一種高效近紅外熒光材料及其生物應(yīng)用
【專利摘要】一種具有大斯托克斯(stoke)位移的高效近紅外熒光染料及其在生物成像和熒光標(biāo)記等領(lǐng)域的應(yīng)用，屬于有機(jī)熒光染料與應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域。具體分子結(jié)構(gòu)以富馬酸腈為基本受體結(jié)構(gòu)單元，通過雙鍵在一側(cè)或兩側(cè)共軛連接具有推電子能力的給體單元，其結(jié)構(gòu)式如下所示，是通過Heck反應(yīng)合成的一類新型的近紅外熒光染料，其中R代表給體基團(tuán)。研究發(fā)現(xiàn)這種染料在紫外光激發(fā)下會(huì)發(fā)出很亮的近紅外熒光，且該材料具有很好的抗光漂白性和高固態(tài)量子效率。同時(shí)這些材料也有很大斯托克斯位移，因此其作為近紅外熒光材料，可應(yīng)用于生物成像和熒光標(biāo)記等領(lǐng)域。
【專利說明】
一種高效近紅外熒光材料及其生物應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于有機(jī)熒光染料與應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種具有大斯托克斯 (stoke)位移的高效近紅外熒光染料及其在生物成像和熒光標(biāo)記等領(lǐng)域的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 十六世紀(jì)光學(xué)顯微鏡改變了人們對生物學(xué)的認(rèn)識(shí)，推動(dòng)了生物醫(yī)學(xué)的快速發(fā)展。 本領(lǐng)域知悉，在光學(xué)顯微鏡下可以觀察細(xì)胞的大小及形態(tài)、細(xì)胞器、染色體等。電子顯微鏡 的發(fā)明開啟了研究細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的新紀(jì)元，如觀察粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體，同時(shí) 配合生物化學(xué)技術(shù)還能對細(xì)胞分子進(jìn)行分析等。隨著人類社會(huì)的進(jìn)步，近年來新的影像學(xué) 設(shè)備及技術(shù)的不斷涌現(xiàn)，分子影像學(xué)應(yīng)運(yùn)而生。分子影像學(xué)是一門涉及影像學(xué)與現(xiàn)代分子 生物學(xué)及其他學(xué)科的新興交叉學(xué)科?，F(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)技術(shù)空前的進(jìn)步和發(fā)展、 高靶向性及靈敏度的分子探針、高時(shí)空分辨率小動(dòng)物成像設(shè)備的發(fā)展等為分子影像學(xué)提供 了條件。分子影像學(xué)是從分子或細(xì)胞水平上成像從而達(dá)到認(rèn)識(shí)疾病、闡明病變組織生物過 程變化、病變細(xì)胞基因表達(dá)、代謝活性高低、病變細(xì)胞是否存活以及細(xì)胞內(nèi)生物活動(dòng)的狀態(tài) 等目的的科學(xué)。分子影像學(xué)的發(fā)展為疾病早期診斷、治療和機(jī)制研究提供了實(shí)時(shí)、動(dòng)態(tài)信 息。常用的分子影像學(xué)方法主要包括光學(xué)成像、超聲成像(ultrasound)、計(jì)算機(jī)斷層攝影 (0011^)11丨6(11：01]108瓜口117,〇')、核磁共振(1]^81161：；[。代80仙11。6；[1]^8；[1^，]\?1)、正電子衍射成像 (positron-emissiontomography，PET )和單光子衍身才（single-photon-emiss ioncomputedtomography，SPECT)等。
[0003] 與其他成像手段相比，光學(xué)成像具有無創(chuàng)傷、無射線輻射危害、價(jià)格低、敏感性高、 可實(shí)時(shí)成像等優(yōu)點(diǎn)。熒光技術(shù)采用熒光報(bào)告基團(tuán)（GFP、RFP、Cyt及dyes等)對靶向細(xì)胞或分 子進(jìn)行標(biāo)記成像。光學(xué)成像儀器可以直接檢測活體生物體內(nèi)特定分子、細(xì)胞活動(dòng)和基因表 達(dá)行為。通過這些技術(shù)，可以觀測活體動(dòng)物體內(nèi)腫瘤的生長及轉(zhuǎn)移、疾病的發(fā)生發(fā)展、基因 的表達(dá)及反應(yīng)等生物學(xué)過程。相對于其他活體成像技術(shù):如超聲、計(jì)算機(jī)斷層攝影、核磁共 振、正電子衍射成像、單光子衍射等，光學(xué)成像具有若干獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，如操作簡便、結(jié)果直 觀、測量快速、靈敏度高及費(fèi)用低廉等。
[0004] 許多生物體及其組織在可見光的激發(fā)下自身會(huì)發(fā)射熒光，嚴(yán)重干擾生物樣品的熒 光檢測和造影，如血漿中血清蛋白的熒光波長范圍為325~350nm，還原性煙酰胺腺嘌呤二 核苷酸磷酸酶(NADPH)和膽紅素的熒光波長范圍為430~470nm，故使得可見光區(qū)熒光分析 的靈敏度和準(zhǔn)確性受到了很大的影響。再加上光散射的影響往往會(huì)產(chǎn)生較為嚴(yán)重的背景干 擾，嚴(yán)重限制了熒光分析法靈敏度的提高，而在近紅外熒光(700~1200nm)光區(qū)，生物體內(nèi) 物質(zhì)的自吸收和自發(fā)熒光較弱，可避免背景干擾而獲得較高的分析靈敏度，同時(shí)還能夠減 少對生命體的損傷，有利于實(shí)現(xiàn)活體檢測。并且由于散射光強(qiáng)度與波長的四次方成反比，隨 著波長增加，拉曼散射迅速減小，使散射干擾也大為減少。另外，小的斯托克斯位移會(huì)造成 染料自淬滅，也稱為染料的自吸收的問題。這是因?yàn)樾∷雇锌怂刮灰频娜玖系奈展庾V與 發(fā)射光譜有很大的交蓋，這樣染料有部分發(fā)射光能被其自身吸收，從而導(dǎo)致熒光強(qiáng)度下降。 另一個(gè)問題是造成熒光分析技術(shù)的測量誤差。這是因?yàn)樾〉乃雇锌怂刮灰剖辜ぐl(fā)波長與熒 光檢測波長太過接近，激發(fā)波長易對熒光檢測狹縫造成散射光干擾。因而開發(fā)具有大斯托 克斯位移的熒光染料有著十分重要的意義。近年來，近紅外熒光材料尤其受到關(guān)注，這主要 是由于近紅外光對生物組織不受背景熒光干擾的強(qiáng)穿透能力(Guo，Z. ;Park，S. ;Y〇〇n，J.; Shin，I.Chem.Soc.Rev.2014,43，16.Yuan，L. ;Lin，W.;Zheng，K.;He，L. ;Huang， W.Chem.Soc.Rev.2013,42,622.Achilefu，S.Angew.Chem.Int.Ed.2010,49， 9816.Escobedo，J·0·;Rusin，0.;Lim，S.;Strongin，R.M·Curr·Opin·Chem.Biol·2010，14， 64.Hilderbrand ?S.A.；ffeissleder?R.Curr.Opin.Chem.Biol.2010?14 ?71.Kiyose?K.； Kojima，H.;Nagano，T.Chem.AsiaJ.2008，3，506·)〇
[0005] 本發(fā)明為基于富馬酸腈為受體單元，通過改變外圍給體結(jié)構(gòu)單元可以得到具有不 同近紅外發(fā)射的近紅外熒光染料。以其為發(fā)光單元制備的熒光納米粒子在細(xì)胞成像和生物 標(biāo)記領(lǐng)域中的應(yīng)用具有廣闊的前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種基于富馬酸腈的近紅外熒光染料及其在生物成像和 熒光標(biāo)記中的應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明所述的近紅外熒光染料，是以富馬酸腈為基本結(jié)構(gòu)單元，由雙鍵在一側(cè)或 兩側(cè)共輒連接具有推電子能力的給體單元，其結(jié)構(gòu)式如下所示：
[0008]
[0009] 其中R代弄給體某閉，為：
[0010]
[0011]該類化合物適用于制備高效近紅外熒光染料。本發(fā)明化合物的特點(diǎn)是具有高的固 態(tài)熒光量子效率和抗光漂白能力，大的stoke位移和多光子吸收截面，且在紫外光激發(fā)下， 任意一種上述化合物都會(huì)發(fā)出近紅外熒光。而以此種化合物為基礎(chǔ)制備的熒光標(biāo)記物，如 熒光納米粒子，熒光探針等能夠用于細(xì)胞成像和生物標(biāo)記。
[0012]富馬酸腈近紅外熒光染料合成步驟如下：
[0013]
[0014] 步驟1:在碘，甲醇鈉催化下，倆分子的苯乙腈類原料反應(yīng)生成富馬酸腈中間體；
[0015] 步驟2:在碳酸銀，醋酸鈀催化條件下進(jìn)行Heck反應(yīng)制備得到終產(chǎn)物分子。
【附圖說明】
[0016]圖1:為實(shí)施例1中制備的近紅外熒光染料在THF溶液和固體狀態(tài)下的紫外可見吸 收發(fā)射譜，激發(fā)波長365nm;
[0017] 圖2:為實(shí)施例2中制備的近紅外熒光染料在THF溶液和固體狀態(tài)下的紫外吸收發(fā) 射譜，激發(fā)波長365nm;
[0018] 圖3:為實(shí)施例17中制備的不同的近紅外熒光染料負(fù)載量時(shí)的熒光發(fā)射譜；
[0019] 圖4:為實(shí)施例18細(xì)胞成像圖，納米粒子培養(yǎng)濃度100yg/mL，激發(fā)波長408nm，捕獲 650~700nm熒光。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 本發(fā)明給出了一類基于富馬酸腈近紅外熒光染料的合成方法及其在細(xì)胞成像和 生物標(biāo)記中的應(yīng)用。
[0021] 前軀體的制備
[0022] 化合物1:
[0023] 對漠苯乙臆(5g，25.505mmol)和鵬(6.5734g，25.505mmol)于250mL反應(yīng)瓶中，沖氣 氣置換三次至瓶中無氧氣和水為止，加入l〇〇mL干燥乙醚攪拌溶解。將甲醇鈉（2.8933g， 5.356mmol)溶于無水甲醇(8.680g，14.613ml)中，除氧和水，在-78攝氏度條件下緩慢滴入 上述溶液中，整個(gè)滴加過程中需一直保持氬氣氛圍。滴加完后，緩慢升溫至0攝氏度，繼續(xù)攪 拌反應(yīng)3小時(shí)。反應(yīng)完后，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%的稀鹽酸溶液淬滅反應(yīng)，然后攪拌反應(yīng)12小時(shí)。反 應(yīng)完全后，將溶液抽濾，濾餅用甲醇和水洗2次。所得固體在真空干燥箱中干燥。最終產(chǎn)品為 白色粉末化合物 1(3.1143g，63%產(chǎn)率500MHz): (ppm)7.67-7 · 72(m，8H，l-benzene)〇
[0024] 化合物2:
[0025] 對溴苯乙腈（2.58，12.753111111〇1)，苯乙腈（1.498，12.753111111〇1)和碘（6.5734 8， 25.505mmol)于250mL反應(yīng)瓶中，沖氬氣置換三次至瓶中無氧氣和水為止，加入100mL干燥乙 醚攪拌溶解。將甲醇鈉(2.8933g，5.356mmol)溶于無水甲醇(8.680g，14.613ml)中，除氧和 水，在-78攝氏度條件下緩慢滴入上述溶液中，整個(gè)滴加過程中需一直保持氬氣氛圍。滴加 完后，緩慢升溫至〇攝氏度，繼續(xù)攪拌反應(yīng)3小時(shí)。反應(yīng)完后，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)5 %的稀鹽酸溶液淬 滅反應(yīng)，然后攪拌反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)完全后，將溶液抽濾，濾餅用甲醇和水洗2次。所得固體 在真空干燥箱中干燥。最終產(chǎn)品為白色粉末化合物2(2.274g，57%產(chǎn)率顯MR(⑶Cl 3， 500MHz):(ppm)7.67-7.72(m,9H,1-benzene)〇
[0026] 實(shí)施例1:
[0027] 分別取化合物 2(159.611^，0.52111]\〇，對二苯胺基苯乙烯（14011^，0.52111]\〇，？(1((^)2 (6mg，0.026mM)，Ag2C〇3(85mg，0.31mM)加入到50mL舒?zhèn)惪斯苤?，加入約10mL甲苯，100攝氏度 下加熱反應(yīng)18小時(shí)。反應(yīng)完后過濾反應(yīng)液，濾液旋干溶劑，經(jīng)硅膠柱提純得深紅色粉末產(chǎn)物 化合物 3,產(chǎn)率 53.4%</HNMR(500MHz，DMS0)S7.82(ddd，J=13.8,8.6,6.0Hz，9H)，7.55(d，J = 8.7Hz，2H)，7.43(s，lH)，7.39(s，lH)，7.33(dd，J = 8.3,7.5Hz，4H)，7.22(s，lH)，7.19(s， lH)，7.11-7.03(m，6H)，6.96(d，J = 8.6Hz，2H).Ms(m/e):C36H25N3，calcd499.6;found499.6。 元素分析實(shí)驗(yàn)值(計(jì)算值） ：C:86.6%(86.55%);H:5.0%(5.04%) ;N:8.4%(8.41%)。 [0028]由圖1可知，化合物3的四氫咲喃溶液最大吸收峰為455nm，在365nm激發(fā)光下的四 氫咲喃溶液中的最大發(fā)射峰位于785nm的近紅外發(fā)光區(qū)域，其斯托克斯位移達(dá)到了 330nm， 這對于生物成像來說是非常有利的。但是溶液亮度比較低，其量子效率只有1.03%，熒光壽 命為0.25ns?；衔?的固體最大發(fā)射峰在690nm，相對于溶液來說產(chǎn)生了 95nm的藍(lán)移，這可 能是其在固態(tài)時(shí)分子扭曲變大引起的，化合物3的固態(tài)熒光壽命為4.5ns，固體的熒光量子 效率增大到了5.9%。
[0029]
[0030] 化甘物;3
[0031] 實(shí)施例2:
[0032]分別取化合物 l(200mg，0.52mM)，對二苯胺基苯乙烯（280mg，1.04mM)，Pd(0Ac)2 (l2mg，0.〇52mM)，Ag2C03(l 7〇mg，0.62mM)加入到 5〇mL 舒?zhèn)惪斯苤校尤爰s10mL甲苯，100 攝氏 度下加熱反應(yīng)18小時(shí)。反應(yīng)完后過濾反應(yīng)液，濾液旋干溶劑，經(jīng)硅膠柱提純得深紅色粉末產(chǎn) 物化合物 4,產(chǎn)率 62.8^,^1^(50010^,01^0)57.87((^ = 8.61^,410,7.82((1,1 = 8.61^, 4H)，7· 58(d，J = 8.8Hz，4H)，7.43(d，J= 16·3Ηζ，4Η)，7· 38-7.33(m，8H)，7· 23(d，J = 16.5Hz，4H)，7.13-7.06(m，llH)，6.98(d，J = 8.7Hz，4H) .Ms(m/e):C56H4〇N4，calcd768.33; 化1111(1767.136.元素分析實(shí)驗(yàn)值(計(jì)算值）：(：:87.5%(87.47%) ;!1:5.2%(5.24%);17.3% (7.29%)〇
[0033]由圖2可知，化合物4的最大吸收峰為472nm，在365nm激發(fā)光下的四氫呋喃溶液中 的最大發(fā)射峰為770nm，同時(shí)我們還可以觀察到化合物4溶液的斯托克斯位移達(dá)到了300nm。 化合物4溶液量子效率為3.43 %，熒光壽命為1.1 Ins，其固體最大發(fā)射峰在698nm，相對于溶 液來說產(chǎn)生了72nm的藍(lán)移，這可能是其在固態(tài)時(shí)分子扭曲變大引起的，而化合物4的固體最 大發(fā)射峰比化合物3有微弱的紅移，這可能是由于共輒體系的延長和分子構(gòu)型更加扭曲引 起的?；衔?的固態(tài)熒光壽命為3.77ns，固體的熒光量子效率增大到了 19.1 %。
[0034]
[0035] 化合物4
[0036] 實(shí)施例3:
[0037]與化合物3合成類似，以對N，N_二甲基苯乙烯代替對二苯胺基苯乙烯，制備得化合 物5。]\^(111/6):375.17，元素分析實(shí)驗(yàn)值(計(jì)算值）：(：:83.2%(83.17%) ;!1:5.6%(5.64%); N：11.2%(11.9%)〇
[0038]
[0039] 化合物5
[0040] 實(shí)施例4:
[00411與化合物3合成類似，以對N，N_二乙基苯乙烯代替對二苯胺基苯乙烯得到化合物 6。 ]\^(!11/6):403.52，元素分析實(shí)驗(yàn)值(計(jì)算值）：(：:83.3%(83.34%) ;!1:6.3%(6.24%);隊(duì) 10.4%(10.41%)〇
[0042]
[0043] 化合物6
[0044] 實(shí)施例5:
[0045]與化合物3合成類似，以對N，N_二丙基苯乙烯代替對二苯胺基苯乙烯得到化合物 7。 ]\^(!11/6):431.57，元素分析實(shí)驗(yàn)值(計(jì)算值）：(：:83.5%(83.49%) ;!1:6.8%(6.77%);隊(duì) 9.7%(9.74%)〇
[0046]
[0047] 化合物7
[0048] 實(shí)施例6:
[0049]與化合物3合成類似，以對9-乙烯基久洛尼定代替對二苯胺基苯乙烯得到化合物 8。 ]\^(111/6):427.2，元素分析實(shí)驗(yàn)值（計(jì)算值）：(：:84.3%(84.28%) ;!1:5.9%(5.89%);隊(duì) 9.8%(9.83%)〇
[0050]
[0051 ] 化合物8
[0052] 實(shí)施例7:
[0053] 與化合物3合成類似，以對N-咔唑苯乙烯代替對二苯胺基苯乙烯得到化合物9 Js (111/6):497.19，元素分析實(shí)驗(yàn)值(計(jì)算值）：(：:86.9%(86.90%) ;!1:4.7%(4.66%);18.4% (8.44%)〇
[0054]
[0055] 化合物9 [0056] 實(shí)施例8:
[0057]與化合物3合成類似，以9-三咔唑苯乙烯代替對二苯胺基苯乙烯得到化合物HLMs (111/6):827.3，元素分析實(shí)驗(yàn)值(計(jì)算值）：(：:87.0%(87.04%) ;!1:4.5%(4.50%);18.5% (8.46%)〇
[0058]
[0059] 化合物10 [0060] 實(shí)施例9:
[00611與化合物3合成類似，以三(三苯胺)基乙烯代替對二苯胺基苯乙烯得到化合物11。 皿8(!11/6):1037.45，元素分析實(shí)驗(yàn)值（計(jì)算值）：(：:87.9%(87.92%) ;!1:5.3%(5.34%);隊(duì) 6.8%(6.75%)0
[0062]
[0063] 化合物11
[0064] 實(shí)施例10:
[0065] 與化合物4合成類似，以對N，N_二甲基苯乙烯代替對二苯胺基苯乙烯，制備得化合 物 12。]\^(!11/6):520.26，元素分析實(shí)驗(yàn)值(計(jì)算值）：(：:83.0%(83.04%) ;!1:6.2%(6.19%); N：10.8%(10.76%)〇
[0066]
[0067] 化合物12 [0068] 實(shí)施例11:
[0069]與化合物4合成類似，以對N，N_二乙基苯乙烯代替對二苯胺基苯乙烯，制備得化合 物 13。]\^(!11/6):576.77，元素分析實(shí)驗(yàn)值(計(jì)算值）：(：:83.3%(83.30%) ;!1:7.0%(6.99%); N：9.7%(9.71%)〇
[0070]
[0071] 化合物13 [0072] 實(shí)施例12:
[0073]與化合物4合成類似，以對N，N_二丙基苯乙烯代替對二苯胺基苯乙烯得到化合物 14。 ]\^(!11/6):632.39，元素分析實(shí)驗(yàn)值(計(jì)算值）：(：:83.5%(83.50%) ;!1:7.6%(7.64%);隊(duì) 8.9%(8.85%)〇
[0074]
[0075] 化合物14
[0076] 實(shí)施例13:
[0077]與化合物4合成類似，以對9-乙烯基久洛尼定代替對二苯胺基苯乙烯得到化合物 15。 ]\^(!11/6):624.33，元素分析實(shí)驗(yàn)值(計(jì)算值）：(：:84.6%(84.58%) ;!1:6.5%(6.45%);隊(duì) 8.9%(8.97%)〇
[0078]
[0079] 化合物15
[0080] 實(shí)施例14:
[00811與化合物4合成類似，以對N-咔唑苯乙烯代替對二苯胺基苯乙烯得到化合物16。此 (111/6):764.29，元素分析實(shí)驗(yàn)值(計(jì)算值）：(：:87.9%(87.93%) ;!1:4.8%(4.74%);17.3% (7.32%)0
[0082]
[0083] 化合物16
[0084] 實(shí)施例15:
[0085] 與化合物4合成類似，以9-三咔唑苯乙烯代替對二苯胺基苯乙烯得到化合物17。此 (111/6):1424.53，元素分析實(shí)驗(yàn)值（計(jì)算值） ：(：：87.6%(87.62%);!1:4.5%(4.52%) ;1 7.9%(7.86%)〇
[0086]
[0087] 化合物17
[0088] 實(shí)施例16:
[0089]與化合物4合成類似，以三(三苯胺)基乙烯代替對二苯胺基苯乙烯得到化合物18。 皿8(!11/6):1844.81，元素分析實(shí)驗(yàn)值（計(jì)算值）：(：:88.5%(88.47%) ;!1:5.5%(5.46%);隊(duì) 6.0%(6.07%)〇
[0090
[0091] 化合物18
[0092] 實(shí)施例17
[0093] 將實(shí)施例2制備的近紅外熒光染料化合物4按lmg/mL的濃度溶解在四氫呋喃中，并 同時(shí)配置lmg/mL的兩親性聚合物聚（苯乙稀-co-馬來酸酐）（PSMA)的四氫咲喃溶液。按圖3 中所示質(zhì)量比例分別取化合物4的四氫呋喃溶液（40yL、36.4yL、33.3yL、32yL、30.76yL、 28.6μL、26.7μL)于2mL的EP管中，再在其中分別加入PSMA溶液160μL，補(bǔ)加四氫呋喃定容至 lmL，超聲使溶液混勻。將上述四氫呋喃溶液快速倒入含有5mL去離子水的玻璃瓶中，40度超 聲6分鐘。在加熱臺(tái)設(shè)置溫度70攝氏度下往瓶中吹氮?dú)夤呐荩ㄒ詺馀莶粫?huì)溢出瓶口為宜）去 除四氫呋喃，吹至瓶中無四氫呋喃味道為止。用0.22微米濾頭過濾溶液即可得紅色納米粒 子溶液。上述納米粒子溶液在365nm紫外光激發(fā)下可發(fā)出很亮的紅光，其最大發(fā)射峰位在 670~700nm之間（附圖3)，且其熒光量子效率會(huì)隨著染料負(fù)載量的減少而逐漸增加，在負(fù)載 比例為1:26時(shí)達(dá)到最大熒光量子效率34%。
[0094] 實(shí)施例18
[0095]實(shí)施例17所述納米粒子可以用于生物成像。A549細(xì)胞株被用作細(xì)胞成像，培養(yǎng)基 均為DMEM培養(yǎng)基加10%胎牛血清、100U ml/1青霉素、lOOmg ml/1鏈霉素，培養(yǎng)條件為體積分 數(shù)5 %二氧化碳，37 °C恒溫培養(yǎng)。待細(xì)胞長至90mm培養(yǎng)皿鋪滿80 %部分時(shí)，用胰蛋白酶37 °C 消化，轉(zhuǎn)移至共聚焦培養(yǎng)皿內(nèi)生長過夜，PBS溶液沖洗細(xì)胞，用含熒光納米粒子100yg/mL的 DMEM維持培養(yǎng)基（2 %血清)換液，5小時(shí)后，棄培養(yǎng)基，用PBS緩沖液沖洗細(xì)胞3次，每次5分 鐘，在共聚焦顯微鏡下鏡檢照相，408nm激發(fā)，捕獲650~700nm熒光檢測熒光納米粒子(如附 圖4)?？梢钥吹剑{米粒子主要集中在細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)區(qū)域且表現(xiàn)出了很高的熒光信號。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種基于富馬酸臘的近紅外巧光染料，其結(jié)構(gòu)式如下所示：2. 如權(quán)利要求1所述的一種基于富馬酸臘的近紅外巧光染料，其結(jié)構(gòu)式如下之一所示：3.權(quán)利要求1或2所述的一種基于富馬酸臘的近紅外巧光染料在生物成像或巧光標(biāo)記 中的應(yīng)用。
【文檔編號】C09K11/06GK106084873SQ201610416587
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月14日 公開號201610416587.3, CN 106084873 A, CN 106084873A, CN 201610416587, CN-A-106084873, CN106084873 A, CN106084873A, CN201610416587, CN201610416587.3
【發(fā)明人】徐斌, 田文晶, 閆路林, 紀(jì)光
【申請人】吉林大學(xué)