專利名稱：一種涂覆型多糖類手性固定相的制備方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及一種手性固定相的制備方法。
背景技術(shù)：
有許多藥物是手性化合物，這些化合物的對映體往往有不同的生理及藥理活性。 對于一對對映體來說，其中的一個對映體對治療疾病有效，而另一個對映體對治療疾病可能無效，甚至有毒副作用，所以分離及檢測手性藥物的對映體對制藥工業(yè)來說至關(guān)重要。目前比較成熟的用來分析檢測對映體含量的方法是高效液相色譜法，這一技術(shù)需要使用手性固定相，已經(jīng)有上百種手性固定相商業(yè)化。至今，仍有一些學者在研究新的手性固定相，或手性固定相的制備方法。天然多糖，如纖維素、直鏈淀粉、葡聚糖及甲殼胺等，它們本身是手性高分子，價廉易得，且含有大量的羥基，容易被取代和官能團化，常用來制備手性固定相，特別是纖維素和淀粉類手性固定相早已商業(yè)化。天然多糖用酰氯或異氰酸酯修飾，得到多糖衍生物，將這些衍生物溶解在有機溶劑中，再涂覆在3-氨基丙基硅膠上，即得涂覆型多糖手性固定相(Y. Okamoto，M. Kawashima, K. Hatada, Chromatographic resolution XI. Controlled chiral recognition of cellulose triphenylcarbamate derivatives supported on silica gel. Journal of Chromatography，363 (1986) 173.)。這是制備天然多糖手性固定相的一般方法。但是一些多糖衍生物不能溶解于一般的有機溶劑，如纖維素三 (3，5- 二甲基苯基甲酸酉旨)等(Y. Okamoto, R. Aburatani, K. Hatada, Chromatographic chiral resolution XIV. Cellulose tribenzoate derivatives as chiral stationary phases for high-performance liquid chromatography, Journal of chromatography, 389 (1987) 95.)，用上述方法就不能將這些多糖衍生物涂覆在載體表面，也就無法制備成手性固定相。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種涂覆型多糖類手性固定相的制備方法，該方法所制得的固定相具有很好的穩(wěn)定性。本發(fā)明解決其技術(shù)問題的技術(shù)方案為一種涂覆型多糖類手性固定相的制備方法，其特征在于它包括如下步驟1)、將多糖涂覆在硅膠表面，得到多糖-硅膠復合物；2)、用異氰酸酯或者酰氯對多糖-硅膠復合物上的多糖進行衍生化，得到衍生化的多糖-硅膠復合物；3)、用硅烷對衍生化的多糖-硅膠復合物表面的硅羥基進行封端，得到涂覆型多糖類手性固定相。具體的步驟如下1)將多糖涂覆在硅膠表面(多糖-硅膠復合物的制備)，采用下列兩種方法中的一種將多糖涂覆在硅膠表面①按多糖的加入量為多糖和硅膠總質(zhì)量的-30%，選取多糖和硅膠；將多糖配制成多糖溶液，其中多糖溶液的濃度為任意濃度(最佳為1.0wt%)；將多糖溶液與用于色譜填料的硅膠均勻混合，加熱蒸除多糖溶液中的溶劑，得到多糖-硅膠復合物(即涂覆有多糖的硅膠)；②按多糖的加入量為多糖和硅膠總質(zhì)量的_30%，選取多糖和硅膠；將多糖配制成多糖溶液，其中多糖溶液的濃度為任意濃度(最佳為1.0wt%)；將多糖溶液與用于色譜填料的硅膠均勻混合，得到混合溶液；再向混合溶液中加入沉淀劑，使多糖沉積在硅膠表面，得到多糖-硅膠復合物，其中沉淀劑為酸或者堿溶液時，則沉淀劑的用量是使多糖溶液中和至中性即可；若沉淀劑為有機溶劑時，則沉淀劑用量使多糖從混合溶液中沉淀完全即可；所述的多糖為淀粉、纖維素、甲殼胺或葡聚糖；所述的硅膠為表面含有羥基的色譜用球形或者無定形硅膠；多糖的涂覆量為_30%，即多糖在多糖-硅膠復合物中的質(zhì)量分數(shù)為 1% -30% ；2)對多糖-硅膠復合物上的多糖進行衍生化(多糖-硅膠復合物上的多糖的修飾)，用下列兩種方法中的一種①多糖-硅膠復合物上的多糖用酰氯修飾，其方法是按多糖-硅膠復合物酰氯不能溶解修飾反應中所生成的多糖衍生物的有機溶劑催化劑的配比= Ig 0. 8g-3g 15ml-30ml 0. 03g_0. lg，將步驟1)制備的多糖-硅膠復合物置于不能溶解修飾反應中所生成的多糖衍生物的有機溶劑中，加入酰氯和催化劑4- 二甲氨基吡啶， 在15-90°C下攪拌反應5- 小時；冷卻，過濾收集固體，用極性有機溶劑洗滌固體，干燥，得到粉末狀產(chǎn)物；所述酰氯為苯甲酰氯及其衍生物，這些衍生物為3，5-二甲基苯甲酰氯、2，6_ 二甲基苯甲酰氯、2-甲基苯甲酰氯、3-甲基苯甲酰氯、4-甲基苯甲酰氯、3，5_ 二氯苯甲酰氯、 2-氯苯甲酰氯、3-氯苯甲酰氯或4-氯苯甲酰氯；所述不能溶解修飾反應中所生成的多糖衍生物的有機溶劑為吡啶(或者三乙胺， 或者為吡啶和三乙胺按任意配比的混合物)或甲苯或苯。所述不能溶解修飾反應中所生成的多糖衍生物的有機溶劑視不同多糖的衍生物而定，如纖維素-三(3，5_ 二甲基苯基甲酸酯)在吡啶、甲苯和苯中均難溶解，則這三種溶劑均可作為用3，5_ 二甲基苯甲酰氯對纖維素-硅膠復合物進行衍生化反應的溶劑；而纖維素-三(苯基甲酸酯)能溶于吡啶，難溶于甲苯或苯，故用苯甲酰氯對纖維素-硅膠復合物進行衍生化時，不能使用吡啶作為反應的溶劑，但可用甲苯或苯作為溶劑；大多數(shù)的多糖衍生物難溶于甲苯或苯，所以甲苯或苯有普適性，因甲苯對人的健康影響小于苯，所以使用甲苯為最優(yōu)；所述極性有機溶劑為乙醇、乙醚、甲醇、乙酸乙酯、正丁醇、異丙醇或正丙醇；②多糖-硅膠復合物上的多糖用異氰酸酯修飾，其方法是按多糖-硅膠復合物 異氰酸酯催化劑=Ig 0. 8g-3g 0.03g-0. lg，將步驟1)制備的多糖-硅膠復合物置于不能溶解修飾反應中所生成的多糖衍生物的有機溶劑中(多糖-硅膠復合物與該有機溶劑的配比關(guān)系為Ig 15ml-30ml)，加入異氰酸酯和催化劑，在15_90°C下攪拌反應5- 小時；冷卻，過濾收集固體，用中等極性或中等以上極性的有機溶劑洗滌固體，干燥，得到粉末狀產(chǎn)物；所述異氰酸酯為苯基異氰酸酯及其衍生物，這些衍生物為3，5-二甲基苯基異氰酸酯、2，6_二甲基苯基異氰酸酯、2-甲基苯基異氰酸酯、3-甲基苯基異氰酸酯、4-甲基苯基異氰酸酯、3，5-二氯苯基異氰酸酯、2-氯苯基異氰酸酯、3-氯苯基異氰酸酯、4-氯苯基異氰酸酯中的一種；所述催化劑為吡啶、三乙胺、4-二甲氨基吡啶、二月桂酸二丁基錫中的一種；所述不能溶解修飾反應中所生成的多糖衍生物的有機溶劑視不同多糖的衍生物而定，如纖維素三(3，5_ 二甲基苯基甲酸酯)在吡啶、甲苯和苯中均難溶解，則這三種溶劑均可作為用3，5_二甲基苯甲酰氯對纖維素-硅膠復合物進行衍生化反應的溶劑；而纖維素三(苯基甲酸酯)能溶于吡啶，難溶于甲苯或苯，故用苯甲酰氯對纖維素-硅膠復合物進行衍生化時，不能使用吡啶作為反應的溶劑，但可用甲苯或苯作為溶劑；大多數(shù)的多糖衍生物難溶于甲苯或苯，所以甲苯或苯有普適性，因甲苯對人的健康影響小于苯，所以使用甲苯為最優(yōu)；所述中等極性或中等以上極性的有機溶劑為乙醚或異丙基醚、甲基叔丁基醚或乙酸乙酯；3)用硅烷對衍生化的多糖-硅膠復合物表面的硅羥基進行封端按步驟2、中得到的粉末狀產(chǎn)物不能溶解粉末上多糖衍生物的有機溶劑三乙胺硅烷的配比=Ig 8mL-12mL 0. 3-0. 7mL 0. lmL_15mL，將步驟2)中得到的粉末狀產(chǎn)物與不能溶解粉末上多糖衍生物的有機溶劑相混合，得到混合物；再向此混合物中加入三乙胺、硅烷；在15-10(TC下攪拌2-M小時；冷卻，過濾，濾餅用不能溶解粉末上多糖衍生物的有機溶劑洗滌，干燥后得到粉末狀固體，即制得涂覆型多糖類手性固定相。步驟幻所述不能溶解粉末上多糖衍生物的有機溶劑為甲苯、苯或四氫呋喃，以甲苯為最優(yōu)；所述硅烷為三甲基氯硅烷，也可以為三甲氧基硅烷衍生物或三乙氧基硅烷衍生物中的一種，如3-氨丙基三乙氧基硅烷、3-氨丙基三甲氧基硅烷、甲基三甲氧基硅烷、甲基三乙氧基硅烷、3-氯丙基三乙氧基硅烷、3-氯丙基三甲氧基硅烷等中的一種。本發(fā)明具有以下優(yōu)點1、在本發(fā)明中，先將多糖涂覆于裸露的硅膠表面，利用硅膠表面的硅羥基與多糖上的羥基之間形成氫鍵作用，將多糖吸附在硅膠上，得到多糖-硅膠復合物，然后用酰氯或異氰酸酯對多糖-硅膠復合物進行異相修飾，最后用硅烷對衍生化的多糖-硅膠復合物表面的硅羥基進行封端，得到相應的手性固定相，克服了某些多糖衍生物(如纖維素-三(3， 5-二甲基苯基甲酸酯)難溶于常見的有機溶劑而無法涂覆的問題。2、該方法所制得的固定相具有很好的穩(wěn)定性。3、采用不同的硅烷對硅膠表面的羥基進行封端，有利于手性選擇體對不同種類手性樣品的識別。


圖1是實施例1中的紅外光譜6
圖1 中a 涂覆纖維素的硅膠[IR(KBr, cm—1) :3358 (-0H)，1098 (Si-O) ] ；b 纖維素-三(3，5_ 二甲基苯甲酸酯)-硅膠復合物手性固定相[IR (KBr, cm—1) :3448 (N-H), 1734 (-CO2-)，1099 (Si-O)]。圖2是實施例1中的纖維素-三(3，5- 二甲基苯甲酸酯)_硅膠復合物手性固定相固體核磁圖譜；圖 2 中13C NMR (25 "C ) δ :200-195,192-185，168-164 (-CO2-)，141-122 (Ar. C), 107-98 (C-I), 83-56 (C-2, C_3，C_4，C_5，C_6，Si-O-CH2CH3), 47-38 (SiCH2CH2CH2NH2), 28-13 (Ar-CH3, SiOCH2CH3, SiCH2CH2CH2NH2)，12-8 (SiCH2CH2CH2NH2)。圖3是實施例1中的手性化合物1在纖維素-三(3，5- 二甲基苯甲酸酯)~硅膠復合物手性固定相上分離的色譜圖；圖3中分離條件a異丙醇/正己烷(30/70，體積比)；b 異丙醇/正己烷 (50/50，體積比)；c 異丙醇/正己烷(70/30，體積比)；紫外檢測波長220納米。圖4是實施例1中用硅烷衍生物封端的多糖手性固定相的結(jié)構(gòu)式圖。
具體實施例方式下面結(jié)合附圖及實例對比本發(fā)明進一步描述實施例1 一種涂覆型多糖類手性固定相(或稱為纖維素-三(3，5-二甲基苯甲酸酯)_硅膠復合物手性固定相)的制備方法，具體的步驟如下1)纖維素溶液的制備，先將干燥的纖維素(0.70g)置于三口燒瓶中，加入二甲基乙酰胺(25mL)，氮氣保護，在160°C下攪拌活化lh，冷卻，過濾，并用丙酮洗滌數(shù)次，再將纖維素于60°C下常壓干燥。取干燥的1^(1(6.5(^)(使用前2001下干燥411)和二甲基乙酰胺(65mL)置于三口燒瓶，加熱到100°C，待LiCl完全溶于二甲基乙酰胺后，加入干燥好的纖維素，降溫至80°C，攪拌溶解池，冷卻至室溫。然后再將冷卻的溶液升溫至80°C，攪拌池，冷卻至室溫。將冷卻后的溶液離心，得到質(zhì)量分數(shù)為1. 0wt%的澄清的纖維素溶液。2)纖維素的涂覆(纖維素-硅膠復合物的制備)取制得的纖維素溶液(51. 30g)與干燥好的空白硅膠(10. 30g)混合均勻，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于70°C下減壓蒸餾。蒸干后，將混合物轉(zhuǎn)移至燒杯中，加蒸餾水攪拌0. ，抽濾，此洗滌過程重復數(shù)次，直到用硝酸銀水溶液檢測不到氯離子為止，干燥后得到纖維素-硅膠復合物[白色粉狀產(chǎn)品(10.78g)]，涂覆量為5.0%。3)纖維素-三(3，5-二甲基苯甲酸酯)_硅膠復合物的制備(纖維素-硅膠復合物的衍生化)將纖維素-硅膠復合物(涂覆有纖維素的硅膠)9. 70g置于三口燒瓶，加入吡啶 (1501^)，25°〇下攪拌301^11。升溫至60°C，加入4-二甲氨基吡啶(0. 40g)和三乙胺(5mL)， 再緩慢滴加3，5- 二甲基苯甲酰氯(10. IOg)。滴加完畢，攪拌24h后，升溫至80°C，攪拌17h， 冷卻。將反應液滴加到500mL無水乙醚中洗滌，抽濾，濾餅用無水乙醚洗滌數(shù)次，直到用硝酸銀水溶液檢測不到氯離子為止。干燥，得到灰白色的粉末狀產(chǎn)物(纖維素-三(3，5_ 二甲基苯甲酸酯)-硅膠復合物10.81g)。
4)纖維素-三(3，5_ 二甲基苯甲酸酯)_硅膠復合物上硅羥基的封端將纖維素-三(3，5-二甲基苯甲酸酯)-硅膠復合物(6.86g)，甲苯(75mL)、三乙胺(3mL，)和3-氨丙基三乙氧基硅烷(IlmL)相混合，85°C下攪拌15h，冷卻。抽濾，濾餅用四氫呋喃洗滌數(shù)次，干燥后得到灰白色粉末狀的固體(涂覆型多糖類手性固定相7. OOg)， 即制得手性固定相。采用紅外光譜法和固體核磁技術(shù)對該手性固定相進行表征，其紅外圖譜見圖1，核磁共振數(shù)據(jù)見圖2。將這種手性固定相填充于色譜柱中，用高效液相色譜法對化合物1的外消旋體進行拆分，其色譜圖見圖3。圖1中的1733CHT1附近出現(xiàn)酯基的吸收峰，說明硅膠表面的纖維素已經(jīng)發(fā)生衍生化反應。圖2中化學位移在43ppm和IOppm處的峰對應-CH2NH2和SiCH2-,氨基來自于3-氨丙基三乙氧基硅烷，表明成功實施了封端反應。圖3說明了化合物1 (化合物1是2-[(4-硝基苯基)羥基甲基]-對甲苯磺酰氮丙啶)能在纖維素-三(3，5_ 二甲基苯甲酸酯)-硅膠復合物手性固定相上成功地實現(xiàn)了對映體分離。實施例1說明了本發(fā)明克服了某些多糖衍生物[如纖維素-三(3，5_ 二甲基苯基甲酸酯)]難溶于常見的有機溶劑而無法涂覆的問題。用硅烷衍生物封端的多糖手性固定相的結(jié)構(gòu)式如圖4所示。用該固定相填充的色譜柱在高效液相儀上運行，經(jīng)過1280多次手性樣品運行后再測量色譜柱的柱效，柱效基本無變化，由此說明所制得的固定相具有很好的穩(wěn)定性。實施例2 淀粉-三(3，5_ 二甲基苯基氨基甲酸酯)_硅膠復合物手性固定相的制備，1)淀粉溶液的制備，將直鏈淀粉(4. 02g)加入到冷蒸餾水(396mL)中，然后再加熱沸騰，攪拌溶解，冷卻后得到澄清的淀粉溶液。2)淀粉的涂覆(淀粉-硅膠復合物的制備)，取制得的淀粉溶液(380. 47g)分成7等份，第一份與干燥的空白硅膠(13. 49g)混合均勻，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于70°C下減壓蒸餾。蒸干后，再用余下的淀粉溶液重復上述涂覆操作 6次，每次用相同量的淀粉溶液，干燥后得到白色粉狀產(chǎn)品(淀粉-硅膠復合物17. 21g)，涂覆量為28. 2%03)淀粉-三(3，5_ 二甲基苯基氨基甲酸酯)_硅膠復合物的制備(淀粉-硅膠復合物的衍生化)將(淀粉-硅膠復合物(涂覆有淀粉的硅膠)10.24g置于三口燒瓶，加入甲苯 (150mL)，25°C下攪拌30min。升溫至60 °C，加入三乙胺(0. 41g)，再緩慢滴加3，5- 二甲基苯基異氰酸酯O3.60g)。滴加完畢，攪拌24h后，升溫至80°C，攪拌17h，冷卻。將反應液滴加到500mL無水乙醚中洗滌，抽濾，濾餅用無水乙醚洗滌3次。干燥，得到灰白色粉末狀[即涂覆有淀粉-三(3，5_ 二甲基苯基氨基甲酸酯)的硅膠20.58g]。4)淀粉-三(3，5_ 二甲基苯基氨基甲酸酯)_硅膠復合物上硅羥基的封端，按照實施例1第四步的方法，不同之處在于，將涂覆有淀粉-三(3，5- 二甲基苯基氨基甲酸酯)的硅膠(6. 15g)代替纖維素-三(3，5_二甲基苯甲酸酯)-硅膠復合物[即涂覆有纖維素-三(3，5_ 二甲基苯甲酸酯)的硅膠]，用甲基三甲氧基硅烷(IOmL)代替3-氨丙基三乙氧基硅烷。反應完畢，洗滌、抽濾，干燥后得到灰白色粉末狀固體(6.22g)，即制得涂覆型多糖類手性固定相。實驗方法和數(shù)據(jù)同實施例1，本實施例說明了本發(fā)明克服了某些多糖衍生物[如纖維素-三(3，5_ 二甲基苯基甲酸酯)]難溶于常見的有機溶劑而無法涂覆的問題。用該固定相填充的色譜柱在高效液相儀上運行，經(jīng)過1000多次手性樣品運行后再測量色譜柱的柱效，柱效基本無變化，由此說明所制得的固定相具有很好的穩(wěn)定性。實施例3 甲殼胺-三甲基苯基氨基甲酸酯)_硅膠復合物手性固定相的制備1)甲殼胺溶液的制備，稱取2. 52g甲殼胺加入到濃度為Iwt %的鹽酸(198mL)中，攪拌溶解，得到Iwt %
澄清甲殼胺溶液。2)甲殼胺的涂覆(甲殼胺-硅膠復合物的制備)，取制得的甲殼胺溶液(180. 41g)與干燥的空白硅膠(10.42g)混合均勻，在攪拌情況下，滴加沉淀劑氫氧化鈉溶液(1襯％ )至溶液成中性，過濾并用蒸餾水洗滌3次，直到用硝酸銀水溶液檢測不到氯離子為止。干燥后得到白色粉狀產(chǎn)品(甲殼胺-硅膠復合物 12. 04g)，涂覆量為 14.8%。3)甲殼胺-三甲基苯基氨基甲酸酯)_硅膠復合物的制備(甲殼胺-硅膠復合物的衍生化)操作步驟同實施例2第三步，用甲殼胺-硅膠復合物(即涂覆有甲殼胺的硅膠)8. 47g代替涂覆有淀粉的硅膠，用4-甲基苯基異氰酸酯(12. 32g)代替3，5-二甲基苯基異氰酸酯。反應完畢后洗滌干燥，得到灰白色粉末狀即涂覆有甲殼胺-三G-甲基苯基氨基甲酸酯)的硅膠(12. 12g)。4)甲殼胺-三甲基苯基氨基甲酸酯)_硅膠復合物上硅羥基的封端將涂覆有甲殼胺-三甲基苯基氨基甲酸酯)的硅膠(6.46g)，甲苯(75mL)、三乙胺(3mL)和3-氯丙基三乙氧基硅烷(IlmL)相混合。85°C下攪拌15h，冷卻；抽濾，濾餅用四氫呋喃洗滌數(shù)次，干燥后得到灰白色粉末狀固體(6. 61g)，即制得手性固定相。用該固定相填充的色譜柱在高效液相儀上運行，經(jīng)過1000多次手性樣品運行后再測量色譜柱的柱效，柱效基本無變化，由此說明所制得的固定相具有很好的穩(wěn)定性。實施例4 葡聚糖-三(2，6_ 二甲基苯基氨基甲酸酯)_硅膠復合物手性固定相的制備1)葡聚糖溶液的制備，將葡聚糖(2. Olg)加入到蒸餾水(198mL)中，攪拌溶解，得到Iwt%澄清葡聚糖溶液。2)葡聚糖的涂覆(葡聚糖-硅膠復合物的制備)，取制得的葡聚糖溶液(180. 47g)分成三等份，第-份與干燥的空白硅膠(10. 15g) 混合均勻，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于70°C下減壓旋蒸，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速，控制溶劑蒸發(fā)的速度。旋干后再分次加入第二份和第三份淀粉溶液，按照上述操作蒸發(fā)干。將干燥后得到白色粉狀產(chǎn)品(葡聚糖-硅膠復合物11. 78g)，涂覆量為15. 1 %。3)葡聚糖-三(2，6_ 二甲基苯基氨基甲酸酯)_硅膠復合物的制備(葡聚糖-硅膠復合物的衍生化)
按照實施例1第三步的方法，不同之處在于，將用葡聚糖-硅膠復合物(即涂覆有葡聚糖的硅膠6. 42g)代替涂覆有纖維素的硅膠，用2，6-二甲基苯基異氰酸酯(10. 56g)代替3，5_ 二甲基苯甲酸酯。反應完畢后洗滌干燥，得到灰白色粉末狀即涂覆有葡聚糖-三 (2，6_ 二甲基苯基氨基甲酸酯)的硅膠(9.77g)。4)葡聚糖-三(2，6_ 二甲基苯基氨基甲酸酯)_硅膠復合物上硅羥基的封端按照實施例1第三步的方法，不同之處在于，將涂覆有葡聚糖-三0，6- 二甲基苯基氨基甲酸酯)的硅膠(6.47g)代替涂覆有纖維素-三(3，5_ 二甲基苯甲酸酯)的硅膠， 將甲基三甲氧基硅烷(IlmL)代替3-氨丙基三乙氧基硅烷。反應完畢，洗滌、抽濾，干燥后得到灰白色粉末狀固體(6. 55g)，即制得手性固定相。用該固定相填充的色譜柱在高效液相儀上運行，經(jīng)過1000多次手性樣品運行后再測量色譜柱的柱效，柱效基本無變化，由此說明所制得的固定相具有很好的穩(wěn)定性。實施例5 纖維素-三(2，6_ 二甲基苯甲酸酯)_硅膠復合物手性固定相的制備按照實施例1第一步和第二步的方法，不同之處在于，纖維素的涂覆的方法為取制得的纖維素溶液(52.41g)與干燥好的空白硅膠(10. 32g)混合均勻，將混合物滴加到 60mL蒸餾水中，過濾并用蒸餾水洗滌沉淀物數(shù)次，直到用硝酸銀水溶液檢測不到氯離子為止。干燥后得到白色粉狀產(chǎn)品(10. 14g)，涂覆量為4.8%。4)纖維素-三(3，5-二甲基苯甲酸酯)_硅膠復合物的制備(纖維素-硅膠復合物的衍生化)，與實施例1不同之處在于，用2，6_ 二甲基苯甲酰氯(7.56g)代替3，5_ 二甲基苯甲酰氯進行反應，用甲基三乙氧基硅烷(IOmL)代替3-氨丙基三乙氧基硅烷進行硅羥基封端。封端后洗滌、抽濾，干燥后得到灰白色粉末狀固體(6. 80g)，即制得手性固定相。用該固定相填充的色譜柱在高效液相儀上運行，經(jīng)過1000多次手性樣品運行后再測量色譜柱的柱效，柱效基本無變化，由此說明所制得的固定相具有很好的穩(wěn)定性。實施例6 纖維素-三甲基苯甲酸酯)_硅膠復合物手性固定相的制備與實施例1不同之處在于，用4-甲基苯甲酰氯(5.94g)代替3，5_ 二甲基苯甲酰氯進行反應。封端方法與實施例1第4步相同。反應完畢后洗滌、抽濾，干燥后得到灰白色粉末狀固體(6. 35g)，即制得手性固定相。用該固定相填充的色譜柱在高效液相儀上運行，經(jīng)過1000多次手性樣品運行后再測量色譜柱的柱效，柱效基本無變化，由此說明所制得的固定相具有很好的穩(wěn)定性。實施例7 纖維素-三甲基苯基氨基甲酸酯)_硅膠復合物手性固定相的制備與實施例1不同之處在于，用2-甲基苯基異氰酸酯(6.04g)代替3，5_ 二甲基苯甲酰氯進行反應。封端方法與實施例1第4步相同。反應完畢后洗滌、抽濾，干燥后得到灰白色粉末狀固體(6. 40g)，即制得手性固定相。實施例8 纖維素-三(3-甲基苯基氨基甲酸酯)_硅膠復合物手性固定相的制備與實施例1不同之處在于，用3-甲基苯基異氰酸酯(5.84g)代替3，5_ 二甲基苯甲酰氯進行反應。封端方法與實施例1第4步相同。反應完畢后洗滌、抽濾，干燥后得到灰白色粉末狀固體(6. 28g)，即制得手性固定相。實施例9 纖維素-三(苯基氨基甲酸酯)-硅膠復合物手性固定相的制備與實施例1不同之處在于，用苯基異氰酸酯(5.27g)代替3，5_ 二甲基苯甲酰氯進行反應。封端方法與實施例1第4步相同。反應完畢后洗滌、抽濾，干燥后得到灰白色粉末狀固體(6. 05g)，即制得手性固定相。實施例10 纖維素-三(3，5_ 二氯苯基氨基甲酸酯)_硅膠復合物手性固定相的制備與實施例1不同之處在于，用3，5-二氯苯基異氰酸酯(18.87g)代替3，5_ 二甲基苯甲酰氯進行反應。封端方法與實施例1第4步相同。反應完畢后洗滌、抽濾，干燥后得到灰白色粉末狀固體(6. 45g)，即制得手性固定相。實施例11 纖維素-三(2-氯苯基氨基甲酸酯)_硅膠復合物手性固定相的制備與實施例1不同之處在于，用2-氯苯基異氰酸酯(4. 57g)代替3，5_ 二甲基苯甲酰氯進行反應。封端方法與實施例1第4步相同。反應完畢后洗滌、抽濾，干燥后得到灰白色粉末狀固體(6. 42g)，即制得手性固定相。實施例12 纖維素-三(3-氯苯基氨基甲酸酯)_硅膠復合物手性固定相的制備與實施例1不同之處在于，3-氯苯基異氰酸酯(4.50g)代替3，5_ 二甲基苯甲酰氯進行反應。封端方法與實施例1第4步相同。反應完畢后洗滌、抽濾，干燥后得到灰白色粉末狀固體(6. 45g)，即制得手性固定相。實施例13 纖維素-三(4-氯苯基氨基甲酸酯)_硅膠復合物手性固定相的制備與實施例1不同之處在于，4-氯苯基異氰酸酯(4.82g)代替3，5_ 二甲基苯甲酰氯進行反應。封端方法與實施例1第4步相同。反應完畢后洗滌、抽濾，干燥后得到灰白色粉末狀固體(6. 38g)，即制得手性固定相。實施例14 纖維素-三O-甲基苯甲酸酯)-硅膠復合物手性固定相的制備與實施例1不同之處在于，2-甲基苯甲酰氯(8. 26g)代替3，5_ 二甲基苯甲酰氯進行反應。封端方法與實施例1第4步相同。反應完畢后洗滌、抽濾，干燥后得到灰白色粉末狀固體(6. 25g)，即制得手性固定相。實施例15 纖維素-三(3-甲基苯甲酸酯)_硅膠復合物手性固定相的制備與實施例1不同之處在于，用3-甲基苯甲酰氯(8. 14g)代替3，5_ 二甲基苯甲酰氯進行反應。封端方法與實施例1第4步相同。反應完畢后洗滌、抽濾，干燥后得到灰白色粉末狀固體(6. 28g)，即制得手性固定相。實施例16 纖維素-三(苯甲酸酯)_硅膠復合物手性固定相的制備與實施例1不同之處在于，用苯甲酰氯(6.32g)代替3，5_ 二甲基苯甲酰氯進行反應。封端方法與實施例1第4步相同。反應完畢后洗滌、抽濾，干燥后得到灰白色粉末狀固體(6. 44g)，即制得手性固定相。實施例17 纖維素-三(3，5_ 二氯苯甲酸酯)_硅膠復合物手性固定相的制備與實施例1不同之處在于，用3，5- 二氯苯甲酰氯(6. 59g)代替3，5_ 二甲基苯甲酰氯進行反應。封端方法與實施例1第4步相同。反應完畢后洗滌、抽濾，干燥后得到灰白色粉末狀固體(6. 36g)，即制得手性固定相。實施例18 纖維素-三(2-氯苯甲酸酯)_硅膠復合物手性固定相的制備與實施例1不同之處在于，用2-氯苯甲酰氯(6.02g)代替3，5_ 二甲基苯甲酰氯進行反應。封端方法與實施例1第4步相同。反應完畢后洗滌、抽濾，干燥后得到灰白色粉末狀固體(6. 14g)，即制得手性固定相。
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實施例19 纖維素-三(3-氯苯甲酸酯)_硅膠復合物手性固定相的制備與實施例1不同之處在于，用3-氯苯甲酰氯(6. 14g)代替3，5_ 二甲基苯甲酰氯進行反應。封端方法與實施例1第4步相同。反應完畢后洗滌、抽濾，干燥后得到灰白色粉末狀固體(6. 44g)，即制得手性固定相。實施例20 纖維素-三(4-氯苯甲酸酯)_硅膠復合物手性固定相的制備與實施例1不同之處在于，用4-氯苯甲酰氯(6.58g)代替3，5_ 二甲基苯甲酰氯進行反應。封端方法與實施例1第4步相同。反應完畢后洗滌、抽濾，干燥后得到灰白色粉末狀固體(6. 34g)，即制得手性固定相。本發(fā)明的各原料的上下限取值以及區(qū)間值都能實現(xiàn)本發(fā)明，以及所列舉的酰氯、 異氰酸酯類試劑各具體原料都能實現(xiàn)本發(fā)明，以及所列舉的硅烷試劑各具體原料都能實現(xiàn)本發(fā)明，以及所列舉的催化試劑各具體原料都能實現(xiàn)本發(fā)明，以及各工藝參數(shù)(溫度、反應時間)的上下限取值以及區(qū)間取值都能實現(xiàn)本發(fā)明。
權(quán)利要求
1.一種涂覆型多糖類手性固定相的制備方法，其特征在于它包括如下步驟1)、將多糖涂覆在硅膠表面，得到多糖-硅膠復合物；2)、用異氰酸酯或者酰氯對多糖-硅膠復合物上的多糖進行衍生化，得到衍生化的多糖-硅膠復合物；3)、用硅烷對衍生化的多糖-硅膠復合物表面的硅羥基進行封端，得到涂覆型多糖類手性固定相。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種涂覆型多糖類手性固定相的制備方法，其特征在于步驟1)所述的將多糖涂覆在硅膠表面，采用下列兩種方法中的一種將多糖涂覆在硅膠表面①按多糖的加入量為多糖和硅膠總質(zhì)量的_30%，選取多糖和硅膠；將多糖配制成多糖溶液；將多糖溶液與用于色譜填料的硅膠均勻混合，加熱蒸除多糖溶液中的溶劑，得到多糖-硅膠復合物；②按多糖的加入量為多糖和硅膠總質(zhì)量的_30%，選取多糖和硅膠；將多糖配制成多糖溶液；將多糖溶液與用于色譜填料的硅膠均勻混合，得到混合溶液；再向混合溶液中加入沉淀劑，使多糖沉積在硅膠表面，得到多糖-硅膠復合物，其中沉淀劑為酸或者堿溶液時，則沉淀劑的用量是使多糖溶液中和至中性即可；若沉淀劑為有機溶劑時，則沉淀劑用量使多糖從混合溶液中沉淀完全。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種涂覆型多糖類手性固定相的制備方法，其特征在于所述的多糖為淀粉、纖維素、甲殼胺或葡聚糖。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種涂覆型多糖類手性固定相的制備方法，其特征在于所述的硅膠為表面含有羥基的色譜用球形或者無定形硅膠。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種涂覆型多糖類手性固定相的制備方法，其特征在于步驟2)所述的對多糖-硅膠復合物上的多糖進行衍生化，用下列兩種方法中的一種①多糖-硅膠復合物上的多糖用酰氯修飾，其方法是按多糖-硅膠復合物 酰氯不能溶解修飾反應中所生成的多糖衍生物的有機溶劑催化劑的配比= Ig 0. 8g-3g 15ml-30ml 0. 03g_0. lg，將步驟1)制備的多糖-硅膠復合物置于不能溶解修飾反應中所生成的多糖衍生物的有機溶劑中，加入酰氯和催化劑4- 二甲氨基吡啶， 在15-90°C下攪拌反應5- 小時；冷卻，過濾收集固體，用極性有機溶劑洗滌固體，干燥，得到粉末狀產(chǎn)物；②多糖-硅膠復合物上的多糖用異氰酸酯修飾，其方法是按多糖-硅膠復合物異氰酸酯催化劑=Ig 0. 8g-3g 0.03g-0. lg，所述催化劑為吡啶、三乙胺、4-二甲氨基吡啶、二月桂酸二丁基錫中的一種；將步驟1)制備的多糖-硅膠復合物置于不能溶解修飾反應中所生成的多糖衍生物的有機溶劑中，加入異氰酸酯和催化劑，在15-90°C下攪拌反應 5-M小時；冷卻，過濾收集固體，用中等極性或中等以上極性的有機溶劑洗滌固體，干燥， 得到粉末狀產(chǎn)物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種涂覆型多糖類手性固定相的制備方法，其特征在于所述酰氯為苯甲酰氯及其衍生物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種涂覆型多糖類手性固定相的制備方法，其特征在于所述苯甲酰氯衍生物為3，5_ 二甲基苯甲酰氯、2，6_ 二甲基苯甲酰氯、2-甲基苯甲酰氯、3-甲基苯甲酰氯、4-甲基苯甲酰氯、3，5-二氯苯甲酰氯、2-氯苯甲酰氯、3-氯苯甲酰氯或4-氯苯甲酰氯。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種涂覆型多糖類手性固定相的制備方法，其特征在于所述不能溶解修飾反應中所生成的多糖衍生物的有機溶劑為吡啶或三乙胺或甲苯或苯，或者為吡啶和三乙胺按任意配比的混合物。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種涂覆型多糖類手性固定相的制備方法，其特征在于所述極性有機溶劑為乙醇、乙醚、甲醇、乙酸乙酯、正丁醇、異丙醇或正丙醇。
10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種涂覆型多糖類手性固定相的制備方法，其特征在于所述異氰酸酯為苯基異氰酸酯及其衍生物。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的一種涂覆型多糖類手性固定相的制備方法，其特征在于 所述苯基異氰酸酯衍生物為3，5- 二甲基苯基異氰酸酯、2，6- 二甲基苯基異氰酸酯、2-甲基苯基異氰酸酯、3-甲基苯基異氰酸酯、4-甲基苯基異氰酸酯、3，5-二氯苯基異氰酸酯、2-氯苯基異氰酸酯、3-氯苯基異氰酸酯、4-氯苯基異氰酸酯中的一種。
12.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種涂覆型多糖類手性固定相的制備方法，其特征在于所述中等極性或中等以上極性的有機溶劑為乙醚或異丙基醚、甲基叔丁基醚或乙酸乙酯；
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種涂覆型多糖類手性固定相的制備方法，其特征在于步驟3)所述的用硅烷對衍生化的多糖-硅膠復合物表面的硅羥基進行封端按步驟幻中得到的粉末狀產(chǎn)物不能溶解粉末上多糖衍生物的有機溶劑三乙胺 硅烷的配比=Ig 8mL-12mL 0. 3-0. 7mL 0. lmL_15mL，將步驟2)中得到的粉末狀產(chǎn)物與不能溶解粉末上多糖衍生物的有機溶劑相混合，得到混合物；再向此混合物中加入三乙胺、硅烷；在15-10(TC下攪拌2-M小時；冷卻，過濾，濾餅用不能溶解粉末上多糖衍生物的有機溶劑洗滌，干燥后得到粉末狀固體，即制得涂覆型多糖類手性固定相。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的一種涂覆型多糖類手性固定相的制備方法，其特征在于 所述不能溶解粉末上多糖衍生物的有機溶劑為甲苯或苯。
15.根據(jù)權(quán)利要求13所述的一種涂覆型多糖類手性固定相的制備方法，其特征在于 所述硅烷為三甲基氯硅烷、三甲氧基硅烷衍生物或三乙氧基硅烷衍生物中的一種。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的一種涂覆型多糖類手性固定相的制備方法，其特征在于 三甲氧基硅烷衍生物為3-氨丙基三甲氧基硅烷、甲基三甲氧基硅烷或3-氯丙基三甲氧基娃焼。
17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的一種涂覆型多糖類手性固定相的制備方法，其特征在于三乙氧基硅烷衍生物為3-氨丙基三乙氧基硅烷、甲基三乙氧基硅烷或3-氯丙基三乙氧基娃焼。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種手性固定相的制備方法。一種涂覆型多糖類手性固定相的制備方法，其特征在于它包括如下步驟1)將多糖涂覆在硅膠表面，得到多糖-硅膠復合物；2)用異氰酸酯或者酰氯對多糖-硅膠復合物上的多糖進行衍生化，得到衍生化的多糖-硅膠復合物；3)用硅烷對衍生化的多糖-硅膠復合物表面的硅羥基進行封端，得到涂覆型多糖類手性固定相。該方法可克服某些多糖衍生物難溶于常見的有機溶劑而無法涂覆的問題，所制得的固定相具有很好的手性分離能力。
文檔編號B01J20/29GK102423699SQ20111025812
公開日2012年4月25日 申請日期2011年9月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月2日
發(fā)明者尹傳奇, 柏正武, 段蓉, 陳偉 申請人:武漢工程大學