本發(fā)明涉及三維紙芯片制備領(lǐng)域，具體涉及一種基于多版圖案化絲網(wǎng)聯(lián)合印刷技術(shù)的三維紙芯片制備方法。

背景技術(shù)：

微流控紙芯片又稱紙上微型實驗室，是一種通過在紙基底上構(gòu)建流體通道網(wǎng)絡(luò)以實現(xiàn)分析檢測的新型微流控分析器件。它將傳統(tǒng)微流控芯片微型化、便攜化等特點與濾紙廉價易得、加工便利、生物相容性好等優(yōu)勢相結(jié)合，已成為一個全新的分析技術(shù)平臺，在臨床醫(yī)療診斷、食品安全檢測和環(huán)境質(zhì)量監(jiān)控等領(lǐng)域均表現(xiàn)出較好的應(yīng)用前景。

(1)2D紙芯片加工技術(shù)

目前，文獻報道的2D紙芯片加工技術(shù)有紫外光刻、蠟印、等離子體處理、噴墨打印、噴墨刻獨、繪圖、絲網(wǎng)印刷、融蠟浸透、融蠟印章、柔印、激光處理等技術(shù)。通過這些技術(shù)在濾紙的特定區(qū)域制造出疏水的隔離帶(或隔離視)，形成親疏水性微通道網(wǎng)絡(luò)，制得2D微流控紙芯片。根據(jù)親疏水圖案化方式不同，2D紙芯片的制作方法可分為兩大類：一是兩步法，即先采用物理沉積、物理堵塞或化學(xué)鍵合等途徑使疏水性材料均勻涂敷或修飾整片紙張，然后通過一定的技術(shù)使局部區(qū)域親水化；二是一步法，即直接在紙張的特定區(qū)域一步疏水化(原親水性紙片)或親水化(原疏水性紙片)處理。屬于前者的有紫外光刻、等離子體處理、噴墨刻燭等技術(shù)；屬于后者的有蠟印、噴墨打印、繪圖、絲網(wǎng)印刷、柔印、激光刻蝕、融蠟浸透和融蠟印章等技術(shù)。第一類制作方法優(yōu)點在于制作的芯片圖案分辨率高，但是所用儀器與試劑價格昂貴，制作過程復(fù)雜、繁瑣。第二類方法中的蠟印、噴墨打印和激光刻蝕優(yōu)點與第一類方法一樣，但是所用儀器與試劑價格也比較昂貴，而融蠟浸透和融蠟印章法雖然試劑與儀器成本低，但是圖案分辨率較低，同時模具制作困難。繪圖、絲網(wǎng)印刷、柔印的成本最低，但是圖案分辨率也較低，并且繪圖法不適合批量生產(chǎn)。

(2)三維紙芯片加工(芯片封接)技術(shù)

三維紙芯片具有立體通道網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)特點使三維紙芯片具有某些優(yōu)于2D紙芯片的性能：1)流體的快速輸送，因為Z軸方向的路徑比x，y-平面內(nèi)的通道路徑要短很多；2)單片裝置內(nèi)高通量檢測，如在2cm×2cm×1.2mm的裝置內(nèi)同時進行16個試驗；3)易設(shè)計功能部件，如將上層紙片用于過濾。目前，文獻報道的三維紙芯片加工技術(shù)主要有2D紙芯片粘結(jié)法和折紙法。2011年，Crooks組報道了用中國傳統(tǒng)的手工折紙技術(shù)制作三維紙芯片的新方法。具體制作過程是首先用簡單的SU8-紫外光刻技術(shù)在一層紙芯片上pattern好通道、儲液池和折痕等分析元件；接著按折痕和一定的折法將該層紙芯片折成多層三維裝置；最后減去四個角放進銷制夾板之間等待進樣分析。折紙法的缺點在于紙層之間較難對準(zhǔn)，并且總是存在縫隙，影響流體垂直流動，還需要配置額外的銷制夾板。Whitesides組利用打有孔眼并在孔眼內(nèi)填充了纖維素粉的不透水雙面膠將兩層或多層經(jīng)SU8-紫外光刻制得的二維紙芯片枯合疊加在一起，首次制得三維紙芯片。這種方法雖然紙層之間能夠緊密結(jié)合，但是制作過程過于困難和繁瑣。2012年，Phillips組報道了一種蠟打印法結(jié)合噴膠技術(shù)快速、批量制作三維紙芯片的新方法。噴膠法的優(yōu)點在于紙層結(jié)合緊密，操作簡單，但相對噴膠量難以控制、較難實現(xiàn)圖案化，膠液在濾紙中的滲透會影響通道的親水性能。

(3)紙芯片上固定藥劑分子

在紙芯片上固定藥劑分子，在流體流經(jīng)固定分子的區(qū)域，達到預(yù)處理或檢測的目的，常用的方法主要有物理固定法、化學(xué)固定法、生物化學(xué)結(jié)合法和載體顆粒法。物理固定法可以直接應(yīng)用到紙表面，這主要是因為紙纖維的毛細拉力和親水性可以促進紙的快速吸收；化學(xué)固定法主要是通過共價交聯(lián)進行的；生物化學(xué)結(jié)合主要是將抗體、酶、菌體或者細胞與纖維素片斷相結(jié)合，然后它們可以自發(fā)地固定到紙纖維上；載體顆粒法是將生物分子共價固定到膠體顆粒上再結(jié)合在紙上。上述固定的方法在結(jié)合過程中可采用點樣或打印的方法來圖案化并提高通量，但儀器昂貴，容易堵塞。

現(xiàn)在絲網(wǎng)印刷技術(shù)來制作2D紙芯片是先制作絲網(wǎng)印刷模具，然后印刷固體蠟，加熱后固體蠟融化進入紙基底微孔內(nèi)，形成疏水瑣，制得具有親疏水圖案的紙芯片。這種制作方法步驟復(fù)雜，圖案分辨率較低；2D紙芯片在封接成三維芯片時，目前的封接方法主要包括折紙法和粘結(jié)法，存在以下缺點：紙層之間存在縫隙，影響流體垂直流動，需要配置額外的銷制夾板；制作過程過于困難、繁瑣，噴膠量難以控制、較難實現(xiàn)圖案化，膠液在濾紙中的滲透會影響通道的親水性能；紙芯片上固定藥劑分子過程中可采用點樣或打印的方法來圖案化并提高通量，但儀器昂貴，容易堵塞。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為此，本發(fā)明針對上述問題的不足，提供一種基于多版圖案化絲網(wǎng)聯(lián)合印刷技術(shù)的三維紙芯片制備方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)存在的精度低、成本高、制作過程復(fù)雜、困難等問題。

本發(fā)明提供的基于多版圖案化絲網(wǎng)聯(lián)合印刷技術(shù)的三維紙芯片制備方法，具體制備過程如下：

用刮板將疏水性印刷液通過圖案化印墨絲網(wǎng)印刷在紙上，滲透入紙張，形成疏水區(qū)，沒有印刷的部分為親水區(qū)，獲得紙芯片的通道層和檢測層；

用刮板將預(yù)處理藥劑通過圖案化藥印絲網(wǎng)印刷在所述通道層和所述檢測層上的預(yù)處理區(qū)域；

用刮板將檢測藥劑通過圖案化印藥絲網(wǎng)印刷在所述檢測層上的檢測區(qū)域；

用刮板將膠液通過圖案化印膠絲網(wǎng)印刷在所述通道層上；

將所述通道層和所述檢測層粘結(jié)組裝，獲得三維紙芯片。

優(yōu)選地，所述印墨絲網(wǎng)和印藥絲網(wǎng)均采用尼龍網(wǎng)，所述印膠絲網(wǎng)采用鋼網(wǎng)。

優(yōu)選地，所述印墨絲網(wǎng)采用200-400目，所述印膠絲網(wǎng)采用50-180目，所述印藥絲網(wǎng)采用200-400目。

更優(yōu)選地，所述印墨絲網(wǎng)采用300目；所述印膠絲網(wǎng)采用140-160目；所述印藥絲網(wǎng)采用300-400目。

優(yōu)選地，所述印墨絲網(wǎng)、所述印藥絲網(wǎng)、所述印膠絲網(wǎng)的張力均為15-18N/cm。

優(yōu)選地，印刷時，所述印墨絲網(wǎng)、所述印藥絲網(wǎng)、所述印膠絲網(wǎng)與紙之間網(wǎng)距均是1-4mm。

更優(yōu)選地，所述印墨絲網(wǎng)、所述印藥絲網(wǎng)、所述印膠絲網(wǎng)與紙之間網(wǎng)距均是1-1.8mm。

優(yōu)選地，所述刮板在印刷時與絲網(wǎng)接觸時角度是40-50°，印刷速度為0.2-0.6m/s。

優(yōu)選地，所述疏水性印刷液包括疏水性物質(zhì)和溶劑；其中，所述疏水性物質(zhì)為網(wǎng)印油墨、石蠟、聚二甲基硅氧烷、丙烯顏料中的一種；所述溶劑是乙酸乙酯、正庚烷、甲苯、乙醇中的一種；

當(dāng)所述印刷液由網(wǎng)印油墨和乙酸乙酯組成時，所述網(wǎng)印油墨和所述乙酸乙酯的體積比為5-3∶1；當(dāng)所述印刷液由石蠟和正庚烷組成時，所述石蠟和所述正庚烷的質(zhì)量比為1∶150-200；當(dāng)所述印刷液由丙烯顏料和乙醇組成時，所述丙烯顏料和所述乙醇的體積比為1∶1-1.5；

當(dāng)所述印刷液由疏水性物質(zhì)聚二甲基硅氧烷和溶劑甲苯組成時，還包括交聯(lián)劑正硅酸乙酯，所述聚二甲基硅氧烷、所述正硅酸乙酯和所述甲苯的體積比為10∶1∶2-3。

優(yōu)選地，所述預(yù)處理藥劑是化學(xué)掩蔽劑、緩沖劑、酶或酶標(biāo)記的抗體。

優(yōu)選地，所述檢測藥劑是化學(xué)顯色劑、熒光探針、DNA分子、細菌、細胞或底物。

更優(yōu)選地，所述化學(xué)顯色劑和熒光探針分別由蒸餾水或相應(yīng)有機溶劑配制；所述DNA分子、細菌、細胞或底物由纖維素或二氧化硅微球包被。

優(yōu)選地，所述膠液是主要成分為環(huán)氧樹脂的紙粘膠；所述紙選自濾紙、醋酸纖維素膜、硝酸纖維素膜或混合纖維素膜中的一種。

本發(fā)明提供的基于多版圖案化絲網(wǎng)聯(lián)合印刷技術(shù)的三維紙芯片制備方法具有如下有益效果：

1)采用絲網(wǎng)印刷技術(shù)，通過改進打印材料，不采用固體蠟，而是采用疏水性材料和對應(yīng)溶劑一次性滲入紙層的方式，省略加熱再滲透，簡化制作步驟；從網(wǎng)孔目數(shù)、刮板角度、印刷速度、紙張承載力、輸水材料和配方等多參數(shù)的優(yōu)化，精確控制疏水材料在紙張的垂直滲透量和水平延展量，增大垂直滲透，降低水平延展，從而提高圖案的精度；

2)采用絲網(wǎng)印刷技術(shù)，來印刷膠液，從而將三維紙芯片再封接成三維芯片；從網(wǎng)孔目數(shù)、刮板角度、印刷速度、紙張承載力，精確控制膠液在紙張的垂直滲透量和水平延展量，增大膠液水平延展，降低垂直滲透，在保證將紙粘結(jié)緊密的同時，最大程度避免由于膠液在濾紙中的滲透，而對通道的親水性能的影響；

3)采用絲網(wǎng)印刷技術(shù)，來印刷藥劑分子，容易實現(xiàn)圖案化，儀器設(shè)備簡單，容易實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化，顯著降低生產(chǎn)成本。

附圖說明

圖1為本發(fā)明提供的實施例1制備的三維紙芯片的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2為本發(fā)明提供的實施例2制備的三維紙芯片的結(jié)構(gòu)示意圖。

具體實施方式

為了使本領(lǐng)域技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案能予以實施，下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明，但所舉實施例不作為對本發(fā)明的限定。

實施例1

選取300目的圖案化印墨絲網(wǎng)，其材質(zhì)為尼龍，絲網(wǎng)張力18N/cm，利用該圖案化印墨絲網(wǎng)將體積比為3∶1的網(wǎng)印油墨和乙酸乙酯組成的疏水性印刷液，印刷在濾紙上，印刷時所述印墨絲網(wǎng)與濾紙之間網(wǎng)距是1.5mm，刮板與所述印墨絲網(wǎng)接觸時角度是45°，印刷速度是0.2m/s，紙張承受壓力為12N，獲得紙芯片(2D紙芯片)的通道層和檢測層。

預(yù)處理藥劑采用化學(xué)掩蔽劑，具體為水溶液質(zhì)量配比為20％的丙二酸鈉和15％的氟化鈉。將顯色劑二乙基二硫代氨基甲酸鈉使用EDTA和HF的混合溶液(EDTA：0.05mol l^-1；HF：0.05mol l^-1)配置成1.0mg ml^-1的溶液，使用2％(v/v)的氨水將pH調(diào)節(jié)成8.5，得到檢測藥劑。

選取400目的圖案化印藥絲網(wǎng)，其材質(zhì)為尼龍，絲網(wǎng)張力18N/cm；利用該圖案化印藥絲網(wǎng)將上述預(yù)處理藥劑印刷在圖1所示的第二層預(yù)處理區(qū)域，將上述得到檢測藥劑印刷在圖1所示的第四層檢測區(qū)域，晾干，其絲網(wǎng)圖案分別與第二層和第四層一致，印刷時印藥絲網(wǎng)與濾紙之間網(wǎng)距是1.5mm，刮板與印藥絲網(wǎng)接觸時角度是45°，印刷速度是0.4m/s，紙張承受壓力為8N。

選取150目的圖案化印藥絲網(wǎng)，其材質(zhì)為鋼網(wǎng)，絲網(wǎng)張力15N/cm，利用該圖案化印膠絲網(wǎng)將膠液(主要成分是環(huán)氧樹脂的紙粘膠)印刷在圖1所示的第一層的背面，第二層的背面和第四層的正面，其絲網(wǎng)圖案分別與第一層、第二層和第四層一致，印刷時印膠絲網(wǎng)與濾紙之間網(wǎng)距是1.5mm，刮板與印膠絲網(wǎng)接觸時角度是45°，印刷速度是0.4m/s，紙張承受壓力為4N，將第一層濾紙背面與第二層濾紙正面粘結(jié)，依次粘結(jié)至整個圖案化三維紙芯片裝配完成。

2D芯片疏水材料透紙率100％，通道分辨率0.25mm，膠液對通道親水性無影響。按照上述步驟制備的三維紙芯片其結(jié)構(gòu)示意圖如圖1所示。通過該芯片，可將單一樣品平行分配為16個平行樣品，提高檢測通量。

實施例2

選取400目的圖案化印墨絲網(wǎng)，其材質(zhì)為尼龍，絲網(wǎng)張力18N/cm，利用該圖案化印墨絲網(wǎng)將體積比為1∶1的丙烯顏料和乙醇組成的疏水性印刷液，印刷在濾紙上，印刷時所述印墨絲網(wǎng)與濾紙之間網(wǎng)距是1.5mm，刮板與所述印墨絲網(wǎng)接觸時角度是45°，印刷速度是0.2m/s，紙張承受壓力為12N，獲得紙芯片(2D紙芯片)的通道層和檢測層。

預(yù)處理藥劑采用化學(xué)掩蔽劑，具體為Na₂S₂O₃(40ppm)和0.05％(v/v)H₂SO₄的混合溶液。將顯色劑丁二酮肟使用50％(v/v)的丙酮水溶液配成2mg ml^-1的溶液(該溶液同時包含EDTA：0.05mol l^-1，Na₂S₂O₃：0.05mol l^-1)，得到檢測藥劑。

選取400目的圖案化印藥絲網(wǎng)，其材質(zhì)為尼龍，絲網(wǎng)張力18N/cm，利用該圖案化印藥絲網(wǎng)將上述預(yù)處理藥劑印刷在圖2所示的第二層或第三層預(yù)處理區(qū)域，將檢測藥印刷在圖2所示的第四層檢測區(qū)域，晾干，其絲網(wǎng)圖案分別與第二層和第四層一致，印刷時印藥絲網(wǎng)與濾紙之間網(wǎng)距是1.5mm，刮板與印藥絲網(wǎng)接觸時角度是45°，印刷速度是0.4m/s，紙張承受壓力為8N。

選取150目的圖案化印藥絲網(wǎng)，其材質(zhì)為鋼網(wǎng)，絲網(wǎng)張力15N/cm，利用該圖案化印膠絲網(wǎng)將膠液(主要成分是環(huán)氧樹脂的紙粘膠)印刷在圖2所示的第一層的背面，第二層的背面和第四層的正面，其絲網(wǎng)圖案分別與第一層、第二層和第四層一致，印刷時印膠絲網(wǎng)與濾紙之間網(wǎng)距是1.5mm，刮板與印膠絲網(wǎng)接觸時角度是45°，印刷速度是0.4m/s，紙張承受壓力為4N，將第一層濾紙背面與第二層濾紙正面粘結(jié)，依次粘結(jié)至整個圖案化三維紙芯片裝配完成。

2D芯片疏水材料透紙率100％，通道分辨率0.125mm，膠液對通道層親水性無影響，按照上述步驟制備的三維紙芯片其結(jié)構(gòu)示意圖如圖2所示。通過該芯片，可將4種待測樣品分別平行分配為4個平行樣品，并形成圖2中檢測陣列的排列方式。

實施例3

選取200目的圖案化印墨絲網(wǎng)，其材質(zhì)為尼龍，絲網(wǎng)張力15N/cm，利用該圖案化印墨絲網(wǎng)將質(zhì)量比為1∶150的石蠟和正庚烷組成的疏水性印刷液，印刷在醋酸纖維素膜上，印刷時所述印墨絲網(wǎng)與醋酸纖維素膜之間網(wǎng)距是1.8mm，刮板與所述印墨絲網(wǎng)接觸時角度是40°，印刷速度是0.6m/s，醋酸纖維素膜承受壓力為4N，獲得紙芯片(2D紙芯片)的通道層和檢測層。

預(yù)處理藥劑采用體積分?jǐn)?shù)為2％的氨水，檢測藥劑為濃度為2mg/ml的丁二酮肟。

選取300目的圖案化印藥絲網(wǎng)，其材質(zhì)為尼龍，絲網(wǎng)張力15N/cm；利用該圖案化印藥絲網(wǎng)將上述預(yù)處理藥劑印刷在圖1所示的第二層預(yù)處理區(qū)域，將上述檢測藥劑印刷在圖1所示的第四層檢測區(qū)域，晾干，其絲網(wǎng)圖案分別與第二層和第四層一致，印刷時印藥絲網(wǎng)與醋酸纖維素膜之間網(wǎng)距是1.8mm，刮板與印藥絲網(wǎng)接觸時角度是40°，印刷速度是0.4m/s，醋酸纖維素膜承受壓力為8N。

選取160目的圖案化印藥絲網(wǎng)，其材質(zhì)為鋼網(wǎng)，絲網(wǎng)張力18N/cm，利用該圖案化印膠絲網(wǎng)將膠液(主要成分是環(huán)氧樹脂的紙粘膠)印刷在圖1所示的第一層的背面，第二層的背面和第四層的正面，其絲網(wǎng)圖案分別與第一層、第二層和第四層一致，印刷時印膠絲網(wǎng)與醋酸纖維素膜之間網(wǎng)距是1.8mm，刮板與印膠絲網(wǎng)接觸時角度是40°，印刷速度是0.6m/s，醋酸纖維素膜承受壓力為8N，將第一層醋酸纖維素膜背面與第二層醋酸纖維素膜正面粘結(jié)，依次粘結(jié)至整個圖案化三維紙芯片裝配完成。

實施例4

選取300目的圖案化印墨絲網(wǎng)，其材質(zhì)為尼龍，絲網(wǎng)張力16N/cm，利用該圖案化印墨絲網(wǎng)將體積比為5∶1的網(wǎng)印油墨和乙酸乙酯組成的疏水性印刷液，印刷在硝酸纖維素膜上，印刷時所述印墨絲網(wǎng)與硝酸纖維素膜之間網(wǎng)距是1.0mm，刮板與所述印墨絲網(wǎng)接觸時角度是50°，印刷速度是0.2m/s，硝酸纖維素膜承受壓力為12N，獲得紙芯片(2D紙芯片)的通道層和檢測層。

預(yù)處理藥劑1采用單分散二氧化硅微球(5.0μL，2.5％(w/V))混合金標(biāo)兔抗HAV抗體1；檢測藥劑采用單分散二氧化硅微球(5.0μL，2.5％(w/V))混合兔抗HAV抗體2。

選取400目的圖案化印藥絲網(wǎng)，其材質(zhì)為尼龍，絲網(wǎng)張力16N/cm；利用該圖案化印藥絲網(wǎng)將上述預(yù)處理藥劑印刷在圖2所示的第二層預(yù)處理區(qū)域，將上述檢測藥劑印刷在圖2所示的第四層檢測區(qū)域，晾干，其絲網(wǎng)圖案分別與第二層和第四層一致，印刷時印藥絲網(wǎng)與硝酸纖維素膜之間網(wǎng)距是1.0mm，刮板與印藥絲網(wǎng)接觸時角度是50°，印刷速度是0.6m/s，醋酸纖維素膜承受壓力為6N。

選取140目的圖案化印藥絲網(wǎng)，其材質(zhì)為鋼網(wǎng)，絲網(wǎng)張力16N/cm，利用該圖案化印膠絲網(wǎng)將膠液(主要成分是環(huán)氧樹脂的紙粘膠)印刷在圖2所示的第一層的背面，第二層的背面和第四層的正面，其絲網(wǎng)圖案分別與第一層、第二層和第四層一致，印刷時印膠絲網(wǎng)與硝酸纖維素膜之間網(wǎng)距是1.0mm，刮板與印膠絲網(wǎng)接觸時角度是50°，印刷速度是0.6m/s，硝酸纖維素膜承受壓力為8N，將第一層硝酸纖維素膜背面與第二層硝酸纖維素膜正面粘結(jié)，依次粘結(jié)至整個圖案化三維紙芯片裝配完成。

實施例5

對實施例1所制得的圖案化三維紙芯片進行顯色檢測，具體為：

使用去離子水，將固體CuSO₄·5H₂O配置成濃度為100ppm的Cu²⁺標(biāo)準(zhǔn)溶液。再將濃度為100ppm的Cu²⁺溶液分別稀釋至50ppm、20ppm、10ppm、5ppm、2ppm、1ppm。將濃度為1-100ppm的一系列Cu²⁺溶液50μL，滴加至實施例1所制得的圖案化三維紙芯片上層的樣品滴加入口。將三維紙芯片靜置3分鐘后，觀察檢測區(qū)域的顏色變化。Cu²⁺經(jīng)顯色后，陣列區(qū)域變成黃褐色，整體顏色依照Cu²⁺濃度的由高到低的變化呈由深到淺的漸變效果。

實施例6

對實施例2所制得的圖案化三維紙芯片進行顯色檢測，具體為：

使用去離子水，將固體NiSO₄·6H₂O配置成濃度為100ppm的Ni²⁺標(biāo)準(zhǔn)溶液。再將濃度為100ppm的Ni²⁺溶液分別稀釋至50ppm、20ppm、10ppm、5ppm、2ppm、1ppm。將濃度為1-100ppm的一系列Ni²⁺溶液50μL，滴加至實施例2所制得的圖案化多層陣列紙芯片上層的樣品滴加入口。將三維紙芯片靜置3分鐘后，觀察檢測區(qū)域的顏色變化。Ni²⁺經(jīng)顯色后，陣列區(qū)域變成紫紅色，整體顏色依照Ni2+濃度的由高到低的變化呈由深到淺的漸變效果。

實施例7

對實施例3所制得的圖案化三維紙芯片進行顯色檢測，具體為：

使用去離子水，將固體NiSO₄·6H₂O配置成濃度為100ppm的Ni²⁺標(biāo)準(zhǔn)溶液。將濃度為100ppm的Ni²⁺溶液分別稀釋至50ppm、20ppm、10ppm、5ppm、2ppm、1ppm。將濃度為1-100ppm的一系列Ni²⁺溶液50μL，滴加至實施例3所制得的圖案化多層陣列紙芯片上層的樣品滴加入口。將三維紙芯片靜置3分鐘后，觀察檢測區(qū)域的顏色變化。Ni²⁺經(jīng)顯色后，檢測區(qū)域變成紫紅色，整體顏色依照Ni²⁺濃度的由高到低的變化呈由深到淺的漸變效果。

實施例8

對實施例4所制得的圖案化三維紙芯片進行顯色檢測，具體為：

使用患者血清樣本，滴加至實施例4所制得的圖案化多層陣列紙芯片上層的樣品滴加入口。將三維紙芯片靜置3分鐘后，觀察檢測區(qū)的顏色變化。HAV經(jīng)顯色后，檢測區(qū)域變成紅色，整體顏色依照HAV濃度的由高到低的變化呈由深到淺的漸變效果。

以上所述實施例僅是為充分說明本發(fā)明而所舉的較佳的實施例，其保護范圍不限于此。本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明基礎(chǔ)上所作的等同替代或變換，均在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)，本發(fā)明的保護范圍以權(quán)利要求書為準(zhǔn)。