專利名稱：一種a組輪狀病毒抗原膠體金檢測(cè)試紙條的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種A組輪狀病毒(RV-group A)抗原檢測(cè)試紙條及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
對(duì)于輪狀病毒(RV)感染的診斷，經(jīng)典方法是病毒分離和雙份血清呈4倍增高，至今仍是臨床診斷的金標(biāo)準(zhǔn)?，F(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展為RV感染的診斷提供了許多新的檢測(cè)方法，如電鏡或免疫電鏡從糞便提取物中檢測(cè)輪狀病毒顆?？乖粦?yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和核酸探針技術(shù)檢測(cè)病毒顆粒和抗原；采用聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)可直接檢測(cè)糞便提取物中的病毒RNA；應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)對(duì)輪狀病毒抗原進(jìn)行檢測(cè)等。但以上方法均存在著操作復(fù)雜，時(shí)間長(zhǎng)，需要昂貴的儀器、設(shè)備、需要專業(yè)人員在有條件的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行等，不適合流行病學(xué)調(diào)查和現(xiàn)埸檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容
(一)、要解決的技術(shù)問(wèn)題本發(fā)明的目的是提供一種方便、快捷地檢測(cè)A組輪狀病毒抗原的試紙條。
本發(fā)明再一個(gè)目的是提供所述試紙條在檢測(cè)A組輪狀病毒抗原中的應(yīng)用。
(二)、技術(shù)方案本發(fā)明為一種檢測(cè)試紙條，它包含(1)包被A組輪狀病毒單克隆抗體和抗鼠IgG二個(gè)條帶的硝酸纖維膜；(2)含有膠體金標(biāo)記A組輪狀病毒單克隆抗體的玻璃纖維膜。
本發(fā)明所述的試紙條，它還包含(1)反應(yīng)支持物；(2)吸水墊；
(3)金標(biāo)抗體保護(hù)膜。
本發(fā)明所述的試紙條，其中反應(yīng)支持物選用PVC板。
本發(fā)明所述的試紙條，其中吸水墊選用濾油紙。
本發(fā)明所述的試紙條，其中金標(biāo)抗體保護(hù)膜同時(shí)具有吸水功能，選用聚脂膜、玻璃纖維或?yàn)V紙纖維。
本發(fā)明還公開(kāi)了所述試紙條在檢測(cè)A組輪狀病毒抗原中的應(yīng)用(見(jiàn)圖2)。留取患者糞便，放入裝有稀釋液的小瓶?jī)?nèi)，將試紙條“4”處插入瓶?jī)?nèi)(直至觀察完結(jié)果后方可取出試紙條)，樣品中的液體吸起上行，10-15分鐘判讀結(jié)果如含有A組輪狀病毒抗原，則與試紙條上膠體金標(biāo)記的A組輪狀病毒單克隆抗體形成相應(yīng)的復(fù)合物，上行與包被在硝酸纖維膜上的A組輪狀病毒單克隆抗體結(jié)合，形成紅色線條，即在“T”處形成紅色條帶。
無(wú)論是否含有相對(duì)應(yīng)的抗原，膠體金標(biāo)記單克隆抗體繼續(xù)向上爬行與包被在膜上的抗鼠IgG形成紅色沉淀線，即在“C”處形成紅色條帶。此線是質(zhì)控線，如膠體金失效，此線就不會(huì)出現(xiàn)，說(shuō)明試紙條失效。
陽(yáng)性結(jié)果會(huì)出現(xiàn)2條紅色沉淀線，陰性結(jié)果出現(xiàn)1條紅色沉淀線，如不出現(xiàn)線條說(shuō)明試紙條失效。
本發(fā)明的技術(shù)方案是采用純化的A組輪狀病毒單克隆抗體和抗鼠IgG分別固相于硝酸纖維膜上(NC膜)，結(jié)合膠體金標(biāo)記的A組輪狀病毒單克隆抗體，應(yīng)用膜層析雙抗體夾心法的原理檢測(cè)糞便中的A組輪狀病毒。
(三)、有益效果用本發(fā)明試紙條檢測(cè)A組輪狀病毒抗原，方便、快速、簡(jiǎn)捷，不需特殊儀器設(shè)備、不需專業(yè)培訓(xùn)，結(jié)果清晰易辨；操作簡(jiǎn)單，易于推廣，適合基層，適合于大批量檢測(cè)，適合流行病學(xué)調(diào)查，對(duì)A組輪狀病毒引起的嬰幼兒腹瀉的診斷起到輔助檢測(cè)作用。


圖1A本發(fā)明試紙條的正面示意圖；B本發(fā)明試紙條的側(cè)面示意圖；1吸水墊；2硝酸纖維膜(T包被A組輪狀病毒單克隆抗體的條帶；C包被抗鼠IgG的質(zhì)控條帶)；3含有膠體金標(biāo)記A組輪狀病毒單克隆抗體的玻璃纖維膜；4金標(biāo)抗體保護(hù)膜；5反應(yīng)支持物。
圖2檢測(cè)結(jié)果示意圖；從左至右依次為T、C兩條線顯色為陽(yáng)性；C一條線顯色為陰性；T、C兩條線未顯色為無(wú)效。
具體實(shí)施例方式
以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1 A組輪狀病毒抗原檢測(cè)試紙條(參見(jiàn)圖1)反應(yīng)支持物為6.5cm×0.4cm PCV板；吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙；1.8cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗鼠IgG、A組輪狀病毒單克隆抗體；含有0.4cm×0.4cm膠體金標(biāo)記的A組輪狀病毒單克隆抗體玻璃纖維膜；金標(biāo)抗體保護(hù)膜為2.7cm×0.4cm的聚脂膜；即形成了A組輪狀病毒抗原檢測(cè)試紙條。
實(shí)施例2 A組輪狀病毒抗原檢測(cè)試紙條(參見(jiàn)圖1)反應(yīng)支持物為6.5cm×0.4cm PCV板；吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙；1.8cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗鼠IgG、A組輪狀病毒單克隆抗體；含有0.4cm×0.4cm膠體金標(biāo)記的A組輪狀病毒單克隆抗體玻璃纖維膜；金標(biāo)抗體保護(hù)膜為2.7cm×0.4cm的玻璃纖維；即形成了A組輪狀病毒抗原檢測(cè)試紙條。
實(shí)施例3 A組輪狀病毒抗原檢測(cè)試紙條(參見(jiàn)圖1)反應(yīng)支持物為6.5cm×0.4cm PCV板；吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙；1.8cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗鼠IgG、A組輪狀病毒單克隆抗體；含有0.4cm×0.4cm膠體金標(biāo)記的A組輪狀病毒單克隆抗體玻璃纖維膜；金標(biāo)抗體保護(hù)膜為2.7cm×0.4cm的濾紙纖維；即形成了A組輪狀病毒抗原檢測(cè)試紙條。
實(shí)施例4 檢測(cè)方法(參見(jiàn)圖2)留取患者糞便，放入裝有稀釋液的小瓶?jī)?nèi)，將實(shí)施例1試紙條“4”處插入瓶?jī)?nèi)(直至觀察完結(jié)果后方可取出試紙條)，樣品中的液體吸起上行，10-15分鐘判讀結(jié)果如含有A組輪狀病毒抗原，則與試紙條上膠體金標(biāo)記的A組輪狀病毒單克隆抗體形成相應(yīng)的復(fù)合物，上行與包被在硝酸纖維膜上的A組輪狀病毒單克隆抗體結(jié)合，形成紅色線條，即在“T”處形成紅色條帶。
無(wú)論是否含有相對(duì)應(yīng)的抗原，膠體金標(biāo)記單克隆抗體繼續(xù)向上爬行與包被在膜上的抗鼠IgG形成紅色沉淀線，即在“C”處形成紅色條帶。此線是質(zhì)控線，如膠體金失效，此線就不會(huì)出現(xiàn)，說(shuō)明試紙條失效。
陽(yáng)性結(jié)果會(huì)出現(xiàn)2條紅色沉淀線，陰性結(jié)果出現(xiàn)1條紅色沉淀線，如不出現(xiàn)線條說(shuō)明試紙條失效。
實(shí)驗(yàn)例1 臨床檢測(cè)結(jié)果經(jīng)檢測(cè)186例患有腹瀉嬰幼兒患者糞便標(biāo)本，A組輪狀病毒感染，出現(xiàn)兩條帶92例，占49.5％。試紙條法(T2)與目前應(yīng)用的ELISA(T1a)和PAGE(T1b)法相比較，靈敏度為99％，特異度100％。
ELISA(T1a)和PAGE(T1b)法與試紙條法(T2)對(duì)比實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)表

權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)試紙條，其特征在于，它包含(1)包被A組輪狀病毒單克隆抗體和抗鼠IgG二個(gè)條帶的硝酸纖維膜；(2)含有膠體金標(biāo)記A組輪狀病毒單克隆抗體的玻璃纖維膜。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述試紙條，它還包含(1)反應(yīng)支持物；(2)吸水墊；(3)金標(biāo)抗體保護(hù)膜。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述試紙條，其中反應(yīng)支持物選用PVC板。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述試紙條，其中吸水墊選用濾油紙。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述試紙條，其中金標(biāo)抗體保護(hù)膜選用聚脂膜、玻璃纖維或?yàn)V紙纖維。
6.權(quán)利要求1-5之任一所述試紙條在檢測(cè)A組輪狀病毒抗原中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種檢測(cè)試紙條，它包含1)包被A組輪狀病毒單克隆抗體和抗鼠IgG二個(gè)條帶的硝酸纖維膜；2)含有膠體金標(biāo)記A組輪狀病毒單克隆抗體的玻璃纖維膜，應(yīng)用膜層析雙抗體夾心法的原理檢測(cè)糞便中的A組輪狀病毒。應(yīng)用本發(fā)明試紙條檢測(cè)，減少了許多繁瑣的程序，且方便快捷，特異準(zhǔn)確，10－15分鐘判讀結(jié)果，不需特殊儀器也不需專業(yè)培訓(xùn)，適合醫(yī)院等基層單位，適合大規(guī)模的流行病學(xué)調(diào)查及應(yīng)對(duì)突發(fā)事件。
文檔編號(hào)G01N33/558GK1963519SQ20051008685
公開(kāi)日2007年5月16日 申請(qǐng)日期2005年11月10日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月10日
發(fā)明者劉明 申請(qǐng)人:北京莊笛浩禾生物醫(yī)學(xué)科技有限公司