專利名稱：預(yù)診癌癥的方法和試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種以簡(jiǎn)單且容易的方式預(yù)診癌癥的方法和試劑盒。更具體的說，本發(fā)明涉及通過測(cè)定患者癌癥發(fā)生前將產(chǎn)生變化的血液中癌癥篩查抗原(CSA)的濃度，來預(yù)診和/或診斷癌癥發(fā)生或感染癌癥危險(xiǎn)的方法和試劑盒。本發(fā)明特別適用于(1)患有癌癥但沒有主觀癥狀的患者，(2)患有良性腫瘤，慢性炎癥或胃炎但沒有主觀癥狀的患者及(3)正常人。上述(1)和(2)中的患者可用本發(fā)明的試劑盒及方法預(yù)測(cè)癌癥的發(fā)生或感染癌癥的危險(xiǎn)，并進(jìn)行更精確的醫(yī)學(xué)檢查，其有助于在早期診斷癌癥。
背景技術(shù)：
早期癌癥的檢測(cè)對(duì)治愈癌癥是最重要的。在多數(shù)情況下，由癌癥產(chǎn)生的主觀癥狀是在癌癥惡化后才顯現(xiàn)出來的。而通常醫(yī)院中進(jìn)行的癌癥醫(yī)學(xué)檢查對(duì)普通人來說是不太容易的，因此難以在早期發(fā)現(xiàn)癌癥。因此需要一種以簡(jiǎn)單且容易的方式預(yù)診癌癥發(fā)生或感染癌癥危險(xiǎn)的方法，以使普通人可以方便的對(duì)癌癥的發(fā)生和在癌癥發(fā)展早期階段進(jìn)行自檢。
.為了開發(fā)一種簡(jiǎn)單且容易的方法診斷和治療癌癥，免疫學(xué)家嘗試尋找腫瘤特異性移植抗原(TSTA)。然而，由于腫瘤來源于人的正常細(xì)胞的特征事實(shí)，因此，除了某些惡性上皮癌外，TSTA未被鑒定。同時(shí)，也嘗試使用腫瘤相關(guān)移植抗原(TATA)，例如，α—甲胎蛋白(AFP)及存在于正常細(xì)胞中但在腫瘤細(xì)胞中增加的癌胚抗原(CEA)來診斷癌癥。但是，TATA的過量表現(xiàn)僅在腫瘤惡化后才產(chǎn)生。因此，用TATA診斷腫瘤的方法對(duì)癌癥的早期診斷作用不大。
半乳糖凝集素(Galectin)是一種β-半乳糖苷結(jié)合凝集素，存在于多數(shù)植物與動(dòng)物中，包括海綿動(dòng)物(poriferan)，線蟲，哺乳動(dòng)物(mammamlia)等，并對(duì)動(dòng)物細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的層粘連蛋白具有高親和性，并且已知與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[26，27]。另外，也已知半乳糖凝集素與細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)化，以及腫瘤的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。迄今為止，已鑒定出9種半乳糖凝集素，形成一個(gè)半乳糖凝集素家族。半乳糖凝集素的分子量為14-36kDa，以單體或二聚體形式存在。半乳糖凝集素-1，半乳糖凝集素-3及半乳糖凝集素-8存在于各種內(nèi)臟器官中，而半乳糖凝集素-2，半乳糖凝集素-4，半乳糖凝集素-5及半乳糖凝集素-7存在于特異的內(nèi)臟器官或細(xì)胞中[2，10，15，17，25]。
半乳糖凝集素-3也稱為CBP-35，Mac-2，εBP，RL-29，L-34，L-31等，由Ho和Springer[12]在巰基乙酸鹽活化的巨噬細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，是一種分子量約為26-32kDa的蛋白質(zhì)[27]。半乳糖凝集素-3與細(xì)胞的生長(zhǎng)，分化，惡性退化及胚胎形成相關(guān)，而且也與IgE介導(dǎo)的細(xì)胞超敏反應(yīng)相關(guān)，并在細(xì)胞-細(xì)胞之間及細(xì)胞-基質(zhì)之間的連接中起重要作用。半乳糖凝集素-3促進(jìn)人Jurkat-T細(xì)胞中鈣離子的吸收[8]，并與T細(xì)胞的凋亡相關(guān)[29]。半乳糖凝集素-3可以核糖核蛋白(RNP)/半乳糖凝集素-3復(fù)合體的形式存在，作用于前體-mRNA底物及RNA剪接過程[7]。
也已知半乳糖凝集素-3在無信號(hào)肽的條件下從細(xì)胞中釋放出來[31]。白介素-1(IL-1)和成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)是與其具有相同釋放特性的生物物質(zhì)，但仍沒有鑒定出確切的釋放機(jī)制。該釋放特性與真核細(xì)胞中一般的可溶性蛋白有很大不同。
已知半乳糖凝集素-3蛋白與惡性腫瘤密切相關(guān)，存在于結(jié)腸癌，皮膚癌，甲狀腺癌，乳腺癌等中[5，6，9，14，18，19，20，23，24，28]。但在胃癌領(lǐng)域的研究比結(jié)腸癌，肺癌，乳腺癌及惡性黑素瘤的研究少得多。半乳糖凝集素-3在正常肝細(xì)胞中不出現(xiàn)，但在肝癌和心肌硬變中出現(xiàn)[13]。已知對(duì)甲狀腺癌來說，半乳糖凝集素-3的出現(xiàn)可作為癌癥手術(shù)前的標(biāo)志物[20]。對(duì)胃癌而言，已報(bào)道半乳糖凝集素-3在正常胃組織中不出現(xiàn)，但在胃癌中出現(xiàn)[30]?？傊惹暗难芯勘砻靼肴樘悄?3的出現(xiàn)與惡性腫瘤密切相關(guān)。但仍沒有闡明半乳糖凝集素-3與腫瘤發(fā)展，特別是胃癌發(fā)展的確切關(guān)系。另外，也沒有關(guān)于應(yīng)用半乳糖凝集素-3預(yù)診和/或診斷癌癥發(fā)生或感染癌癥危險(xiǎn)的報(bào)道。
發(fā)明概述綜上所述，本發(fā)明人鑒定了半乳糖凝集素-3的出現(xiàn)與腫瘤發(fā)展的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)半乳糖凝集素-3在腫瘤發(fā)展的前期或初始階段—良性腫瘤或慢性炎癥和胃炎階段是過量出現(xiàn)的。因此，本發(fā)明涉及利用腫瘤發(fā)展前期階段及初始階段半乳糖凝集素-3過量出現(xiàn)的簡(jiǎn)單且容易的方法。
因此，本發(fā)明的一個(gè)目標(biāo)是提供在腫瘤發(fā)展前期階段及初始階段，通過測(cè)定血液中半乳糖凝集素-3的濃度診斷和/預(yù)診癌癥發(fā)生或感染癌癥的風(fēng)險(xiǎn)的方法和試劑盒，半乳糖凝集素-3在作為惡性腫瘤(癌)前期或初始階段的良性腫瘤(腺瘤)或慢性炎癥階段是過量出現(xiàn)的。根據(jù)本發(fā)明中的試劑盒和方法檢測(cè)癌癥發(fā)生或感染癌癥危險(xiǎn)的用戶可到醫(yī)院進(jìn)行更精確的醫(yī)學(xué)檢查，其導(dǎo)致進(jìn)行癌癥的早期和精確診斷。
換句話說，依照本發(fā)明的試劑盒和方法有助于用戶在腫瘤發(fā)展初始階段自檢其感染癌癥的危險(xiǎn)，從而有助于在腫瘤發(fā)展的早期及早發(fā)現(xiàn)癌癥，特別是胃癌。因此，本發(fā)明的另一個(gè)目標(biāo)是提供對(duì)沒有主觀癥狀的用戶診斷和/或預(yù)診癌癥發(fā)生的方法和試劑盒。
為了達(dá)到以上及其他優(yōu)勢(shì)，本發(fā)明提供了診斷和/或預(yù)診癌癥發(fā)生或感染癌癥危險(xiǎn)的方法，包括以下步驟通過將血液樣品與半乳糖凝集素-3的單克隆抗體反應(yīng)測(cè)定血液樣品中半乳糖凝集素-3的濃度；將測(cè)定的半乳糖凝集素-3濃度與正常人血樣品中半乳糖凝集素-3濃度進(jìn)行比較；如果測(cè)定濃度比正常人血中半乳糖凝集素-3的濃度高，則預(yù)診為感染癌癥的危險(xiǎn)。
本發(fā)明也提供診斷或預(yù)診癌癥發(fā)生或感染癌癥危險(xiǎn)的方法，包括以下步驟制備具有反應(yīng)部分，樣品注射部分及提供從樣品注射部分通過反應(yīng)部分的通道的膜的檢測(cè)條，其中半乳糖凝集素-3的捕獲抗體或半乳糖凝集素-3固定在反應(yīng)部分；將包括半乳糖凝集素-3及偶聯(lián)金顆粒的半乳糖凝集素-3示蹤抗體的血液樣品通過膜從樣品注射部分轉(zhuǎn)移到反應(yīng)部分；根據(jù)反應(yīng)部分顏色的變化預(yù)診感染癌癥的危險(xiǎn)。
本發(fā)明進(jìn)一步提供診斷或預(yù)診癌癥發(fā)生或感染癌癥危險(xiǎn)的試劑盒，包括具有反應(yīng)部分，樣品注射部分及提供從樣品注射部分到反應(yīng)部分的樣品通道的膜的檢測(cè)條，其中反應(yīng)部分包括固定于其上的半乳糖凝集素-3的捕獲抗體或半乳糖凝集素-3，使得當(dāng)包括半乳糖凝集素-3及偶聯(lián)金顆粒的半乳糖凝集素-3示蹤抗體的血樣品通過膜從樣品注射部分轉(zhuǎn)移到反應(yīng)部分時(shí)，可根據(jù)血樣品中半乳糖凝集素-3的濃度測(cè)定反應(yīng)部分的顏色。
本發(fā)明進(jìn)一步提供診斷或預(yù)診癌癥發(fā)生或感染癌癥危險(xiǎn)的試劑盒，包括一種用于固定血樣品中半乳糖凝集素-3的微量培養(yǎng)板；一種與固定在微量培養(yǎng)板上的半乳糖凝集素-3反應(yīng)以誘導(dǎo)微量培養(yǎng)板顏色變化的單克隆抗體。
本發(fā)明進(jìn)一步提供診斷或預(yù)診癌癥發(fā)生或感染癌癥危險(xiǎn)的方法，包括以下步驟測(cè)定在作為惡性腫瘤發(fā)展初始階段的腺瘤或慢性炎癥階段出現(xiàn)的癌癥篩查抗原；通過將血樣品與癌癥篩查抗原的單克隆抗體反應(yīng)測(cè)定血樣品中癌癥篩查抗原濃度；將測(cè)定的癌癥篩查抗原濃度與正常人血樣品中癌癥篩查抗原濃度進(jìn)行比較；如果測(cè)定濃度實(shí)質(zhì)上高于或低于正常人血液中癌癥篩查抗原濃度，則預(yù)診感染癌癥的危險(xiǎn)。
附圖及照片簡(jiǎn)述參考以下詳細(xì)描述，并結(jié)合相應(yīng)附圖及照片，如同更容易理解，更完整地理解本發(fā)明及其很對(duì)附帶的優(yōu)勢(shì)將相當(dāng)明顯，其中

圖1A所示的是由正常細(xì)胞環(huán)繞的奧厄巴赫氏神經(jīng)叢處半乳糖凝集素-3出現(xiàn)的顯微照片(放大比例200)；圖1B所示的是半分化指環(huán)狀細(xì)胞處半乳糖凝集素-3純現(xiàn)的顯微照片(放大比例200)；圖2A所示的是腸組織轉(zhuǎn)化處半乳糖凝集素-3出現(xiàn)的顯微照片(放大比例100)；圖2B所示的是管狀癌處半乳糖凝集素-3出現(xiàn)的顯微照片(放大比例200)；圖3所示的是分化良好的腫瘤組織及半分化指環(huán)狀細(xì)胞處半乳糖凝集素-3出現(xiàn)的顯微照片(放大比例200)；圖4所示的是根據(jù)半乳糖凝集素-3出現(xiàn)的程度得到的5年存活比例的圖表；及圖5所示的是正常人，胃癌患者及慢性胃炎患者血液中半乳糖凝集素-3的濃度的圖表。連續(xù)稀釋的血樣品中半乳糖凝集素-3的濃度以通過ELISA方法測(cè)定的吸收值表示。在圖5中，x軸代表血樣品的稀釋比例，y軸代表490nm處的吸收值。圖5中每個(gè)標(biāo)記均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差的方式表示。
圖6是形成依照本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方案的試劑盒的檢測(cè)條的平面圖。
發(fā)明詳述為了更好的理解本發(fā)明，對(duì)以下內(nèi)容及后附的權(quán)利要求進(jìn)行詳細(xì)描述。
本發(fā)明提供了在腫瘤發(fā)展前期或初始階段診斷或預(yù)診癌癥發(fā)生或感染癌癥的危險(xiǎn)的方法，所述例如胃癌，肝癌，甲狀腺癌等。迄今為止，癌癥的診斷均是通過測(cè)定存在于正常細(xì)胞中，但在腫瘤細(xì)胞中增加的腫瘤相關(guān)移植抗原(TATA)的濃度進(jìn)行的。但是，TATA的過量出現(xiàn)僅在腫瘤惡化后，即在腫瘤發(fā)展初始階段之后才發(fā)生。因此，用TATA診斷腫瘤的方法對(duì)癌癥的早期診斷幫助不大。
相反，本發(fā)明涉及一種早期診斷癌癥發(fā)展的新概念。根據(jù)本發(fā)明的方法，用惡性腫瘤(癌)發(fā)展前在血液中過量出現(xiàn)的抗原來診斷和/或預(yù)診感染癌癥的危險(xiǎn)，而不是用癌癥發(fā)展后過量出現(xiàn)的抗原進(jìn)行診斷。本發(fā)明中所用的抗原定義為癌癥篩查抗原(CSA)。
本發(fā)明也提供一種利用癌癥篩查抗原(CSA)的特性，可使普通用戶在癌癥發(fā)展早期階段并以簡(jiǎn)單且容易的方式診斷和/或預(yù)診癌癥發(fā)生的試劑盒，所述癌癥例如胃癌，肝癌，甲狀腺癌等，優(yōu)選胃癌。根據(jù)本發(fā)明，合適的癌癥篩查抗原是半乳糖凝集素-3。半乳糖凝集素-3在正常組織，例如正常胃組織，肝組織及甲狀腺中不出現(xiàn)，但在作為惡性腫瘤(癌)前期階段的良性腫瘤(腺癌)或慢性炎癥階段過量出現(xiàn)。因此，半乳糖凝集素-3可用于早期診斷胃癌。另外，由于肝癌及甲狀腺癌與胃癌具有相同的特征，因此半乳糖凝集素-3也可用于早期診斷肝癌及甲狀腺癌。
利用半乳糖凝集素-3預(yù)診腫瘤，例如胃癌發(fā)生的方法包括以下步驟獲得用戶血樣品，通過抗原—抗體反應(yīng)測(cè)定血樣品中半乳糖凝集素-3濃度，將測(cè)定的半乳糖凝集素-3濃度與未處于良性腫瘤(腺瘤)，慢性炎癥或惡性腫瘤(癌)階段的正常人血液中半乳糖凝集素-3濃度進(jìn)行比較。半乳糖凝集素-3在正常血液中不出現(xiàn)，但在作為癌癥前期階段的腺癌或慢性炎癥階段是過量出現(xiàn)，并且在癌癥階段維持過量出現(xiàn)。因此，如果用戶血樣品中半乳糖凝集素-3濃度高于正常人，則該用戶可能處于疾病初始或前期階段，并很有可能感染腫瘤。
由于根據(jù)本發(fā)明的方法是通過測(cè)定血樣品中半乳糖凝集素-3的濃度來診斷癌癥，而不是直接檢測(cè)胃，肝及甲狀腺組織，因此對(duì)癌癥的特異類型，例如胃癌，肝癌及甲狀腺癌的區(qū)別可能不全面。但如果檢測(cè)結(jié)果為陽性，則用戶可進(jìn)行更精確的醫(yī)學(xué)檢查，其導(dǎo)致早期和精確診斷癌癥。
根據(jù)本發(fā)明的方法，診斷腫瘤的第一步是通過將血樣品與半乳糖凝集素-3單克隆抗體反應(yīng)，測(cè)定血樣品中半乳糖凝集素-3濃度。血樣品中半乳糖凝集素-3濃度可通過免疫檢測(cè)方法進(jìn)行測(cè)定，優(yōu)選地通過利用抗原—抗體反應(yīng)的酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法進(jìn)行測(cè)定。
對(duì)使用作為酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法之一的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)來說，是將血樣品中的抗原(半乳糖凝集素-3)固定在固相上。例如，抗原包被在固相，例如微量培養(yǎng)板上。優(yōu)選地，在固定前用緩沖液以32-256的稀釋比例稀釋血清樣品?？乖潭ê?，對(duì)固相進(jìn)行洗滌和封閉。
然后，向固相中加入單克隆抗體(半乳糖凝集素-3的第一抗體，例如M3/38單克隆抗體(大鼠IgG))，與抗原反應(yīng)，并進(jìn)行洗滌，然后加入第二抗體(例如，偶聯(lián)辣根過氧化物酶(HRP)的山羊抗大鼠IgG)，與作為第二抗體抗原的第一抗體反應(yīng)。優(yōu)選地，第二抗體用酶進(jìn)行標(biāo)記。標(biāo)記酶的第二抗體與第一抗體結(jié)合后，對(duì)第二抗體加入著色劑溶液(colorantsolution)，以誘導(dǎo)酶反應(yīng)及清晰的顏色變化。
終止酶反應(yīng)后，測(cè)定半乳糖凝集素-3與單克隆抗體復(fù)合物的光吸收，從而得到血樣品中半乳糖凝集素-3的濃度。由于第一抗體，第二抗體，酶及著色劑在本領(lǐng)域中均是已知的，因此本領(lǐng)域中熟練人員可很容易地進(jìn)行選擇，優(yōu)選地，可以僅使用標(biāo)記酶的第一抗體，而不用第二抗體。
選擇性地，可用一種試劑盒，例如一種與檢測(cè)懷孕，糖尿病或血液中膽固醇含量的傳統(tǒng)試劑盒具有相同構(gòu)造的免疫色譜檢測(cè)條測(cè)定半乳糖凝集素-3濃度。
該試劑盒具有本領(lǐng)域已知的多種構(gòu)造。如圖6所示，該試劑盒最簡(jiǎn)單的構(gòu)造是包括反應(yīng)部分10，樣品注射部分20及提供從樣品注射部分20到反應(yīng)部分10的通道的膜30的檢測(cè)條100。該檢測(cè)條100可用具有至少一個(gè)用于觀察反應(yīng)部分10及注射樣品的窗口的塑料容器進(jìn)行保護(hù)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，半乳糖凝集素-3捕獲抗體固定在反應(yīng)部分10上，包括抗原(半乳糖凝集素-3)及偶聯(lián)金顆粒的半乳糖凝集素-3示蹤抗體的血樣品通過膜30從樣品注射部分20轉(zhuǎn)移到反應(yīng)部分10。在該實(shí)施方案中，如果半乳糖凝集素-3在血樣品中是過量出現(xiàn)，則更多的半乳糖凝集素-3與偶聯(lián)金顆粒的示蹤抗體反應(yīng)，從而在反應(yīng)部分10捕獲更大量的抗體—抗原復(fù)合物，其導(dǎo)致反應(yīng)部分10的顏色變化。相反，如果半乳糖凝集素-3在血樣品中沒有過量出現(xiàn)，則偶聯(lián)金顆粒的示蹤抗體不能與抗原反應(yīng)，從而不能在反應(yīng)部分10上被捕獲。在這種情況下，反應(yīng)部分10的顏色不發(fā)生變化。因此，用戶可以根據(jù)反應(yīng)部分10的顏色變化測(cè)定半乳糖凝集素-3濃度。
偶聯(lián)金顆粒的示蹤抗體可直接與血樣品混合，并注射到樣品注射部分20。選擇性地，偶聯(lián)金顆粒的示蹤抗體可以以干燥狀態(tài)定位于樣品注射部分20及反應(yīng)部分10之間。在后一種情況下，當(dāng)血樣品從樣品注射部分20轉(zhuǎn)移到反應(yīng)部分10時(shí)，干燥的偶聯(lián)金顆粒的示蹤抗體與之混合，并與血樣品中的半乳糖凝集素-3發(fā)生反應(yīng)。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，半乳糖凝集素-3固定在反應(yīng)部分10，包括半乳糖凝集素-3及偶聯(lián)金顆粒的半乳糖凝集素-3示蹤抗體的血樣品通過膜30從樣品注射部分20轉(zhuǎn)移到反應(yīng)部分10。當(dāng)包括半乳糖凝集素-3及偶聯(lián)金顆粒的示蹤抗體的血樣品到達(dá)反應(yīng)部分10時(shí)，固定在反應(yīng)部分10的半乳糖凝集素-3和血樣品中的半乳糖凝集素-3與偶聯(lián)金顆粒的示蹤抗體發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)性反應(yīng)。因此，如果血樣品中的半乳糖凝集素-3過量出現(xiàn)，則固定在反應(yīng)部分10的半乳糖凝集素-3不能與偶聯(lián)金顆粒的示蹤抗體發(fā)生反應(yīng)。因此，反應(yīng)部分10的顏色不發(fā)生變化。相反，如果血樣品中的半乳糖凝集素-3沒有過量出現(xiàn)，則固定在反應(yīng)部分10的半乳糖凝集素-3捕獲大量偶聯(lián)金顆粒的示蹤抗體，其導(dǎo)致反應(yīng)部分10的顏色發(fā)生變化。
總之，反應(yīng)部分10包括固定其上的半乳糖凝集素-3的捕獲抗體或半乳糖凝集素-3，使得當(dāng)包括半乳糖凝集素-3及偶聯(lián)金顆粒的半乳糖凝集素-3示蹤抗體的血樣品通過膜30轉(zhuǎn)移到反應(yīng)部分10時(shí)，可根據(jù)血樣品中半乳糖凝集素-3的濃度測(cè)定反應(yīng)部分10的顏色。
為了清晰地檢測(cè)反應(yīng)部分10的顏色變化，可根據(jù)傳統(tǒng)方法，例如將血樣品與氧化劑混合，從而對(duì)血樣品進(jìn)行脫色。選擇性地，可在樣品注射部分20與反應(yīng)部分10之間形成一個(gè)對(duì)血樣品中有色物質(zhì)進(jìn)行過濾的過濾器。優(yōu)選地，可在樣品注射部分20的反向末端在膜30上形成一條傳統(tǒng)的控制線40，將控制線40設(shè)計(jì)為當(dāng)血樣品到達(dá)控制線40時(shí)，其顏色發(fā)生改變，從而使用戶確定檢測(cè)已完成。
一般來說，甚至正常組織中也包括少量的半乳糖凝集素-3。因此，應(yīng)對(duì)該試劑盒的顏色變化進(jìn)行控制，以使血樣品中半乳糖凝集素-3的濃度比正常血液高時(shí)才發(fā)生顏色變化。另外，由于半乳糖凝集素-3濃度而產(chǎn)生的顏色變化依賴于樣品的稀釋比例(參見以下實(shí)施例)。因此，應(yīng)控制樣品稀釋比例，以使反應(yīng)部分的顏色對(duì)正常血液不發(fā)生改變，而對(duì)異常血液可發(fā)生改變。根據(jù)本試劑盒構(gòu)造可正確控制稀釋比例。另外，美國(guó)專利5,616,467中公開的任何傳統(tǒng)試劑盒的構(gòu)造均可作為本發(fā)明中試劑盒的構(gòu)造。
為了更詳細(xì)舉例說明本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，給出以下實(shí)施例。
實(shí)施例1.材料與方法(1).胃癌組織與血液的制備從韓國(guó)Aju大學(xué)醫(yī)院獲得100個(gè)胃癌組織切片。100個(gè)在1994-1996年間通過病理診斷確診為胃癌的患者在胃切除術(shù)期間收集組織切片。組織切片包括晚期癌，早期胃癌(EGG)，癌癥前期損傷及正常胃粘膜組織。正常外周血從隨機(jī)挑選的正常人中獲得，胃癌或胃炎患者的外周血從韓國(guó)Aju大學(xué)醫(yī)院及天主教大學(xué)文森醫(yī)院(Catholic University Vincent Hospital)獲得。
(2).胃癌組織中半乳糖凝集素-3蛋白的免疫組化染色為了除去制備切片中的石蠟及水化切片，將組織切片浸泡在二甲苯溶液中5分鐘，浸泡過程重復(fù)進(jìn)行3次。然后將切片依次浸泡在100％乙醇溶液，另一個(gè)100％乙醇溶液，90％乙醇溶液，80％乙醇溶液及70％乙醇溶液中，每次浸泡5分鐘。然后將切片在蒸餾水中浸泡10分鐘，在3％過氧化氫溶液中浸泡5分鐘，并用含1％Triton X-100的PBS洗滌3次，每次5分鐘。洗滌后的切片轉(zhuǎn)移到濕潤(rùn)的容器中以防止非特異性結(jié)合反應(yīng)，并用10％正常山羊血清處理，在室溫下反應(yīng)30分鐘。
反應(yīng)完成后，將產(chǎn)M3/38單克隆抗體(大鼠IgG，第一抗體)的細(xì)胞株培養(yǎng)上清加到濕潤(rùn)的容器中，并在4℃過夜反應(yīng)，用含1％Triton X-100的PBS洗滌3次，每次5分鐘。用含3％BSA的PBS以1∶800的稀釋比例稀釋作為第二抗體的偶聯(lián)辣根過氧化物酶(HRP)的山羊抗大鼠IgG(Pierce co.)，并加到濕潤(rùn)的容器中，室溫下反應(yīng)1小時(shí)，并用含1％Triton X-100的PBS洗滌3次，每次5分鐘。然后將組織與3，3’-二氨基聯(lián)苯胺(DAB)進(jìn)行反應(yīng)，洗滌，染色，以Harris’蘇木精作為對(duì)照，并進(jìn)行脫水。
(3).外周血中半乳糖凝集素-3濃度的測(cè)定外周血中半乳糖凝集素-3濃度通過ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法)如下。
分別用100μl含有等量0.5M碳酸鹽和0.5M碳酸氫鹽(pH＝9.6)的緩沖液包被兩塊96孔板。然后用50μl緩沖液和50μl含有抗原(半乳糖凝集素-3)的血樣品分別包被96孔板的一個(gè)。將混合物均勻混合，并將100μl混合物轉(zhuǎn)移到第二個(gè)96孔板中，以使樣品稀釋2倍。重復(fù)進(jìn)行稀釋過程，將混合物稀釋2048倍，在某些實(shí)驗(yàn)中，稀釋到131072倍。
稀釋的混合物在4℃過夜反應(yīng)，從而將抗原(半乳糖凝集素-3)包被到96孔板上。然后包被的抗原用洗液(PBS+0.05％Tween-20)洗滌3次，并用含3％BSA的PBS進(jìn)行封閉，在37℃培養(yǎng)1小時(shí)。然后對(duì)微量培養(yǎng)板進(jìn)行洗滌。
然后，向包被的抗原中加入第一抗原。詳細(xì)地，制備的半乳糖凝集素-3單克隆抗體用具有下述組成的EIA緩沖液以1∶1稀釋比例進(jìn)行稀釋，并接種到微孔中(100μl/孔)，37℃溫育2小時(shí)，洗滌。
<EIA緩沖液組成(100ml)>
0.01M tris-HCl緩沖液 75mlTween-20 0.1ml胎牛血清 25mlEDTA 200mg硫柳汞5mg然后用第二抗體進(jìn)行反應(yīng)。詳細(xì)地，山羊抗大鼠IgG-HRP以1∶1,500稀釋比例進(jìn)行稀釋，并接種到微孔中(100μl/孔)，37℃溫育2小時(shí)，洗滌。第二步是向孔中接種色原溶液(100μl/孔)。同時(shí)制備儲(chǔ)液，以使OPD終濃度為0.5mg/ml，OPD底物的緩沖液由0.05M檸檬酸鈉及0.05M Na2HPO4(pH 5.0)組成。通過混合1ml OPD儲(chǔ)液(鄰苯二胺儲(chǔ)液)，9ml OPD緩沖液及3.3μl30％H2O2制備HRP底物，混合物在室溫溫育1小時(shí)。然后加入2.5M H2SO4(50μl/孔)終止反應(yīng)，測(cè)定490nm處板的光吸收。
(4).病理解釋以胃部奧厄巴赫氏神經(jīng)叢中半乳糖凝集素-3的出現(xiàn)作為對(duì)照。根據(jù)以下標(biāo)準(zhǔn)解釋病理診斷。
(-)半乳糖凝集素-3不出現(xiàn)(1+)半乳糖凝集素-3在少于5％的腫瘤細(xì)胞中出現(xiàn)(2+)半乳糖凝集素-3在5-50％的腫瘤細(xì)胞中出現(xiàn)(3+)半乳糖凝集素-3在多于50％的腫瘤細(xì)胞中出現(xiàn)(5).分組及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析根據(jù)半乳糖凝集素-3的出現(xiàn)，將上述四個(gè)標(biāo)準(zhǔn)分為如下2組，以對(duì)病理參數(shù)進(jìn)行比較。
A組3+B組-，1+，2+通過Chi-square檢測(cè)法分析兩組之間根據(jù)UICC分類方法確定的病理參數(shù)，例如侵入深度，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目及TNM階段，并用Kaplan-Meier法測(cè)定根據(jù)半乳糖凝集素-3出現(xiàn)而得到的兩組的存活比例。當(dāng)P值小于0.05時(shí)，認(rèn)為該數(shù)據(jù)是統(tǒng)計(jì)學(xué)上有意義的。
2.結(jié)果(1).免疫組化染色由奧厄巴赫氏神經(jīng)叢處半乳糖凝集素-3的出現(xiàn)(參見圖1A和1B)清楚表明半乳糖凝集素-3在正常細(xì)胞中很少出現(xiàn)，僅有少量半乳糖凝集素-3在粘膜頸部出現(xiàn)。如圖2A和2B所示，半乳糖凝集素-3在作為腫瘤前期階段的腸組織轉(zhuǎn)化階段更強(qiáng)烈出現(xiàn)。如圖3所示，半乳糖凝集素-3在腫瘤組織中廣泛出現(xiàn)，但出現(xiàn)程度隨細(xì)胞的分化程度而增加。因此，細(xì)胞分化階段的出現(xiàn)程度高于惡性腫瘤階段的出現(xiàn)程度。
(2).根據(jù)半乳糖凝集素-3的出現(xiàn)對(duì)兩組進(jìn)行的比較100個(gè)胃癌患者中包括72個(gè)男性及28個(gè)女性，平均年齡為53.7(年齡范圍為27-78)。其中64個(gè)人劃分到A組，36個(gè)人劃分到B組。對(duì)兩組的病理參數(shù)進(jìn)行比較，結(jié)果如表1所示。對(duì)B組而言，腸型和彌散型(diffuse type)的數(shù)目幾乎相同，但對(duì)A組而言，腸型的數(shù)目大于彌散型的數(shù)目(p＜0.05)。對(duì)侵入深度而言，在兩組中T3的比例均是最大的(p＜0.05)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目的范圍為1-6(p＜0.05)在I-IV階段中，階段III的比例是最大的，但P值大于0.05，因此認(rèn)為該檢測(cè)結(jié)果沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
表1根據(jù)半乳糖凝集素-3的出現(xiàn)分組患者的病理分析
A組半乳糖凝集素-3出現(xiàn)程度(n＝64)3+B組半乳糖凝集素-3出現(xiàn)程度(n＝36)-，1+，2+圖4所示的是根據(jù)半乳糖凝集素-3出現(xiàn)而得到的5年存活比例，A組的5年存活比例是64.06％，B組的5年存活比例是63.89％(p值＝0.9153)。因此，發(fā)現(xiàn)半乳糖凝集素-3的出現(xiàn)與患者的預(yù)期生命時(shí)間無關(guān)。
(3).外周血中半乳糖凝集素-3的檢測(cè)分別從正常人，慢性胃炎患者，良性腫瘤患者及胃癌患者組中獲得外周血。測(cè)定半乳糖凝集素-3濃度，結(jié)果如圖5所示。如圖5所示，慢性胃炎，良性腫瘤及胃癌組中半乳糖凝集素-3的出現(xiàn)比正常人的高。因此，半乳糖凝集素-3可更有效地用作預(yù)測(cè)癌癥或預(yù)診抗原，而不是用作癌癥診斷試劑。出現(xiàn)的分辨能力在血樣品稀釋100倍時(shí)最大。
3.討論從上述實(shí)驗(yàn)中，測(cè)定了腫瘤發(fā)展各階段半乳糖凝集素-3的出現(xiàn)程度，并發(fā)現(xiàn)了其與腫瘤發(fā)展的關(guān)系?？偨Y(jié)來說，半乳糖凝集素-3在正常細(xì)胞中很少出現(xiàn)，但在作為腫瘤前期階段的腸組織轉(zhuǎn)化及腺瘤階段強(qiáng)烈出現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)中獲得的最出人意料的結(jié)果是半乳糖凝集素-3在腸組織轉(zhuǎn)化和腺瘤階段的出現(xiàn)比在腫瘤階段更強(qiáng)烈。半乳糖凝集素-3的出現(xiàn)在分化的腫瘤細(xì)胞中比在未分化的腫瘤細(xì)胞中更強(qiáng)烈。這表明半乳糖凝集素-3的出現(xiàn)在腸組織轉(zhuǎn)化和腺瘤初始階段開始增加，在腸組織轉(zhuǎn)化和腺瘤階段達(dá)到最大，并在腸組織轉(zhuǎn)化和腺瘤發(fā)展為腫瘤時(shí)仍得到維持。
從病理參數(shù)的分析發(fā)現(xiàn)，半乳糖凝集素-3的出現(xiàn)與侵入深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目相關(guān)性不大。該結(jié)果與乳腺癌的研究結(jié)果類似，但與半乳糖凝集素-3的出現(xiàn)與惡性腫瘤發(fā)展密切相關(guān)的結(jié)腸癌，肺癌，黑素瘤等的研究結(jié)果不同。從胃癌實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，半乳糖凝集素-3的出現(xiàn)與患者的存活比例相關(guān)性不大(p＝0.9153)，這表明半乳糖凝集素-3作為惡性腫瘤特異診斷標(biāo)志物并不如此有效。
然而，在本發(fā)明中，半乳糖凝集素-3主要用作腸組織轉(zhuǎn)化和腺瘤，而不是惡性腫瘤的診斷試劑。由于半乳糖凝集素-3主要在胃癌發(fā)展的前期或初始階段出現(xiàn)，因此期望半乳糖凝集素-3在癌癥發(fā)展的初始或中間階段起作用。因此，半乳糖凝集素-3的出現(xiàn)可用作胃癌早期預(yù)診及感染胃癌可能性的篩查標(biāo)志物。
4.結(jié)論報(bào)道了半乳糖凝集素-3的出現(xiàn)在惡性腫瘤，例如結(jié)腸癌，甲狀腺癌，肺癌及黑色上皮癌中增加，而在乳腺癌中降低。對(duì)胃癌而言，報(bào)道了半乳糖凝集素-3在正常胃組織中很少出現(xiàn)，而在胃癌組織中有出現(xiàn)[30]。在以上報(bào)道中，研究了半乳糖凝集素-3在正常胃組織和胃癌中的出現(xiàn)，但沒有闡述癌癥發(fā)展過程中半乳糖凝集素-3的出現(xiàn)，因此，在以前報(bào)道中沒有關(guān)于使用半乳糖凝集素-3作為抗原對(duì)腫瘤進(jìn)行早期預(yù)診的報(bào)道。相反，在本發(fā)明中研究了半乳糖凝集素-3在正常組織和血液，胃癌前期階段，良性瘤初始階段及惡性瘤惡化階段的出現(xiàn)，而且發(fā)現(xiàn)半乳糖凝集素-3的過量出現(xiàn)可作為惡性腫瘤初始階段的信號(hào)，即用于檢測(cè)腫瘤發(fā)展前期及初始階段的信號(hào)。
在本發(fā)明中，僅顯示并描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，但如前所述，可以理解，本發(fā)明可以使用各種其他組合和環(huán)境，并且可在此處表述的發(fā)明主旨的范圍內(nèi)進(jìn)行修改或修飾。
參考文獻(xiàn)1.Barondes，S.H.，Cooper，D.N.W.，Gift，M.A.and Leffler，H.Galectinsstructure and function of a large family of animal lectins，J.Biol.Chem.，26920807-20810，1994.
2.Barondes，S.H.，Castronovo，V.，Cooper，D.N.W.，Cummings，R.D.，Drickamer，K.，F(xiàn)eizi，T.，Gitt，M.A.，Hirabayashi，J.，Hughes，C.，Kasai，K-I.，Leffler，H.，Liu，F(xiàn)-T.，Lotan，R.，Mercurio，A.M.，Monsigny，M.，Pillai，S.，Poirer，F(xiàn).，Raz，A.，Rigby，P.W.J.，Rini，J.M.and Wang，J.L. Galectinsafamily of animal β-galactoside-binding lectins，Cell，76 597-598，1994.
3.Blaser，C.，Kaufmann，M.，Muller，C.，Zimmermann，C.，Wells，V.，Mallucci，L.and Pircher，H.β-galactoside-binding protein secreted byactivated T-cells inhibits antigen-induced proliferation of T-cells，Eur.J.Immunol.，282311-2319，1998.
4.Bresalier，R.S.，Yan，P-S.，Byrd，J.C.，Lotan，R.and Raz，A.Expression of the endogenous galactose-binding protein galectin-3 correlateswith the malignant potential of tumors in the central nervous system，Cancer，80 776-787，1997.
5.Bresalier，R.S.，Mazurek，N.，Stemberg，L.R.，Byrd，J.C.，Yunker，C.K.，Nangia-Makker，P.and Raz，A.Metastasis of human colon cancer is alteredby modifyng expression of the β-galactoside-binding protein galectin-3，Gastroenterology，115287-296，1998.
6.Castronovo，V.，Van den Brule，F(xiàn).A.，Jackers，P.，Clausse，N.，Liu，F(xiàn)-T.，Gillet，C.and Sobel，M.E.Decreased expression of galectin-3 is associatedwith progression of human breast cancer，J.Pathol.，17943-48，1996.
7.Dagher，S.F.，Wang，J.L and Patterson，R.J.Identification of galectin-3as a factor in pre-mRNA splicing，Proc.Natl.Acad.，921213-1217，1995.
8.Dong，S and Hughes，C.Galectin-3 stimulates uptake of extracellularCa2+in human Jurkat T-cells，F(xiàn)EBS Letters，395165-169，1996.
9.Fernandez，P.L.，Merino，M.J.，Gomez，M.，Campo，E.，Medina，T.，Castronovo，V.，Sanjuan，X.，Cardesa，A.，Liu，F(xiàn)-T.and Sobel，M.E.Galectin-3 and laminin expression in neoplastic and non-neoplastic thyroidtissue，J.Pathol.，18180-86，1997.
10.Gitt，M.A.，Wiser，M.F.，Leffler，H.，Herrmann，J.，Xia，Y-R.，Massa，S.M.，Cooper，D.N.W.，Lusis，A.J. and Barondes，S.H.Sequence andmapping of galectin-5，aβ-galactoside-binding lectin，found in rat erythrocytes，J.Biol.Chem.，2705032-5038，1995.
11.Hermanek，P and Sobin L.H.TNM classification of malignant tumors，4th ed.GenevaUnion lnternationale Contrele Cancer(UICC)，198712.Ho，M-K.and Springer，T.A.Mac-2，a hovel 32,000 Mr mousemacrophage subpopulation-specific antigen defined by monoclonal antibodies，J.Immunol.，1281221-1228，198213.Hsu，D.K.，Dowling，C.A.，Jeng，K.C.G.，Chen，J-T.，Yang，R-Y.andLiu，F(xiàn)-T.Galectin-3 expression is induced in cirrhotic liver andhepatocellular carcinoma，Int.J.Cancer，81519-526，199914.Irimura，T.，Matsushida，Y.，Sutton，R.C.，Carralero，D.，Ohannesian，D.W.，Cleary，K.R.，Ota，D.M.，Nicolson，G.L. and Lotan，R.Increasedcontent of an endogenous lactose-binding lectin in human colorectalcarcinoma progressed to metastatic stages，Cancer Res.，51387-393，199115.Leffler，H.and Barondes，S.H.Specificity of binding of three solublerat lung lectins to substituted and unsubstituted mammalian β-galactosides，J.Biol.Chem.26110119-10126，198616.Lotan，R.，Ito，H.，Yasui，W.，Yokozaki，H.，Lotan，D.and Tahara，E.Expression of a 31 kDa lactoside-binding lectin in normal human gastricmucosa and in primary and metastatic gastric carcinomas，Int.J.Cancer，56474-480，199417.Madsen，P.，Rasmussen，H.H.，F(xiàn)lint，T.，Gromov，P.，Kruse，T.A.，Honore，B.，Vorum，H.and Celis，J.E.Cloning，expression and chromosomemapping of human galectin-7，J.Biol.Chem.，2705823-5829，199518.Marer，N.L.and Hughes，R.C.Effects of the carbohydrate-bindingprotein galectin-3 on the invasiveness of human breast carcinoma cells，J.Cell.Physiol.，16851-58，199619.Ohannesian，D.W.，Lotan，D.，Thomas，P.，Jeesup，J.M.，F(xiàn)ukuda，M.，Gabius，H-J.and Lotan，R.Carcinoembryonic antigen and otherglycoconjugates act as ligands for galectin-3 in human colon carcinoma cells，Cancer Res.，552191-2199，199520.Orlandi，F(xiàn).，Saggiorato，E.，Pivano，G.，Puligheddu，B.，Termine，A.，Cappia，S.，Giuli，P.D.and Angeli，A.Galectin-3 is a presurgical marker ofhuman thyroid carcinoma，Cancer Res.，583015-3020，199821.Perrillo，N.L.，Marcus，M.E.and Baum，L.G.Galectinsversatilemodulators of cell adhesion cell proliferation and cell death，J.Mol.Med.，76402-412，199822.Raimond，J.，Roulex，F(xiàn).，Monsigny，M.and Legrand，A.The secondintron of the human galectin-3 gene has a strong promoter activitydown-regulated by p53，F(xiàn)EBS Letters，363165-169，199523.Sanjuan，X.，F(xiàn)ernandez，P.L.，Castells，A.，Castronovo，V.，Van DenBrule，F(xiàn).，Liu，F(xiàn)-T.，Cardesa，A.and Campo，E.Differential expression ofgalectin-3 and galectin-1 in colorectal cancer progression，Gastroenterology，1131906-1915，199724.Schoeppner，H.L.，Raz，A.，Ho，S.B.and Bresalier，R.S.Expression ofan endogenous galactose-binding lectin correlates with neoplastic progressionin the colon，Cancer，752818-2826，199525.Sparrow，C.P.，Leffler，H.and Barondes，S.H.Multiple solubleβ-galactoside-binding lectins from human lung，J.Biol.Chem.，2627383-7390，198726.Woo，H-J.，Lotz，M.M.，Jung，J.U.and Mercurio，A.M.Carbohydrate-binding protein 35(Mac-2)，a laminin-binding lectin，formsfunctional dimers using cysteine 186，J.Biol.Chem.，26618419-18422，199127.Woo，H-U.，Shaw，L.M.，Messier，U.M.and Mercurio.A.M.Themajor non-integrin laminin binding protein of macrophages is identical tocarbohydrate binding proein 35(Mac-2)，J.Biol.Chem.，2657097-7099，199028.Xu，X-C.，EI-Naggar and Lotan，R.Differential expression ofgalectin-land galectin-3 in thyroid tumors，Am.J.Pathol.，147815-822，199529.Yang，R-Y.，Hsu.D.K.and Liu，F(xiàn)-T.Expression of galectin-3modulates T-cell growth and apoptosis，Proc.Natl.Acad.Sci.，936737-3742，199630.Joo，H-G.，and Woo，H-J.Studies on the expression of galectin-3 ingastric cancer，Kor.J.Immunol.，18583-590，199631.Woo，H-J.Secretion of macrophage differentiation antigen，Mac-2，Kor.J.Immunol.，1561-68，199權(quán)利要求
1.一種診斷或預(yù)診癌癥發(fā)生或感染癌癥危險(xiǎn)的方法，其包括以下步驟通過將血樣品與半乳糖凝集素-3的單克隆抗體反應(yīng)測(cè)定血樣品中半乳糖凝集素-3的濃度；將測(cè)定的半乳糖凝集素-3濃度與正常人血樣品中半乳糖凝集素-3的濃度進(jìn)行比較；及如果測(cè)定濃度比正常人血液中半乳糖凝集素-3的濃度高，則預(yù)診為具有感染癌癥的危險(xiǎn)。
2.權(quán)利要求1中的方法，其中所述測(cè)定血樣品中半乳糖凝集素-3濃度的步驟是通過測(cè)定由酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)形成的半乳糖凝集素-3與單克隆抗體復(fù)合物的吸收值進(jìn)行的。
3.權(quán)利要求2中的方法，其中所述單克隆抗體是M3/38單克隆抗體(大鼠IgG)，所述單克隆抗體作為第一抗體，將偶聯(lián)辣根過氧化物酶(HRP)的山羊抗大鼠IgG用作為第二抗體，其與所述第一抗體進(jìn)行反應(yīng)。
4.權(quán)利要求1中的方法，其中所述測(cè)定血樣品中半乳糖凝集素-3濃度的步驟包括以下步驟用緩沖液將血樣品稀釋到預(yù)定稀釋比例；將血樣品中的半乳糖凝集素-3固定到固相上；將作為第一抗體的半乳糖凝集素-3單克隆抗體與固定在固相上的半乳糖凝集素-3進(jìn)行反應(yīng)；將作為第二抗體的偶聯(lián)辣根過氧化物酶(HRP)的山羊抗大鼠IgG與所述第一抗體進(jìn)行反應(yīng)；對(duì)所述辣根過氧化物酶使用著色劑溶液；及通過測(cè)定所述半乳糖凝集素-3和抗體復(fù)合物的吸收值來測(cè)定半乳糖凝集素-3的濃度。
5.權(quán)利要求1中的方法，其中在以32-256的稀釋比例稀釋最初血樣品時(shí)測(cè)定血樣品中的半乳糖凝集素-3濃度。
6.一種診斷或預(yù)診癌癥發(fā)生或感染癌癥危險(xiǎn)的方法，包括以下步驟制備具有反應(yīng)部分，樣品注射部分及提供從樣品注射部分轉(zhuǎn)移到反應(yīng)部分的通道的膜的檢測(cè)條，其中將半乳糖凝集素-3的捕獲抗體或半乳糖凝集素-3固定在反應(yīng)部分；將包括半乳糖凝集素-3及偶聯(lián)金顆粒的半乳糖凝集素-3示蹤抗體的血液樣品通過膜從樣品注射部分轉(zhuǎn)移到反應(yīng)部分；及根據(jù)反應(yīng)部分顏色的變化預(yù)診感染癌癥的危險(xiǎn)。
7.權(quán)利要求6中的方法，其中直接將所述偶聯(lián)金顆粒的示蹤抗體與所述血樣品混合，并注射到所述樣品注射部分。
8.權(quán)利要求6中的方法，其中所述檢測(cè)條進(jìn)一步包括以干燥狀態(tài)定位于樣品注射部分與反應(yīng)部分之間的偶聯(lián)金顆粒的示蹤抗體。
9.權(quán)利要求6中的方法，其中所述檢測(cè)條進(jìn)一步包括在所述樣品注射部分的反向末端的膜上形成的控制線，其被設(shè)計(jì)為當(dāng)血樣品到達(dá)控制線時(shí)，其顏色發(fā)生改變。
10.權(quán)利要求6中的方法，其中以32-256的稀釋比例稀釋所述血樣品。
11.一種診斷或預(yù)診癌癥發(fā)生或感染癌癥危險(xiǎn)的試劑盒，其包括具有反應(yīng)部分；樣品注射部分及提供從樣品注射部分轉(zhuǎn)移到反應(yīng)部分的樣品通道的膜的檢測(cè)條，其中所述反應(yīng)部分包括固定其上的半乳糖凝集素-3捕獲抗體或半乳糖凝集素-3，當(dāng)包括半乳糖凝集素-3及偶聯(lián)金顆粒的半乳糖凝集素-3示蹤抗體的血液樣品通過膜從樣品注射部分轉(zhuǎn)移到反應(yīng)部分時(shí)，可根據(jù)所述血樣品中半乳糖凝集素-3濃度測(cè)定反應(yīng)部分的顏色。
12.權(quán)利要求11中的試劑盒，其中所述偶聯(lián)金顆粒的示蹤抗體以干燥狀態(tài)定位于樣品注射部分與反應(yīng)部分之間。
13.權(quán)利要求11中的試劑盒，其中所述檢測(cè)條進(jìn)一步包括在所述樣品注射部分反向末端的膜上形成的控制線，其被設(shè)計(jì)為當(dāng)血樣品到達(dá)控制線時(shí)，其顏色發(fā)生改變。
14.一種診斷或預(yù)診癌癥發(fā)生或感染癌癥危險(xiǎn)的試劑盒，其包括一種用于固定血樣品中半乳糖凝集素-3的微量培養(yǎng)板；及一種與固定在所述微量培養(yǎng)板上的半乳糖凝集素-3反應(yīng)以誘導(dǎo)微量培養(yǎng)板顏色變化的單克隆抗體。
15.一種診斷或預(yù)診癌癥發(fā)生或感染癌癥危險(xiǎn)的方法，其包括以下步驟測(cè)定在作為惡性癌癥發(fā)展前期階段的腺瘤或慢性炎癥階段出現(xiàn)的癌癥篩查抗原；通過將血樣品與所述癌癥篩查抗原的單克隆抗體反應(yīng)測(cè)定血樣品中癌癥篩查抗原的濃度；將測(cè)定的癌癥篩查抗原的濃度與正常人血樣品中癌癥篩查抗原濃度進(jìn)行比較；及如果測(cè)定濃度實(shí)質(zhì)上高于或低于正常人血液中癌癥篩查抗原濃度，則預(yù)診感染癌癥的危險(xiǎn)。
16.權(quán)利要求16中的方法，其中所述測(cè)定癌癥篩查抗原的步驟包括以下步驟測(cè)定抗原在正常，慢性炎癥，腺瘤及惡性腫瘤階段的組織中的出現(xiàn)程度；及當(dāng)在慢性炎癥或腺瘤階段的組織中抗原出現(xiàn)程度實(shí)質(zhì)上高于或低于正常階段的組織中抗原出現(xiàn)程度時(shí)，確定抗原作為癌癥篩查抗原。
全文摘要
本發(fā)明涉及診斷和/或預(yù)診癌癥發(fā)生或感染癌癥危險(xiǎn)的方法和試劑盒，通過測(cè)定患者癌癥發(fā)生前發(fā)生改變的血液中癌癥篩查抗原(CSA)的濃度進(jìn)行檢測(cè)。該診斷或預(yù)診癌癥發(fā)生或感染癌癥危險(xiǎn)的方法包括如下步驟通過將血樣品與半乳糖凝集素－3的單克隆抗體反應(yīng)測(cè)定血樣品中半乳糖凝集素－3的濃度；將測(cè)定的半乳糖凝集素－3濃度與正常人血樣品中半乳糖凝集素－3濃度進(jìn)行比較；如果測(cè)定濃度比正常人血液中半乳糖凝集素－3濃度高，則預(yù)診具有感染癌癥的危險(xiǎn)。
文檔編號(hào)G01N33/574GK1620612SQ02828218
公開日2005年5月25日 申請(qǐng)日期2002年2月19日 優(yōu)先權(quán)日2000年10月30日
發(fā)明者禹希宗 申請(qǐng)人:自利他生物技術(shù)有限責(zé)任公司, 財(cái)團(tuán)法人索爾大學(xué)校產(chǎn)學(xué)協(xié)力財(cái)團(tuán)