專利名稱：免疫細胞微流體陣列的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種免疫細胞的檢驗裝置，尤其是免疫細胞的微流體陣列，屬于細胞免疫檢驗技術(shù)領(lǐng)域。
研究表明，白細胞分化抗原不但在白細胞(如淋巴細胞、單核細胞、粒細胞等)表面表達，還分布在胸腺細胞、髓樣細胞、骨髓干細胞、上皮細胞等的細胞膜上。它是細胞正常分化成熟為不同譜系和不同階段的細胞表面標(biāo)記，并隨細胞活化程度出現(xiàn)或消失。它們大都是穿膜的蛋白質(zhì)或糖蛋白，含胞膜外區(qū)、穿膜區(qū)和胞漿區(qū)；有些白細胞分化抗原是以磷脂酰肌醇連接方式“錨”在細胞膜上；少數(shù)白細胞分化抗原是碳水化合物半抗原。根據(jù)分布與功能，現(xiàn)大體上將其分為9大類，即1.T細胞；2.B細胞；3.髓樣細胞和單核細胞；4.血小板；5.NK細胞和非譜系細胞；6.活化抗原；7.血管內(nèi)皮細胞；8.黏附因子；9.細胞因子受體。在機體生理和病理過程中，白細胞分化抗原不僅參與識別抗原、捕捉抗原，促進免疫細胞與抗原或免疫分子間的相互作用，而且在介導(dǎo)免疫細胞間、免疫細胞與基質(zhì)間的黏附作用，免疫應(yīng)答的識別、活化及效應(yīng)階段均發(fā)揮重要作用，同時在造血細胞分化和造血過程的調(diào)控，炎癥發(fā)生以及腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移等方面也起著重要作用。因此，對白細胞分化抗原的研究不僅是對某些白細胞的研究，同時也可反映整個機體的健康水平，具有重要意義。
目前，不同白細胞分化抗原的檢測通常采用將待檢細胞樣本固定在檢測底板上，再滴加某種抗體及指示物的方法。當(dāng)抗體與細胞膜上相應(yīng)的抗原結(jié)合而產(chǎn)生特異性反應(yīng)時，即可檢出樣本細胞中含有某種抗原。這種現(xiàn)有技術(shù)存在的主要問題一是檢驗效率低，因為已確定的白細胞分化抗原有166種分子群及為數(shù)眾多的亞群，逐一檢驗十分煩瑣；二是固定后的白細胞失去活性，不能進行培養(yǎng)，因此無法進一步觀察具有不同白細胞分化抗原的細胞的生長狀態(tài)。
為了達到以上目的，本發(fā)明的免疫細胞微流體陣列的基本技術(shù)方案是包括高分子化合物底板，該底板上制有按順序排布的微陣列沉孔，各沉孔之間通過微管道連通，兩相鄰沉孔之間的微管道傾斜設(shè)置，排序在前沉孔上的管口高于排序在后鄰接沉孔上的管口。
當(dāng)進行細胞的白細胞分化抗原分析時，先在微陣列底板的各沉孔底部分別有序地固定各種抗白細胞分化抗原的抗體，然后將被檢樣品(細胞)源源不斷地輸往排序在前的微陣列沉孔，細胞液將按序由前向后逐個流經(jīng)固定了不同抗體的各微陣列沉孔，直至從末位的沉孔中流出。當(dāng)樣本細胞與某沉孔中的抗體發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)而滯留時，便可斷定樣本細胞中含有對應(yīng)的分化抗原。這樣，一次操作便可檢出樣本細胞所具有的白細胞分化抗原類型，從而判斷細胞表面白細胞分化抗原的種類、細胞分化過程中的白細胞分化抗原消長規(guī)律等，工作效率大大提高。并且由于沉孔中固定抗體，當(dāng)其與細胞膜上相應(yīng)的抗原結(jié)合將細胞分離、固定后，可以保持白細胞的活性，只要加上培養(yǎng)劑，經(jīng)過一定時間的培養(yǎng)，就可以觀察具有不同白細胞分化抗原的細胞的生長狀態(tài)，從而對細胞/機體正常與否進行整體評價，以利于綜合評價機體的免疫機能、炎癥發(fā)生以及腫瘤細胞轉(zhuǎn)移等整體健康水平。
在以上基本技術(shù)方案基礎(chǔ)上，本發(fā)明進一步的改進是高分子化合物底板上的微陣列沉孔兩端分別制有與首位沉孔和末位沉孔連通的首位儲液槽和末位儲液槽，兩儲液槽之間通過蠕動泵連接。這樣，從末位沉孔流出的細胞液/培養(yǎng)液進入末位儲液槽后，可以被蠕動泵重新輸送到與首位儲液槽，再從首位沉孔逐個流經(jīng)固定了不同抗體的各微陣列沉孔，直至從末位的沉孔中流出，逐個流經(jīng)各微陣列沉孔，形成循環(huán)流動，使微陣列板上每各沉孔中的液體量一致，更有利于獲得理想的檢驗結(jié)果。


圖1為本發(fā)明一個實施例的結(jié)構(gòu)示意圖。
在微陣列底板1的兩端，即首位沉孔及末位沉孔的外方，各制有一個可容納2ml液體的儲液槽5。其中，與微陣列首位沉孔相連的儲液槽稱A槽，與末位沉孔相連的儲液槽稱B槽，兩槽之間用蠕動泵3連接。這樣，液體可以從B槽泵至A槽，而A槽的液體則通過水壓的重力流入微陣列的首位沉孔、2孔……直至末位沉孔，回流至B槽，形成循環(huán)，使微陣列板上的每個沉孔中的液體量一致。
當(dāng)進行細胞的白細胞分化抗原分析時，先在微陣列板的各沉孔底部分別有序地固定各種抗白細胞分化抗原的抗體，然后將被檢樣品(細胞)加到A槽中與培養(yǎng)劑混勻，經(jīng)相通管道流經(jīng)各沉孔。根據(jù)細胞膜上表達的白細胞分化抗原的不同，被檢樣品(細胞)與相應(yīng)沉孔中的特異性抗體結(jié)合并被固定下來。依據(jù)研究目的，可直接在顯微鏡下觀察、分析被檢樣品(細胞)所具有的白細胞分化抗原。
本實施例的免疫細胞微流體陣列適用于分離、固定并最終鑒別細胞表面表達的白細胞分化抗原的種類，以期分析細胞活化程度、白細胞分化抗原消長規(guī)律，不同細胞的分化生長狀況，以綜合評價機體的整體健康水平。
除上述實施例外，本發(fā)明還可以有其他實施方式。凡采用等同替換或等效變換形成的技術(shù)方案，均落在本發(fā)明要求的保護范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.免疫細胞微流體陣列，包括高分子化合物底板，其特征在于所述底板上制有按順序排布的微陣列沉孔，各沉孔之間通過微管道連通，兩相鄰沉孔之間的微管道傾斜設(shè)置，排序在前沉孔上的管口高于排序在后鄰接沉孔上的管口。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述免疫細胞微流體陣列，其特征在于所述高分子化合物底板上的微陣列沉孔兩端分別制有與首位沉孔和末位沉孔連通的首位儲液槽和末位儲液槽，兩儲液槽之間通過蠕動泵連接。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述免疫細胞微流體陣列，其特征在于所述微陣列沉孔底部分別有序地固定抗白細胞分化抗原的抗體。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述免疫細胞微流體陣列，其特征在于所述微陣列沉孔之間通過微管道連通形成往復(fù)的S形循環(huán)流道。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述免疫細胞微流體陣列，其特征在于所述微陣列沉孔的孔徑為2mm±0.2mm，各相鄰沉孔的間距為2～3mm。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述免疫細胞微流體陣列，其特征在于所述微管道的直徑為0.1～0.5mm。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述免疫細胞微流體陣列，其特征在于所述高分子化合物底板配有隔離蓋。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種免疫細胞微流體陣列，屬于細胞免疫檢驗技術(shù)領(lǐng)域。在該免疫細胞微流體陣列的高分子化合物底板上制有按順序排布的微陣列沉孔，各沉孔之間通過微管道連通，兩相鄰沉孔之間的微管道傾斜設(shè)置，排序在前沉孔上的管口高于排序在后鄰接沉孔上的管口。使用本發(fā)明，一次操作便可檢出具有相應(yīng)白細胞分化抗原的細胞，從而判斷細胞表面白細胞分化抗原的種類、細胞分化過程中的白細胞分化抗原消長規(guī)律等，工作效率大大提高。并且只要加上培養(yǎng)劑，經(jīng)過一定時間的培養(yǎng)，就可以觀察具有不同白細胞分化抗原的細胞的生長狀態(tài)，從而對細胞/機體正常與否進行整體評價體，以利于綜合評價機體的免疫機能、炎癥發(fā)生以及腫瘤細胞轉(zhuǎn)移等整體健康水平。
文檔編號G01N33/544GK1403817SQ0213847
公開日2003年3月19日 申請日期2002年10月22日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月22日
發(fā)明者鄭紀(jì)山, 陶開華 申請人:中國人民解放軍南京軍區(qū)聯(lián)勤部軍事醫(yī)學(xué)研究所