一種乙醇和亞臨界流體混合萃取天然產(chǎn)物有效成分的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種天然產(chǎn)物有效成分的提取方法，具體涉及同時(shí)提取天然產(chǎn)物中水溶性和脂溶性有效成分的方法，特別是涉及以一種乙醇和亞臨界流體混合萃取天然產(chǎn)物有效成分的方法，屬于天然產(chǎn)物有效成分萃取領(lǐng)域。本發(fā)明利用乙醇和亞臨界流體混合作為萃取溶劑，在密閉、無氧、低壓的萃取罐內(nèi)，通過萃取、脫溶、膜分離-大孔吸附樹脂聯(lián)用分離三個(gè)步驟對各組分分別進(jìn)行分離純化，最終得到天然產(chǎn)物高純度的水溶性成分與脂溶性成分提取物的一種新型萃取與分離技術(shù)，在工業(yè)中具有廣闊的應(yīng)用前景。
【專利說明】-種乙醇和亞臨界流體混合萃取天然產(chǎn)物有效成分的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明公開了一種天然產(chǎn)物有效成分的提取方法，具體涉及同時(shí)提取天然產(chǎn)物中 水溶性和脂溶性有效成分的方法，特別是涉及以一種乙醇和亞臨界流體混合萃取天然產(chǎn)物 有效成分的方法，屬于天然產(chǎn)物有效成分萃取領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002] 動(dòng)物、植物、昆蟲、海洋生物和微生物體內(nèi)的組成成分或其代謝產(chǎn)物以及人和動(dòng)物 體內(nèi)許多內(nèi)源性的化學(xué)成分統(tǒng)稱作天然產(chǎn)物，其中主要包括蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、核酸、各 種酶類、單糖、寡糖、多糖、糖蛋白、樹脂、膠體物、木質(zhì)素、維生素、脂肪、油脂、蠟、生物堿、揮 發(fā)油、黃酮、糖苷類、萜類、苯丙素類、有機(jī)酸、酚類、醌類、內(nèi)酯、留體化合物、鞣酸類、抗生素 類等天然存在的化學(xué)成分，依據(jù)其溶解性可分為水溶性和脂溶性兩大類。目前在天然產(chǎn)物 有效成分萃取領(lǐng)域內(nèi)，常用的方法主要有溶劑法、壓榨法、蒸餾法和升華法等。
[0003] 溶劑提取法主要包括水煎煮、有機(jī)溶劑提取等。利用水作為溶劑時(shí)，對脂溶性成分 的提取效果就相對欠佳；甲醇等親水性有機(jī)溶劑對人體以及環(huán)境的危害和影響不容忽視。 且這幾種方法雖然普遍應(yīng)用，但通常會(huì)造成有效成分損失，尤其是脂溶性成分；提取液中除 有效成分外，往往雜質(zhì)較多，給精制帶來不利；高溫操作會(huì)引起熱敏性有效成分的大量分 解。如中國專利200910201558. 5公布的"一種同時(shí)提取天然產(chǎn)物丹參中水溶性和脂溶性有 效成分的方法"，其工藝中利用紅外輻射放熱同時(shí)提取出丹參中的水溶性和脂溶性有效成 分，所用的提取溶劑是水與有機(jī)溶劑（甲醇、乙醇等醇類）組成的混合溶劑，將水作為提取 水溶性成分的溶劑，有機(jī)溶劑提取脂溶性成分，但其混合溶劑的實(shí)質(zhì)仍為一定濃度的醇溶 液。
[0004] 亞臨界水和亞臨界乙醇萃取過程中，雖然可以通過控制萃取壓力和溫度，使水或 乙醇的極性在較大范圍內(nèi)變化，以實(shí)現(xiàn)天然產(chǎn)物的有效成分從水溶性和脂溶性成分的連續(xù) 提取，及選擇性提取。201010500500. 3公開了亞臨界水作為介質(zhì)同時(shí)提取山藥中多種生物 活性成分的方法，雖然利用亞臨界水提取法將水溶性山藥多糖、尿囊素和脂溶性薯蕷皂苷 同時(shí)提取出來，實(shí)現(xiàn)連續(xù)提取，但其提取過程經(jīng)過三步升溫過程完成，步驟繁瑣，且提取溫 度高于100°C，會(huì)破壞部分多糖的結(jié)構(gòu)，從而影響得率。亞臨界水提取的專利、文獻(xiàn)報(bào)道，大 多是利用亞臨界水的選擇性提取，實(shí)現(xiàn)水溶性成分（如：專利號為201110002219. 1 -種亞 臨界水提取米糠多糖的方法）或者脂溶性成分（如：201310301124. 9亞臨界水萃取茴香精 油的制備方法）的提取與分離。亞臨界乙醇提取法中，專利號為201010136309. 5 -種利用 亞臨界醇類從微藻濕藻泥中提取油脂的方法，其提取溫度高于78. 4°C，會(huì)破壞天然產(chǎn)物中 熱敏性物質(zhì)的活性。目前，單一的亞臨界流體（丙烷、丁烷、二甲醚、四氟乙烷）萃取，特別 適于天然產(chǎn)物中脂溶性成分的萃取，而不能實(shí)現(xiàn)水溶性成分的充分提取。
[0005] 以上不同萃取方法各有利弊，很難做到水溶性和脂溶性有效成分兼顧萃取，因此 尋找一種低溫、高效、環(huán)保，同時(shí)兼顧脂溶性成分和水溶性成分的提取方法顯得尤為重要。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題，以乙醇和亞臨界流體混合作為萃取溶劑同時(shí)提取天 然產(chǎn)物中水、脂組分，有效改進(jìn)傳統(tǒng)提取、分離、純化和濃縮過程方法的不足之處，在較短周 期內(nèi)得到純度相對更高的產(chǎn)品，且環(huán)保、能夠較大程度保留熱敏性物質(zhì)的活性、提取成本相 對低廉、可進(jìn)行工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)。下面具體說明實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的方法步驟和實(shí)現(xiàn)方式：
[0007] 1)萃?。簩⒔?jīng)過預(yù)處理的物料放入密閉萃取罐中，抽真空，向罐內(nèi)注入一定比例 一定體積分?jǐn)?shù)的乙醇溶液和適量的亞臨界流體作為混合溶劑，將物料完全浸沒，在萃取過 程中可以輔助攪拌以提高效率。根據(jù)物料的不同特性，物料、亞臨界流體及乙醇溶液添加量 的質(zhì)量體積比（w/v/v)為1:1?50:1?50,乙醇溶液的體積分?jǐn)?shù)為50%?95%，萃取時(shí)間 為10?120min，溫度為0?50°C，攪拌速率為50?lOOOrpm，萃取1?4次，壓力為相應(yīng)萃 取溫度下對應(yīng)的混合溶劑的飽和蒸氣壓。
[0008] 2)脫溶：萃取結(jié)束后，緩慢將液體溶劑完全放進(jìn)分離罐，對萃取罐和分離罐分別 進(jìn)行蒸發(fā)脫溶處理，脫溶完成即得到同時(shí)包含脂溶性成分與水溶性成分的混合提取物；然 后從萃取罐和分離罐中蒸發(fā)出的亞臨界溶劑氣體，經(jīng)過隔膜壓縮機(jī)壓縮液化，流回溶劑儲(chǔ) 存罐，循環(huán)使用。
[0009] 3)膜分離：混合溶劑提取物，通過離心（1000?8000rpm)預(yù)處理去除部分固性雜 質(zhì)，之后通過0. 05 μ m?0. 2 μ m微濾膜，截留去除提取液中不溶性固體顆粒、菌體及少量大 分子物質(zhì)；再用5000?20000Da超濾膜截留去除蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)及膠體物質(zhì)等雜質(zhì)，通過反滲 透膜（醋酸纖維素膜、中空纖維反滲透膜）濃縮超濾液，以去除少量小分子物質(zhì)，膜分離操 作整個(gè)過程，在型號為HC-DGM25-2X多功能膜實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（成都和誠過濾技術(shù)有限公司）上 完成。
[0010] 4)樹脂分離：膜分離純化液經(jīng)過最佳類型的大孔吸附樹脂（如D-101、DA-201、 八8-8、0-301等）吸附，選擇合適體積分?jǐn)?shù)的乙醇溶液（25 (%?95(%)，從天然產(chǎn)物提取液 中，最終分離得到高純度的脂溶性物質(zhì)和水溶性物質(zhì)。
[0011] 所述物料可以是新鮮（或經(jīng)干燥處理）的天然植物、微生物或動(dòng)物，以及傳統(tǒng)方法 提取分離不徹底的或雜質(zhì)含量高的提取物等。
[0012] 所述亞臨界溶劑為易揮發(fā)性有機(jī)溶劑，易于固液徹底分離，包括丙烷、丁烷、二甲 醚、四氟乙烷中的一種或幾種的混合。
[0013] 所述物料、亞臨界流體及乙醇溶液添加量的質(zhì)量體積比（w/v/v)為1:1?50:1? 50 〇
[0014] 所述乙醇溶液的體積分?jǐn)?shù)為50%?95%。
[0015] 所述混合提取條件：溫度為0?50°C，壓力為相應(yīng)溫度下對應(yīng)的飽和蒸氣壓，時(shí)間 為10?120min，攪拌速率為50?lOOOrpm。
[0016] 所述脫溶后的亞臨界溶劑可循環(huán)利用。
[0017] 所述分離得到的脂溶性物質(zhì)與水溶性物質(zhì)可分別進(jìn)行后續(xù)的加工處理。
[0018] 所述提取液預(yù)處理離心轉(zhuǎn)速為1000?8000rpm。
[0019] 所述的膜分離溫度20?40°C。
[0020] 所述膜為微濾（MF0. 05?10 μ m)、超濾（UF1?100nm)、納濾（NF1?10nm)和反 滲透（R0彡lnm)中一種或幾種。
[0021] 所述大孔樹脂可為D-101型、DA201型、SIP系列、X-5型、AB-8型、⑶X-104型、 LD-605 型、LD-601 型、CAD-40 型、DM-130 型、R-A 型、CHA-111 型、WLD 型（混合型）、H-107 型、NKA-9型等中的一種或幾種。
[0022] 所述大孔吸附樹脂洗脫溶劑乙醇溶液的體積分?jǐn)?shù)范圍為25%?95% (對于不同 材料的不同成分所用洗脫濃度不同，所列只為總的乙醇體積范圍，具體情況具體分析）。
[0023] 本發(fā)明利用乙醇和亞臨界流體混合作為萃取溶劑，在密閉、無氧、低壓的萃取罐 內(nèi)，依據(jù)有機(jī)物相似相溶的原理，通過物料與萃取溶劑在浸泡過程中的分子擴(kuò)散過程，使物 料中的脂溶性成分和水溶性成分轉(zhuǎn)移到萃取溶劑中，最后通過減壓蒸發(fā)過程將混合提取物 中的亞臨界流體脫除，結(jié)合膜分離-大孔吸附樹脂聯(lián)用技術(shù)對各組分分別進(jìn)行分離純化， 最終得到天然產(chǎn)物的高純度水溶性成分與脂溶性成分提取物的一種新型萃取與分離技術(shù)。
[0024] 本發(fā)明的優(yōu)越性在于：
[0025] 1)提取過程：工藝簡單、設(shè)備投入低，適合大規(guī)模生產(chǎn)；萃取溫度較低（通常情況 下為室溫），不會(huì)破壞熱敏性物質(zhì)的天然活性；產(chǎn)品提取程度高，周期短，效率高；混合溶劑 的使用，增加了天然產(chǎn)物中脂溶性成分和水溶性成分提取的選擇性和效率；溶劑可循環(huán)利 用，不會(huì)對環(huán)境造成污染，分離得到的脂溶性成分與水溶性成分中亞臨界溶劑殘留均低于 lppm〇
[0026] 2)分離、純化和濃縮過程：膜分離-大孔吸附樹脂聯(lián)用機(jī)制的選擇，避免雜質(zhì)對樹 脂柱的污染，增加了樹脂柱的使用壽命，且分離出產(chǎn)品純度要高于只用一種方法分離濃縮 的純度。
[0027] 以乙醇和亞臨界流體混合萃取技術(shù)獲得天然產(chǎn)物中的有效成分，結(jié)合膜分離-大 孔樹脂吸附對所萃取的樣品進(jìn)行分離純化，克服了傳統(tǒng)萃取法（如水煎煮、溶劑提取等）和 分離法（如溶劑萃取分離、沉淀分離等）周期長、效率低、除雜效果不理想、有效成分損失等 缺點(diǎn)，是可以得到高純度的天然產(chǎn)物水溶性成分與脂溶性成分提取物的一種新型萃取與分 離技術(shù)。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0028] 圖1提取流程圖

【具體實(shí)施方式】
[0029] 實(shí)施例1
[0030] 取200g刺槐（含水量< 13% )，粉碎并過80目篩子后，置于密閉萃取罐中，加入 體積分?jǐn)?shù)為70%乙醇1800mL，關(guān)閉進(jìn)料通道后，抽至真空，向萃取罐中注入二甲醚溶劑，將 物料完全浸沒，物料、亞臨界二甲醚及乙醇溶液添加量的質(zhì)量體積比（w/v/v)為1:6:9。在 溫度為25°C (壓力為相應(yīng)溫度下對應(yīng)的飽和蒸氣壓），攪拌速率為700rpm的條件下，萃取 50min ;萃取結(jié)束后，緩慢將混合溶劑完全放進(jìn)分離罐，對萃取罐和分離罐分別進(jìn)行蒸發(fā)脫 溶處理，最終得到同時(shí)含有脂溶性成分與水溶性成分的提取物。從萃取罐和分離罐中脫除 的亞臨界溶劑，經(jīng)過隔膜壓縮機(jī)壓縮液化，液態(tài)的溶劑流回溶劑儲(chǔ)存罐，循環(huán)使用。刺槐提 取物和乙醇混合體系，經(jīng)過多功能膜實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)7000rmp離心，去除肉眼可見固性雜質(zhì)，經(jīng)過 〇. 1 μ m微濾膜澄清過濾，然后經(jīng)過lOOOODa的超濾膜除雜過濾，最后經(jīng)過150Da的納濾膜 濃縮脫除提取物中的乙醇。脫除乙醇后，對刺槐提取物進(jìn)行分離純化，得到的刺槐濃縮液 經(jīng)D-101型大孔吸附樹脂吸附后，使用70%乙醇解吸吸附樹脂柱上的刺槐黃酮；然后再用 NK-11型大孔吸附樹脂吸附后，用80%乙醇解吸吸附樹脂柱上的刺槐多酚。經(jīng)福林-酚比 色法、高效液相色譜法檢測，水溶性成分刺槐多酚的提取率為0. 19%，脂溶性成分刺槐黃酮 的提取率為1. 29%，高于索氏提取法的1. 06%提取率（楊兆艷，孫元琳，陳靜.刺槐葉中總 黃酮提取工藝的研究[J]，試驗(yàn)研究，2009(8) : 61 - 64)，提取物中亞臨界溶劑殘留均低于 lppm〇
[0031] 實(shí)施例2
[0032] 取200g干燥的桑葉（含水量< 13%)，粉碎并過80目篩子后，置于密閉萃取罐 中，加入體積分?jǐn)?shù)為70%乙醇400mL，關(guān)閉進(jìn)料通道后，抽至真空，向萃取罐中注入二甲醚 溶劑，將物料完全浸沒，物料、亞臨界二甲醚及乙醇溶液添加量的質(zhì)量體積比（w/v/v)為 1:13:2。在45°C溫度（壓力為該溫度對應(yīng)的飽和蒸汽壓），攪拌速率為600rpm的條件下萃 取30min ;萃取結(jié)束后，將混合溶劑放入分離罐中，對萃取罐和分離罐分別進(jìn)行蒸發(fā)脫溶處 理，再次向萃取罐中注入體積分?jǐn)?shù)為70%乙醇400mL，抽真空，注入二甲醚溶劑進(jìn)行萃取。 重復(fù)三次，最終得同時(shí)含有脂溶性成分與水溶性成分的提取物，其余步驟同上。
[0033] D-101型大孔吸附樹脂吸附桑葉黃酮和桑葉多糖，NKA-9型大孔吸附樹脂吸附桑 葉生物堿。經(jīng)苯酚-硫酸顯色法、雷氏鹽比色法和高效液相色譜法檢測，水溶性成分桑葉多 糖的提取率分別為2. 98%，而傳統(tǒng)水提取法僅約等于2. 51% (趙峻，高嵐.桑葉多糖的 降糖降脂作用[J].天津中醫(yī)藥，2004, 21 (6) :505 - 506.);水溶性成分桑葉生物堿的提取 率為0.95%，而傳統(tǒng)水提取法僅約等于0.50 % (鄧偉杰，孫智平，羅新根，吳新榮.正 交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化桑葉總生物堿提取工藝[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2012, 30 (3) :608 - 609)， 醇提取法約等于0.40% (劉凡，黃勇，廖森泰，肖更生，鄒宇曉，施英，穆利霞，劉 軍，沈維治.應(yīng)用響應(yīng)面法優(yōu)化桑葉多糖、黃酮和生物堿聯(lián)合提取工藝條件[J].蠶業(yè)科 學(xué)，2013, 39(3) :0568 - 0575);脂溶性成分桑葉黃酮提取率為1. 69%，而傳統(tǒng)水提取法僅 約為1.14% (張亮亮，汪詠梅，徐曼，吳冬梅，陳笳鴻.不同品種桑葉多酚和黃酮含量變 化規(guī)律研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2013, 24(5) :1064 - 1066)，醇提取法約為0.72% (楊虎， 馬燮，陳虹，楊郭，蔡文秋，黃中林.桑葉中黃酮類化合物的提取工藝研究[J].應(yīng)用化 工，2008, 37 (5) : 520 - 522)，提取物中亞臨界溶劑殘留均低于lppm。
[0034] 實(shí)施例3
[0035] 取干燥的杜仲皮（含水量< 13% ) 1000kg，粉碎后過100目篩子，置于密閉萃取罐 中，加入體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇溶液，抽真空，向罐內(nèi)注入丁烷溶劑將物料完全浸沒，物料、 亞臨界丁烷及乙醇溶液添加量的質(zhì)量體積比（w/v/v)為1:5:5,萃取條件為：時(shí)間30min，溫 度30°C (壓力為該溫度下對應(yīng)的飽和蒸汽壓），攪拌速率為500rpm。萃取結(jié)束后，將混合溶 劑放入分離罐中，對萃取罐和分離罐分別進(jìn)行蒸發(fā)脫溶處理，脫溶完成即得同時(shí)含有脂溶 性成分與水溶性成分的杜仲皮提取物，其余步驟同上。其中，200nm的無機(jī)陶瓷膜（氧化鋁 膜），有效截留脂溶性成分（白樺脂酸、β-谷留醇、熊果酸等）；D-101、S-8、AB-8和LD-605 等型大孔吸附樹脂吸附杜仲皮中水溶性有效成分（生物堿、綠原酸、苷類、酚等）。經(jīng)高效液 相色譜法、紫外可見分光光度法和硝酸鋁-亞硝酸鈉比色法等方法的檢測，所得水溶性成 分與脂溶性成分提取率分別可達(dá)95%和98%，且亞臨界溶劑殘留均低于lppm。
[0036] 以上列舉的僅是實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的幾個(gè)具體實(shí)施例。顯然，本發(fā)明不限于以上實(shí)施例， 還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開的內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所 有變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1. 一種乙醇和亞臨界流體混合萃取天然產(chǎn)物有效成分的方法，其特征包括如下步驟： 1) 萃?。簩⒔?jīng)過預(yù)處理的物料放入密閉萃取罐中，抽真空，向罐內(nèi)注入一定比例一定 體積分?jǐn)?shù)的乙醇溶液和適量的亞臨界流體作為混合萃取溶劑，至將物料完全浸沒，在萃取 過程中可以輔助攪拌以提高效率，根據(jù)物料的不同特性，在一定萃取條件下進(jìn)行多次萃 ??； 2) 脫溶：萃取結(jié)束后，緩慢將液體溶劑完全放進(jìn)分離罐，對萃取罐和分離罐分別進(jìn)行 蒸發(fā)脫溶處理，脫溶完成即得到同時(shí)包含脂溶性成分與水溶性成分的混合提取物；從萃取 罐和分離罐中蒸發(fā)出的亞臨界溶劑氣體，經(jīng)過隔膜壓縮機(jī)壓縮液化，流回溶劑儲(chǔ)存罐，脫溶 后的亞臨界溶劑可循環(huán)利用； 3) 膜分離：混合溶劑提取物，通過1000?8000rpm離心，預(yù)處理去除部分固性雜質(zhì)，之 后通過微濾膜截留去除提取液中不溶性固體顆粒、菌體及少量大分子物質(zhì)；再用超濾膜截 留去除5000?20000Da蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)及膠體物質(zhì)等雜質(zhì)，最后過反滲透膜濃縮超濾液，以去 除少量小分子物質(zhì)，膜分離操作整個(gè)過程的溫度維持在20?40°C ; 4) 樹脂分離：膜分離純化液經(jīng)過不同類型的大孔吸附樹脂吸附后，選擇合適體積分?jǐn)?shù) 的乙醇溶液進(jìn)行洗脫，最終分離得到高純度的脂溶性物質(zhì)和水溶性物質(zhì)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟1)中的物料可以是新鮮或經(jīng)干燥 處理的天然植物、微生物或動(dòng)物，以及傳統(tǒng)方法提取分離不徹底的或雜質(zhì)含量高的提取物 等。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟1)中乙醇溶液的體積分?jǐn)?shù)為 50%?95%。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟1)中亞臨界溶劑為易揮發(fā)、易于 固液徹底分離的有機(jī)溶劑，包括丙烷、丁烷、二甲醚、四氟乙烷中的一種或幾種的混合。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟1)中物料、亞臨界流體及乙醇溶 液添加量的質(zhì)量體積比為1:1?50:1?50。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟1)中萃取條件為：萃取時(shí)間為 10?120min，溫度為0?50°C，攪拌速率為50?lOOOrpm，壓力為相應(yīng)萃取溫度下對應(yīng)的 混合溶劑的飽和蒸氣壓，萃取1?4次。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟3)中粗分離中所用膜為微濾 MF0. 05?10 μ m、超濾UF1?100nm、納濾NF1?10nm和反滲透R0 < lnm中一種或幾種。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1或7所述的方法，其特征在于所述反滲透膜可以是醋酸纖維素膜或 中空纖維反滲透膜。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟4)中大孔樹脂可為D-101型、 DA201 型、SIP 系列、X-5 型、AB-8 型、GDX-104 型、LD-605 型、LD-601 型、CAD-40 型、DM-130 型、R-A型、CHA-111型、WLD型、H-107型、NKA-9型等中的一種或幾種。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟4)中大孔吸附樹脂洗脫溶劑乙 醇溶液的體積分?jǐn)?shù)范圍為25%?95%。
【文檔編號】B01D61/58GK104096381SQ201410325624
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2014年7月9日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月9日
【發(fā)明者】秦廣雍, 王麗, 龐會(huì)利 申請人:鄭州大學(xué), 河南雍龍藥食科技有限公司