專利名稱：：Peg包覆的核-殼二氧化硅納米顆粒及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本申請總體上涉及納米顆粒，更具體而言涉及包覆聚乙二醇(“PEG”)的熒光納米顆粒。此外本發(fā)明還描述了PEG包覆的熒光納米顆粒的制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：U.S.專利公開No.2004/0101822Al和2006/0245971Al(它們通過引用的方式全部并入本文)描述了熒光核-殼二氧化硅納米顆粒(下文中稱為“Cs納米顆?！?，其具有與它們的表面連接的各種配體和加入它們的核和/或殼中的熒光染料。在CS納米顆粒的一個實施方案中，納米顆粒在激發(fā)后能夠發(fā)射出近紅外光譜范圍的光。因此，CS納米顆?？蓱?yīng)用于各種檢測方法中。例如，由于它們較小的尺寸和較高的信號輸出，因此CS納米顆?？稍隗w內(nèi)成為系統(tǒng)的部分，從而允許進行手術(shù)的受試者的血管系統(tǒng)可視化。納米級顆粒的體內(nèi)應(yīng)用經(jīng)常遇到顆粒聚集的挑戰(zhàn)。顆粒聚集或凝聚(納米級顆粒通過共價和非共價相互作用以形成較大聚集體的過程)可產(chǎn)生較大尺寸的聚集體，從而抑制納米級顆粒的移動和應(yīng)用。納米級顆粒還可與組織非特異性連接，這也限制了它們的應(yīng)用。需要改善的CS納米顆粒，其具有降低的聚集和/或非特異性或不期望的連接特性。發(fā)明概述本文描述了PEG包覆的CS納米顆粒，其具有降低的聚集和/或非特異性或不期望的連接特性。為了防止聚集和粘結(jié)，CS納米顆粒包覆與二氧化硅顆粒表面關(guān)聯(lián)的化合物(配體)，所述化合物(配體)含有至少一個親水性部分。關(guān)聯(lián)可通過(例如)共價硅烷基偶聯(lián)化學(xué)來獲得。含有親水性部分的示例性化合物為硅烷-PEG(硅烷-聚乙二醇)化合物。在一個示例性實施方案中，硅烷-PEG為甲氧基(聚氧乙烯)丙基]_三甲氧基硅烷(CH3(OC2H4)6-9(CH2)OSi(OCH3)3)。使用親水性化合物(例如改性PEG)包覆納米顆粒可具有許多優(yōu)點。首先，其可減少納米顆粒聚集。其次，其可降低血液中其他化合物(例如蛋白)與顆粒表面的非特異性結(jié)合，從而防止它們保留在器官和其他組織中，進而允許它們在血流中循環(huán)至它們通過腎排泄清除為止。附圖簡要說明圖1示出對示例性PEG包覆的CS納米顆粒、非PEG包覆的CS納米顆粒和游離的染料前體進行熒光掃描比較的結(jié)果。Y軸為熒光單位(相對于游離的染料前體輸出歸一化)，X軸為熒光波長；圖2示出PEG包覆CS納米顆粒、包覆后過濾和尺寸選擇的示例性方法；圖3示出通過這樣的方案合成的CS顆粒的尺寸分布，在所述方案中所述核包覆PEG包覆化合物(例如[甲氧基(聚氧乙烯)丙基]_三甲氧基硅烷)或雜-雙官能PEG化合物的殼，使得制得的CS顆粒的直徑小于7nm；3圖4示出在各種緩沖鹽溶液中14天后6nm的CS顆粒通過熒光相關(guān)光譜法的尺寸表征；圖5示出使用本文所述的示例性PEG包覆的CS納米顆粒來使腎血管系統(tǒng)、特別是尿道可視化的可能的示例性方法；圖6示出水(對照)、非PEG包覆的CS納米顆粒和PEG包覆的CS納米顆粒的體內(nèi)分布比較；圖7示出非PEG包覆的CS納米顆粒和PEG包覆的CS納米顆粒在血液和尿液中的濃度/時間比較；圖8示出作為CS納米顆粒排泄函數(shù)的包覆的CS納米顆粒尺寸相對于熒光的分析。發(fā)明詳述1.包覆的CS納米顆粒本文描述了熒光核_殼二氧化硅納米顆粒，其具有與它們表面關(guān)聯(lián)的一種或多種配體。并未進行限定，下列CS納米顆?？梢允荱.S.專利公開No.2004/0101822A1和/或2006/0245971A1中所述的任意CS納米顆粒。例如，CS納米顆粒可以是核包含巰基官能團的二氧化硅納米顆粒，或者核中加入第一參照染料并且殼中加入第二傳感染料的二氧化硅納米顆粒。CS納米顆?？申P(guān)聯(lián)配體?？膳cCS納米顆粒關(guān)聯(lián)的配體包括U.S.專利公開No.2004/0101822A1中所述的配體和本文中所述的配體。例如，其中可與CS納米顆粒關(guān)聯(lián)的配體包括生物聚合物、合成聚合物、抗原、抗體、病毒或病毒組分、受體、半抗原、酶、激素、化合物、病原體、微生物或其組分、毒素、表面改性劑(例如當(dāng)與納米顆粒關(guān)聯(lián)時改變納米顆?；蚍治鑫锏谋砻嫘阅芑蚪M織相容性的表面活性劑)、及其組合。例如，優(yōu)選的配體為抗體，如單克隆或多克隆抗體。與CS納米顆粒關(guān)聯(lián)的配體還可以是熒光猝滅劑分子，如特用于猝滅由CS納米顆粒發(fā)射出的熒光的BlackHoleQuencher(BHQ)分子。該猝滅劑分子直接與CS納米顆粒的二氧化硅表面連接，或者通過可切除的連接劑(例如肽或核苷酸)連接在PEG分子上。例如，所述連接劑通過特用于某些氨基酸序列的蛋白酶或通過特用于某些核苷酸序列的核酸酶來切除。按照這種方式，由于猝滅劑分子從CS納米顆粒表面去除并且熒光可被檢測，因此可以檢測連接劑切除劑(例如蛋白酶或核酸酶)的存在。熒光猝滅劑分子的應(yīng)用由Zheng，G.，J.Chen，etal.(其通過引用方式并入本文)、Zheng，G.，J.Chen,etal.,(2007).Photodynamicmolecularbeaconasanactivatablephotosensitizerbasedonprotease-controlledsingletoxygenquenchingandactivation.ProcNatlAcadSciUSA104(21):8989_94所述。在一個實施方案中，與CS納米顆粒關(guān)聯(lián)的配體為含有至少一個親水性部分的配體，例如Pluronic⑧型聚合物(通式為HO(C2H4O)a(-C3H6O)b(C2H4O)aH的非離子聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物)、三嵌段共聚物聚(乙二醇-b-(DL-乳酸-co-乙醇酸)-b-乙二醇)(PEG-PLGA-PEG)、二嵌段共聚物聚己酸內(nèi)酯-PEG(PCL-PEG)、聚(偏二氟乙烯)-PEG(PVDF-PEG)、聚(乳酸-co_PEG)(PLA-PEG)、聚(甲基丙烯酸甲酯)-PEG(PMMA-PEG)等。在具有這種部分的實施方案中，親水性部分為PEG部分，例如[甲氧基(聚氧乙烯)丙基]-三甲氧基硅烷(例如CH3(OC2H4)6_9(CH2)OSi(OCH3)3)、[甲氧基(聚氧乙烯)丙基]-二4甲氧基硅烷(例如CH3(OC2H4)6_9(CH2)OSi(OCH3)2)、或[甲氧基(聚氧乙烯)丙基]_單甲氧基硅烷(例如CH3(OC2H4)6_9(CH2)OSi(OCH3))。在另一個實施方案中，連接足夠量的配體以包覆CS納米顆粒。理論上，包覆化合物的鏈的長度可在1至100單體長度之間，優(yōu)選在4至25單位之間。在使用PEG鏈的實施方案中，聚合物末端可以是羥基(-0H)而不是甲氧基。在使用較短PEG鏈的實施方案中，所得CS納米顆粒具有更小的直徑。在本文所述的PEG包覆的CS納米顆粒的使用方法的一個實施方案中，相對于較大直徑的CS納米顆粒，相對較小的直徑允許用于腎排泄或改善腎排泄。例如，在另外的分離步驟后，獲得較短PEG包覆的CS納米顆粒，其流體動力學(xué)半徑為4nm，并且通過熒光相關(guān)光譜法測定窄的粒徑分布。參照圖1和U.S.專利公開No.2004/0101822A1中所述，包含熒光染料的非PEG包覆的CS納米顆粒的每染料亮度(perdyebrightness)在游離染料在水溶液中的過程中是改善的。本文所述的PEG納米顆粒包覆的另一個優(yōu)點是相對于未包覆的CS納米顆粒，其觀察到每染料熒光亮度進一步改善。在使用納米顆粒的許多體外和體內(nèi)的方法中，甚至相對于未包覆的CS納米顆粒的信號噪音比改善是有利的。除了改善的信號，PEG包覆的CS納米顆粒顯著降低了試驗測試受試者中的死亡率。例如，靜脈內(nèi)注射未包覆的IOnm以下的二氧化硅納米顆?？蓪?dǎo)致試驗動物死亡。例如，在一個試驗中，當(dāng)注射200μ1劑量的2.7mg/ml的未包覆的點溶液(dotsolution)時，組中的5只小鼠死亡。相反，注射類似劑量的[甲氧基(聚氧乙烯)丙基]-三甲氧基硅烷包覆的CS納米顆粒的5只小鼠的死亡率為零。2.制備包覆的CS納米顆粒的方法本文所述的制備包覆的CS納米顆粒的方法可通過制備[甲氧基(聚氧乙烯)丙基]-三甲氧基硅烷包覆的CS納米顆粒的下列示例性方法來理解。用于所述應(yīng)用的CS納米顆粒通過Wiesner和Ow在US專利公開No.2004/0101822A1中所述的方法來合成，使得根據(jù)動態(tài)光散射法來測定它們的直徑低于lOnm。在一個實施方案中，制得的包覆的CS納米顆粒保持總直徑低于lOnm。所得CS納米顆粒針對甲醇透析。在這些步驟后它們濃縮為約10mg/ml。隨后CS納米顆粒包覆[甲氧基(聚氧乙烯)丙基]-三甲氧基硅烷。必須量通過下列方式來計算如Tripp和Hair、Tripp,C.P.和Μ.L.Hair(1995).ReactionofMethylsilanolsswithHydratedSilicaSurfacesTheHydrolysisofTrichloro-,Dichloro-,andMonochloromethylsilanesandtheEffectsofCuring.LANGMUIR11(1)149-155中所述(其通過引用方式并入本文)，首先估計在給定體積的納米顆粒溶液中的表面硅醇的總量。知道表面硅醇的量和因此單層覆蓋表面所需要的硅烷化合物(包覆材料)的量，然后將過量10倍的包覆化合物[甲氧基(聚氧乙烯)丙基]_三甲氧基硅烷稀釋到甲醇體積中，所述甲醇體積是待包覆的納米顆粒溶液的體積的兩倍。向該溶液中加入氨，以獲得最終濃度為0.2摩爾。在恒定攪拌下將納米顆粒滴定到甲醇/氨/[甲氧基(聚氧乙烯)丙基]-三甲氧基硅烷混合物中，并在室溫下繼續(xù)攪拌12小時。最終，在超純水中透析納米顆粒。在一個實施方案中，PEG包覆化合物以雜-雙官能PEG化合物的形式提供。所述官能圖可以為(但不限于)馬來酰亞胺官能團、酯官能團、和羥基官能團。雜-雙官能PEG5化合物的一種官能團可以反應(yīng)以形成用于與CS納米顆粒的二氧化硅的殼偶聯(lián)的硅烷。第二官能圖可以反應(yīng)以連接配體。所述配體可以是U.S.專利公開NO.2004/0101822A1中所述的任意配體。在一個實施方案中，配體包括能夠識別靶分子或物質(zhì)的靶向部分。在按照下列方式進行包覆過程的實施方案中使用非常短的親水性化合物(如硅烷-PEG，例如至多10個單體單元)，并使用乙酸鹽緩沖鹽作為催化劑和僅使用水作為溶劑，這導(dǎo)致即使在加入納米顆粒前短PEG-硅烷也快速絮凝。這使得包覆過程無效。較小催化劑氨的使用和幾乎不含水，或者在水和醇的混合物中，這樣的反應(yīng)條件解決了該問題。包覆的(和未包覆的)CS納米顆?？砂ㄌ蠖鵁o法通過腎臟的顆?；蚓奂w。納米顆粒尺寸分布可通過使用市售過濾旋轉(zhuǎn)柱(例如PallCorporationdOKD或30KD尺寸的Jumbo-、Macro-、Micro-禾口Nanos印柱)中的那些或其他供貨商(如Millipore)的產(chǎn)品)經(jīng)過過濾來變窄。濾出物可進一步通過類似但具有更小的孔徑的產(chǎn)品(例如IKD或3KD尺寸的Jumbo-、Macro-、Micro-和Nanos印柱)在體外濃縮。CS納米顆粒還可以使用由Simpore開發(fā)的超薄膜(其可能用于更大的流量和更低的孔的損失(由于它們稀疏的橫截面))來過濾。圖2示出CS納米顆粒包覆和使用兩種過濾器過程的過濾的示例性方法。我們通過熒光相關(guān)光譜法(FCS)分析使用[甲氧基(聚氧乙烯)丙基]_三甲氧基硅烷包覆而制備的典型納米顆粒的兩種尺寸部分(3KD滯留物和30KD滯留物)。我們發(fā)現(xiàn)對于較小的3KD滯留物而言，鈴動力直徑為4nm并且尺寸分布非常窄，對于較大的30KD滯留物，直徑為16nm。在另外的實施方案中，CS顆粒的核通過Wiesner和Ow在US專利公開No.2004/0101822A1(其通過引用的方式并入本文)中所述的方法來合成，使得通過熒光相關(guān)光譜法測定的核的直徑小于5nm。隨后使所得核包覆PEG包覆化合物(例如[甲氧基(聚氧乙烯)丙基]_三甲氧基硅烷)或雜-雙官能PEG化合物的殼，使得制得的CS顆粒的直徑小于7nm。通過該方法合成的CS納米顆粒具有非常窄的尺寸分布。無需另外的合成后過濾過程來使尺寸分布變窄。圖3示出三個不同批次中的CS顆粒的熒光相關(guān)光譜法尺寸表征。CS顆粒尺寸分布分別以6nm、4nm和3nm為中心。圖4示出所得CS顆粒在各種緩沖鹽溶液中14天后的穩(wěn)定性。用于包封Cy5.5染料的6nm、4nm和3nmCS顆粒的染料前體的制備在氮氣惰性化的手套箱中將Img的Cy5.5馬來酰亞胺染料溶解在ImL的二甲基亞砜(DMSO)中。在Cy5.5馬來酰亞胺染料完全溶解在DMSO中后，將3-巰基丙基三甲氧基硅烷(MPTMS)以50IMPTMSCy5.5馬來酰亞胺的摩爾比加入所述溶液中。在磁力攪拌板上在室溫下在黑暗中攪拌反應(yīng)至少12小時。包封Cy5.5染料的基于二氧化硅的富集染料的6nm、4nm和3nmCS顆粒的制備在干凈的圓底玻璃燒瓶中加入合適量的乙醇或甲醇溶劑。試劑濃度如下表所示。以下列順序加入試劑水、染料前體、原硅酸四乙酯(TEOS)、2.OM在乙醇中的氨。在磁力攪拌板上在室溫下攪拌反應(yīng)至少12小時。使用PEG包覆化合物包覆二氧化硅富集染料的核來制備6nm、4nm和3nm的CS顆粒向如上所述合成的含有基于二氧化硅的富集染料的核的混合物中加入硅烷化PEG化合物(例如[甲氧基(聚氧乙烯)丙基]_三甲氧基硅烷)，以產(chǎn)生包圍核的殼。加入的6PEG化合物的量如下表所示。為了制備具有窄的尺寸分布的顆粒，使用劑量容積式流量吸液管以較少的等分試樣間歇(例如每10至15分鐘小于5mM)來加入PEG化合物，并且連續(xù)攪拌。在加入所有PEG化合物后，將反應(yīng)混合物在黑暗中攪拌12小時。收集所得CS顆粒，并針對溶劑甲醇或乙醇通過透析方法來純化，從而除去未反應(yīng)的加入物。另外，針對去離子水來透析CS顆粒，從而交換溶劑。然后水中的CS顆粒可在不同緩沖液溶液中再生以用于成像應(yīng)用。表I:3.使用方法在腹部手術(shù)中輸尿管的意外損壞是并發(fā)癥和醫(yī)療差錯的主要原因。二氧化硅納米顆粒允許外科醫(yī)生使用特定裝備的腹腔鏡使輸尿管和膀胱通過組織而可視化?？梢暬瘞椭饪漆t(yī)生在血管、泌尿管、神經(jīng)和腹部處理中避免意外損壞這些結(jié)構(gòu)。盡管可將支架插入輸尿管中以在手術(shù)過程中顯示這些結(jié)構(gòu)，但是這種方法本身就可能損壞復(fù)雜的結(jié)構(gòu)。另外，包括泌尿科醫(yī)生進行該方法的成本大大降低了其經(jīng)濟上的適用性。使用熒光染料來使輸尿管可視化的概念由Udshamadshuridze提出，N.S.Udshamadshuridze,IntraoperativeVisualizationoftheUreterswithFluoresceinSodiumZ.Urol.Nephr.，Vol.81；pp.635-639(其通過引用方式并入本文)。該研究揭示出使用熒光素，批準(zhǔn)用于臨床的非毒性染料。然而，熒光素發(fā)射出波長無法明顯透過(脂肪)組織的光。因此，盡管其出版于1988年，但是未見臨床采用該研究。在用于使受試者的輸尿管可視化時，CS納米顆粒、特別是具有近紅外熒光化合物的PEG包覆的CS納米顆粒可提供許多優(yōu)點。例如，通過包封近紅外熒光染料而獲得的亮度增強使得它們優(yōu)于相同濃度的游離染料。組織的吸收系數(shù)被認為在近紅外光區(qū)(650nm-900nm)更小，使得光可更深地透過數(shù)厘米厚的組織。另外，染料與CS納米顆粒的二氧化硅網(wǎng)絡(luò)的共價鍵合會避免染料泄露到周圍組織并且在其他器官或組織中積累。這種泄露將降低目標(biāo)器官和周圍組織的對比度。在注射到體內(nèi)后保持強度的熒光染料有利于其作為成像助劑在臨床中的應(yīng)用。因此，CS納米顆粒、特別是PEG包覆的CS納米顆?？伸o脈內(nèi)注射到人或動物中(用于人時，將使用FDA批準(zhǔn)、按照GMP生產(chǎn)并因此具有相應(yīng)的孔徑的過濾器)。CS納米顆粒在通過腎臟后不會降低熒光并濃縮在尿液中。這使正在進行腹部手術(shù)的外科醫(yī)生以尿液從腎臟流向膀胱的方式來觀察輸尿管。使用特定裝備的腹腔鏡這些結(jié)構(gòu)(輸尿管和膀胱)7是通過脂肪組織可視化的，因此避免對于這些結(jié)構(gòu)的意外損壞，如圖5所示。除了使輸尿管成像，二氧化硅納米顆?？杉尤雮鞲衅飨到y(tǒng)中以賦予觀察者時間和空間信息。例如，主要由Wiesneretal所述的pH傳感器證據(jù)基于二氧化硅納米顆粒，該二氧化硅納米顆粒加入環(huán)境敏感性染料和用于公制傳感的參照染料(“納米顆粒傳感器”)。該主要PH傳感器的證據(jù)已經(jīng)證實可擴展測定其他生理參數(shù)，例如金屬狀態(tài)、氧的狀態(tài)、氧化還原狀態(tài)等，這些生理參數(shù)可涉及染料發(fā)射情況的變化。通過將納米顆粒傳感器或其他基于納米顆粒的傳感裝置注射到機體內(nèi)，研究者和臨床醫(yī)生可使機體成像并獲得其他重要的生理數(shù)據(jù)。加入體內(nèi)的納米顆粒的分布是影響它們體內(nèi)應(yīng)用可能性的關(guān)鍵問題。期望有快速試驗，其中在目標(biāo)位置觀察(使用可透過組織的NIR成像系統(tǒng))注射的點，并且在提供測量或其他功能后快速清除。一個接受FDA批準(zhǔn)用于注射診斷性納米顆粒的關(guān)鍵問題是它們從機體清除。通過確?？焖俚哪I臟清除、低的殘留物質(zhì)量和物質(zhì)在體內(nèi)的強度，通過使用本文所述的包覆的CS納米顆粒可開發(fā)出更安全更精確的試驗。包覆的CS納米顆粒的其他優(yōu)點和特征從下列與未包覆的CS納米顆粒的比較中將是顯而易見的。參照圖6，可見未包覆的CS納米顆粒和[甲氧基(聚氧乙烯)丙基]-三甲氧基硅烷包覆的CS納米顆粒的體內(nèi)分布在注射到小鼠中2小時后是不同的?？梢娫?小時后在脾臟和肝臟中積累未包覆的CS納米顆粒。尿液濃度表現(xiàn)出與端點分析(在注射CS納米顆粒2小時后)中的相同。然而，PEG包覆的CS納米顆粒即使在2小時后也仍然保留在血流中，因此仍可通過腎臟分泌。參照圖7，未包覆(A)和[甲氧基(聚氧乙烯)丙基]-三甲氧基硅烷包覆C的點(B)在兩個獨立試驗中靜脈內(nèi)注射到麻醉的豬中。在兩個試驗中，隨時間對血液和尿液進行取樣，并分析CS納米顆粒含量。明顯地，包覆的C的點(B)停留在血流中而不是像未包覆的點(A)—樣從其中耗盡。還可以注射比未包覆的CS納米顆粒更高劑量的PEG包覆的CS納米顆粒，而不會存在CS納米顆粒聚集的風(fēng)險，這可在使用[甲氧基(聚氧乙烯)丙基]-三甲氧基硅烷包覆的CS納米顆粒(B)獲得的更高尿液濃度中看到。在血液中注射更高劑量的CS納米顆粒直接轉(zhuǎn)變?yōu)楦叩哪蛞簼舛?。期望在尿液中獲得更高濃度的CS納米顆粒，因為作為使輸尿管可視化的基礎(chǔ)的檢測的熒光信號將會更強。參照圖8，[甲氧基(聚氧乙烯)丙基]-三甲氧基硅烷包覆的納米顆粒的尺寸分布已經(jīng)表明影響腎臟排泄。包覆的納米顆粒通過30K的柱過濾。濾出物在3K的柱上重新濃縮。兩部分(滯留物和重新濃縮的濾出物)匹配相同的熒光并且單獨注射(5只小鼠/部分)。在2小時后，取出尿液和血液并且分析熒光(RFU=相對熒光單位)。較之滯留物部分(較大的納米顆粒)，30K濾出物部分(較小的納米顆粒)在尿液中在更高程度上清晰。另外，在注射較小的納米顆粒部分的小鼠中，血液中檢測的熒光明顯更低(P<0.05)，原因在于熒光納米顆粒的排泄。對照組示出未注射納米顆粒的小鼠的背景信號。8權(quán)利要求一種熒光納米顆粒，包含基于二氧化硅的核，包含含有巰基取代基的有機官能團；和有機熒光化合物；二氧化硅的殼；以及硅烷PEG化合物；其中所述二氧化硅的殼包封所述基于二氧化硅的核；并且所述硅烷PEG化合物與所述二氧化硅的殼偶聯(lián)。2.權(quán)利要求1所述的納米顆粒，其中所述熒光納米顆粒的直徑為IOnm或更小。3.權(quán)利要求1所述的納米顆粒，其中所述硅烷-PEG化合物包含25或更少的重復(fù)的PEG單元。4.權(quán)利要求3所述的納米顆粒，其中所述硅烷-PEG化合物選自[甲氧基(聚氧乙烯)丙基]-三甲氧基硅烷、[甲氧基(聚氧乙烯)丙基]-二甲氧基硅烷和[甲氧基(聚氧乙烯)丙基]-單甲氧基硅烷。5.權(quán)利要求1所述的納米顆粒，其中所述納米顆粒在激發(fā)時能夠發(fā)射波長大于650nm的熒光。6.權(quán)利要求1所述的納米顆粒，其中所述二氧化硅的殼包含硅醇；并且其中所述硅烷-PEG化合物與所述硅醇偶聯(lián)。7.一種組合物，包含多個權(quán)利要求1所述的納米顆粒；其中所述多個納米顆粒中少于10%的納米顆粒具有直徑大于IOnm的二氧化硅的殼。8.權(quán)利要求1所述的熒光納米顆粒，還包含適于與靶分子或底物關(guān)聯(lián)的配體。9.一種熒光納米顆粒，包含基于二氧化硅的核，包含有機熒光化合物；二氧化硅的殼；適于與靶分子或底物關(guān)聯(lián)的配體；以及硅烷-PEG化合物；其中所述二氧化硅的殼包封所述基于二氧化硅的核，并且所述熒光納米顆粒的直徑在約Inm和約IOOnm之間。10.權(quán)利要求9所述的熒光納米顆粒，其中所述硅烷-PEG化合物與所述二氧化硅的核以及適于與靶分子或底物關(guān)聯(lián)的配體偶聯(lián)。11.一種熒光納米顆粒，包含基于二氧化硅的網(wǎng)絡(luò)，包含有機熒光材料；聚合物配體，其通過包含有機官能團的連接劑與所述基于二氧化硅的網(wǎng)絡(luò)的外表面偶聯(lián)；適于與靶分子或底物關(guān)聯(lián)的配體；包含有機官能團的連接劑；以及硅烷-PEG化合物，其與所述基于二氧化硅的網(wǎng)絡(luò)的外表面偶聯(lián)。全文摘要本文描述了一種PEG包覆的核-殼納米顆粒，其表現(xiàn)了降低的聚集和/或降低的非特異性或不需要的連接特性。這些熒光納米顆粒包括基于二氧化硅的核(其具有包含巰基取代基的有機官能團、有機熒光化合物)、二氧化硅的殼、和硅烷-PEG化合物。所述納米顆粒的二氧化硅的殼包封基于二氧化硅的核，并且硅烷-PEG化合物與二氧化硅的殼偶聯(lián)。文檔編號B82B1/00GK101903290SQ200880114641公開日2010年12月1日申請日期2008年8月29日優(yōu)先權(quán)日2007年8月31日發(fā)明者H·歐,U·威斯納申請人:混合硅晶科技公司