與膜通道相互作用的分子的方法，該方法包括下列步驟(a)提供包括一種或多種膜通道的細(xì)胞膜；(b)在允許偶聯(lián)劑與細(xì)胞膜結(jié)合的條件下，培養(yǎng)細(xì)胞膜和包含閃爍體和偶聯(lián)劑的載體；(c)在允許配體和膜通道結(jié)合的條件下，培養(yǎng)細(xì)胞膜和包含激活閃爍體的標(biāo)記物的配體；(d)培養(yǎng)細(xì)胞膜和懷疑與膜通道相互作用的受試分子；(e)在受試分子存在時和在受試分子不存在時，測定載體的閃爍體中的發(fā)射；和(f)比較當(dāng)受試分子存在時從載體的閃爍體中的發(fā)射和當(dāng)受試分子不存在時從載體的閃爍體中的發(fā)射。收集步驟(f)的信息用于評價(jià)與感興趣的細(xì)胞膜相互作用的分子。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明用于檢測膜通道的調(diào)節(jié)劑。一般說來，一方面，本發(fā)明利用了2個部分，載體和配體，它們優(yōu)選在細(xì)胞膜上相互作用，來輸出指示受試化合物與膜通道相互作用的信息。利用摻入到載體中并包含閃爍體的偶聯(lián)劑將載體與細(xì)胞膜連接。配體與細(xì)胞膜的膜通道特異性結(jié)合，并包含激活閃爍體的標(biāo)記物。設(shè)計(jì)該分析，以利用(載體的)閃爍體和(配體的)激活閃爍體的標(biāo)記物之間的空間間隔來確定調(diào)節(jié)劑與感興趣的膜通道之間的相互作用。在一個說明性的實(shí)施方案中，配體的激活閃爍體的標(biāo)記物是放射性同位素，例如125I。125I-標(biāo)記的配體與膜通道結(jié)合，載體與細(xì)胞膜結(jié)合。當(dāng)125I發(fā)射波長為λ1的射線時，載體就接收到了該射線，然后載體的閃爍體發(fā)射可以檢測的波長為λ2的熒光輻射。由于在水中125I射線的平均范圍相對較短，懸浮著的反應(yīng)物的任何水性介質(zhì)都可以作為發(fā)射的有效吸收體。結(jié)果，未結(jié)合的125I將不能形成可檢測的信號輸出；相反，未結(jié)合的125I中的發(fā)射將會被水性介質(zhì)吸收?？梢杂脺y定125I的能量門控的標(biāo)準(zhǔn)液體閃爍計(jì)數(shù)系統(tǒng)來進(jìn)行輸出信號的檢測。一般地，當(dāng)激活閃爍體的標(biāo)記物發(fā)射的能量在水中具有有限范圍的距離時，未結(jié)合的配體典型地距離閃爍體太遠(yuǎn)而不能刺激閃爍體。結(jié)果，在測定分析信號前就不需要洗去膜絡(luò)合物或除去包含激活閃爍體的標(biāo)記物的未結(jié)合的配體。因此，該分析系統(tǒng)和方法提供了一種同質(zhì)的系統(tǒng)，在分析結(jié)果讀數(shù)前避免了另外的洗滌和/或分離步驟。優(yōu)選地，載體具有適合所述接近分析的大小。例如在優(yōu)選的實(shí)施方案中，優(yōu)化載體的典型直徑，以允許在載體中包含的閃爍體能足夠地物理接近標(biāo)記的配體，當(dāng)載體和標(biāo)記的配體分別與細(xì)胞膜和膜通道連接時，使激活閃爍體的標(biāo)記物發(fā)射的能量可以到達(dá)載體的閃爍體，和導(dǎo)致閃爍體發(fā)射能量。典型地，載體的直徑小于閃爍體的激活范圍。例如，聚(乙烯基甲苯)(PVT)珠的典型直徑是約5μm，而硅酸釔(YSi)的典型直徑是約2.5μm。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，載體的濃度范圍是分析反應(yīng)溶液的約0.75-5mg/ml。優(yōu)選地，載體與細(xì)胞膜培養(yǎng)的溫度范圍是室溫(20-25℃)到約37℃，pH條件是約4到約8。本發(fā)明提供競爭性結(jié)合測定來檢測與感興趣的膜通道相互作用的分子。如上述討論，標(biāo)記的配體與感興趣的膜通道結(jié)合。當(dāng)在分析混合物中存在分子和標(biāo)記的配體并且存在與感興趣的膜通道相互作用的分子時，因此，兩個部分將獲競爭性地與膜通道結(jié)合。一般地說，如果該分子與膜通道相互作用(例如，結(jié)合或以其他方式影響與配體的結(jié)合)時，標(biāo)記的配體將保留在溶液中。由于在水性溶液中激活閃爍體的標(biāo)記物發(fā)射較短，因此溶液中標(biāo)記物的發(fā)射將會在溶液中終止，并不能增加要檢測的任意輸出信號。換言之，根據(jù)下列的方法來測定配體與載體的接近當(dāng)配合和載體都在激活范圍內(nèi)時，配體誘導(dǎo)載體的閃爍體發(fā)射可檢測的能量。激活范圍是與反應(yīng)溶液中激活閃爍體的標(biāo)記物中發(fā)射的范圍相同的載體的距離。該分析是根據(jù)對發(fā)生兩個事件形成的絡(luò)合物的測定(1)標(biāo)記的配體與膜通道的結(jié)合和(2)載體與細(xì)胞膜的結(jié)合，形成了配體/膜通道-載體/細(xì)胞膜絡(luò)合物?？梢岳迷摐y定來檢測一種或多種分子，其通過相互性作用，競爭性地取代標(biāo)記的配體至激活范圍以外的位置。如果一種或多種分子與膜通道相互作用(例如，結(jié)合)，取代的標(biāo)記的配體將不能與膜通道結(jié)合，因此保留在溶液中和激活范圍之外。因此，水性的反應(yīng)溶液將會吸收標(biāo)記的配體中的發(fā)射。從載體的閃爍體中的輸出信號也相應(yīng)地減少。另一方面，如果一種或多種分子沒有與膜通道相互作用，將會有更多的標(biāo)記的配體與膜通道結(jié)合，因此在激活范圍之內(nèi)。從載體的閃爍體中的輸出信號也相應(yīng)地增加。優(yōu)選地，可以通過到達(dá)監(jiān)測器的λ2帶輻射的強(qiáng)度(或通過與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較來確定)來推斷形成的標(biāo)記的配體/膜通道-載體/細(xì)胞膜絡(luò)合物的程度。在本發(fā)明的實(shí)施方案中，反應(yīng)介質(zhì)是含水的，分析期間pH的范圍是約3到約9，介質(zhì)的溫度范圍是約25℃到約37℃。根據(jù)本發(fā)明，在允許偶聯(lián)劑與細(xì)胞膜連接的條件下，培養(yǎng)細(xì)胞膜和包含閃爍體和偶聯(lián)劑的載體。該細(xì)胞膜包含一種或多種通道。根據(jù)本發(fā)明，細(xì)胞膜可以包含完整細(xì)胞，部分的細(xì)胞膜，和/或膜囊?？梢詮娜我膺m當(dāng)類型的動物細(xì)胞，包括人、大鼠等等中獲得細(xì)胞膜?？梢苑蛛x完整細(xì)胞，并用細(xì)胞制備領(lǐng)域已知的方法來處理，包括全組織的機(jī)械或酶分裂，或細(xì)胞培養(yǎng)。在一些實(shí)施方案中，例如當(dāng)細(xì)胞膜制備方法可能破壞或使細(xì)胞受體失活時，優(yōu)選可以利用完整細(xì)胞作為細(xì)胞膜的來源在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，可以在可控的條件下破壞膜，得到部分的細(xì)胞膜和/或膜囊。在一些實(shí)施方案中，部分的細(xì)胞膜和/或囊可以為本發(fā)明的分析和方法提供更簡單的形式，因?yàn)樵诜治銎陂g不用過多地關(guān)注細(xì)胞溶解和/或切力。細(xì)胞膜可以來自組織和/或培養(yǎng)的細(xì)胞。破壞細(xì)胞膜并使它們穩(wěn)定的方法是本領(lǐng)域已知的。處理組織得到細(xì)胞膜的方法也是本領(lǐng)域已知的。包含在細(xì)胞膜內(nèi)的膜通道可以是通過細(xì)胞內(nèi)源性表達(dá)的天然膜通道，或誘導(dǎo)進(jìn)入細(xì)胞的外源性DNA重組表達(dá)的膜通道。細(xì)胞膜的分離是本領(lǐng)域已知的，用于膜通道(例如離子通道)的構(gòu)建重組宿主細(xì)胞的方法也是本領(lǐng)域已知的。在另一個實(shí)施方案中，可以把膜通道摻入到人造膜中(參見Cornell，BA等人(1997)，Nature387，580-583)。例如，這些人造膜可以包括拴在包含離子通道的類脂膜上的電極，并形成離子儲庫。本發(fā)明的分析系統(tǒng)和方法可以用于各種的膜通道。這些膜通道包括離子通道、配體門控通道等等。當(dāng)本說明書用一個特定種類的通道，例如離子通道描述本發(fā)明時，顯而易見地本文的技術(shù)也可以用于在細(xì)胞膜中存在的各種膜通道。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，在每200μl分析反應(yīng)溶液中存在0.5μg或更多的細(xì)胞膜。優(yōu)選地，在每200μl分析反應(yīng)溶液中存在約0.5到約20μg的細(xì)胞膜。在另一個方面，細(xì)胞膜優(yōu)選的濃度是約2.5mg/ml或更大，優(yōu)選范圍是分析反應(yīng)溶液的約2.5到約100mg/ml。在細(xì)胞膜中包含的膜通道的量將根據(jù)細(xì)胞膜的來源而不同。例如，在天然產(chǎn)生的細(xì)胞膜中，細(xì)胞膜制品中通道的濃度可以根據(jù)種類而不同(例如人與大鼠膜)。當(dāng)確定在分析中包含的細(xì)胞膜的量時，可以考慮膜的來源，以達(dá)到需要的膜通道濃度。根據(jù)本發(fā)明，在允許配體和膜通道結(jié)合的條件下，培養(yǎng)細(xì)胞膜和包含激活閃爍體的標(biāo)記物的配體。為了本文的討論，包括激活閃爍體的標(biāo)記物的配體也可稱作“標(biāo)記的配體”。選擇該配體來與感興趣的膜通道結(jié)合，在一些特別的實(shí)施方案中，該配體甚至能阻斷貫穿膜通道的電導(dǎo)性。除了當(dāng)它們靠近時能夠刺激閃爍體的激活閃爍體的標(biāo)記物外，本發(fā)明的配體基本上是生物學(xué)和化學(xué)鑒定的未標(biāo)記的配體。在上句中，“基本上生物學(xué)和化學(xué)鑒定”是指以與未標(biāo)記的配體(也就是說，缺乏激活閃爍體的標(biāo)記物的配體)相似的方式將包含激活閃爍體的標(biāo)記物的配體配制成可以與感興趣的膜通道相互作用。換言之，激活閃爍體的標(biāo)記物的摻入不會顯著干擾配體的結(jié)構(gòu)或功能，特別地，不會顯著干擾配體和感興趣的膜通道之間的相互作用。根據(jù)本發(fā)明，適當(dāng)?shù)呐潴w的例子包括抗體、肽、或小分子。適當(dāng)?shù)目贵w的例子包括與感興趣的膜通道特異性結(jié)合的任意抗體。根據(jù)本發(fā)明，抗體可以是單克隆或多克隆的，其可以包含完全長度的蛋白質(zhì)或片段(例如，F(xiàn)c或F(ab)’)。已經(jīng)鑒定了許多與膜通道結(jié)合的肽，其中任意一個都可以根據(jù)本發(fā)明使用。例如，對于鈣通道，配體肽包括但不限于spider和conesnail肽毒素(參見例如Mintz等人，(1992)Neuron985-95；Randall等，(1995)J.Neurosci.152995-3012)。對于鈉通道，很好地研究過的特異性阻滯劑包括但不限于蝎毒和腔腸動物觸須的刺細(xì)胞中的肽毒素、熱帶蛙分泌的生物堿毒素、和其他從許多類型的植物的葉子中獲得的脂溶性、殺蟲性物質(zhì)(參見Hille，Ionicchannelsofexcitablemembranes，2nded.，SinauerAssociates，Inc.，Sunderland，Mass)。對于鉀通道，適當(dāng)?shù)呐潴w肽的離子包括但不限于，毒素，例如在下表中所列出的那些。適當(dāng)?shù)呐潴w和它們相應(yīng)的離子通道的例子概述于下表I中。當(dāng)配體是天然產(chǎn)生時，也指明了配體的來源。表I.用于離子通道分析的示例性配體離子通道肽來源Ca2+通道N-型ω-芋螺毒素MVILAConusmagnusω-芋螺毒素GVIAConusgeographusω-芋螺毒素CVID(AM336)Conussp.ω-芋螺毒素CVIAConussp.ω-芋螺毒素CVIBConussp.ω-芋螺毒素CVICConussp.ω-芋螺毒素SVIBConusstriatusω-芋螺毒素TVIAConussp.ω-芋螺毒素CNVIIAConussp.ω-芋螺毒素PtHAConussp.ω-AgoIHAgelenopsissp.ω-芋螺毒素MVIICConusmagnusP/Q-型ω-agatoxin-IVAAgelenopsisapertaQ-型ω-芋螺毒素MVIICConusmagnusT-型咪拉地爾L-型1，4-二氫吡啶類苯烷基胺苯并噻氮類BAYK8644Na+通道河豚毒素Tetradonstellatus和Tetraodontiformesorder的其它魚類局部麻醉藥(例如利多卡因)μ-芋螺毒素GIIIB肽毒素Conusgeographustoxin抗驚厥藥(例如拉莫三嗪、苯妥英)抗心律不齊藥(例如奎尼丁、美西律)蛙毒Phyllobatesaurotaenia烏頭堿Aconitumsp.藜蘆定堿Veratumsp.蝎毒LeiurusquinquestriatusATXIIAnthopleuraxanthogrammicaPhyrethorids(殺蟲劑)Chrysanthemumsp.雙鞭甲藻神經(jīng)毒素PtychodiscusbrevisK+通道Kv1.1，1.2，1.6α-樹突毒素肽DendroaspisangusticepsKv1.3北非蝎毒素LeiurusquinquestriatusHebreausKv1.3瑪格毒素CentruoidesmargaritatusKv1，Kv3，Kv4.24-氨基吡啶類Kv1.1，1.6，2.1，Kv3四乙銨離子Ca2+-激活的K+(BK/hslo)Paxilline生物堿毒素PenicilliumpaxilliIberiotoxin肽ButhustamulusNS1608特別地，首先從Conusgeographus毒液中分離出來的GVIA是一種27個氨基酸的肽，是N-型鈣通道的有效和選擇性阻滯劑(Whorlow等人，ClinExpPharmacolPhysiol。1996，23(1)16-21)。MVIIA(也稱作zincontide或SNX-111)是首先從Conusmagnus的毒液中分離出來的，其是一種25個氨基酸的肽，是有效的N-型鈣通道阻滯劑(Olivera等人，(1987)Biochemistry262086-2090)。從Conusmagnus的毒液中分離出來的MVIIC是一種26個殘基的肽，是N-型鈣通道的弱阻滯劑，是P/Q-型鈣通道有效的阻滯劑(Hillyard等人，(1992)Neuron969-77；Wheeler等人，(1994)Science264107-111；Sasaki等人，(2000)FebsLetters466125-129)。ω-AgatoxinTVA是從spiderAgelenopsisaperta中分離出來的，是一種48個氨基酸的肽，據(jù)報(bào)道可以與P/Q-型鈣通道結(jié)合(Mintz等人，(1992)Neuron985-95)。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該配體包含與感興趣的小分子結(jié)合的小分子。適當(dāng)?shù)男》肿拥碾x子包括拮抗類藥物(鈣通道)；以及四乙銨離子，和抗心律不齊藥例如硝苯地平和奎尼丁(鉀通道)；有機(jī)分子例如二磺基二苯乙烯類、芳基胺苯甲酸鹽和磺酰脲類化合物(氯通道)。此外，可以使用晶體生物堿辣椒辣素。對于配體門控通道，根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方案可以使用內(nèi)源性特異性配體例如乙酰氯、谷氨酸、甘氨酸、或γ-氨基丁酸。配體與感興趣的膜通道的親和力可以影響分析的靈敏度。例如，高親和力的配體可以不會檢測到結(jié)合較弱的分子；兩一方面，低親和力的配體會導(dǎo)致檢測到的非特異性結(jié)合增加。因此，在優(yōu)選的實(shí)施方案中，選擇配體的親和力在需要的范圍內(nèi)，例如分析獲得的EC50值與傳統(tǒng)方法例如膜片鉗獲得的值具有良好的相關(guān)性。例如，配體對膜通道的親和力的優(yōu)選范圍是約1pM到約50nM，更優(yōu)選的范圍是約5pM到50pM。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所存在的配體的量的范圍是約10pM到約50pM，優(yōu)選約12pM到約20pM，最優(yōu)選約15pM。許多配體是容易從各種商業(yè)來源得到的放射性標(biāo)記的形式。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，控制反應(yīng)試劑和反應(yīng)條件的選擇，以減少標(biāo)記的配體的非特異性結(jié)合。根據(jù)這些實(shí)施方案，這些不想要的非特異性結(jié)合包括標(biāo)記的配體與任何感興趣的膜通道以外的位點(diǎn)的結(jié)合。例如，非特異性結(jié)合可以包括膜脂和位于膜中的其它蛋白質(zhì)。在其它情況下，非特異性結(jié)合包括標(biāo)記的配體與載體的直接結(jié)合，或者與分析容器本身的結(jié)合。非特異性結(jié)合是不可飽和的，但是與在樣品中存在的配體總濃度呈近似線性。當(dāng)發(fā)生時，非特異性結(jié)合增加了背景計(jì)數(shù)，因此減少了分析中測定到的特異性信號。一般地，觀測到的總配體結(jié)合是配體與相應(yīng)受體(在存在的情況下，膜通道)的可飽和的(雙曲線的)特異性結(jié)合和配體與各種位點(diǎn)(即感興趣的膜通道以外的位點(diǎn))的非飽和(線性的)結(jié)合的和。該關(guān)系可以如下表達(dá)(總結(jié)合)＝(與膜通道的特異性結(jié)合)+(與其他位點(diǎn)的非特異性結(jié)合)。典型地，通過在過量非標(biāo)記的配體存在下進(jìn)行結(jié)合研究來間接地獲得特異性結(jié)合的組分值。非標(biāo)記的配體與標(biāo)記的配體競爭性地與膜通道結(jié)合。由于非標(biāo)記的配體過量，特異性結(jié)合位點(diǎn)(膜通道結(jié)合位點(diǎn))對于實(shí)驗(yàn)的配體將是不可用的，因此其結(jié)合被限制于非特異性位點(diǎn)。減少非特異性結(jié)合，包括根據(jù)組分彼此之間的競爭性和/或分析方式選擇適當(dāng)分析組分。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，例如，當(dāng)ω-芋螺毒素用作配體時，優(yōu)選的載體是用麥胚凝集素包被的PVT珠。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，非特異性結(jié)合維持在提供最佳信噪比的信號的水平。此外，可以優(yōu)化分析條件例如緩沖液的pH，特異性離子或有機(jī)分子的存在，和/或培養(yǎng)時間來減少非特異性結(jié)合。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，在緩沖液系統(tǒng)中可以包括添加物以減少非特異性結(jié)合。典型的NSB減少劑包括牛血清白蛋白(BSA)，聚乙烯亞胺(PEI)鹽和洗滌劑。此外，分析容器例如微量滴定板是由非結(jié)合表面(NBS)的材料構(gòu)成的，這些材料可以減少配體與分析容器的非特異性結(jié)合。根據(jù)本發(fā)明，將細(xì)胞膜和懷疑與膜通道相互作用的受試分子培養(yǎng)。根據(jù)本發(fā)明，載體和細(xì)胞膜連接，包含激活閃爍體的標(biāo)記物的配體與感興趣的膜通道結(jié)合。當(dāng)這發(fā)生時，刺激包含在載體中的閃爍體來發(fā)射能量。然后比較當(dāng)受試分子存在時閃爍體的發(fā)射和當(dāng)沒有受試分子時閃爍體的發(fā)射。當(dāng)受試分子存在時發(fā)射的改變(例如，減小)標(biāo)明了受試分子與感興趣的膜通道的相互作用。如現(xiàn)在更詳細(xì)地說明的那樣，如果需要，可以改變分析的培養(yǎng)步驟的特定順序。例如，在一些實(shí)施方案中，細(xì)胞膜、包含閃爍體和偶聯(lián)劑的載體、包含激活閃爍體的標(biāo)記物的配體和懷疑與膜通道相互作用的受試分子可以分別、連續(xù)加入到該分析中。換句話說，在該實(shí)施方案中，步驟(a)到(d)在分析中可以是分別、連續(xù)的步驟。優(yōu)選該實(shí)施方案不需要任何分離或洗滌步驟，所有反應(yīng)試劑都連續(xù)地直接加入到反應(yīng)介質(zhì)中。這些特別的實(shí)施方案可以提供很多優(yōu)點(diǎn)，例如簡單化的方式和過程。進(jìn)一步地，在分析前不需要預(yù)培養(yǎng)期，因此反應(yīng)試劑可以在分析的當(dāng)天重新溶解或融化。在一些實(shí)施方案中，該特別的方式允許簡單地優(yōu)化膜和載體的比例，成為可以設(shè)置不同的膜濃度和不同的載體濃度的基質(zhì)試驗(yàn)。優(yōu)選地，使用稍微過量的載體以確保完全捕獲該分析中存在的所有細(xì)胞膜。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以利用已知的確定載體最佳濃度的方法，以用于本文所述的分析。對于本發(fā)明加入的特定順序并不被認(rèn)為是關(guān)鍵性的。在一些實(shí)施方案中，在加入分析的其他反應(yīng)試劑前，在允許細(xì)胞膜和載體形成膜-載體絡(luò)合物的條件下，細(xì)胞膜和載體進(jìn)行了預(yù)培養(yǎng)。根據(jù)該實(shí)施方案，在向分析中加入細(xì)胞膜或標(biāo)記的配體前，細(xì)胞膜和載體進(jìn)行了預(yù)培養(yǎng)。一般地，作為達(dá)到該目的的一個代表性方法，在需要的溫度下(典型地2-8℃)將細(xì)胞膜和載體在預(yù)培養(yǎng)期(典型地1到4小時)小心地?cái)嚢琛Ｔ撎貏e的實(shí)施方案可以提供很多優(yōu)點(diǎn)，例如減少向分析中加入的次數(shù)，因?yàn)檩d體和膜是作為一個反應(yīng)試劑加入的。在一些實(shí)施方案中，該實(shí)施方案可以為分析條件提供均一性，因?yàn)閷τ诜治龅拿糠N反應(yīng)溶液都是使用同樣的制品。可替代地，在一些實(shí)施方案中，在向分析中加入其它反應(yīng)試劑前，在允許細(xì)胞膜和配體形成膜-配體絡(luò)合物的條件下，細(xì)胞膜與用激活閃爍體的標(biāo)記物標(biāo)記的配體進(jìn)行了預(yù)培養(yǎng)。根據(jù)該實(shí)施方案，加入的載體的量足以與分析反應(yīng)混合物中的所有細(xì)胞膜連接。引入的過量體積將會導(dǎo)致與游離配體的結(jié)合的平衡移動，這樣在進(jìn)行測定前反應(yīng)將會給出足夠的時間來重新平衡。在一些實(shí)施方案中，該方式的分析的培養(yǎng)時間可以比連續(xù)方式加入反應(yīng)試劑的情況更短。優(yōu)選地，在進(jìn)行本發(fā)明的方法的本文所述的所有實(shí)施方案中，優(yōu)化細(xì)胞膜和載體的比例，以使得分析中存在的全部，或幾乎全部的細(xì)胞膜與載體連接(比如，結(jié)合)。與未結(jié)合的膜(沒有與載體連接的膜)結(jié)合的標(biāo)記的配體對分析信號沒有貢獻(xiàn)，因?yàn)?，該?biāo)記的配體距離載體的閃爍體太遠(yuǎn)而不能影響閃爍體的發(fā)射。在連續(xù)加入反應(yīng)試劑或配體與細(xì)胞膜預(yù)培養(yǎng)的實(shí)施方案中，優(yōu)選包括稍微過量的載體以確保載體捕獲了所有的細(xì)胞膜。在本發(fā)明一個典型的表現(xiàn)中，表示配體與膜通道結(jié)合以及載體與細(xì)胞膜連接的信號將會持續(xù)增加，直至分析達(dá)到平衡?？商娲?，在分析期間的特定時間點(diǎn)，t，進(jìn)行測定。通過使用光電倍增管的任意適當(dāng)?shù)臋z測器來檢測產(chǎn)生的輸出?？梢允褂萌我膺m當(dāng)?shù)纳虡I(yè)可用的閃爍計(jì)數(shù)器作為檢測器。如所述，本發(fā)明提供一種鑒定與膜通道相互作用的分子，因此，當(dāng)在分析樣品中存在懷疑與膜通道相互作用的分子時，該分子將與包含激活閃爍體的標(biāo)記物的配體競爭性地和感興趣的膜通道結(jié)合。結(jié)果，當(dāng)該分子與膜通道結(jié)合時，它取代了標(biāo)記的配體，因此降低了閃爍體發(fā)射的光能，這是因?yàn)閺拈W爍體附近清除了包含激活閃爍體的標(biāo)記物的配體。如果該分子的競爭性更強(qiáng)，將會在分析輸出中觀測到可測定的改變。因此，本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案可以提供很多優(yōu)點(diǎn)，例如允許高效篩選懷疑與感興趣的膜通道相互作用的分子的系統(tǒng)。此外，根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案，在研究中僅僅通過系統(tǒng)的配體-膜通道的反應(yīng)比例來控制分析的時間。根據(jù)本發(fā)明，僅僅需要與細(xì)胞膜結(jié)合的包含激活閃爍體的標(biāo)記物的配體與載體的閃爍體足夠緊密地接近，以允許標(biāo)記的配體發(fā)射的輻射能轟擊閃爍體。結(jié)果，不需要從反應(yīng)混合物中洗去載體或以其他方式試圖除去未結(jié)合的標(biāo)記的配體；相反，可以用在分析混合物中存在的所有組分來測定發(fā)射能的水平。下面的實(shí)施例解釋說明了本發(fā)明的各個方面。實(shí)施例反應(yīng)試劑和方法結(jié)合緩沖液50mMhepes-Tris，pH7.4，和0.05％牛血清白蛋白(BSA)PVT-WGA珠聚(乙烯基甲苯)-麥胚凝集素SPA珠(商業(yè)可用的，來自Amersham，Piscataway，NJ，Cat.No.RPNQ0001)。Ysi-WGA珠硅酸釔-麥胚凝集素SPA珠(商業(yè)可用的，來自Amersham，Piscataway，NJ，Cat.No.RPNQ0011).Ysi-PL珠硅酸釔-麥胚凝集素SPA珠(商業(yè)可用的，來自Amersham，Piscataway，NJ，Cat.No.RPNQ0010).GVIAPerkinElmerLifeSciences，Boston，MA，Cat.NoNEX239[125I]MVIICPerkinElmerLifeSciences，Boston，MA，Cat.NoNEX323[125I]MVIIAPerkinElmerLifeSciences，Boston，MA，Cat.NoNEX316除非另有說明，在下列實(shí)施例中使用的SPA珠濃度是5mg/ml。細(xì)胞膜的制備根據(jù)Zhang等，(2001)Int.Immunopharmacol1955-965的方法，從人神經(jīng)母細(xì)胞瘤(IMR32)中制備，從溴脫氧尿苷或成年雄性斯普拉-道來大鼠腦組織中分化來制備細(xì)胞膜。簡言之，在冰冷的25mMTris(pH7.2)，2mMEDTA和320mM蔗糖中均勻化細(xì)胞或組織。在均勻化以后，首先將混懸液以100×g離心10分鐘。收集所得到的上清液，然后以40,000×g離心20分鐘。收集膜沉淀，再懸浮于結(jié)合緩沖液中，并在-70℃貯存。用牛血清白蛋白(BSA)作為標(biāo)準(zhǔn)品，使用Bradford試劑(Bio-Rad)來確定膜制品中蛋白質(zhì)的濃度。細(xì)胞膜的量為2-5mg/ml。典型地，在大鼠腦膜蛋白中鈣通道的量是約200fmol/mg。實(shí)施例1配體與鈣通道的特異性結(jié)合本實(shí)施例說明的方法，是用于測定配體與包含在從大鼠腦組織中分離的細(xì)胞中的鈣通道的特異性結(jié)合。在96-孔微量滴定板上，在室溫下(20℃-25℃)進(jìn)行分析。在每個孔中，加入2.5μg的如上所述從大鼠腦組織中分離的細(xì)胞膜(通過蛋白質(zhì)濃度來測定)，1mgPVT-WGA珠，和將總反應(yīng)溶液達(dá)到200μl體積量的結(jié)合緩沖液在室溫和pH7.4下培養(yǎng)1小時。該預(yù)培養(yǎng)步驟產(chǎn)生了細(xì)胞膜/珠絡(luò)合物。在培養(yǎng)后，向每個孔中加入15pM的下列標(biāo)記的配體中的一種[125I]GVIA，或[125I]MVHC。所得到的混合物在室溫和pH7.4下培養(yǎng)60分鐘。當(dāng)進(jìn)行非特異性結(jié)合研究時，在加入[125I]GVIA前，向每個孔中加入100nM未標(biāo)記的GVIA芋螺毒素，反應(yīng)混合物在室溫和pH7.4下培養(yǎng)1小時，以得到平衡。存在過量的未標(biāo)記的GVIA芋螺毒素，以使得在加入標(biāo)記的GVIA前所有可用的鈣通道特異性結(jié)合位點(diǎn)都通過未標(biāo)記的配體結(jié)合。用PackardTopCountTM閃爍計(jì)數(shù)器測定微量滴定板發(fā)射的光能。光能的增加對應(yīng)于膜-珠絡(luò)合物的形成。GVIA的結(jié)合的結(jié)果如附圖1所示。如上述，用[125I]GVIA培養(yǎng)不同的時間(0到20小時)，并在附圖1的X-軸上表示。[125I]GVIA結(jié)合在Y-軸上表示，單位是cpm。配體的總結(jié)合如曲線A(填充格)所示，而非特異性結(jié)合如曲線B(空方格)所示。通過確定總結(jié)合(曲線A)和非特異性結(jié)合(曲線B)之間的差異來獲得GVIA與鈣通道的特異性結(jié)合。為了確定孔與孔之間的差異，在96孔板中測定48個總結(jié)合樣品和48個非特異性結(jié)合樣品。接著進(jìn)行上述實(shí)施例1所述的分析方法。結(jié)果如附圖7所示，其表明了單位為cpm(Y-軸)的[125I]GVIA的總結(jié)合和NSB樣品的結(jié)合。X-軸表示樣品的數(shù)目。在該附圖中用方格表示總結(jié)合，用三角形表示非特異性結(jié)合。如所示，當(dāng)測定的總結(jié)合為1641.3次每分鐘(cpm)時，測定的非特異性結(jié)合(NSB)是264cpm。因此，確定GVIA的特異性結(jié)合(總結(jié)合-非特異性結(jié)合)是1377cpm?？偨Y(jié)合與非特異性結(jié)合的計(jì)算比例是約6.Z-因子(Zhang等，1999，J.Biomol.Screening，467-73)是約0.75，提示該分析的再現(xiàn)性對于構(gòu)建高效篩選是足夠的。實(shí)施例2對標(biāo)記的配體和細(xì)胞膜結(jié)合的影響確定載體濃度、細(xì)胞膜濃度和配體濃度對標(biāo)記的配體和細(xì)胞膜結(jié)合的影響。載體濃度在設(shè)定的標(biāo)記的配體和細(xì)胞膜的濃度下，檢測改變載體的濃度的影響。在微量滴定板中制備包含不同濃度的SPA珠(0.75到5mg/ml)的孔。在每個孔中，含有2.5μg從大鼠腦組織中分離的細(xì)胞膜和結(jié)合緩沖液，兩者的和使總反應(yīng)溶液體積達(dá)到200μl。將反應(yīng)混合物在室溫和pH7.4下培養(yǎng)1小時。作為對照，向每個孔中加入100nM未標(biāo)記的GVIA，將反應(yīng)混合物在室溫和pH7.4下培養(yǎng)1小時。未標(biāo)記的GVIA要過量，以使得未標(biāo)記的配體與所有可用的鈣通道特異性結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合。然后向每個孔中加入15pM[125I]GVIA，以獲得平衡。用PackardTopCountTM閃爍計(jì)數(shù)器測定微量滴定板發(fā)射的光能。結(jié)果如附圖2所示。SPA珠的濃度(mg/孔)如X-軸所示，單位為cpm的[125I]GVIA結(jié)合如Y-軸所示。光能的增加對應(yīng)于珠-膜絡(luò)合物的形成。如附圖2所示，[125I]GVIA與細(xì)胞膜的結(jié)合取決于所存在的PVT-WGA珠的濃度。標(biāo)記的-GVIA的總結(jié)合用曲線A(黑色圓)表示，標(biāo)記的-GVIA的非特異性結(jié)合用曲線B(空白圓)表示。細(xì)胞膜濃度在設(shè)定的標(biāo)記的配體和載體的濃度下，檢測改變細(xì)胞膜的濃度的影響。在微量滴定板的孔中置入從大鼠腦組織獲得的不同濃度的(3.125到25mg/ml)的細(xì)胞膜。在每個孔中，加入1mgPVT-WGA珠和使得總反應(yīng)溶液體積達(dá)到200μl的結(jié)合緩沖液。將反應(yīng)混合物在室溫和pH7.4下培養(yǎng)1小時。在培養(yǎng)后，向每個孔中加入100nM未標(biāo)記的GVIA，將反應(yīng)混合物在室溫和pH7.4下培養(yǎng)1小時。未標(biāo)記的GVIA要過量，以使得未標(biāo)記的配體與所有可用的鈣通道特異性結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合。然后向每個孔中加入15pM[125I]GVIA，將反應(yīng)混合物在室溫和pH7.4下培養(yǎng)1小時，以獲得平衡。用PackardTopCountTM閃爍計(jì)數(shù)器測定微量滴定板發(fā)射的光能。結(jié)果如附圖3所示。腦膜的濃度如X-軸所示(μg/孔)，[125I]GVIA結(jié)合如Y-軸所示(cpm)。光能的增加對應(yīng)于珠-膜絡(luò)合物的形成。如附圖3所示，珠-膜絡(luò)合物的形成取決于在分析混合物中存在的細(xì)胞膜的濃度。標(biāo)記的-GVIA的總結(jié)合用曲線A(黑色圓)表示，標(biāo)記的-GVIA的非特異性結(jié)合用曲線B(空白圓)表示。配體濃度在設(shè)定的標(biāo)記的載體和細(xì)胞膜的濃度下，檢測改變標(biāo)記的配體的濃度的影響。在微量滴定板的孔中置入從大鼠腦組織獲得的不同濃度的(3.125到25mg/ml)的細(xì)胞膜。向96-孔滴定板的每個孔中，加入1mgPVT-WGA珠，2.5μg從大鼠腦中分離的細(xì)胞膜和使得總反應(yīng)溶液體積達(dá)到200μl的結(jié)合緩沖液。將反應(yīng)混合物在室溫和pH7.4下培養(yǎng)1小時。在培養(yǎng)后，向每個孔中加入100nM未標(biāo)記的GVIA，將反應(yīng)混合物在室溫和pH7.4下培養(yǎng)1小時。未標(biāo)記的GVIA要過量，以使得未標(biāo)記的配體與所有可用的鈣通道特異性結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合。然后向每個孔中加入不同濃度(1到100pM)的[125I]GVIA，將反應(yīng)混合物在室溫和pH7.4下培養(yǎng)1小時，以獲得平衡。用PackardTopCountTM閃爍計(jì)數(shù)器測定微量滴定板發(fā)射的光能.結(jié)果如附圖4所示.單位為pM的[125I]GVIA的濃度如X-軸所示，單位為cpm的[125I]GVIA結(jié)合如Y-軸所示。光能的增加對應(yīng)于珠-膜絡(luò)合物的形成。附圖4表明了[125I]GVIA濃度對于標(biāo)記的配體與細(xì)胞膜結(jié)合的影響。在不含細(xì)胞膜的情況下確定背景(曲線B，三角形)。配體的總結(jié)合用曲線A(黑方格)表示，而非特異性結(jié)合用曲線C(空方格)表示。附圖5顯示的是在高濃度的配體下，[125I]GVIA與細(xì)胞膜的結(jié)合是可飽和的。單位為pM的[125I]GVIA的濃度如X-軸所示，單位為cpm的[125I]GVIA結(jié)合如Y-軸所示。在附圖5中所示的數(shù)據(jù)是附圖4數(shù)據(jù)的重繪圖。該計(jì)算機(jī)繪出的曲線表示了數(shù)據(jù)的最佳擬合。在約12pM的濃度時達(dá)到了半數(shù)最大結(jié)合(EC50)，而在約25pM的濃度時達(dá)到了最大結(jié)合(Bmax)。對[125I]GVIA的飽和數(shù)據(jù)的分析表明，用一位點(diǎn)模型是結(jié)合的最佳擬合，解離常數(shù)(Kd)值是13pM，Bmax值是225fmol/mg蛋白質(zhì)。實(shí)施例3鈣通道的競爭性結(jié)合下面，研究其他鈣通道配體和[125I]GVIA競爭性地與從大鼠腦中分離的細(xì)胞膜結(jié)合的能力。在96孔微量滴定板的每個孔中，加入下列物質(zhì)1mgWGA-PVT珠，2.5μg從大鼠腦組織中分離的大鼠細(xì)胞膜，使總反應(yīng)溶液體積達(dá)到200μl的結(jié)合緩沖液。然后向每個孔中加入15pM[125I]GVIA，將反應(yīng)混合物在室溫和pH7.4下培養(yǎng)1小時。研究不同配體進(jìn)爭性地與細(xì)胞膜結(jié)合的能力，包括，向上述制備的反應(yīng)混合物中加入下列一種配體GVIA、MVIIA、MVIIC、和ω-Agatoxin。加入的每種配體的濃度是0.01pM到0.1pM。將反應(yīng)混合物在室溫和pH7.4下培養(yǎng)1小時，以獲得平衡。用PackardTopCountTM閃爍計(jì)數(shù)器測定微量滴定板發(fā)射的光能。結(jié)果如附圖6所示，其表明了所研究的每種配體的結(jié)合曲線。通過單-位點(diǎn)結(jié)合模型進(jìn)行抑制曲線的最佳擬合。配體的濃度如X-軸所示(l0gM)，[125I]GVIA結(jié)合如Y-軸所示(cpm)。CVIA的結(jié)合如曲線A(方格)所示，MVIIA如曲線B(圓)所示，MVIIC如曲線C(黑三角)所示，ω-Agatoxin入曲線D(空白三角)所示。觀測到的[125I]GVIA與細(xì)胞膜結(jié)合的取代順序如下GVIA＞MVHA＞MVIIC＞＞ω-Agatoxin。換言之，GVIA顯示了最高的相對親和力，而ω-Agatoxin對所分析的配體顯示了最低的相對親和力。通過單-位點(diǎn)模型對GVIA、MVIIA和MVIIC結(jié)合數(shù)據(jù)進(jìn)行最佳擬合。結(jié)果表明，[125I]GVIA與從大鼠腦中分離的細(xì)胞膜中的N-型鈣通道特異性結(jié)合。計(jì)算每種配體的親和常數(shù)(Ki)，結(jié)果如表2所示。該數(shù)據(jù)表明，該分析方法提供了一種有效的系統(tǒng)來研究與鈣通道競爭性結(jié)合的相互作用。表2特定配體的親和常數(shù)實(shí)施例4配體與細(xì)胞膜的結(jié)合下面研究兩種不同的配體與從大鼠腦中分離的細(xì)胞膜的結(jié)合。在微量滴定板中和室溫下進(jìn)行分析。在第一組設(shè)計(jì)用于檢測[125I]GVIA結(jié)合的反應(yīng)中，向每個孔中加入2.5μg從大鼠腦組織中分離的大鼠細(xì)胞膜，1mgWGA-PVT珠，和使總反應(yīng)溶液體積達(dá)到200μl的結(jié)合緩沖液，將反應(yīng)混合物在室溫和pH7.4下培養(yǎng)1小時。在第二組設(shè)計(jì)用于檢測[125I]GVIA結(jié)合的反應(yīng)中，向每個孔中加入5μg從大鼠腦組織中分離的大鼠細(xì)胞膜，1mgPVT-WGA珠，使總反應(yīng)溶液體積達(dá)到200μl的結(jié)合緩沖液，將反應(yīng)混合物在室溫和pH7.4下培養(yǎng)1小時。該預(yù)培養(yǎng)步驟產(chǎn)成了細(xì)胞膜/珠絡(luò)合物。在上述培養(yǎng)后，向第一組反應(yīng)中加入15pM[125I]MVIIA，向第二組反應(yīng)中加入15pM[125I]MVIIC。將反應(yīng)混合物在室溫和pH7.4下培養(yǎng)1小時，以獲得平衡。用實(shí)施例1的方法，以對反應(yīng)混合物合適的方式，在100nM未標(biāo)記的MVIIA(第一組反應(yīng))或MVIIC(第二組反應(yīng))存在下測定非特異性結(jié)合。用PackardTopCountTM閃爍計(jì)數(shù)器測定微量滴定板發(fā)射的光能。結(jié)果如附圖8所示。每種配體的總結(jié)合如條形A所示，而每種配體的非特異性結(jié)合如條形B所示。單位為cpm的[125I]芋螺毒素的結(jié)合(第一組反應(yīng)是MVIIA，第二組反應(yīng)是MVIIC)如Y-軸所示。實(shí)施例5配體與IMR32細(xì)胞的結(jié)合如下所述研究標(biāo)記的配體與IMR32細(xì)胞的結(jié)合。在微量滴定板中和室溫下進(jìn)行分析。向每個孔中加入10μg從上述的IMR32細(xì)胞中分離的細(xì)胞膜，1mgWGA-PVT珠，和使總反應(yīng)溶液體積達(dá)到200μl的結(jié)合緩沖液，將反應(yīng)混合物在室溫和pH7.4下培養(yǎng)1小時。該預(yù)培養(yǎng)步驟產(chǎn)成了細(xì)胞膜/珠絡(luò)合物。在上述培養(yǎng)后，向反應(yīng)混合物中加入15pM[125I]GVIA(第一組反應(yīng))，加入15pM[125I]MVIIA(第二組反應(yīng))。將反應(yīng)混合物在室溫和pH7.4下培養(yǎng)1小時，以獲得平衡。用實(shí)施例1的方法，以對反應(yīng)混合物合適的方式，在100nM未標(biāo)記的GVIA(第一組反應(yīng))或MVIIA(第二組反應(yīng))存在下測定非特異性結(jié)合。用PackardTopCountTM閃爍計(jì)數(shù)器測定微量滴定板發(fā)射的光能。結(jié)果如附圖9所示。每種配體的總結(jié)合如條形A所示，而每種配體的非特異性結(jié)合如條形B所示。單位為cpm的[125I]芋螺毒素的結(jié)合(第一組反應(yīng)是GVIA，第二組反應(yīng)是MVIIA)如Y-軸所示。實(shí)施例6包含不同偶聯(lián)劑的珠的結(jié)合如下所述研究包含不同偶聯(lián)劑的載體與細(xì)胞膜連接的能力和在配體-結(jié)合分析中的功能。在微量滴定板中和室溫下進(jìn)行分析。向每個孔中加入2.5μg從大鼠腦組織中分離的大鼠細(xì)胞膜，1mgYsi-WGA珠或Ysi-PL珠，和使總反應(yīng)溶液體積達(dá)到200μl的結(jié)合緩沖液，將反應(yīng)混合物在室溫和pH7.4下培養(yǎng)1小時。該預(yù)培養(yǎng)步驟產(chǎn)成了細(xì)胞膜/珠絡(luò)合物。在上述培養(yǎng)后，向反應(yīng)混合物中加入15pM[125I]MVIIA。將反應(yīng)混合物在室溫和pH7.4下培養(yǎng)1小時，以獲得平衡。用實(shí)施例1的方法，在100nM未標(biāo)記的MVIIA存在下測定非特異性結(jié)合。用PackardTopCountTM閃爍計(jì)數(shù)器測定微量滴定板發(fā)射的光能。結(jié)果如附圖10所示?？偨Y(jié)合如條形A所示，而非特異性結(jié)合如條形B所示。單位為cpm的[125I]MVIIA的結(jié)合如Y-軸所示。我們觀測到，該非特異性結(jié)合高于使用PVT-WGA珠的分析。根據(jù)對本說明書的思考或從本文公開的本發(fā)明的實(shí)施中，本發(fā)明的其他實(shí)施方案對本領(lǐng)域技術(shù)人員將是顯而易見的。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以做出對本文所述原理和實(shí)施方案的各種省略、改變和變化，而不脫離下列權(quán)利要求所指定的本發(fā)明的真正范圍和精神。本文引用的所有專利、專利文獻(xiàn)和出版物都通過參考引入，就像分別引入一樣。權(quán)利要求1.一種檢測與細(xì)胞膜通道相互作用的分子的分析系統(tǒng)，該分析系統(tǒng)包括a.包含膜通道的細(xì)胞膜；b.載體，其包含閃爍體和與細(xì)胞膜連接的偶聯(lián)劑；c.選擇性地與膜通道結(jié)合的配體，該配體包含激活閃爍體的標(biāo)記物，其中載體與細(xì)胞膜的連接和配體與膜通道的結(jié)合導(dǎo)致了從載體的閃爍體中發(fā)射，其中，當(dāng)與膜通道相互作用的受試分子存在時，改變了從載體的閃爍體中的發(fā)射。2.權(quán)利要求1的分析系統(tǒng)，其中該細(xì)胞膜是從表達(dá)天然膜通道的細(xì)胞膜中得到的。3.權(quán)利要求1的分析系統(tǒng)，其中該細(xì)胞膜是從重組細(xì)胞分離的，該重組細(xì)胞從外源性DNA表達(dá)膜通道。4.權(quán)利要求1的分析系統(tǒng)，其中該細(xì)胞膜是人造膜。5.權(quán)利要求1的分析系統(tǒng)，其中該膜通道是離子通道。6.權(quán)利要求5的分析系統(tǒng)，其中該離子通道選自鈉通道、鉀通道、氯通道、鈣通道和配體門控離子通道。7.權(quán)利要求6的分析系統(tǒng)，其中該離子通道是鈣通道。8.權(quán)利要求1的分析系統(tǒng)，其中該膜通道是配體門控通道。9.權(quán)利要求1的分析系統(tǒng)，其中該載體包含珠。10.權(quán)利要求1的分析系統(tǒng)，其中該載體包含二苯基唑。11.權(quán)利要求1的分析系統(tǒng)，其中該載體包含聚(乙烯基甲苯)。12.權(quán)利要求1的分析系統(tǒng)，其中該載體包含硅酸釔。13.權(quán)利要求1的分析系統(tǒng)，其中該偶聯(lián)劑與細(xì)胞膜以非特異性方式連接。14.權(quán)利要求13的分析系統(tǒng)，其中該偶聯(lián)劑依靠細(xì)胞膜的負(fù)電荷與細(xì)胞膜連接。15.權(quán)利要求13的分析系統(tǒng)，其中該偶聯(lián)劑選自麥胚凝集素A型和麥胚凝集素B型。16.權(quán)利要求1的分析系統(tǒng)，其中該偶聯(lián)劑與細(xì)胞膜以特異性結(jié)合相互作用的方式連接。17.權(quán)利要求16的分析系統(tǒng)，其中該偶聯(lián)劑是直接對抗在細(xì)胞膜上表達(dá)的一種或多種蛋白質(zhì)的抗體。18.權(quán)利要求1的分析系統(tǒng)，其中該配體選自抗體或抗體片段、肽和小分子。19.權(quán)利要求18的分析系統(tǒng)，其中該配體選自GVIA、MVIIA、MVIIC。20.權(quán)利要求1的分析系統(tǒng)，其中該激活閃爍體的標(biāo)記物是放射性同位素。21.權(quán)利要求1的分析系統(tǒng)，其中該分子是離子通道調(diào)節(jié)劑。22.權(quán)利要求1的分析系統(tǒng)，其中當(dāng)存在與膜通道相互作用的分子時，從載體的閃爍體中的發(fā)射減少。23.一種鑒定與細(xì)胞膜通道相互作用的分子的方法，該方法包括下列步驟a.提供包括一種或多種膜通道的細(xì)胞膜；b.在允許偶聯(lián)劑與細(xì)胞膜結(jié)合的條件下，培養(yǎng)細(xì)胞膜和包含閃爍體和偶聯(lián)劑的載體；c.在允許配體和膜通道結(jié)合的條件下，培養(yǎng)細(xì)胞膜和包含激活閃爍體的標(biāo)記物的配體；d.培養(yǎng)細(xì)胞膜和懷疑與膜通道相互作用的受試分子；e.在受試分子存在時和在受試分子不存在時，測定載體的閃爍體中的發(fā)射；和f.比較當(dāng)受試分子存在時從載體的閃爍體中的發(fā)射和當(dāng)受試分子不存在時從載體的閃爍體中的發(fā)射。24.權(quán)利要求23的方法，其中在步驟(c)或(d)之前進(jìn)行步驟(b)。25.權(quán)利要求23的方法，其中在步驟(b)之前進(jìn)行步驟(c)和步驟(d)。26.權(quán)利要求23的方法，其中測定從閃爍體中的發(fā)射包括測定光能的發(fā)射。全文摘要本發(fā)明提供一種檢測與膜通道相互作用的分子的分析系統(tǒng)，該分析系統(tǒng)包括，包含一種或多種末通道的細(xì)胞膜；載體，包含閃爍體和與細(xì)胞膜連接的偶聯(lián)劑；選擇性地與膜通道結(jié)合的配體，該配體包含激活閃爍體的標(biāo)記物。根據(jù)本發(fā)明，載體與細(xì)胞膜的連接和配體與膜通道的結(jié)合導(dǎo)致了從載體的閃爍體中發(fā)射，其中，當(dāng)與膜通道相互作用的受試分子存在時，改變了從載體的閃爍體中的發(fā)射。也公開了鑒定與膜通道相互作用的分子的方法。文檔編號G01N33/68GK101023355SQ200580031637公開日2007年8月22日申請日期2005年7月19日優(yōu)先權(quán)日2004年7月20日發(fā)明者S·－P·張,E·E·科德申請人:詹森藥業(yè)有限公司