專利名稱：直通型檢測(cè)裝置的內(nèi)部校準(zhǔn)系統(tǒng)的制作方法
相關(guān)申請(qǐng)本申請(qǐng)是2001年12月24日提交的申請(qǐng)?zhí)枮?0/035,014的美國專利申請(qǐng)的部分繼續(xù)申請(qǐng)。
背景技術(shù)：
各種分析方法和裝置通常被用于直通型檢測(cè)裝置來測(cè)定測(cè)試樣品中可能存在的分析物是否存在和/或其濃度。例如，在利用免疫系統(tǒng)機(jī)制的免疫檢測(cè)中，響應(yīng)于機(jī)體的病原性或外來抗原的存在就會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。這些抗體和抗原，即免疫反應(yīng)物，能夠彼此相互結(jié)合，從而引起高度特異性的反應(yīng)機(jī)制，可用于測(cè)定生物樣品中特定抗原的存在或濃度。
有許多已知的采用標(biāo)記有可檢測(cè)成分的免疫反應(yīng)物來對(duì)分析物進(jìn)行檢測(cè)分析的免疫檢測(cè)方法。例如，“三明治型”檢測(cè)通常涉及將測(cè)試樣品與針對(duì)分析物的抗體混合。這些抗體可移動(dòng)并被連接于標(biāo)記物或探針，如染色的乳膠、膠體金屬溶液，或者放射性同位素。接著，混合物與帶有固定了針對(duì)分析物的抗體的條帶或區(qū)域的色譜分析介質(zhì)接觸。色譜分析介質(zhì)通常為類似纖維素試紙的條帶形式。當(dāng)分析物與標(biāo)記的抗體的復(fù)合物到達(dá)色譜分析介質(zhì)上固定了抗體的區(qū)域時(shí)發(fā)生結(jié)合并且結(jié)合的標(biāo)記的抗體被定位于該區(qū)域。這指示出了分析物的存在。該技術(shù)可用于獲得定量或半定量結(jié)果。在Grubb等的美國專利US4168146以及Tom等的美國專利US4366241中，描述了一些這種三明治型檢測(cè)的例子。
一種替代技術(shù)是“競(jìng)爭(zhēng)型”檢測(cè)。在“競(jìng)爭(zhēng)型”檢測(cè)中，標(biāo)記物通常是能夠與樣品中存在的任何未標(biāo)記的分析物競(jìng)爭(zhēng)性地與抗體結(jié)合的標(biāo)記了的分析物或分析物類似物。競(jìng)爭(zhēng)性檢測(cè)通常用于測(cè)定分析物如半抗原，每個(gè)半抗原是單價(jià)的，并僅能與一個(gè)抗體分子結(jié)合。在Deutsch等的美國專利US4235601；Liotta的美國專利US4442204以及Buechler等的美國專利US5208535中，有競(jìng)爭(zhēng)性免疫檢測(cè)裝置的例子的描述。
許多這種檢測(cè)，尤其是對(duì)半定量和定量檢測(cè)來說，依賴于校準(zhǔn)來給出有效及有意義的結(jié)果。特別的，通常可采用外部或內(nèi)部校準(zhǔn)系統(tǒng)。在一個(gè)外部校準(zhǔn)系統(tǒng)中，通常由包含一系列已知量的分析物的標(biāo)準(zhǔn)樣品來獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線，接著將得自樣品的結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)曲線相比較，獲知樣品中分析物的存在和/或數(shù)量。外部校準(zhǔn)方法設(shè)計(jì)起來相對(duì)容易，且操作簡(jiǎn)便。然而，該方法通常受到環(huán)境和批次間變化的干擾，因而可信度低。
另一方面，傳統(tǒng)的內(nèi)部校準(zhǔn)系統(tǒng)通常采用一種具有校準(zhǔn)區(qū)域和檢測(cè)區(qū)域的膜，其上固定有對(duì)分析物具有特異性的捕獲試劑。遺憾的是，校準(zhǔn)區(qū)域提供與核測(cè)區(qū)域的可靠且準(zhǔn)確的比較的能力常常有限。而且，絕大部分內(nèi)部校準(zhǔn)區(qū)域相當(dāng)昂貴，因而使得它們不適于某些實(shí)際應(yīng)用。
因此，目前需要一種易于控制、價(jià)格低廉的直通型檢測(cè)裝置的準(zhǔn)確校準(zhǔn)系統(tǒng)。
發(fā)明概述根據(jù)本發(fā)明的一種實(shí)施方案，公開了一種檢測(cè)測(cè)試樣品中分析物是否存在或其量的直通型檢測(cè)裝置(如三明治型，競(jìng)爭(zhēng)型等)。該檢測(cè)裝置包括一個(gè)能夠與包含特異性結(jié)合成分和可檢測(cè)探針的探針結(jié)合物液體連通的多孔膜。例如，在一些實(shí)施方案中，可檢測(cè)探針選自發(fā)色團(tuán)、催化劑、熒光化合物、化學(xué)發(fā)光化合物、放射性標(biāo)記物、直接可見標(biāo)記物、脂質(zhì)體或者這些物質(zhì)的組合。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，可檢測(cè)探針包括乳膠微粒。
多孔膜還限定了一個(gè)含有能夠結(jié)合分析物或結(jié)合探針結(jié)合體的捕獲試劑的檢測(cè)區(qū)域。在一些實(shí)施方案中，例如，捕獲試劑選自抗原、半抗原、抗體以及這些物質(zhì)的復(fù)合物。檢測(cè)區(qū)域能夠產(chǎn)生檢測(cè)信號(hào)從而指示分析物的存在與否。
此外，為有助于測(cè)定測(cè)試樣品中存在的分析物的量，多孔膜還限定了一個(gè)含有構(gòu)造成與探針結(jié)合體結(jié)合的結(jié)合子的校準(zhǔn)區(qū)域。校準(zhǔn)區(qū)域包括i)包含第一預(yù)定量的結(jié)合子的第一校準(zhǔn)區(qū)(如線，點(diǎn)等)，該第一校準(zhǔn)區(qū)能夠產(chǎn)生第一校準(zhǔn)信號(hào)；以及ii)包含比第一預(yù)定量的結(jié)合子的量大的第二預(yù)定量的結(jié)合子的第二校準(zhǔn)區(qū)(如線，點(diǎn)等)，該第二校準(zhǔn)區(qū)能夠產(chǎn)生第二校準(zhǔn)信號(hào)，其強(qiáng)度比第一校準(zhǔn)信號(hào)大。
一旦校準(zhǔn)區(qū)產(chǎn)生信號(hào)，便可將它們與測(cè)定信號(hào)相比較，來確定測(cè)試樣品中分析物的存在或其相對(duì)量。例如，在一些實(shí)施方案中，可通過視覺觀察校準(zhǔn)信號(hào)，并將其與檢測(cè)信號(hào)比較。而且，也可通過使用儀器，如熒光讀數(shù)器、色度讀數(shù)器等將校準(zhǔn)信號(hào)與檢測(cè)信號(hào)進(jìn)行比較。如果希望，可通過校準(zhǔn)信號(hào)的強(qiáng)度對(duì)已知的分析物的量作圖從而產(chǎn)生校準(zhǔn)曲線。該曲線一旦產(chǎn)生，就可用于測(cè)定測(cè)試樣品中分析物的未知量。
為了給出更高的校準(zhǔn)準(zhǔn)確性，校準(zhǔn)區(qū)域可采用2個(gè)以上的校準(zhǔn)區(qū)。例如，在一些實(shí)施方案中，校準(zhǔn)區(qū)域還包括包含比第二預(yù)定量的結(jié)合子的量大的第三預(yù)定量的結(jié)合子的第三校準(zhǔn)區(qū)(如線，點(diǎn)等)。該第三校準(zhǔn)區(qū)能夠產(chǎn)生第三校準(zhǔn)信號(hào)，其強(qiáng)度比第二校準(zhǔn)信號(hào)大。然而，應(yīng)理解的是任一數(shù)量的校準(zhǔn)區(qū)，如4個(gè)或5個(gè)，也適用于本發(fā)明。
也能選擇校準(zhǔn)區(qū)的幾何設(shè)置以增加或減少校準(zhǔn)需要的時(shí)間。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，至少一個(gè)校準(zhǔn)區(qū)被設(shè)置為基本上垂直于測(cè)試樣品通過多孔膜流向的方向。此外，在另一個(gè)實(shí)施方案中，至少一個(gè)校準(zhǔn)區(qū)被設(shè)定為基本上平行于測(cè)試樣品通過多孔膜流向的方向。這種平行設(shè)置可允許多個(gè)校準(zhǔn)區(qū)同時(shí)進(jìn)行校準(zhǔn)。
按照本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，描述了一種測(cè)定測(cè)試樣品中分析物是否存在或其量的直通型檢測(cè)裝置。該直通型檢測(cè)裝置包括一個(gè)能夠與包括特異性結(jié)合成分和可檢測(cè)探針的探針結(jié)合體液體連通的多孔膜。探針結(jié)合體被構(gòu)造為當(dāng)與測(cè)試樣品接觸時(shí)，能與其中的分析物相結(jié)合，并形成探針結(jié)合體/分析物復(fù)合物和非復(fù)合的探針結(jié)合體。此外，多孔膜限定了一個(gè)檢測(cè)區(qū)域。捕獲試劑基本上非擴(kuò)散地固定于多孔膜上、檢測(cè)區(qū)域內(nèi)。捕獲試劑能夠與探針結(jié)合體/分析物復(fù)合物結(jié)合產(chǎn)生檢測(cè)信號(hào)。多孔膜還限定了一個(gè)包含構(gòu)造為與非復(fù)合的探針結(jié)合體結(jié)合的結(jié)合子的校準(zhǔn)區(qū)域。校準(zhǔn)區(qū)域包括能夠產(chǎn)生校準(zhǔn)信號(hào)的第一和第二校準(zhǔn)線。通過將測(cè)定信號(hào)與第一校準(zhǔn)信號(hào)及第二校準(zhǔn)信號(hào)相比較，來確定測(cè)試樣品中的分析物的相對(duì)量。
按照本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，描述了一種測(cè)定測(cè)試樣品中分析物(如抗原)是否存在或其量的直通型檢測(cè)裝置。該直通型檢測(cè)裝置包括一個(gè)能夠與包括特異性結(jié)合成分和可檢測(cè)探針的探針結(jié)合體液體連通的多孔膜。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，特異性結(jié)合成分與分析物相同。多孔膜限定了一個(gè)檢測(cè)區(qū)域，其中預(yù)定量的捕獲試劑基本上非擴(kuò)散地固定于多孔膜上。捕獲試劑(如抗體)能夠與分析物(如抗原)結(jié)合，從而導(dǎo)致測(cè)試樣品中的分析物與探針結(jié)合體競(jìng)爭(zhēng)預(yù)定量的捕獲試劑。檢測(cè)區(qū)域能夠產(chǎn)生檢測(cè)信號(hào)。多孔膜還限定了一個(gè)包括構(gòu)造為能夠與未被捕獲試劑結(jié)合的探針結(jié)合體結(jié)合的結(jié)合子的校準(zhǔn)區(qū)域。校準(zhǔn)區(qū)域包括能夠產(chǎn)生校準(zhǔn)信號(hào)的第一和第二校準(zhǔn)區(qū)。通過將測(cè)定信號(hào)與第一校準(zhǔn)信號(hào)及第二校準(zhǔn)信號(hào)相比較，來確定測(cè)試樣品中的分析物的相對(duì)量。
按照本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，描述了一種測(cè)定測(cè)試樣品中分析物(如抗原)是否存在或其量的直通型檢測(cè)裝置。該檢測(cè)裝置包括一個(gè)能夠與包括特異性結(jié)合成分(如抗體)和可檢測(cè)探針的探針結(jié)合體相連通的多孔膜。探針結(jié)合體被構(gòu)造為當(dāng)與測(cè)試樣品接觸時(shí)，能與測(cè)試樣品中的分析物相結(jié)合，并形成探針結(jié)合體/分析物復(fù)合物和非復(fù)合的探針結(jié)合體。多孔膜限定了一個(gè)檢測(cè)區(qū)域，其中捕獲試劑基本上非擴(kuò)散地固定于多孔膜上。捕獲試劑(如抗原)能夠與非復(fù)合的探針結(jié)合體相結(jié)合，其中檢測(cè)區(qū)域能夠產(chǎn)生檢測(cè)信號(hào)。多孔膜還限定了一個(gè)包括構(gòu)造為能夠與未被捕獲試劑結(jié)合的探針結(jié)合體結(jié)合的結(jié)合子的校準(zhǔn)區(qū)域。校準(zhǔn)區(qū)域包括能夠產(chǎn)生校準(zhǔn)信號(hào)的第一和第二校準(zhǔn)區(qū)。通過將測(cè)定信號(hào)與第一校準(zhǔn)信號(hào)及第二校準(zhǔn)信號(hào)相比較，來確定測(cè)試樣品中的分析物的相對(duì)量。
在下面詳細(xì)討論本發(fā)明的其它特征和方面。
附圖簡(jiǎn)述參考附圖，說明書的剩余部分更具體地闡述了對(duì)本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言充分且可行的本發(fā)明的公開內(nèi)容，包括其最佳模式，其中

圖1是本發(fā)明的一種實(shí)施方案的頂視圖，顯示的是在一個(gè)校準(zhǔn)區(qū)域中有三條校準(zhǔn)線的直通型檢測(cè)裝置；圖2是本發(fā)明的直通型檢測(cè)裝置的一種實(shí)施方案的透視示意圖，顯示的是將含有分析物的測(cè)試樣品施加于樣品墊之后的膜檢測(cè)條；圖3圖示的是圖2中所示的側(cè)向檢測(cè)，但測(cè)試樣品遷移通過該檢測(cè)裝置；圖4是本發(fā)明另一種實(shí)施方案的頂視圖，其中圖4A顯示的是基本上平行于分析物流向的校準(zhǔn)線，以及圖4B顯示的是基本上平行于分析物流向的校準(zhǔn)點(diǎn)；圖5顯示的是用于本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案的校準(zhǔn)曲線；圖6顯示的是如在實(shí)施例3中討論的CRP檢測(cè)中的校準(zhǔn)曲線；圖7顯示的是如在實(shí)施例4中討論的LH檢測(cè)中的校準(zhǔn)曲線；以及圖8顯示的是如在實(shí)施例5中討論的前白蛋白檢測(cè)中的校準(zhǔn)曲線。
在本說明書和圖中重復(fù)使用的參考標(biāo)記表示本發(fā)明中相同或相似的特征或成分。
典型實(shí)施方案的詳述定義如這里所用，術(shù)語“分析物”通常指的是待檢測(cè)的物質(zhì)。例如，分析物可包括抗原物質(zhì)；半抗原；抗體；以及這些物質(zhì)的結(jié)合。分析物包括但不限于毒素；有機(jī)化合物；蛋白質(zhì)；肽；微生物；氨基酸；核酸；激素；類固醇；維生素；藥物(包括那些為治療目的和非法目的而使用的藥物)；細(xì)菌；病毒粒和上述任一物質(zhì)的代謝物或抗體。一些分析物的特異例子包括鐵蛋白；肌酸激酶MIR(CK-MB)；地高辛；苯妥英；苯巴比通；酰胺咪嗪；萬古霉素；艮他霉素；茶堿；丙戊酸；奎尼定；促黃體生成激素(LH)；促卵泡激素(FSH)；雌二醇；孕酮；IgE抗體；維生素B2；微球蛋白；糖化血紅蛋白(Gly.Hb)；皮質(zhì)醇；洋地黃毒苷；N-乙酰普魯卡因胺(NAPA)；普魯卡因胺；風(fēng)疹抗體，如風(fēng)疹I(lǐng)gG和風(fēng)疹I(lǐng)gM；弓形蟲病抗體，如弓形蟲病IgG(Toxo-IgG)和弓形蟲病IgM(Toxo-IgM)；睪酮；水楊酸鹽；對(duì)乙酰氨基酚；乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)；乙型肝炎核心抗原的抗體，如抗乙型肝炎核心抗原IgG和IgM(Anti-HBC)；人免疫缺陷病毒1及2(HIV1和2)；人類T細(xì)胞白血病病毒1和2(HTLV)；乙型肝炎e抗原(HBeAg)；乙型肝炎e抗原的抗體(Anti-HBe)；促甲狀腺激素(TSH)；甲狀腺素(T4)；總?cè)饧紫僭彼?總T3)；游離三碘甲腺原氨酸(游離T3)；癌胚抗原(CEA)以及α胎蛋白(AFP)。濫用的藥物及控制物質(zhì)包括但不限于安非他明；甲基安非他明；巴比妥酸鹽，如異戊巴比妥、司可巴比妥、戊巴比妥、苯巴比妥及巴比妥；苯(并)二氮類，例如利眠寧和安定；大麻素，如印度大麻及大麻；可卡因；芬太尼；LSD；安眠酮；鴉片劑，例如海洛因、嗎啡、可待因、氫嗎啡酮、氫可酮、美沙酮、羥可酮、氫羥嗎啡酮及鴉片；苯環(huán)己哌啶；以及丙氧芬(propoxyhene)。其它可能的分析物可參照Tom等的美國專利US4366241中的描述。
如這里所用，術(shù)語“測(cè)試樣品”通常指的是懷疑含有分析物的材料。使用的測(cè)試樣品可直接從來源獲得，或者先經(jīng)過預(yù)處理以改變樣品的特性再使用。測(cè)試樣品可以源自任何生物來源，如生理液，包括血液、唾液、接目鏡液體、腦脊液、汗液、尿液、奶、腹水、引起沙啞的異物、滑液、腹膜液、羊膜液等。測(cè)試樣品可在使用前被預(yù)先處理，例如從血液中制備血漿；稀釋粘液等。處理方法可涉及過慮、蒸餾、濃縮、干擾成分的失活；以及添加試劑。除了生理液外，也可采用其它液體樣品，如水、食品等以進(jìn)行環(huán)境或食品生產(chǎn)檢測(cè)。另外，懷疑包含分析物的固體材料可用作測(cè)試樣品。在一些例子中，將固體測(cè)試樣品處理成液體介質(zhì)或釋放分析物，這可能有益。
詳細(xì)描述現(xiàn)詳細(xì)參考本發(fā)明的各種實(shí)施方案，下面闡述了其一個(gè)或多個(gè)實(shí)施例。每一個(gè)實(shí)施例都提供了對(duì)本發(fā)明的解釋，而不是限定本發(fā)明。事實(shí)上，對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，不背離本發(fā)明的精神或范圍對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種改變和變化是顯而易見的。例如，作為一個(gè)實(shí)施方案的一部分解釋或描述的一些特征，可用于另一個(gè)實(shí)施方案，從而得出一個(gè)新的實(shí)施方案。因此，本發(fā)明將這些改變和變化包含于所附的權(quán)利要求及其等同物中。
一般來說，本發(fā)明涉及直通型檢測(cè)裝置的內(nèi)部校準(zhǔn)系統(tǒng)。尤其是，本發(fā)明采用了一個(gè)包含兩個(gè)或更多個(gè)不同校準(zhǔn)區(qū)(如線，點(diǎn)等)的校準(zhǔn)區(qū)域。校準(zhǔn)區(qū)包括不同數(shù)量的結(jié)合子，從而使得一個(gè)區(qū)能夠產(chǎn)生的校準(zhǔn)信號(hào)的強(qiáng)度弱于其它區(qū)產(chǎn)生的校準(zhǔn)信號(hào)。在一個(gè)實(shí)施方案中，可對(duì)每一個(gè)校準(zhǔn)區(qū)中的結(jié)合子水平做一個(gè)校準(zhǔn)曲線，以用來對(duì)照測(cè)定信號(hào)。已發(fā)現(xiàn)，該內(nèi)部校準(zhǔn)系統(tǒng)提供了一種準(zhǔn)確、廉價(jià)且易于控制的測(cè)定測(cè)試樣品中分析物是否存在的方法。
例如，參考圖1-3，現(xiàn)對(duì)根據(jù)本發(fā)明形成的三明治型直通型檢測(cè)裝置20的一個(gè)實(shí)施方案進(jìn)行更為詳細(xì)的描述。如圖所示，檢測(cè)裝置20包括一個(gè)任選用剛性材料(未示出)負(fù)載的多孔膜23。通常，多孔膜23可由任一種測(cè)試樣品可通過的材料制成。例如，用于制備多孔膜23的材料包括但不限于天然材料、合成材料、或經(jīng)合成改性的天然材料，如多糖(如纖維素物質(zhì)，例如紙；纖維素衍生物，如醋酸纖維素和硝化纖維素)；二氧化硅；無機(jī)物，如滅活氧化鋁，硅藻土，MgSO4，或其它均勻分散于多孔聚合物基質(zhì)中的細(xì)碎無機(jī)材料，所述聚合物例如氯乙烯，氯乙烯-丙烯共聚物，以及氯乙烯-醋酸乙烯酯共聚物；布料，包括天然產(chǎn)物(如棉花)和合成物(如尼龍或人造纖維)；多孔膠，例如硅膠，瓊脂糖，葡聚糖以及白明膠；聚合薄膜，如聚丙烯酰胺；等。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，多孔膜23由硝化纖維素和/或聚酯砜材料形成。應(yīng)當(dāng)理解，術(shù)語“硝化纖維素”指的是纖維素硝酸酯，其可以是單獨(dú)的硝化纖維素，或者是硝酸和其它酸(如具有1至7個(gè)碳原子的脂族羧酸)的混合酯。
為啟動(dòng)對(duì)測(cè)試樣品中分析物40的檢測(cè)，使用者可直接將測(cè)試樣品施加于多孔膜23的一個(gè)部分，測(cè)試樣品通過該部分遷移到達(dá)一個(gè)或多個(gè)檢測(cè)區(qū)和校準(zhǔn)區(qū)(見下面的描述)?？商鎿Q地，也可先將測(cè)試樣品施加于能夠與多孔膜23液體連通的樣品墊上。例如，如圖1-3中所示，側(cè)流檢測(cè)裝置20可包括一個(gè)通常構(gòu)造為接收測(cè)試樣品的樣品墊21。一些可用于制備樣品墊21的合適的材料包括但不限于硝化纖維素，纖維素，多孔聚乙烯墊以及玻璃纖維濾紙。如果希望，樣品墊21還可包括一種或多種檢測(cè)預(yù)處理試劑，它們擴(kuò)散或非擴(kuò)散地吸附于其上。
在圖示的實(shí)施方案中，測(cè)試樣品從樣品墊21遷移至放置地與樣品墊21的一端相連通的結(jié)合墊22(如圖1中指示箭頭29所示)。結(jié)合墊22由允許測(cè)試樣品通過的材料制成。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合墊22由玻璃纖維制成。
除了簡(jiǎn)單地允許測(cè)試樣品通過之外，結(jié)合墊22通常還履行其它功能。例如，在一些實(shí)施方案中，將各種探針41(見圖2)通過釋放而施加于結(jié)合墊22上。當(dāng)包含于試劑墊22后，在分析物40從樣品墊21通過結(jié)合墊22時(shí)，這些探針41可保持能與分析物40結(jié)合。與分析物40結(jié)合后，探針41就能用于確認(rèn)(如視覺觀察等)檢測(cè)裝置20的檢測(cè)區(qū)域是否存在分析物40。
通常，能夠產(chǎn)生視覺可觀察或通過儀器裝置可檢測(cè)的信號(hào)的任何物質(zhì)均可作為探針41。各種適合的探針包括發(fā)色團(tuán)；催化劑；熒光化合物；化學(xué)發(fā)光化合物；放射性標(biāo)記物；直接可見標(biāo)記物，包括膠體金屬或非金屬粒子(如金)，染料粒子，酶或底物，或者有機(jī)聚合物乳膠粒子；脂質(zhì)體或其它含有信號(hào)產(chǎn)生物質(zhì)的小囊；等。例如，在Litman等的美國專利US4275149中描述了一些適合用作探針的酶，在這里為所有的目的全文引作參考。酶/底物探針系統(tǒng)的一個(gè)例子是堿性磷酸酶及底物氮藍(lán)四唑-5-溴-4-氯代-3-吲哚-磷酸，或其衍生物或類似物，或者底物4-甲基傘形酮基-磷酸。在一個(gè)可作為替代的探針系統(tǒng)中，探針可以是不要求酶反應(yīng)操作來產(chǎn)生可檢測(cè)信號(hào)的的熒光化合物。熒光化合物分子，如熒光素，藻膽蛋白，若丹明以及它們的衍生物或類似物均適合在該反應(yīng)中用作探針?？少徺I得到的這些熒光材料的例子包括Molecular Probes，Inc.出售的，商品名為“FluoSphere”(Red 580/605)和“Transfluo Sphere”(543/620)的熒光羧化微球體，以及同樣屬于該公司出售的“Texas Red”以及5-羧四甲基若丹明和6-羧四甲基若丹明。
一種視覺可檢測(cè)的彩色微粒(有時(shí)稱作“珠”或“微珠”)也適于作為探針，從而給出樣品中分析物是否存在或其濃度的直接的彩色顯示，而無需另外的產(chǎn)生信號(hào)的試劑。在一些例子中，用于定量檢測(cè)的粒子也可產(chǎn)生導(dǎo)致粒子所處區(qū)域具有與膜23的剩余部分不同的信號(hào)的信號(hào)(如光吸收)。
用于探針41的微粒類型也是可以變化的。例如，天然微粒，如核，支原體，質(zhì)粒，質(zhì)體，哺乳動(dòng)物細(xì)胞(如紅細(xì)胞血影)，單細(xì)微生物(如細(xì)菌)，多糖(如瓊脂糖)等均可采用。此外，也可采用合成的微粒。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，合成的乳膠微粒用染料染色后可作用探針41。盡管任何能夠吸附或共價(jià)結(jié)合于結(jié)合配基的乳膠微粒均可用于本發(fā)明，但是乳膠微粒通常由聚苯乙烯；丁二烯苯乙烯；苯丙乙烯三元共聚物；聚甲基丙烯酸甲酯；聚甲基丙烯酸乙酯；苯乙烯-馬來酸酐共聚物；聚乙酸乙烯酯；聚乙烯吡啶；聚二乙烯苯；聚對(duì)苯二甲酸丁二醇酯；丙烯腈；氯乙烯丙烯酸酯等，或者這些物質(zhì)的醛基、羧基、氨基、羥基或者酰肼衍生物制成。在Jou等的美國專利US5670381和Tarcha等的美國專利US5252459中描述了一些其它的適合的微粒，在這里為所有的目的全文引作參考?？少徺I的合適的彩色乳膠微粒的例子包括Bang’s Laboratory，Inc.出售的羧化乳膠珠。
在使用時(shí)，微粒探針41的平均直徑通?？筛鶕?jù)需要，根據(jù)如選擇的粒子類型、膜的孔徑尺寸以及膜組成的因素而變化。例如，在一些實(shí)施方案中，微粒探針41的平均直徑范圍為大約0.01微米到大約100微米，而在另一些實(shí)施方案中，為大約0.1微米到大約75微米。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，微粒探針41的平均直徑為大約0.3微米。在這些例子中，膜23的孔的尺寸為大約0.1-0.3微米。
當(dāng)沉積于結(jié)合墊22之后，探針41能夠直接與分析物40結(jié)合(共價(jià)或非共價(jià)結(jié)合)。然而，時(shí)常需要以某種方式修飾探針41，以使它們更容易與分析物40結(jié)合。在這樣的例子中，探針41可用非共價(jià)(如吸附)和/或共價(jià)附著于其上形成探針結(jié)合體42的某些特異性結(jié)合成分90來進(jìn)行修飾。
特異性結(jié)合成分通常指的是具有特異性結(jié)合對(duì)的成分，即兩種不同的分子，其中一種分子化學(xué)地和/或生物地結(jié)合于第二種分子。例如，免疫反應(yīng)特異性結(jié)合成分可包括抗原，半抗原，抗體或者它們的復(fù)合物，包括那些通過重組DNA方法或肽合成形成的產(chǎn)物?？贵w可以是單克隆抗體，也可以是多克隆抗體，重組蛋白，或其混合物或片斷，還包括抗體和其它特異性結(jié)合成分的混合物。制備這些抗體以及它們適于作為特異性結(jié)合成分的細(xì)節(jié)，對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是公知的。
另外的常用特異性結(jié)合對(duì)包括但不限于生物素和抗生物素蛋白，糖類和外源凝集素，互補(bǔ)核苷酸序列(包括DNA雜交檢測(cè)中，檢測(cè)目標(biāo)核酸序列的探針和捕獲核酸序列)，互補(bǔ)肽序列(其中包括通過重組方法形成的序列)，效應(yīng)物和受體分子，激素和激素結(jié)合蛋白，輔酶和酶，酶抑制劑和酶等。此外，特異性結(jié)合對(duì)可包括與初始特異性結(jié)合成分類似的成分。例如，分析物的衍生物或片段，即也可使用分析物類似物，只要其具有至少一個(gè)與分析物相同的抗原決定簇。
特異性結(jié)合成分90通?？刹捎酶鞣N公知的技術(shù)的任一種附著于探針41。例如，當(dāng)采用乳膠微粒作為探針41時(shí)，特異性結(jié)合成分90與其的共價(jià)連接可采用羧基、氨基、醛基、溴乙?；⒌庖阴；⒘蛄u基、環(huán)氧基和其它反應(yīng)性功能基或連接功能基，以及殘留的自由基和基團(tuán)陽離子來實(shí)現(xiàn)，通過它們可實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)偶聯(lián)反應(yīng)。也可包括表面功能基團(tuán)作為功能化的共聚單體，因?yàn)槿槟z微粒的表面可含有相當(dāng)高表面濃度的極性基團(tuán)。此外，盡管乳膠微粒探針一般在合成后被功能化，在一些情況下，例如聚(苯硫酚)，微粒能夠直接共價(jià)連接于蛋白質(zhì)上，而無需額外的修飾。
因此，再次參考圖2及3，包含分析物40的測(cè)試樣品開始施加于樣品墊21。從樣品墊，測(cè)試樣品接著遷移到結(jié)合墊22，在此分析物40結(jié)合于探針結(jié)合體42上的特異性結(jié)合成分90，形成探針結(jié)合體/分析物復(fù)合物49。而且，由于結(jié)合墊22與多孔膜23液體連通，探針結(jié)合體/分析物復(fù)合物49可從結(jié)合墊22遷移至存在于多孔膜23上的檢測(cè)區(qū)域31。
檢測(cè)區(qū)域31可包括固定的捕獲試劑45。盡管不要求，但希望捕獲試劑45由與用于制備探針結(jié)合體42的特異性結(jié)合成分90同類或同種的物質(zhì)(如抗體)制成。這些捕獲試劑45作為探針結(jié)合體/分析物復(fù)合物49的靜態(tài)結(jié)合位點(diǎn)。在一些例子中，分析物40，如抗體、抗原等，具有兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。當(dāng)?shù)竭_(dá)檢測(cè)區(qū)域31時(shí)，其中的一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)被探針結(jié)合體/分析物復(fù)合物49的特異性結(jié)合成分90占據(jù)。然而，分析物40的空余結(jié)合位點(diǎn)可結(jié)合固定的捕獲試劑45。當(dāng)結(jié)合于固定的捕獲試劑45后，新形成的三元復(fù)合物50的探針結(jié)合體42指示出分析物40的存在，這可視覺觀察，也可通過其它方法測(cè)定(如儀器等)。因此，為測(cè)定測(cè)試樣品中是否存在特定分析物40，使用者可簡(jiǎn)單地分析檢測(cè)區(qū)域31。
然而，盡管檢測(cè)區(qū)域可指示分析物是否存在，但采用一個(gè)檢測(cè)區(qū)域通常難以確定測(cè)試樣品中分析物的相對(duì)濃度。因此，根據(jù)本發(fā)明，該檢測(cè)裝置還包括一個(gè)可與檢測(cè)區(qū)域比較以確定測(cè)試樣品中特定分析物的濃度的校準(zhǔn)區(qū)域。例如，再次參考圖1-3，圖示了一個(gè)包括校準(zhǔn)區(qū)域32的直通型檢測(cè)裝置20的實(shí)施方案。在這個(gè)實(shí)施方案中，校準(zhǔn)區(qū)域32形成于多孔膜上，并被定位于檢測(cè)區(qū)域31的下游。對(duì)照區(qū)域32裝備有能夠與通過膜23全長(zhǎng)的任何剩余的探針41和/或探針結(jié)合體42結(jié)合的結(jié)合子47。尤其是，當(dāng)與測(cè)試樣品接觸時(shí)，任何未與分析物40結(jié)合的探針41和/或探針結(jié)合體42遷移通過具有復(fù)合物49的檢測(cè)區(qū)域31。在檢測(cè)區(qū)域31中，如前面所述，復(fù)合物49與捕獲試劑45結(jié)合并保持被固定于此。然而，未結(jié)合的的探針41和/或探針結(jié)合體42繼續(xù)遷移通過檢測(cè)區(qū)域31，并進(jìn)入多孔膜23的校準(zhǔn)區(qū)域32。在校準(zhǔn)區(qū)域32，這些未結(jié)合的探針41和/或探針結(jié)合體42與結(jié)合子47相結(jié)合。當(dāng)固定于校準(zhǔn)區(qū)域32中時(shí)，探針41和/或探針結(jié)合體42可視覺觀察，或可通過其它方法觀察，從而使用戶能夠?qū)z測(cè)區(qū)域31的信號(hào)強(qiáng)度與校準(zhǔn)區(qū)域32的信號(hào)強(qiáng)度相比較。
校準(zhǔn)區(qū)域32通?？商峁┤我鈹?shù)量的不同的校準(zhǔn)區(qū)，以使用戶能更好地測(cè)定測(cè)試樣品中特定分析物的濃度。例如，在大多數(shù)實(shí)施方案中，校準(zhǔn)區(qū)域32包括兩個(gè)或更多個(gè)校準(zhǔn)的不同校準(zhǔn)區(qū)(如線，點(diǎn)等)。例如，在圖示的實(shí)施方案中，采用了至少三個(gè)線形校準(zhǔn)區(qū)25、26和27。如圖1-3中所示，校準(zhǔn)區(qū)25、26和/或27可設(shè)置為基本上垂直于測(cè)試樣品通過檢測(cè)裝置20的流向的方向的線形式。
同樣的，在一些實(shí)施方案中，如圖4A所示，校準(zhǔn)區(qū)25、26和/或27可設(shè)置為基本上平行于測(cè)試樣品通過檢測(cè)裝置的流向的方向的線形式。在另一個(gè)實(shí)施方案中，如圖4B所示，三個(gè)校準(zhǔn)區(qū)25a、26a和/或27a可設(shè)置為基本上平行于測(cè)試樣品通過檢測(cè)裝置的流向的方向的點(diǎn)形式。在這樣的例子中，用戶能夠在較短的時(shí)間內(nèi)，將校準(zhǔn)信號(hào)與檢測(cè)信號(hào)進(jìn)行比較，因?yàn)槊總€(gè)校準(zhǔn)區(qū)同時(shí)產(chǎn)生校準(zhǔn)信號(hào)。
校準(zhǔn)區(qū)25、26和27可預(yù)先設(shè)置于多孔膜23上，其含有不同量的結(jié)合子47，從而當(dāng)探針41和/或探針結(jié)合體42遷移時(shí)，每個(gè)校準(zhǔn)區(qū)25、26和27產(chǎn)生不同的信號(hào)強(qiáng)度。每個(gè)校準(zhǔn)區(qū)內(nèi)結(jié)合子47的總量可通過利用不同大小的校準(zhǔn)區(qū)域和/或通過改變每個(gè)校準(zhǔn)區(qū)中結(jié)合子47的溶液濃度或體積來改變。通常而言，給定校準(zhǔn)區(qū)內(nèi)結(jié)合子47的濃度范圍為溶液重量的大約0.01％到大約25％。
如果希望，在檢測(cè)裝置20中可采用過量的探針分子，以使每個(gè)校準(zhǔn)區(qū)25、26和27達(dá)到其最大的、預(yù)先設(shè)定的可能信號(hào)強(qiáng)度。即，沉積于校準(zhǔn)區(qū)25、26和27的探針41的量是預(yù)先設(shè)定的，因?yàn)樵谛?zhǔn)區(qū)25、26和27上采用的結(jié)合子47的量被設(shè)定為預(yù)定且已知的水平?？蓪⑿?zhǔn)區(qū)25、26和27與檢測(cè)線24之間的信號(hào)強(qiáng)度水平進(jìn)行比較來計(jì)算測(cè)試樣品中分析物40的量。該比較步驟可通過視覺觀察并借助于讀數(shù)裝置或者采用其它技術(shù)來進(jìn)行。
校準(zhǔn)和樣品檢測(cè)可在大致相同的條件下同時(shí)進(jìn)行，因而提供了可靠的定量結(jié)果及更高的靈敏性。檢測(cè)裝置20也可用于半定量檢測(cè)。尤其是，當(dāng)多個(gè)校準(zhǔn)區(qū)25、26和27給出了信號(hào)強(qiáng)度范圍時(shí)，檢測(cè)區(qū)域31的信號(hào)強(qiáng)度可與校準(zhǔn)區(qū)25、26和27的信號(hào)強(qiáng)度相比較(如視覺觀察)?；跈z測(cè)區(qū)域31所處的信號(hào)強(qiáng)度范圍，可測(cè)定分析物40的大致濃度范圍。如果希望，將檢測(cè)區(qū)域31與校準(zhǔn)區(qū)25、26和27的信號(hào)比相對(duì)于已知分析物濃度范圍的分析物濃度作圖，可得出校準(zhǔn)曲線，如在圖5中所示。為測(cè)定未知的測(cè)試樣品的量，可根據(jù)校準(zhǔn)曲線將信號(hào)比轉(zhuǎn)換為分析物濃度。此外，當(dāng)采用熒光測(cè)定測(cè)試樣品中分析物40的量時(shí)，可采用接收器或接收裝置來測(cè)定在檢測(cè)區(qū)域31和校準(zhǔn)區(qū)域32中產(chǎn)生的熒光的量，然后進(jìn)行適當(dāng)?shù)谋容^來確定給定測(cè)試樣品中的分析物的量。
校準(zhǔn)區(qū)域32中使用的結(jié)合子47通常由能夠與探針41和/或探針結(jié)合體42形成化學(xué)或物理結(jié)合的各種不同材料制成。例如，在一些實(shí)施方案中，結(jié)合子47可包括一種與捕獲試劑45相同或不同的生物捕獲試劑。這些生物捕獲試劑是本領(lǐng)域公知的，可包括但不限于抗原、半抗原、抗體及其復(fù)合物。
另外，也希望采用各種非生物材料用于結(jié)合子47。例如，在一些實(shí)施方案中，結(jié)合子47可包括能夠與探針41和/或探針結(jié)合體42結(jié)合的聚電解質(zhì)。這些聚電解質(zhì)可帶有凈正電荷或凈負(fù)電荷，或者凈電荷通常為零。例如，一些合適的帶有凈正電荷的聚電解質(zhì)的例子包括但不限于聚賴氨酸(可從St.Louis，MO的Sigma-Aldrich Chemical Co.，Inc.購買得到)；聚氮丙啶；表氯醇功能化的聚胺和/或聚酰氨基胺，例如聚(二甲胺-表氯醇共聚物)；聚二烯丙基二甲基-氯化銨；陽離子化的纖維素衍生物，如纖維素共聚物或被季銨水溶性單體接枝的纖維素衍生物等。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，采用了含有季銨水溶性單體的纖維素衍生物CelQuatSC-230M或H-100(購自National Starch&Chemical，Inc.)。此外，一些合適的帶有凈負(fù)電荷的聚電解質(zhì)的例子包括但不限于聚丙烯酸，例如聚(乙烯基-甲基丙烯酸共聚體，鈉鹽)等。還應(yīng)理解，其它的聚電解質(zhì)也可用于本發(fā)明，如兩性聚電解質(zhì)(即具有極性部分和非極性部分)。例如，一些合適的兩性聚電解質(zhì)的例子包括但不限于聚(苯乙烯基-b-N-甲基2-乙烯基碘化吡啶鎓)和聚(苯乙烯基-b-丙烯酸)，二者均可從加拿大Dorval的Polymer Source，Inc.購得。
盡管通常可使用任何聚電解質(zhì)，但特定應(yīng)用所選擇的聚電解質(zhì)可根據(jù)探針/探針結(jié)合體、多孔膜等的性質(zhì)而改變。尤其是，聚電解質(zhì)分布的電荷使其能與帶有相反電荷的物質(zhì)結(jié)合。因此，例如帶有凈正電荷的聚電解質(zhì)通常能夠與帶有負(fù)電荷的探針41和/或探針結(jié)合體42更好地結(jié)合，而帶有凈負(fù)電荷的聚電解質(zhì)通常能夠與帶有正電荷的探針41和/或探針結(jié)合體42更好地結(jié)合。因此，在這些例子中，這些分子間的離子相互作用使得在校準(zhǔn)區(qū)域32內(nèi)能夠產(chǎn)生所需要的結(jié)合。然而，盡管在校準(zhǔn)區(qū)域32內(nèi)采用離子相互作用主要實(shí)現(xiàn)所期望的結(jié)合，但也發(fā)現(xiàn)，聚電解質(zhì)也能與帶有相似電荷的探針41和/或探針結(jié)合體42結(jié)合。
由于聚電解質(zhì)被設(shè)計(jì)為結(jié)合探針41和/或探針結(jié)合體42以給出校準(zhǔn)信號(hào)，一般希望聚電解質(zhì)基本上非擴(kuò)散地固定于多孔膜23的表面上。否則，尋求校準(zhǔn)檢測(cè)裝置的用戶將不容易檢測(cè)到探針41和/或探針結(jié)合體42。因此，聚電解質(zhì)可以基本上不擴(kuò)散到多孔膜23的基質(zhì)中的方式，施加于多孔膜23。尤其是，聚電解質(zhì)一般與多孔膜23表面上存在的功能基團(tuán)形成離子和/或共價(jià)結(jié)合，從而固定于多孔膜上。盡管不要求，也希望聚電解質(zhì)與多孔膜23之間形成共價(jià)結(jié)合以使聚電解質(zhì)在膜上固定地更長(zhǎng)久。
例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，將用于形成聚電解質(zhì)的單體首先制成溶液，接著將其直接施加于多孔膜23上。多種溶劑(如有機(jī)溶劑，水等)可用于制備溶液。一旦施加，立即采用加熱、電子束照射、自由基聚合等方法引發(fā)單體聚合。在一些例子中，隨著單體的聚合，它們與多孔膜23的某些功能基團(tuán)形成共價(jià)結(jié)合，從而將形成的聚電解質(zhì)固定于其上。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，吖丙啶單體可與一些多孔膜(如硝化纖維素)表面上存在的羧基形成共價(jià)結(jié)合。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，聚電解質(zhì)可在施加于多孔膜23之前被制備。如果希望，可首先采用有機(jī)溶劑、水等將聚電解質(zhì)制成溶液。然后，將聚電解質(zhì)溶液直接施加于多孔膜23上，并干燥。干燥時(shí)，如前所述，聚電解質(zhì)可與多孔膜23表面上存在的、某些帶有與聚電解質(zhì)相反的電荷的功能基團(tuán)形成離子結(jié)合。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，帶正電荷的聚吖丙啶可與一些多孔膜(如硝化纖維素)表面上存在的、帶負(fù)電荷的羧基形成離子結(jié)合。
此外，還可采用各種已知技術(shù)，將聚電解質(zhì)交聯(lián)到多孔膜23上。例如，在一些實(shí)施方案中，采用表氯醇功能化的聚胺和/或聚酰氨基胺作為可交聯(lián)的帶正電荷的聚電解質(zhì)。這些材料的例子在Keim的美國專利US3700623、US3772076、US4537657中有描述，在這里為所有的目的全部引作參考，并據(jù)信可以KymeneTM商標(biāo)從Hercules，Inc.，Wilmington，Del.購得。例如，KymeneTM450和2064是含有能夠與一些類型的多孔膜(如硝化纖維素)上存在的羧基形成共價(jià)結(jié)合，并在卷曲時(shí)能夠與多孔膜的聚合物骨架發(fā)生交聯(lián)的環(huán)氧化物環(huán)和季銨基團(tuán)的表氯醇功能化的聚胺和/或聚酰氨基胺。在一些實(shí)施方案中，交聯(lián)溫度可從大約50℃到大約120℃，交聯(lián)時(shí)間可從大約10秒到約600秒。
盡管前面描述了將聚電解質(zhì)非擴(kuò)散地固定于多孔膜23上的各種技術(shù)，應(yīng)理解，任何其它將聚電解質(zhì)化合物非擴(kuò)散固定的技術(shù)均適用于本發(fā)明。事實(shí)上，前述的那些方法僅僅作為能夠用于本發(fā)明的技術(shù)的例證。例如，在一些實(shí)施方案中，某些成分可添加到聚電解質(zhì)溶液中，其能基本抑制該聚電解質(zhì)擴(kuò)散到多孔膜23的基質(zhì)中。
除了上述成分以外，直通型檢測(cè)裝置20還可包括其它成分。例如，再次參考圖1-3，檢測(cè)裝置20還可包括一個(gè)芯吸墊28。芯吸墊28通常接收遷移通過整個(gè)多孔膜23的液體。如本領(lǐng)域所公知的那樣，芯吸墊28有助于促進(jìn)毛細(xì)作用和通過膜23的液體流動(dòng)。
盡管前面描述了檢測(cè)裝置構(gòu)造的各種實(shí)施方案，應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明的檢測(cè)裝置通?？梢跃哂腥魏嗡Ｍ臉?gòu)造，并不需要包括上面描述的所有成分。而且，這里沒有專門提及的檢測(cè)裝置的其它已知成分也可用于本發(fā)明。例如，在Lambotte等的美國專利US5395754、Jou等的美國專利US5670381以及Malick等的美國專利US6194220中描述的各種檢測(cè)裝置的構(gòu)造，在這里為所有的目的全部引作參考。另外，還應(yīng)理解，按照本發(fā)明也可制備競(jìng)爭(zhēng)性檢測(cè)裝置。競(jìng)爭(zhēng)性檢測(cè)裝置的技術(shù)和構(gòu)造對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是公知的。
例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，利用包含與分析物40相同的特異性結(jié)合成分90的探針結(jié)合體42很容易將前面描述以及在圖1-3中圖示的直通型檢測(cè)裝置20更改為競(jìng)爭(zhēng)性檢測(cè)裝置。結(jié)果，分析物40和探針結(jié)合體42將競(jìng)爭(zhēng)檢測(cè)區(qū)域31中預(yù)定量的捕獲試劑45。通常而言，由于分析物40是未結(jié)合的，其通過多孔膜的移動(dòng)更快，并占據(jù)了檢測(cè)區(qū)域31中更多的結(jié)合位點(diǎn)。接著，所有未結(jié)合的探針結(jié)合體42遷移至校準(zhǔn)區(qū)域32，并在此與結(jié)合子47結(jié)合。因此可將校準(zhǔn)區(qū)域32中產(chǎn)生的信號(hào)與檢測(cè)區(qū)域31中產(chǎn)生的信號(hào)進(jìn)行比較，其中測(cè)試樣品中分析物的相對(duì)量與檢測(cè)信號(hào)強(qiáng)度成反比，而與校準(zhǔn)信號(hào)強(qiáng)度成正比。
同樣地，在另一個(gè)實(shí)施方案中，可采用與分析物40相同的捕獲試劑45來制備競(jìng)爭(zhēng)性檢測(cè)裝置。因而，在該實(shí)施方案中，探針結(jié)合體42開始結(jié)合于分析物40，形成三元復(fù)合物49。接著，未結(jié)合的探針結(jié)合體42和三元復(fù)合物49遷移到檢測(cè)區(qū)域31，在此未結(jié)合的探針結(jié)合體42與捕獲試劑45結(jié)合。然后，所有剩余的未結(jié)合的探針結(jié)合體42與三元復(fù)合物49遷移至校準(zhǔn)區(qū)域32，在此它們競(jìng)爭(zhēng)預(yù)定量的結(jié)合子47。因此在校準(zhǔn)區(qū)域32中產(chǎn)生的信號(hào)可與在檢測(cè)區(qū)域31中產(chǎn)生的信號(hào)相比較，其中測(cè)試樣品中分析物的相對(duì)量與檢測(cè)信號(hào)的強(qiáng)度成反比，而與校準(zhǔn)信號(hào)的強(qiáng)度成正比。
參照下列實(shí)施例可更好地理解本發(fā)明。
實(shí)施例1示范了本發(fā)明的內(nèi)部校準(zhǔn)區(qū)域校準(zhǔn)三明治檢測(cè)裝置的能力。最初，將由硝化纖維素制成的Millipore SX多孔膜樣品層壓到相應(yīng)的長(zhǎng)度約為30厘米的支撐板上。接著，用聚氮丙啶水溶液在膜上形成條帶(7.4％的聚吖丙啶溶液的1×，10×和100×稀釋液)，制得三條分離的、濃度不同的校準(zhǔn)線。施加聚氨丙啶后，將膜在37℃下干燥1小時(shí)。
將一個(gè)纖維素纖維芯吸墊(Millipore Co.)附著于膜的一端。膜的另一端插入各種探針和探針結(jié)合體的懸浮液中。尤其是，檢測(cè)下列探針

檢測(cè)裝置也插入探針結(jié)合體的懸浮液中。尤其是，采用已知技術(shù)，將上述探針結(jié)合于抗-C反應(yīng)蛋白單克隆抗體(抗-CRP Mab)、抗-促黃體生成激素單克隆抗體(抗-LH Mab)，以及抗前白蛋白多克隆抗體(抗-Pab)。例如，最初，將100微升0.5微米的熒光羧基微球體(購自Molecular Probes，Inc.)用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)洗滌兩次，接著再次懸浮于200微升的PBS中。將5mg碳化二亞胺加入到懸浮液中，將混合物輕柔混合1小時(shí)。將微球體用硼酸鹽緩沖液洗滌兩次，然后洗滌。再將微球體懸浮于185微升的硼酸鹽緩沖液中。接著，將15微升α-LH單克隆抗體(9.7mg/m1)加入到懸浮液中，并在輕柔混合下反應(yīng)3小時(shí)。然后，將200微升1M的乙醇胺水溶液加入到反應(yīng)混合物中反應(yīng)20分鐘。接著用PBS洗滌微球體兩次，并將其保存于PBS中。
探針及探針結(jié)合體懸浮液含有水以及1.6％的聚氧乙烯山梨聚糖單月桂酸酯(一種購自Sigma Aldrich，名為“Tween 20”的非離子表面活性劑)。所得的探針濃度范圍為0.001-5mg/ml，探針結(jié)合體的濃度范圍為0.2-10mg/ml。
大約5分鐘后，觀察形成條帶的校準(zhǔn)線，確定探針/探針結(jié)合體是否可通過視覺檢測(cè)。含有1×稀釋溶液的線呈現(xiàn)出最大信號(hào)強(qiáng)度，而含有100×稀釋溶液的線呈現(xiàn)出最小信號(hào)強(qiáng)度。
實(shí)施例2示范了本發(fā)明的內(nèi)部校準(zhǔn)區(qū)域校準(zhǔn)半浸量尺型三明治檢測(cè)裝置的能力。最初，將由硝化纖維素制成的Millipore SX多孔膜樣品層壓到相應(yīng)的長(zhǎng)度約為30厘米的支撐板上。接著，用7.4％的聚氮丙啶水溶液在Millipore SX膜上形成條帶(1×，10×和100×稀釋的樣品)，制得三條濃度不同的校準(zhǔn)線。
將抗-C-反應(yīng)蛋白(抗-CRP)單克隆抗體(Mab A5804，1mg/ml，購自BiosPacific Inc.)在膜上形成條帶來制備檢測(cè)線。將膜在37℃下干燥1小時(shí)。將一個(gè)纖維素纖維芯吸墊(Millipore Co.)附著于膜的一端。然后將層壓的膜切成小的半浸量尺。
將膜相對(duì)于芯吸墊的一端插入含有C-反應(yīng)蛋白(CRP)、Tween 20、抗-CRPMab結(jié)合的藍(lán)色乳膠珠(抗-CRP Mab-珠)以及水的檢測(cè)孔中。孔中的混合物沿著半浸量尺遷移至浸量尺的檢測(cè)線、校準(zhǔn)線以及芯吸墊。
CRP分析物在檢測(cè)線被抗-CRP Mab-珠捕獲，同時(shí)所有剩余的未結(jié)合的抗-CRP Mab-珠被校準(zhǔn)線捕獲。因而，大約5分鐘后，可在檢測(cè)線處觀察到一條藍(lán)色的線，而在校準(zhǔn)線處觀察到三條藍(lán)色的線。含有1×稀釋溶液的線呈現(xiàn)出最大信號(hào)強(qiáng)度，而含有100×稀釋溶液的線呈現(xiàn)出最小信號(hào)強(qiáng)度。
實(shí)施例3示范了本發(fā)明的內(nèi)部校準(zhǔn)區(qū)域校準(zhǔn)半浸量尺型三明治檢測(cè)裝置的能力。最初，將由硝化纖維素制成的HF09002多孔膜樣品層壓到相應(yīng)的長(zhǎng)度約為30厘米的支撐板上。用0.14％(校準(zhǔn)#1)、0.64％(校準(zhǔn)#2)和1.4％(校準(zhǔn)#3)的聚氮丙啶水溶液(1×、10×和100×稀釋的樣品)在膜上形成條帶，制備三條不同濃度的校準(zhǔn)線。
將抗-C-反應(yīng)蛋白(抗-CRP)單克隆抗體(Mab A5804，1mg/ml，購自BiosPacific Inc.)在膜上形成條帶來制備檢測(cè)線。將膜在37℃下干燥1小時(shí)。將一個(gè)纖維素纖維芯吸墊(Millipore Co.)附著于膜的一端。然后將層壓的膜切成小的半浸量尺。
將膜相對(duì)于芯吸墊的一端插入含有Tween 20、過量的抗-CRP Mab結(jié)合的藍(lán)色乳膠珠(抗-CRP Mab-珠)以及水的三個(gè)檢測(cè)孔中。檢測(cè)孔中還含有不同濃度的C-反應(yīng)蛋白(CRP)。特別地，溶液中分別含有0納克(ng)、0.54ng、5.4ng以及54ng的CRP。
孔中的混合物沿著每個(gè)半浸量尺遷移至浸量尺的檢測(cè)線、校準(zhǔn)線以及芯吸墊。CRP分析物在檢測(cè)線被抗-CRP Mab-珠捕獲，同時(shí)所有剩余的未結(jié)合的抗-CRP Mab-珠被校準(zhǔn)線捕獲。因而，對(duì)于每一種樣品，可在檢測(cè)線處觀察到一條藍(lán)色的線，而在校準(zhǔn)線處觀察到三條藍(lán)色的線。含有1.4％聚吖丙啶溶液的線呈現(xiàn)出最大信號(hào)強(qiáng)度，而含有0.14％聚吖丙啶溶液的線呈現(xiàn)出最小信號(hào)強(qiáng)度。在此分析的基礎(chǔ)上，確定了校準(zhǔn)線#1含有0.54ng的CRP，校準(zhǔn)線#2含有5.4ng的CRP，校準(zhǔn)線#3含有54ng的CRP。
因此，當(dāng)檢測(cè)未知測(cè)試樣品時(shí)，可通過將檢測(cè)線與三個(gè)校準(zhǔn)線進(jìn)行比較，從而以視覺確定CRP濃度。尤其是，當(dāng)通過視覺測(cè)定的檢測(cè)線強(qiáng)度在校準(zhǔn)線#2與校準(zhǔn)線#3的強(qiáng)度之間時(shí)，CRP濃度為5.4ng到54ng之間。同樣，當(dāng)通過視覺測(cè)定的檢測(cè)線強(qiáng)度在校準(zhǔn)線#1與校準(zhǔn)線#2的強(qiáng)度之間時(shí)，CRP濃度為0.54ng到5.4ng之間。而且，當(dāng)檢測(cè)線強(qiáng)度弱于校準(zhǔn)線#1的強(qiáng)度時(shí)，CRP濃度低于0.54ng；當(dāng)檢測(cè)線強(qiáng)度強(qiáng)于校準(zhǔn)線#3的強(qiáng)度時(shí)，CRP濃度高于54ng。
也可采用儀器來測(cè)定校準(zhǔn)線強(qiáng)度，如采用檢測(cè)讀數(shù)器。例如，可利用校準(zhǔn)線#1-#3的線強(qiáng)度及其CRP濃度來制作校準(zhǔn)曲線(如圖6所示)。通過校準(zhǔn)曲線產(chǎn)生的數(shù)學(xué)方程可被輸入到能夠讀出用于檢測(cè)測(cè)試樣品中的CRP的強(qiáng)度的儀器中。
實(shí)施例4示范了本發(fā)明的內(nèi)部校準(zhǔn)區(qū)域校準(zhǔn)半浸量尺型三明治檢測(cè)裝置的能力。最初，將由硝化纖維素制成的SHF075多孔膜樣品層壓到相應(yīng)的長(zhǎng)度約為30厘米的支撐板上。用不同濃度的CelQuatH-100(纖維素衍生物，購自National Starch&Chemical，Inc.)在膜上形成條帶，制成三條濃度不同的校準(zhǔn)線。尤其是，采用的CelQuatH-100濃度分別為百萬分之2.5(ppm)(校準(zhǔn)#1)、5ppm(校準(zhǔn)#2)以及20ppm(校準(zhǔn)#3)。
用抗-β-促黃體生成激素(抗-β-LH)單克隆抗體(Mab，1mg/ml，購自Fitzgerald Industries Intl.，Inc.)在膜上形成條帶制得檢測(cè)線。將膜在37℃下干燥1小時(shí)。將纖維素纖維芯吸墊(Millipore Co.)附著于膜的一端。然后將層壓的膜切成小的半浸量尺。
將膜相對(duì)于芯吸墊的一端插入含有Tween 20、抗-α-促黃體生成激素(抗-α-LH)Mab結(jié)合的藍(lán)色乳膠珠(抗-α-LH Mab-珠)以及水的檢測(cè)孔中。該混合物還含有不同濃度的β-促黃體生成激素(LH)。特別地，測(cè)定的濃度為0ppm、20ppm以及100ppm，分別對(duì)應(yīng)于含有0納克(ng)、20ng以及100ng的LH的溶液。
孔中的混合物沿著每一半浸量尺遷移至浸量尺的檢測(cè)線、校準(zhǔn)線以及芯吸墊。LH分析物在檢測(cè)線被抗-α-LH Mab-珠捕獲，同時(shí)所有剩余的未結(jié)合的抗-α-LH Mab-珠被校準(zhǔn)線捕獲。因而，對(duì)于每一種樣品，可在檢測(cè)線處觀察到一條藍(lán)色的線，而在校準(zhǔn)線處觀察到三條藍(lán)色的線。含有20ppm CelQuat的溶液的線呈現(xiàn)出最大信號(hào)強(qiáng)度，而含有2.5ppm CelQuat的溶液的線呈現(xiàn)出最小信號(hào)強(qiáng)度。在此分析的基礎(chǔ)上，確定了校準(zhǔn)線#1含有20ng的LH，校準(zhǔn)線#3含有100ng的LH。而且，利用能夠讀出線強(qiáng)度的儀器，可確定校準(zhǔn)線#1、#2和#3分別具有線強(qiáng)度1、2及4。
可利用校準(zhǔn)線#1-#3的線強(qiáng)度及其LH濃度來制作校準(zhǔn)曲線(如圖7所示)。然后將校準(zhǔn)曲線產(chǎn)生的數(shù)學(xué)方程輸入儀器。接著，將含有未知濃度LH的測(cè)試樣品施加于按上面所述制成的膜。采用儀器測(cè)得的檢測(cè)信號(hào)的強(qiáng)度約為1.5。因而，測(cè)定的未知測(cè)試樣品中LH的濃度為約36ng。
實(shí)施例5示范了本發(fā)明的內(nèi)部校準(zhǔn)區(qū)域校準(zhǔn)半浸量尺型競(jìng)爭(zhēng)性檢測(cè)裝置的能力。最初，將由硝化纖維素制成的HF120多孔膜樣品層壓到相應(yīng)的長(zhǎng)度約為30厘米的支撐板上。用不同濃度的CelQuatH-100(纖維素衍生物，購自National Starch&Chemical，Inc.)在膜上形成條帶，制成三條濃度不同的校準(zhǔn)線。尤其是，采用的CelQuatH-100濃度分別為百萬分之2.5(ppm)(校準(zhǔn)#1)、5ppm(校準(zhǔn)#2)以及20ppm(校準(zhǔn)#3)。
用前白蛋白(1mg/ml，購自Biogenesis，Inc.)在膜上形成條帶，制得檢測(cè)線。將膜在37℃下干燥1小時(shí)。將纖維素纖維芯吸墊(Millipore Co.)附著于膜的一端。然后將層壓的膜切成小的半浸量尺。
將膜相對(duì)于芯吸墊的一端插入含有30微升2％的Tween 20、10微升連接有抗前白蛋白多克隆抗體的紅色熒光微球體以及水的檢測(cè)孔中?；旌衔镏羞€含有不同濃度的在磷酸鹽緩沖鹽水中的前白蛋白。特別地，測(cè)定的濃度為0微克、75微克以及125微克。
觀察到三條不同強(qiáng)度的紅色校準(zhǔn)線，其中校準(zhǔn)線#3具有最大強(qiáng)度，線#1強(qiáng)度最小。在該競(jìng)爭(zhēng)性檢測(cè)裝置中，檢測(cè)線的強(qiáng)度與測(cè)試的前白蛋白的濃度成反比。當(dāng)不存在前白蛋白時(shí)，結(jié)合物被檢測(cè)線和三條校準(zhǔn)線捕獲。隨著前白蛋白抗原的量的增大，檢測(cè)線強(qiáng)度越來越弱。
然后采用熒光讀數(shù)器讀出線強(qiáng)度并繪出校準(zhǔn)曲線。結(jié)果顯示于下表1。
表1用線強(qiáng)度校準(zhǔn)對(duì)前白蛋白的檢測(cè)

對(duì)于檢測(cè)線，測(cè)定的信號(hào)強(qiáng)度值為20、10及0，分別對(duì)應(yīng)的前白蛋白的量為0微克、75微克和125微克。從這些數(shù)據(jù)得到的校準(zhǔn)曲線也顯示于圖8中。利用該校準(zhǔn)曲線可測(cè)定未知含量的前白蛋白是否存在和/或其數(shù)量。
針對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方案詳細(xì)描述了本發(fā)明的同時(shí)，應(yīng)當(dāng)理解的是，本領(lǐng)域技術(shù)人員一旦理解了上述內(nèi)容就很容易想到這些實(shí)施方案的替代、變換及等同方式。因而，本發(fā)明的范圍應(yīng)依據(jù)所附權(quán)利要求及其等價(jià)物來確定。
權(quán)利要求
1.一種測(cè)定測(cè)試樣品中分析物是否存在或其量的直通型檢測(cè)裝置，所述直通型檢測(cè)裝置包括一個(gè)多孔膜，其中所述多孔膜與包含特異性結(jié)合成分和可檢測(cè)探針的探針結(jié)合體液體連通，所述多孔膜限定了一個(gè)包含有能夠與分析物或探針結(jié)合體結(jié)合的捕獲試劑的檢測(cè)區(qū)域，其中所述檢測(cè)區(qū)域能夠產(chǎn)生代表分析物存在或不存在的檢測(cè)信號(hào)；一個(gè)包含有構(gòu)造成能與所述探針結(jié)合體結(jié)合的結(jié)合子的校準(zhǔn)區(qū)域，所述校準(zhǔn)區(qū)域包括i)包含第一預(yù)定量的所述結(jié)合子的第一校準(zhǔn)區(qū)，所述第一校準(zhǔn)區(qū)能夠產(chǎn)生第一校準(zhǔn)信號(hào)；ii)包含比所述第一預(yù)定量的所述結(jié)合子的量大的第二預(yù)定量的所述結(jié)合子的第二校準(zhǔn)區(qū)，所述第二校準(zhǔn)區(qū)能夠產(chǎn)生第二校準(zhǔn)信號(hào)，其強(qiáng)度比第一校準(zhǔn)信號(hào)大；以及其中，通過將所述檢測(cè)信號(hào)與所述第一校準(zhǔn)信號(hào)及所述第二校準(zhǔn)信號(hào)相比較，來確定測(cè)試樣品中分析物的相對(duì)量。
2.如權(quán)利要求1中限定的直通型檢測(cè)裝置，其中能通過視覺將所述檢測(cè)信號(hào)與所述第一校準(zhǔn)信號(hào)及所述第二校準(zhǔn)信號(hào)進(jìn)行比較。
3.如權(quán)利要求1中限定的直通型檢測(cè)裝置，其中能通過使用儀器將所述檢測(cè)信號(hào)與所述第一校準(zhǔn)信號(hào)及所述第二校準(zhǔn)信號(hào)進(jìn)行比較。
4.如權(quán)利要求1中限定的直通型檢測(cè)裝置，其中通過將所述第一校準(zhǔn)信號(hào)及第二校準(zhǔn)信號(hào)的強(qiáng)度相對(duì)于分析物的已知含量作圖，來繪制校準(zhǔn)曲線。
5.如權(quán)利要求1中限定的直通型檢測(cè)裝置，其中所述校準(zhǔn)區(qū)域還包括含有比所述第二預(yù)定量的所述結(jié)合子的量大的、第三預(yù)定量的所述結(jié)合子的第三校準(zhǔn)區(qū)，所述第三校準(zhǔn)區(qū)能夠產(chǎn)生第三校準(zhǔn)信號(hào)，其強(qiáng)度比所述第二校準(zhǔn)信號(hào)大。
6.如權(quán)利要求1中限定的直通型檢測(cè)裝置，其中所述第一和第二校準(zhǔn)區(qū)被設(shè)定為基本上平行于測(cè)試樣品通過所述多孔膜流向的方向。
7.如權(quán)利要求1中限定的直通型檢測(cè)裝置，其中所述結(jié)合子為聚電解質(zhì)。
8.如權(quán)利要求1中限定的直通型檢測(cè)裝置，其中所述可檢測(cè)探針選自發(fā)色團(tuán)、催化劑、熒光化合物、化學(xué)發(fā)光化合物、放射性標(biāo)記物、直接可見標(biāo)記物、脂質(zhì)體或者這些物質(zhì)的組合。
9.如權(quán)利要求8中限定的直通型檢測(cè)裝置，其中所述可檢測(cè)探針包括乳膠微粒。
10.如權(quán)利要求1中限定的直通型檢測(cè)裝置，其中所述探針結(jié)合體的特異性結(jié)合成分選自抗原、半抗原、抗體及其復(fù)合物。
11.如權(quán)利要求1中限定的直通型檢測(cè)裝置，其中所述捕獲試劑選自抗原、半抗原、抗體及其復(fù)合物。
12.如權(quán)利要求1中限定的直通型檢測(cè)裝置，其中檢測(cè)裝置為三明治型檢測(cè)裝置。
13.如權(quán)利要求1中限定的直通型檢測(cè)裝置，其中檢測(cè)裝置為競(jìng)爭(zhēng)型檢測(cè)裝置。
14.一種測(cè)定測(cè)試樣品中分析物是否存在或其量的直通型檢測(cè)裝置，所述直通型檢測(cè)裝置包括一個(gè)與包含特異性結(jié)合成分和可檢測(cè)探針的探針結(jié)合體液體連通的多孔膜，其中所述多孔膜限定了一個(gè)檢測(cè)區(qū)域，所述檢測(cè)區(qū)域包含有能夠與分析物結(jié)合的捕獲試劑，其中所述檢測(cè)區(qū)域能夠產(chǎn)生代表分析物存在或不存在的檢測(cè)信號(hào)；一個(gè)校準(zhǔn)區(qū)域，其包含有構(gòu)造成能與所述探針結(jié)合體結(jié)合的結(jié)合子，所述校準(zhǔn)區(qū)域包括i)包含第一預(yù)定量的所述結(jié)合子的第一校準(zhǔn)線，所述第一校準(zhǔn)線能夠產(chǎn)生第一校準(zhǔn)信號(hào)；ii)包含比第一預(yù)定量的所述結(jié)合子的量大的、第二預(yù)定量的所述結(jié)合子的第二校準(zhǔn)線，所述第二校準(zhǔn)線能夠產(chǎn)生第二校準(zhǔn)信號(hào)，其強(qiáng)度比所述第一校準(zhǔn)信號(hào)大；以及iii)包含比所述第二預(yù)定量的所述結(jié)合子的量大的、第三預(yù)定量的所述結(jié)合子的第三校準(zhǔn)線，第三校準(zhǔn)線能夠產(chǎn)生第三校準(zhǔn)信號(hào)，其強(qiáng)度比所述第二校準(zhǔn)信號(hào)大；和其中，通過將所述檢測(cè)信號(hào)與所述第一校準(zhǔn)信號(hào)、第二校準(zhǔn)信號(hào)及第三校準(zhǔn)相比較，來確定測(cè)試樣品中分析物的相對(duì)量。
15.如權(quán)利要求14中限定的直通型檢測(cè)裝置，其中能通過視覺將所述檢測(cè)信號(hào)與所述第一校準(zhǔn)信號(hào)、所述第二校準(zhǔn)信號(hào)及所述第三校準(zhǔn)信號(hào)進(jìn)行比較。
16.如權(quán)利要求14中限定的直通型檢測(cè)裝置，其中能通過使用儀器將所述檢測(cè)信號(hào)與所述第一校準(zhǔn)信號(hào)、所述第二校準(zhǔn)信號(hào)及所述第三校準(zhǔn)信號(hào)進(jìn)行比較。
17.如權(quán)利要求14中限定的直通型檢測(cè)裝置，其中通過將所述第一校準(zhǔn)信號(hào)、第二校準(zhǔn)信號(hào)及第三校準(zhǔn)信號(hào)的強(qiáng)度相對(duì)于分析物的已知量作圖，來繪制校準(zhǔn)曲線。
18.如權(quán)利要求14中限定的直通型檢測(cè)裝置，其中所述第一、第二及第三校準(zhǔn)線被設(shè)定為基本上平行于測(cè)試樣品通過所述多孔膜流向的方向。
19.一種測(cè)定測(cè)試樣品中分析物是否存在或其量的直通型檢測(cè)裝置，所述直通型檢測(cè)裝置包括一個(gè)與包含特異性結(jié)合成分和可檢測(cè)探針的探針結(jié)合體液體連通的多孔膜，所述探針結(jié)合體被構(gòu)造成當(dāng)與測(cè)試樣品中的分析物接觸時(shí)能夠與其結(jié)合，并形成探針結(jié)合體/分析物復(fù)合物及未復(fù)合的探針結(jié)合體，其中所述多孔膜限定了i)一個(gè)檢測(cè)區(qū)域，其中捕獲試劑基本上非擴(kuò)散地固定于所述多孔膜上，所述捕獲試劑能夠與所述探針結(jié)合體/分析物復(fù)合物結(jié)合，其中所述檢測(cè)區(qū)域能夠產(chǎn)生檢測(cè)信號(hào)；ii)一個(gè)校準(zhǔn)區(qū)域，其包含有構(gòu)造成能與所述未復(fù)合的探針結(jié)合體結(jié)合的結(jié)合子，所述校準(zhǔn)區(qū)域包括a)包含第一預(yù)定量的所述結(jié)合子的第一校準(zhǔn)區(qū)，所述第一校準(zhǔn)區(qū)能夠產(chǎn)生第一校準(zhǔn)信號(hào)；b)包含比第一預(yù)定量的所述結(jié)合子的量大的第二預(yù)定量的所述結(jié)合子的第二校準(zhǔn)區(qū)，所述第二校準(zhǔn)區(qū)能夠產(chǎn)生第二校準(zhǔn)信號(hào)，其強(qiáng)度比第一校準(zhǔn)信號(hào)大；以及其中，通過將所述檢測(cè)信號(hào)與所述第一校準(zhǔn)信號(hào)及第二校準(zhǔn)信號(hào)相比較，來確定測(cè)試樣品中分析物的相對(duì)量。
20.一種測(cè)定測(cè)試樣品中分析物是否存在或其量的直通型檢測(cè)裝置，所述直通型檢測(cè)裝置包括一個(gè)與包含特異性結(jié)合成分和可檢測(cè)探針的探針結(jié)合體液體連通的多孔膜，其中所述多孔膜限定了i)一個(gè)檢測(cè)區(qū)域，其中預(yù)定量的捕獲試劑基本上非擴(kuò)散地固定于所述多孔膜上，所述捕獲試劑能夠與所述探針結(jié)合體及分析物結(jié)合，其中所述檢測(cè)區(qū)域能夠產(chǎn)生檢測(cè)信號(hào)，以及ii)一個(gè)校準(zhǔn)區(qū)域，其包含有構(gòu)造成能與所述未被所述捕獲試劑結(jié)合的探針結(jié)合體結(jié)合的結(jié)合子，所述校準(zhǔn)區(qū)域包括a)包含第一預(yù)定量的所述結(jié)合子的第一校準(zhǔn)區(qū)，所述第一校準(zhǔn)區(qū)能夠產(chǎn)生第一校準(zhǔn)信號(hào)；b)包含比所述第一預(yù)定量的所述結(jié)合子的量大的第二預(yù)定量的所述結(jié)合子的第二校準(zhǔn)區(qū)，所述第二校準(zhǔn)區(qū)能夠產(chǎn)生第二校準(zhǔn)信號(hào)，所述第二校準(zhǔn)信號(hào)的強(qiáng)度比所述第一校準(zhǔn)信號(hào)大；以及其中，通過將檢測(cè)信號(hào)與所述第一校準(zhǔn)信號(hào)及第二校準(zhǔn)信號(hào)相比較，來確定測(cè)試樣品中分析物的相對(duì)量。
21.權(quán)利要求20中限定的直通型檢測(cè)裝置，其中所述特異性結(jié)合成分與分析物相同。
22.一種測(cè)定測(cè)試樣品中分析物是否存在或其量的直通型檢測(cè)裝置，所述直通型檢測(cè)裝置包括一個(gè)與包含特異性結(jié)合成分和可檢測(cè)探針的探針結(jié)合體液體連通的多孔膜，所述探針結(jié)合體被構(gòu)造成當(dāng)與測(cè)試樣品中的分析物接觸時(shí)能夠與其結(jié)合，并形成探針結(jié)合體/分析物復(fù)合物及未復(fù)合的探針結(jié)合體，其中所述多孔膜限定了i)一個(gè)檢測(cè)區(qū)域，其中捕獲試劑基本上非擴(kuò)散地固定于所述多孔膜上，所述捕獲試劑能夠與所述未復(fù)合的探針結(jié)合體結(jié)合，其中所述檢測(cè)區(qū)域能夠產(chǎn)生檢測(cè)信號(hào)，以及ii)一個(gè)校準(zhǔn)區(qū)域，其包含有構(gòu)造成能與所述探針結(jié)合體/分析物復(fù)合物以及所述未被所述捕獲試劑結(jié)合的探針結(jié)合體結(jié)合的結(jié)合子，所述校準(zhǔn)區(qū)域包括a)包含第一預(yù)定量的所述結(jié)合子的第一校準(zhǔn)區(qū)，所述第一校準(zhǔn)區(qū)能夠產(chǎn)生第一校準(zhǔn)信號(hào)；b)包含比所述第一預(yù)定量的所述結(jié)合子的量大的第二預(yù)定量的所述結(jié)合子的第二校準(zhǔn)區(qū)，所述第二校準(zhǔn)區(qū)能夠產(chǎn)生第二校準(zhǔn)信號(hào)，所述第二校準(zhǔn)信號(hào)的強(qiáng)度比所述第一校準(zhǔn)信號(hào)大；以及其中，通過將所述檢測(cè)信號(hào)與所述第一校準(zhǔn)信號(hào)及第二校準(zhǔn)信號(hào)相比較，來確定測(cè)試樣品中分析物的相對(duì)量。
23.權(quán)利要求22中限定的直通型檢測(cè)裝置，其中所述特捕獲試劑與分析物相同。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種測(cè)定測(cè)試樣品中存在的分析物的量的直通型檢測(cè)裝置。該直通型檢測(cè)裝置包括一個(gè)與包含特異性結(jié)合成分和可檢測(cè)探針的探針結(jié)合體液體連通的多孔膜。該多孔膜限定了一個(gè)檢測(cè)區(qū)域和一個(gè)校準(zhǔn)區(qū)域。該校準(zhǔn)區(qū)域包括兩個(gè)或更多個(gè)包含不同數(shù)量、設(shè)定為能夠與探針結(jié)合體結(jié)合的結(jié)合子的校準(zhǔn)區(qū)(如線、點(diǎn)等)。因而，可產(chǎn)生校準(zhǔn)信號(hào)，且很容易將產(chǎn)生的校準(zhǔn)信號(hào)與檢測(cè)信號(hào)相比較(可視地、定量地等)從而測(cè)定測(cè)試樣品中分析物的存在或其量。
文檔編號(hào)G01N33/558GK1608207SQ02825950
公開日2005年4月20日 申請(qǐng)日期2002年11月21日 優(yōu)先權(quán)日2001年12月24日
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