發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一系列含氮雜環(huán)基取代的烯類(lèi)化合物的新用途。

背景技術(shù)：

隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，對(duì)生物體的研究已經(jīng)進(jìn)入到分子甚至單分子水平，但是傳統(tǒng)的免疫組化和基因芯片技術(shù)只能限于體外實(shí)驗(yàn)，而且無(wú)法直觀地觀察所研究的對(duì)象，所以迫切需要一種能在分子水平上直接展現(xiàn)組織與細(xì)胞內(nèi)分子變化的成像方法。熒光分子成像監(jiān)測(cè)靈敏、成像迅速、無(wú)放射性危害，且可同時(shí)觀察多分子事件，因此廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)的研究中，尤其在腦神經(jīng)和腫瘤成像的研究領(lǐng)域中。熒光成像技術(shù)尤其在近二十多年來(lái)得到迅猛發(fā)展，在近幾年的諾貝爾獎(jiǎng)中，和熒光成像技術(shù)相關(guān)的就有兩項(xiàng)，2008年的諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)授予發(fā)現(xiàn)和改造綠色熒光蛋白的三位科學(xué)家，緊接著，2014年的諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)又授予，諾貝爾獎(jiǎng)極少在這么短的時(shí)間內(nèi)給同一領(lǐng)域頒發(fā)兩次獎(jiǎng)，可見(jiàn)熒光成像技術(shù)的重要性。

無(wú)論是哪一種熒光成像技術(shù)，最核心的關(guān)鍵之一都在于光學(xué)探針的選擇，尤其是超分辨熒光顯微技術(shù)，對(duì)光學(xué)探針的要求極高。所謂光學(xué)探針主要是能在光激發(fā)下發(fā)射出熒光的染料，而通常成像的分辨率和最終效果就取決于染料的性質(zhì)，因此，優(yōu)化和開(kāi)發(fā)具有優(yōu)異性能的熒光染料成為熒光成像技術(shù)的發(fā)展重點(diǎn)。已有的商用染料只有幾款，比較常用的有alexafluor、attodyes、cydyes和dylightfluor系列，以及各種熒光蛋白。這些商用染料大部分是基于對(duì)熒光素、羅丹明、香豆素、bodipy和雙花青染料的改性，種類(lèi)單一，而且合成復(fù)雜，價(jià)格昂貴，而熒光蛋白又體積太大，影響分子水平的研究，因此對(duì)性質(zhì)優(yōu)異的新型熒光染料的需求制約著成像技術(shù)的發(fā)展。

含氮雜環(huán)基取代的烯類(lèi)化合物的部分化合物曾被用在抗神經(jīng)退行性疾病領(lǐng)域(wo2010087306描述了部分氮雜環(huán)取代烯類(lèi)化合物用于抗神經(jīng)退行性疾病劑，wo2010087313描述了用作神經(jīng)突延長(zhǎng)刺激藥劑，wo2010087315描述了用作抗阿爾茨海默癥藥劑，jp2004250407)、有機(jī)硫磷農(nóng)藥檢測(cè)(tetrahedronletters，2010，51(13)：1754-1757.)、信息儲(chǔ)存和復(fù)寫(xiě)材料(jp2009271202，jp2004111011，jp2002221790)、朊蛋白相關(guān)疾病的檢測(cè)與補(bǔ)救(wo2004035522)領(lǐng)域、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的治療調(diào)節(jié)劑(wo2010068287，wo2011019400，wo2012047826)、ace2的活化劑(wo2008066770)、太赫茲發(fā)生器(us20080099698)、鋅離子和汞離子檢測(cè)(bulletinofthekoreanchemicalsociety(2009)，30(12)，3109-3112.)、載脂蛋白a-i表達(dá)刺激劑(jp2001131151)和檢測(cè)溶劑極性(chemicalreviews，1994，94(8)：2319-2358.)。

由于這類(lèi)化合物的重要性，因此也是合成方法學(xué)研究的熱點(diǎn)，許多課題組對(duì)其合成方法進(jìn)行了研究，得到了高產(chǎn)率簡(jiǎn)易地合成方法(thejournaloforganicchemistry，2011，76(16)：6849-6855.)。但是，對(duì)含氮雜環(huán)基取代的烯類(lèi)化合物發(fā)光性質(zhì)一直以來(lái)只是停留在理論階段(dyesandpigments，2007，72(3)：357-362.，chemicalphysicsletters268(1997)434-438，chemicalphysicsletters444(2007)71-75，journalofphotochemistryandphotobiologya：chemistry，2011，218(1)：76-86，chemicalphysicsletters415(2005)217-222，)，很少運(yùn)用到實(shí)際生物成像中或者對(duì)其成像性質(zhì)進(jìn)行仔細(xì)地研究(ca2129933描述了氨基苯乙烯基吡啶鹽作為粘度的熒光探針粘度)。沒(méi)有廣泛地涉及到把該類(lèi)化合物作為熒光染料用于生物成像，這是由于傳統(tǒng)觀念的熒光成像要求染料最好對(duì)ph和細(xì)胞環(huán)境不敏感，以期得到窄光譜和多色成像，但是通過(guò)我們的研究發(fā)現(xiàn)，敏感型的熒光染料在生物成像中尤其是組織學(xué)成像中能揭示許多新的現(xiàn)象，顯示細(xì)胞微環(huán)境的差異，這個(gè)性質(zhì)可以在許多方面有重要的應(yīng)用，比如測(cè)定細(xì)胞內(nèi)微環(huán)境ph、區(qū)分病理組織(比如腫瘤)與正常組織、區(qū)分不同的細(xì)胞器等等。

現(xiàn)有用于熒光成像的染料，比如基于熒光素、羅丹明、bodipy和雙花青等染料改性得到的商用染料，在實(shí)際應(yīng)用普遍存在一些不足，首先在于合成復(fù)雜，提純困難，得到的產(chǎn)率低；而且由于染料在水中發(fā)光，成像時(shí)產(chǎn)生很強(qiáng)的熒光背景，需要加上洗去多余的染料，使得成像操作繁瑣，加長(zhǎng)成像時(shí)間，為研究帶來(lái)新的不可控因素。

現(xiàn)有的ph檢測(cè)的探針大多也是基于熒光素、羅丹明、bodipy和雙花青等染料改性得到的，存在這些染料擁有的不足，文獻(xiàn)(tractrendsinanalyticalchemistry2010，29(9)，pp1004-1013和chem.rev.，2010，110(5)，pp2709-2728)很好地總結(jié)了現(xiàn)有ph熒光探針的不足和對(duì)新型ph熒光探針的需求，比如熒光素類(lèi)探針stokes位移小、8-羥基芘-1，3，6-三磺酸類(lèi)染料不能進(jìn)入細(xì)胞、花青類(lèi)染料容易光漂白、一些染料光穩(wěn)定性差或量子產(chǎn)率低。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

經(jīng)過(guò)深入研究，本發(fā)明的發(fā)明人出乎意料地發(fā)現(xiàn)，相比于傳統(tǒng)熒光染料，具有以下通式的一系列含氮雜環(huán)基取代的烯類(lèi)化合物可以簡(jiǎn)單地合成，成像速度快而且水中完全無(wú)背景，實(shí)現(xiàn)免洗成像，而且能夠表現(xiàn)出單組分多色成像性質(zhì)，在生物成像具有巨大的潛在應(yīng)用。同時(shí)，該含氮雜環(huán)基取代的烯類(lèi)化合物能夠以0.2差異靈敏度靈敏地區(qū)分相差0.2以上的ph值，在水中無(wú)背景，提高了ph檢測(cè)的信噪比。此外，該含氮雜環(huán)基取代的烯類(lèi)化合物的分子量小，容易進(jìn)入細(xì)胞，發(fā)光量子產(chǎn)率高且穩(wěn)定，并且能夠表征細(xì)胞微環(huán)境特點(diǎn)。

鑒于此，本發(fā)明的目的是提供具有以下通式的一系列含氮雜環(huán)基取代的烯類(lèi)化合物的新用途。

一方面，本發(fā)明提供了由通式a表示的化合物或其鹽用于生物成像、ph值檢測(cè)、生物大分子或細(xì)胞微環(huán)境檢測(cè)的用途，

其中

z表示任選地被一個(gè)多個(gè)基團(tuán)r2取代的吡咯基、噻唑基、異噻唑基、噁唑基、異噁唑基、吡唑基、咪唑基、1h-1，2，3-三唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、1，3，5-三嗪基、吲哚基、嘌呤基、咔唑基、喹啉基、異喹啉基、喋啶基或喹喔啉基；優(yōu)選地，在這些基團(tuán)中，含有n原子的雜環(huán)基團(tuán)上的r2取代基不在該n原子上；

s1和s2各自獨(dú)立地選自h、鹵素、c1-c6烷基或c3-c6環(huán)烷基；

r1表示h、鹵素、羥基、氨基、巰基、磺?；?、羧基、氰基、酰胺基、c1-c6烷基、羥基c1-c6烷基、c2-c6烯基、c2-c6炔基、c3-c6環(huán)烷基、c3-c6環(huán)烷基-c1-c6烷基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷基氨基、羥基c1-c6烷基氨基、c1-c6烷硫基、c3-c7雜環(huán)烷基、c6-c10芳基、雜芳基，其中所述c6-c10芳基和所述雜芳基任選地被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、羥基、氨基、巰基、磺酰基、硝基、羰基、酯基、羧基、氰基、酰胺基、c1-c6烷基、c2-c6烯基、c2-c6炔基、c3-c6環(huán)烷基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷基氨基、羥基c1-c6烷基氨基、c1-c6烷硫基和c3-c7雜環(huán)烷基的取代基取代；

r2表示h、羥基、氨基、巰基、磺?；?、羧基、氰基、酰胺基、c1-c6烷基、或c1-c6烷氧基，

術(shù)語(yǔ)“雜芳基”表示是指具有單個(gè)或多個(gè)的4至8元環(huán)并含有1、2或3個(gè)單獨(dú)地選自n、o和s的雜原子并且其中的至少一個(gè)雜環(huán)是芳香性的基團(tuán)，術(shù)語(yǔ)“c3-c7雜環(huán)烷基”是指含有一個(gè)n原子作為環(huán)成員并且其他環(huán)成員為碳原子的3至7元飽和環(huán)狀烴基；

在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述由通式a表示的化合物或其鹽為由以下通式i、ii、iii或iv表示的化合物或其鹽：

其中各個(gè)t獨(dú)立地表示c或n，u表示o、s或n，并且r1、r2、s1和s2如上所定義。

在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述由通式a表示的化合物或其鹽為由以下各式表示的化合物或其鹽：

其中z、r1、r2、s1和s2如上所定義，t表示c或n，r3表示h、羥基、氨基、巰基、磺?；Ⅳ然?、氰基、酰胺基、c1-c6烷基、羥基c1-c6烷基、c2-c6烯基、c2-c6炔基、c3-c6環(huán)烷基或c1-c6烷氧基。

優(yōu)選地，所述化合物或其鹽為由以下各式表示的化合物或其鹽：

其中r2、r3、s1、s2和t如權(quán)利要求3所定義，并且r6和r7各自獨(dú)立地表示h、羥基、氨基、巰基、磺?；?、羧基、氰基、酰胺基、c1-c6烷基、羥基c1-c6烷基、c2-c6烯基、c2-c6炔基、c3-c6環(huán)烷基或c1-c6烷氧基。

在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述化合物或其鹽以在選自烷烴類(lèi)、醚類(lèi)、酯類(lèi)、醇類(lèi)或酮類(lèi)的溶劑中的溶液使用。

在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述溶劑為正己烷、二氯甲烷、四氫呋喃、乙酸乙酯、丙酮、乙醇或甲醇，并且所述溶液的濃度范圍為0.1x10^-5m至10x10^-5m。

在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，在不同溶劑、不同ph、不同細(xì)胞微環(huán)境的條件下，所述化合物或其鹽的溶液在生物熒光成像中顯示不同顏色。

在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，當(dāng)所述化合物或其鹽用于檢測(cè)ph值時(shí)，其能夠區(qū)分相差0.2以上的ph值。

本發(fā)明提供了一系列含氮雜環(huán)基取代的烯類(lèi)化合物的新用途，該類(lèi)化合物可以用作生物成像的熒光染料，可用作檢測(cè)ph值的熒光ph探針，可用于生物大分子如蛋白質(zhì)的檢測(cè)，和/或用作腫瘤細(xì)胞檢測(cè)的診斷劑，并且該類(lèi)化合物的成像效果優(yōu)異并表現(xiàn)出單組分多色的性質(zhì)，可用于單組分多色成像或常規(guī)成像等，在生物成像和腫瘤檢測(cè)中具有巨大應(yīng)用前景。

附圖說(shuō)明

圖1：分子i-2060在不同極性有機(jī)溶劑中的紫外可見(jiàn)吸收光譜)，濃度為1×10^-5m，測(cè)試的溫度為298k。

圖2：分子i-2060在不同極性有機(jī)溶劑中的穩(wěn)態(tài)熒光光譜，濃度為1×10^-5m，測(cè)試的溫度為298k。

圖3：將不同染料(藍(lán)色為i-2025，玫紅色為i-2064，青色為i-2061，土黃色為i-2062，紫色為i-2029，青紫色為i-2027，紅色為i-2060，米色為i-2045)分別配成濃度為60mmol/l的乙醇溶液，然后將該溶液吸附到濾紙上，并在紫外燈照射下的熒光效果圖。

圖4：i-2060吸附在濾紙泡在不同ph(從左至右ph分別為1-8)的水溶液中發(fā)光不同。

圖5：染料i-2060對(duì)ph定量響應(yīng)曲線(xiàn)。

圖6：用分子i-2060對(duì)海拉(hela)活細(xì)胞成像的顯微照片，其中使用的激發(fā)光波長(zhǎng)為488nm。

圖7：用分子i-2060對(duì)鼠神經(jīng)元活細(xì)胞成像的顯微照片，其中使用的激發(fā)光波長(zhǎng)為488nm。

圖8：用分子i-2060對(duì)固定鼠神經(jīng)元細(xì)胞成像的顯微照片。

圖9：分子i-2064在不同極性有機(jī)溶劑中的紫外可見(jiàn)吸收光譜，濃度為1×10^-5m，測(cè)試的溫度為298k。

圖10：分子i-2064在不同極性有機(jī)溶劑中的穩(wěn)態(tài)熒光光譜，溶液的濃度為1×10^-5m，測(cè)試的溫度為298k。

圖11：用分子i-2064制成的濾紙能區(qū)分ph值相差0.2精度的不同溶液。

圖12：用分子i-2064對(duì)海拉活細(xì)胞成像的顯微照片。

圖13：用分子i-2064對(duì)固定海拉細(xì)胞成像的顯微照片。

圖14：用分子i-2064對(duì)神經(jīng)元活細(xì)胞成像的顯微照片。

圖15：用分子i-2064對(duì)固定神經(jīng)元細(xì)胞成像的顯微照片。

圖16：用分子i-2064與傳統(tǒng)nissl對(duì)相同小鼠腦冰凍切片染色并成像的顯微照片，其中(a)為用nissl染色，(b)為用分子i-2064染色。從圖中可以看出利用自開(kāi)發(fā)的染料的染色結(jié)果可以看出更為清晰的細(xì)胞分布和不同腦區(qū)之間的區(qū)別更為明顯。

圖17：用分子i-2064對(duì)取自人體的胃組織成像的顯微照片，(a)為正常組織，(b)為癌變組織。

圖18：分子i-2064在相同ph＝7.4的pbs溶液中與不同生物分子或硬脂酸(bsa為牛血清白蛋白，fbs為胎牛血清，trypsin為胰蛋白酶，lipase為脂肪酶，stearicacid為硬脂酸，這里的硬脂酸用作模擬細(xì)胞膜的脂類(lèi))結(jié)合后得到的衍生物的穩(wěn)態(tài)熒光光譜圖。

圖19：分子i-2067在不同極性有機(jī)溶劑中的紫外可見(jiàn)吸收光譜圖，濃度為1×10^-5m，測(cè)試的溫度為298k。

圖20：分子i-2067在不同極性有機(jī)溶劑中的穩(wěn)態(tài)熒光光譜圖，濃度為1×10^-5m，測(cè)試的溫度為298k。

圖21：用分子i-2067對(duì)活斑馬魚(yú)的腦部(a)、軀干部(b)和尾部(c)分別染色成像的顯微照片，其中染色時(shí)間為20分鐘。

圖22：用分子i-2084對(duì)海拉(hela)活細(xì)胞成像的顯微照片，其中使用的激發(fā)光波長(zhǎng)為488nm。

圖23：用分子i-2110對(duì)活體腫瘤成像的顯微照片。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明涉及的一系列基于含氮雜環(huán)基取代的烯類(lèi)化合物小分子有機(jī)染料作為全新的熒光染料，在各種生物成像中展現(xiàn)出優(yōu)異的性質(zhì)，發(fā)光量子產(chǎn)率高，成像穩(wěn)定，沒(méi)有一般熒光染料的光漂白現(xiàn)象，對(duì)細(xì)胞無(wú)害，沒(méi)有光毒性，成像清晰，和傳統(tǒng)染料相比性能絲毫不差。同時(shí)本款染料還具有其他染料不具有的一些優(yōu)異特點(diǎn)，例如合成簡(jiǎn)單，大部分染料通過(guò)碳?xì)滏I活化反應(yīng)一步就能得到產(chǎn)物，而且產(chǎn)率高；后處理簡(jiǎn)單，通過(guò)重結(jié)晶或過(guò)柱能得到高純度的染料；成像速度快而且穩(wěn)定，大部分成像時(shí)間只需要幾秒鐘就實(shí)現(xiàn)成像；染料在水中不發(fā)光，因此成像不需要清洗，而且完全無(wú)背景，得到高對(duì)比度的圖像；染料性質(zhì)穩(wěn)定，保存簡(jiǎn)單，并且在生物體內(nèi)耐受性好，因此成像操作簡(jiǎn)單，避免太多的準(zhǔn)備工作浪費(fèi)時(shí)間，也給研究帶來(lái)過(guò)多不確定因素，引入誤差，延誤研究機(jī)會(huì)；最重要的是，該染料表現(xiàn)出單組分多色成像的性質(zhì)，此類(lèi)染料極度敏感，與生物組織結(jié)合后，在不同的環(huán)境下(比如ph、不同組分、離子濃度等)中表現(xiàn)發(fā)出不同顏色光，呈現(xiàn)單組分多色成像；該類(lèi)染料也很容易進(jìn)行修飾，與各種抗體結(jié)合，做成特異性的熒光探針，或者修飾成水溶性的染料等等。因此這款染料在各類(lèi)生物成像、細(xì)胞內(nèi)ph檢測(cè)和腫瘤細(xì)胞檢測(cè)具有巨大潛在應(yīng)用。

除了與具有與已知熒光化合物性質(zhì)相當(dāng)，本發(fā)明涉及的此類(lèi)染料還具有優(yōu)異的性質(zhì)，突出表現(xiàn)在單組分多色成像的性質(zhì)，在與常規(guī)細(xì)胞成像、活細(xì)胞成像、各種生物組織切片如腦切片成像、病理組織的檢測(cè)與成像，如癌癥組織的成像，器官成像、各種活體動(dòng)物成像如斑馬魚(yú)成像等等成像中，一個(gè)組分的染料就能表現(xiàn)出多種顏色的性質(zhì)，揭示了所檢測(cè)對(duì)象的一些其他染料不能揭示的現(xiàn)象和差異，這些差異可能是微環(huán)境ph、各類(lèi)離子濃度、氧化還原條件、氧氣濃度、二氧化碳濃度、所檢測(cè)化合物的pka及其它性質(zhì)所造成。這類(lèi)染料可為成像及生物檢測(cè)打開(kāi)一扇新的窗戶(hù)，揭示了許多未能發(fā)現(xiàn)的現(xiàn)象與差異。

本發(fā)明中的含氮雜環(huán)基取代的烯類(lèi)化合物之所以對(duì)環(huán)境非常敏感，有單組分多色成像性質(zhì)，原因在于結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)中同時(shí)引入了分子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移(ict)和ph響應(yīng)，以分子i-2064為例，烯基一端的4-[n，n-雙(2-羥乙基)氨基]苯基是一個(gè)供電子基團(tuán)(donor)，另一端的喹啉基是受電子集團(tuán)(acceptor)，通過(guò)中間的雙鍵形成一個(gè)共軛的給-受共軛體系(簡(jiǎn)稱(chēng)d-a體系)，這樣的體系由于電子基態(tài)與激發(fā)態(tài)分離，激發(fā)態(tài)偶極矩增大，被周?chē)h(huán)境的分子穩(wěn)定的程度不同，使得能極差不同，發(fā)光也會(huì)不同，穩(wěn)定激發(fā)態(tài)的分子可以是溶劑分子，也可以是與染料結(jié)合的生物分子，比如蛋白質(zhì)、脂類(lèi)等，周?chē)h(huán)境分子極性不同，使得染料分子的發(fā)光也不同，當(dāng)染料與不同的生物分子結(jié)合時(shí)，變現(xiàn)的就是不同區(qū)域發(fā)光不同；同時(shí)喹啉基上的n原子能接受質(zhì)子或失去質(zhì)子，接受質(zhì)子后，分子的偶極矩進(jìn)一步增大，使得分子對(duì)環(huán)境更為敏感，宏觀上變現(xiàn)為分子不僅能區(qū)分不同極性，還能區(qū)分不同的ph；我們把這類(lèi)同時(shí)結(jié)合分子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移(ict)和ph響應(yīng)的分子稱(chēng)為ict-ph染料。這類(lèi)染料的特點(diǎn)是含氮雜環(huán)基取代的烯類(lèi)化合物，根據(jù)含氮雜環(huán)上n的pka不同，表現(xiàn)出對(duì)不同ph范圍的敏感，同時(shí)調(diào)整分子上的取代基，使得染料的激發(fā)和發(fā)射峰值變化，根據(jù)這一理念我們?cè)O(shè)計(jì)出一整個(gè)系列的染料。

本發(fā)明涉及的此類(lèi)染料可用于常規(guī)細(xì)胞成像、活細(xì)胞成像、各種生物組織切片如腦切片成像、病理組織的檢測(cè)與成像，如癌癥組織的成像，器官成像、各種活體動(dòng)物成像如斑馬魚(yú)成像等等，本發(fā)明也包括染料的合成、成像的使用方法以及此類(lèi)染料的其他應(yīng)用，比如用于探針(ph)和顯示屏，各類(lèi)生物檢測(cè)，藝術(shù)，設(shè)計(jì)、和商用產(chǎn)品。使用形式包括在各種溶液中、固體、納米粒子、吸附在各類(lèi)物質(zhì)上、或包裹在基質(zhì)中。本發(fā)明提供了它們各自具體的非限制性實(shí)例。

本發(fā)明涉及的化合物可與蛋白質(zhì)、核酸、脂質(zhì)、纖維素、殼聚糖等生物分子良好地結(jié)合用于生物成像與分析，也可用作生物學(xué)測(cè)定中的靈敏性檢測(cè)試劑。

本發(fā)明還公開(kāi)了染料在對(duì)各類(lèi)細(xì)胞成像中，能特異地與高爾基體，細(xì)胞核，各種細(xì)胞膜及不同細(xì)胞器結(jié)合發(fā)出熒光，能精細(xì)準(zhǔn)確地展現(xiàn)這些細(xì)胞器的微結(jié)構(gòu)。

本發(fā)明還公開(kāi)了與共聚焦熒光顯微鏡，超分辨熒光顯微鏡等各種不同熒光顯微鏡結(jié)合使用的成像數(shù)據(jù)，具有開(kāi)發(fā)為商用熒光染料的潛能。

本發(fā)明涉及的染料與不同pka蛋白質(zhì)結(jié)合進(jìn)行電泳檢測(cè)，可用于不同類(lèi)蛋白質(zhì)的檢測(cè)。染料還可通過(guò)修飾用于halo-tag、snap-tag、抗體標(biāo)記等特異性標(biāo)記的成像技術(shù)，或用于多色熒光成像。

本發(fā)明涉及的化合物還可以用于做光學(xué)標(biāo)記的染料，所述光學(xué)標(biāo)記可以是蛋白質(zhì)，核酸，寡聚體，dna，rna，生物細(xì)胞，脂質(zhì)，單-，寡-和多糖，配體，受體，聚合物，藥物或聚合物顆粒的標(biāo)記，且所述化合物通過(guò)官能團(tuán)與如上所述物質(zhì)的ho-，h2n-，hs-或ho2c-官能團(tuán)反應(yīng)，作為染料用于測(cè)定蛋白質(zhì)，核酸，寡聚體，dna，rna，生物細(xì)胞，脂質(zhì)，單-，寡-和多糖，配體，受體，聚合物，藥物或聚合物顆粒。

本發(fā)明涉及的染料還能吸附在濾紙上，做成熒光ph響應(yīng)的試紙。把染料吸附于濾紙、玻璃板、脫脂棉等各種基質(zhì)上，或與高分子基質(zhì)結(jié)合，或共價(jià)與高分子結(jié)合，可在不同ph下發(fā)出不同光。也能在醋酸等各類(lèi)酸蒸汽下產(chǎn)生不同熒光。

本發(fā)明涉及的染料還具有壓敏性質(zhì)，在碾壓、剪切、拉伸等力的作用下，具有明顯的發(fā)光紅移或藍(lán)移，一段時(shí)間后恢復(fù)?？捎糜诹χ掳l(fā)光和各種檢測(cè)應(yīng)用中。

本發(fā)明公開(kāi)了所述化合物的合成、純化和檢測(cè)方法。公開(kāi)了所述化合物的各種理化性質(zhì)、紫外吸收、熒光發(fā)射等性質(zhì)。

本發(fā)明涉及的該類(lèi)化合物在乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯等有機(jī)溶劑中有良好的溶解性和強(qiáng)烈的熒光，具有較高的摩爾消光系數(shù)。大部分化合物只有較小的水溶性，且極易與水中的各類(lèi)生物分子結(jié)合發(fā)出不同的熒光，起到檢測(cè)、分析、成像等功能。所有通式還可以任選地修飾包含下列的增溶基團(tuán)，其選自so3^-，po3^-，co2h，oh，nr3⁺，和提供親水性特征的環(huán)糊精或糖；所述取代基任選地通過(guò)脂族基團(tuán)或雜脂族基團(tuán)或環(huán)狀間隔基連接至發(fā)色團(tuán)。修飾增溶基團(tuán)后的化合物具有良好水溶性。

本發(fā)明涉及的此類(lèi)染料可以被紫外(uv)、可見(jiàn)或近紅外(nir)光譜范圍內(nèi)的單色光(激光/激光二極管)或多色光(白色光源)簡(jiǎn)單地激發(fā)發(fā)射熒光，具有高摩爾消光系數(shù)，高光穩(wěn)定性和高儲(chǔ)存穩(wěn)定性，且整個(gè)系列染料能提供不同的親脂親水性，用于各類(lèi)檢測(cè)、分析與成像等功能。

本發(fā)明用于實(shí)現(xiàn)成像的染料為含氮雜環(huán)基取代的烯類(lèi)化合物，結(jié)構(gòu)式中間是一個(gè)或多個(gè)乙烯基，與乙烯基相連一端是含氮雜環(huán)基，另一端是取代苯環(huán)或其他化學(xué)基團(tuán)，用于成像的染料包括含氮雜環(huán)基取代的烯類(lèi)化合物的衍生物及其鹽。

所述含氮雜環(huán)基取代的烯類(lèi)化合物及其衍生物是

下列任一通式的化合物：

z表示任選地被一個(gè)多個(gè)基團(tuán)r2取代的吡咯基、噻唑基、異噻唑基、噁唑基、異噁唑基、吡唑基、咪唑基、1h-1，2，3-三唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、1，3，5-三嗪基、吲哚基、嘌呤基、咔唑基、喹啉基、異喹啉基、喋啶基、喹喔啉基；

s1和s2各自獨(dú)立地選自h、鹵素、c1-c6烷基或c3-c6環(huán)烷基；

r1表示h、鹵素、羥基、氨基、巰基、磺酰基、羧基、氰基、酰胺基、c1-c6烷基、羥基c1-c6烷基、c2-c6烯基、c2-c6炔基、c3-c6環(huán)烷基、c3-c6環(huán)烷基-c1-c6烷基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷基氨基、羥基c1-c6烷基氨基、c1-c6烷硫基、c3-c7雜環(huán)烷基、c6-c10芳基、雜芳基，其中所述c6-c10芳基和所述雜芳基任選地被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、羥基、氨基、巰基、磺?；?、硝基、羰基、酯基、羧基、氰基、酰胺基、c1-c6烷基、c2-c6烯基、c2-c6炔基、c3-c6環(huán)烷基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷基氨基、羥基c1-c6烷基氨基、c1-c6烷硫基和c3-c7雜環(huán)烷基的取代基取代；

r2表示h、羥基、氨基、巰基、磺酰基、羧基、氰基、酰胺基、c1-c6烷基或c1-c6烷氧基；

術(shù)語(yǔ)“雜芳基”表示是指具有單個(gè)或多個(gè)的4至8元環(huán)并含有1、2或3個(gè)單獨(dú)地選自n、o和s的雜原子并且其中的至少一個(gè)雜環(huán)是芳香性的基團(tuán)，術(shù)語(yǔ)“c3-c7雜環(huán)烷基”是指含有一個(gè)n原子作為環(huán)成員并且其他環(huán)成員為碳原子的3至7元飽和環(huán)狀烴基。

在本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)“c1-c6烷基”表示這樣的烴基：其可以是直鏈的或支鏈的，帶有單個(gè)或多個(gè)分支，其中所述烷基通常包含1至6個(gè)碳原子，例如，甲基(me)，乙基(et)，丙基，異丙基(i-丙基)，正丁基，i-丁基(異丁基)，2-丁基(仲丁基)，t-丁基(叔丁基)，異戊基，2-乙基-丙基，1，2-二甲基-丙基等。

術(shù)語(yǔ)“氰基”是指nc-。

術(shù)語(yǔ)″鹵素″表示氯(cl)，碘(i)，氟(f)和溴(br)。

術(shù)語(yǔ)″雜芳基″，單獨(dú)或與其它基團(tuán)組合，是指這樣的芳香性碳環(huán)基，其具有單個(gè)的4至8元環(huán)或者包含6至14個(gè)、特別是6至10個(gè)環(huán)原子并含有1、2或3個(gè)單獨(dú)地選自n、o和s的雜原子的多個(gè)稠合環(huán)，該基團(tuán)中至少一個(gè)雜環(huán)是芳香性的?！半s芳基”的實(shí)例包括：苯并呋喃基、苯并咪唑基、1h-苯并咪唑基、苯并噁嗪基、苯并噁唑基、苯并噻嗪基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并三唑基、呋喃基、咪唑基、吲唑基、1h-吲唑基、吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異噁唑基、噁唑基、吡嗪基、吡唑基、1h-吡唑基、吡唑并[1，5-a]吡啶基、噠嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹啉基、四唑基、噻唑基、噻吩基、三唑基、6，7-二氫-5h-[1]氮茚基等。特別的″雜芳基″是喹啉基、異喹啉基、吡啶基和吡嗪基。具體的″雜芳基″是喹啉-2-基、異喹啉-1-甲基、吡啶-2-基和吡嗪-2-基。

術(shù)語(yǔ)″羥基″表示-oh。

術(shù)語(yǔ)″氨基″表示-nh2。

術(shù)語(yǔ)″巰基″表示-sh。

術(shù)語(yǔ)″磺?；灞硎?s(o)2-。

術(shù)語(yǔ)″羧基″表示-co2h。

術(shù)語(yǔ)″酰胺基″表示-nhcor，其中r是c1-c6烷基。

術(shù)語(yǔ)″硝基″表示-no2。

術(shù)語(yǔ)″羰基″表示-co-。

術(shù)語(yǔ)″酯基″表示-coor，其中r是c1-c6烷基。

在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)z基團(tuán)為不同的氮雜環(huán)時(shí)，形成如下通式化合物：

其中t為碳元素或者氮元素(t＝c或者n)，u為氧元素、硫元素或氮元素(t＝o或s或n)；

此外，本發(fā)明還提供如下通式的化合物：

其中的各個(gè)取代基如上所定義。

在本發(fā)明中，所有通式還可以任選地包含下列的增溶基團(tuán)，電離或離子化取代基，其選自so3^-，po3^-，co2h，oh或nr3⁺，提供親水性特征的環(huán)糊精或糖或peg鏈；所述取代基任選地通過(guò)脂族基團(tuán)或雜脂族基團(tuán)或環(huán)狀間隔基連接至發(fā)色團(tuán)。

本發(fā)明涉及的含氮雜環(huán)基取代的烯類(lèi)化合物的鹽是指所述化合物與酸形成的鹽，所述酸例如為強(qiáng)無(wú)機(jī)酸、強(qiáng)有機(jī)酸、飽和或不飽和的二羧酸或磺酸，所述強(qiáng)無(wú)機(jī)酸包括硫酸、磷酸或鹽酸，所述強(qiáng)有機(jī)酸包括乙酸，所述飽和或不飽和的二羧酸包括酒石酸、檸檬酸，所述磺酸包括鄰甲基苯磺酸或?qū)谆交撬帷?/p>

在一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物是通式i

并且通式i的化合物的非限制實(shí)例是具有如下表1所示結(jié)構(gòu)式的化合物：

表1

在一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物是通式ii

并且通式ii的非限制實(shí)例是具有如下表2所示結(jié)構(gòu)式的化合物：

表2

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物是通式iii

并且通式iii的非限制實(shí)例是具有如下表3所示結(jié)構(gòu)式的化合物：

表3

在本發(fā)明的實(shí)施方案中，所述化合物是通式iv

并且通式iv的非限制實(shí)例是具有如下表4中所示結(jié)構(gòu)式的化合物：

表4

另外，本發(fā)明還提供通過(guò)結(jié)合抗體-染料技術(shù)，將上述染料化合物修飾成能與蛋白質(zhì)特異性反應(yīng)的染料，以如下化合物

為例，可以分別通過(guò)特異性地與氨基、巰基、羰基、炔基或疊氮基反應(yīng)而被修飾為具有以下結(jié)構(gòu)式的化合物：

該化合物還可以與蛋白質(zhì)標(biāo)簽技術(shù)結(jié)合，做成特異性標(biāo)記目標(biāo)蛋白的熒光探針，如下面兩個(gè)例子分別為halo-tag(此處的halo指的是一種蛋白質(zhì)標(biāo)簽技術(shù)，通過(guò)halo配體可以是熒光染料和蛋白質(zhì)特異性地結(jié)合，詳細(xì)描述見(jiàn)acschembiol.2008jun20；3(6)：373-82.tag是標(biāo)簽的意思)和snap-tag(此處的snap指的也是一種蛋白質(zhì)標(biāo)簽技術(shù)，通過(guò)snap配體可以是熒光染料和蛋白質(zhì)特異性地結(jié)合，詳細(xì)描述見(jiàn)chemistry&biology，2008，15(2)：128-136.tag是指標(biāo)簽)的熒光探針

以下將通過(guò)實(shí)例的方式來(lái)描述本發(fā)明中涉及到化合物的合成方法。

本發(fā)明中的一部分染料通過(guò)2-甲基喹啉或2-甲基喹喔啉或2-甲基吡啶或2，6-二甲基吡啶或2-甲基吡嗪與帶甲醛基的分子在對(duì)甲苯磺酰胺或乙酸酐的催化下合成染料，根據(jù)需要再進(jìn)一步進(jìn)行修飾。也包括先對(duì)帶甲醛的分子或其他反應(yīng)物進(jìn)行修飾，再最后合成染料。同一種染料也不限于一種合成方法。任何本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的化學(xué)反應(yīng)和方法都可以用來(lái)進(jìn)行合成該類(lèi)化合物，制備與提純這些化合物的方法不限于但包括本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法。

更具體地，本發(fā)明化合物通過(guò)如下的一般合成方法制備：

該分子3的一般合成步驟：

將分子1(通常為2-甲基喹啉)與同等摩爾比例對(duì)甲苯磺酰胺(tsnh2)混合溶于一定量甲苯中，升溫至120℃，電磁攪拌一定時(shí)間(大約三十分鐘)，再加入等摩爾比例的分子2，在120℃下反應(yīng)三至五天，用薄板層析tlc監(jiān)控反應(yīng)直至分子1與分子2反應(yīng)完全。停止反應(yīng)加熱與攪拌，冷卻至室溫，放置一段時(shí)間。對(duì)于固體產(chǎn)物，先進(jìn)行抽濾得到固體，再用乙醇或甲醇重結(jié)晶，或者直接用硅膠柱色譜法提純(洗脫液大致為乙酸乙酯∶石油醚＝1∶4-1∶2)，得到產(chǎn)物分子3。將其溶于氘代dmso或氘代氯仿中進(jìn)行核磁氫譜表征，并進(jìn)行esi質(zhì)譜表征。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物通過(guò)如下的一般合成方法制備：

該分子3的一般合成步驟為：

將分子1與同等摩爾比例的分子2混合，加入大約兩倍的乙酸酐，升溫至回流，反應(yīng)用薄板層析tlc監(jiān)控反應(yīng)直至分子1與分子2反應(yīng)完全。真空旋掉大部分乙酸酐和乙酸，把剩余的反應(yīng)物加入水中，用1m氫氧化鈉堿化。乙酸乙酯或者甲苯萃取三次，合并所有的有機(jī)相，用飽和食鹽水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，抽濾并旋干有機(jī)溶劑，甲醇或者乙醇重結(jié)晶或者直接用硅膠柱色譜法提純，得到分子3。將其溶于氘代dmso或氘代氯仿中進(jìn)行核磁氫譜表征，并進(jìn)行esi質(zhì)譜表征。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物通過(guò)如下的一般合成方法制備：

該分子3的一般合成步驟為：

將分子1與四丁基硫酸氫銨混合，加入5摩爾/升的氫氧化鈉水溶液，升溫至回流，加入與分子1同等摩爾比例的分子2，回流反應(yīng)。反應(yīng)完成后冷至室溫，抽濾得到粗產(chǎn)物，再重結(jié)晶提純。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物通過(guò)如下的一般合成方法制備：

該分子3的一般合成步驟為：

將分子1(1mmol)、分子2(2mmol)、三氟甲磺酸鈣(5mol％)和四丁基六氟磷酸胺(2mol％)溶于甲苯中，加熱至130度回流反應(yīng)，用薄板層析tlc監(jiān)控反應(yīng)直至分子1與分子2反應(yīng)完全。停止反應(yīng)加熱與攪拌，旋干溶劑。粗產(chǎn)物溶于二氯甲烷，吸附于硅膠通過(guò)硅膠柱色譜法提純。

在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)合成的化合物帶有羥基時(shí)，為了在反應(yīng)中保護(hù)羥基，加入二氫呋喃做保護(hù)，化合物通過(guò)如下的一般合成方法制備：

該分子3的一般合成步驟為：

將分子1(1當(dāng)量)、3，4-二氫-2h-吡喃(1.2當(dāng)量)和對(duì)甲基苯磺酸(0.005當(dāng)量)混合溶于10ml甲苯中，升溫至120度，再加入分子2(1當(dāng)量)和對(duì)甲苯磺酰胺(1當(dāng)量)，在120℃下反應(yīng)一天，用薄板層析tlc監(jiān)控反應(yīng)直至反應(yīng)完全。停止反應(yīng)，冷卻至室溫，加入30ml水、30ml四氫呋喃(thf)和3ml醋酸，放置一段時(shí)間，析出沉淀，抽濾得到固體，乙醇洗，再用乙醇重結(jié)晶，得到目標(biāo)產(chǎn)物。

在一個(gè)實(shí)施方案中，化合物通過(guò)如下的一般合成方法制備：

該分子一般合成步驟為：

將1.44g2-甲基喹喔啉和5mmol的相應(yīng)的醛加入含有0.215g甲基三辛基氯化銨的70ml氫氧化鈉溶液中(5m)，加熱攪拌回流15小時(shí)，冷卻，沉淀過(guò)濾，并用水洗滌，重結(jié)晶或硅膠柱色譜法提純產(chǎn)物。

在一個(gè)實(shí)施方案中，化合物通過(guò)如下的一般合成方法制備：

該分子一般合成步驟為：

將1.3g鹽酸胍、36ml甲醇鈉加入90ml無(wú)水甲醇中，過(guò)濾掉沉淀，向?yàn)V液中加入1.5g相應(yīng)的2-氨基-3-氰基-6-取代的吡啶，加熱回流18h，冷卻至室溫，過(guò)濾，用甲醇洗滌沉淀，在dmf中重結(jié)晶。

在一個(gè)實(shí)施方案中，化合物通過(guò)如下的一般合成方法制備：

該分子一般合成步驟為：

將0.5mmol和0.7mmol的tes-烯醚烯酮溶解在2ml甲苯中，加入高壓管中，除氣10min，加入0.025mmol的pd(oac)2，0.05dtbpf，0.7mmolcsf，0.7mmolbu3snf，在氬氣氛圍下加熱至120℃反應(yīng)2-4h，冷卻至室溫，加入10ml乙醚，所得漿液通過(guò)硅藻土過(guò)濾，濾液用乙醚萃取并用1m氫氧化鈉溶液洗滌，濃縮有機(jī)層，粗產(chǎn)物用硅膠柱色譜提純(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶18)。

在一個(gè)實(shí)施方案中，化合物通過(guò)如下的一般合成方法制備：

該分子一般合成步驟為：

將1.88g4-甲基嘧啶和1.8mmol相應(yīng)的醛加入含有0.86g甲基三辛基氯化銨的200ml氫氧化鈉溶液中(5m)，加熱攪拌回流2h，冷卻，沉淀過(guò)濾，并用水洗滌。硅膠柱色譜提純或者重結(jié)晶方式提純。

在一個(gè)實(shí)施方案中，化合物通過(guò)如下的一般合成方法制備：

該分子一般合成步驟為：

稱(chēng)取均三嗪1.8g(15mmol)、相應(yīng)的醛2.23g(15mmol)和氫氧化鉀0.34g溶于60ml甲醇中，回流攪拌反應(yīng)14h.過(guò)濾得到淡黃色固體，以v(乙酸乙酯)∶v(石油醚)＝1∶2的混合物為洗脫劑，進(jìn)行柱色譜分離，得到目標(biāo)產(chǎn)物。

在一個(gè)實(shí)施方案中，化合物通過(guò)如下的一般合成方法制備：

該分子一般合成步驟為：

將1.83ml3-甲基噠嗪、4.07ml相應(yīng)的醛、0.545g氯化鋅混合，150℃下攪拌2小時(shí)。冷卻至室溫，加入氫氧化鈉水溶液使其分相，分出有機(jī)相，用飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑，用硅膠柱色譜提純(洗脫液為氯仿∶甲醇＝20∶1)得到目標(biāo)產(chǎn)物

在一個(gè)實(shí)施方案中，化合物通過(guò)如下的一般合成方法制備：

該分子一般合成步驟為：

氬氣氛圍下，向火焰干燥的微波瓶中加入加入10mmol的芐醇，10mmol的三乙膦氫溴酸，用封口膜將瓶密封，100℃下攪拌8h。除去密封膜，加入4ml水和11mol的氫氧化鈉粉末，攪拌3分鐘后再超聲5分鐘。加入10mmol的吡咯-2-甲醛，小瓶加蓋后在100℃下微波中照射25min，粗產(chǎn)物用二氯甲烷萃取后用無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮后粗產(chǎn)物用硅膠柱色譜提純(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶4)

在一個(gè)實(shí)施方案中，化合物通過(guò)如下的一般合成方法制備：

該分子一般合成步驟為：

將1.04gn，n-二甲基硫代脲溶解在50ml乙醇中，再將1.79g的n，n-二甲基甲酰胺二甲縮醛(dmf-dma)加入其中。加熱攪拌4h，旋蒸掉溶劑，剩余物質(zhì)溶解在50ml乙腈中，再加入15mmol相應(yīng)的肉桂基溴，加熱回流6h，加入10ml三乙胺后再攪拌30分鐘，旋干溶劑，加入30ml水，用二氯甲烷萃取(3×30ml)，合并有幾層，無(wú)水硫酸鎂干燥，粗產(chǎn)物用硅膠柱色譜法提純。

在一個(gè)實(shí)施方案中，化合物通過(guò)如下的一般合成方法制備：

該分子一般合成步驟為：

1.66g鹽酸羥胺和1.97ml吡啶和1g的a加到10ml乙醇中，回流6h，冷卻至室溫，旋掉溶劑，粗產(chǎn)物導(dǎo)入冰水中攪拌1h，沉淀過(guò)濾，干燥，并在甲醇和二氯甲烷的混合液中重結(jié)晶得到目標(biāo)產(chǎn)物。

在一個(gè)實(shí)施方案中，化合物通過(guò)如下的一般合成方法制備：

該分子一般合成步驟為：

將0.5g水合肼、濃鹽酸、1.0g的a加入10ml乙醇中，回流6h，冷卻至室溫，旋掉溶劑，粗產(chǎn)物導(dǎo)入冰水中攪拌1h，沉淀過(guò)濾，干燥，并在甲醇和二氯甲烷的混合液中重結(jié)晶得到目標(biāo)產(chǎn)物。

通過(guò)上述合成方法可以看出，本發(fā)明涉及一系列的熒光染料化合物的合成簡(jiǎn)單，大部分染料通過(guò)碳?xì)滏I活化反應(yīng)一步就能得到產(chǎn)物，而且產(chǎn)率高，后處理簡(jiǎn)單，通過(guò)重結(jié)晶或過(guò)柱能得到高純度的染料。

以下本發(fā)明將結(jié)合具體實(shí)施例作進(jìn)一步的說(shuō)明。

實(shí)施例1、(e)-2-(4-甲氧基苯乙烯基)喹啉的合成(i-2025)

將0.83g2-甲基喹啉、1.00g對(duì)甲苯磺酰胺(tsnh2)混合溶于10ml甲苯中，升溫至120℃，再加入0.79g對(duì)甲氧基苯甲醛，在120℃下反應(yīng)三天，用薄板層析tlc監(jiān)控反應(yīng)直至反應(yīng)完全。停止反應(yīng)加熱與攪拌，冷卻至室溫，抽濾得到固體，乙醇洗，再用乙醇重結(jié)晶，得到目標(biāo)產(chǎn)物為淺黃色固體，產(chǎn)率82％。

¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ8.12(d，j＝8.6hz，1h)，8.06(d，j＝8.5hz，1h)，7.85-7.55(m，6h)，7.49(t，j＝7.5hz，1h)，7.32(d，j＝7.9hz，1h)，6.94(d，j＝8.7hz，2h)，3.86(s，3h).

實(shí)施例2、(e)-n-(4-(2-(喹啉-2-基)乙烯基)苯基)乙酰胺的合成(i-2061)

按照實(shí)施例1的相同過(guò)程，只是將對(duì)甲氧基苯甲醛替換為等當(dāng)量的對(duì)乙酰氨基苯甲醛，得到的固體用乙醇洗，再用乙醇重結(jié)晶，由此得到(e)-n-(4-(2-(喹啉-2-基)乙烯基)苯基)乙酰胺，淺黃色固體，產(chǎn)率89％。

¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ8.11(d，j＝8.6hz，1h)，8.07(d，j＝8.5hz，1h)，7.78(d，j＝8.0hz，1h)，7.73-7.45(m，8h)，7.33(d，j＝16.3hz，1h)，2.19(s，3h)，1.72(s，1h).

實(shí)施例3、按照實(shí)施例1的程序，只是將2-甲基喹啉分別替換為等當(dāng)量的2，6-二甲基喹啉和6-溴-2-甲基喹啉，由此得到(e)-n，n-二甲基-4-(2-(6-甲基喹啉-2-基)乙烯基)苯胺和(e)-4-(2-(6-溴喹啉-2-基)乙烯基)-n，n-二甲基苯胺。

(e)-n，n-二甲基-4-(2-(6-甲基喹啉-2-基)乙烯基)苯胺(i-2063)

¹hnmr(300mhz，dmso)δ8.17(d，j＝8.6hz，1h)，7.83(d，j＝8.6hz，1h)，7.71(dd，j＝18.8，12.3hz，3h)，7.55(d，j＝8.6hz，3h)，7.17(d，j＝16.3hz，1h)，6.76(d，j＝8.8hz，2h)，2.97(s，6h)，2.48(s，3h).

實(shí)施例4、(e)-4-(2-(6-溴喹啉-2-基)乙烯基)-n，n-二甲基苯胺(i-2069)

¹hnmr(400mhz，dmso)δ8.26(d，j＝8.7hz，1h)，8.19(d，j＝2.2hz，1h)，7.89-7.71(m，4h)，7.57(d，j＝8.8hz，2h)，7.19(d，j＝16.3hz，1h)，6.76(d，j＝8.9hz，2h)，2.95(d，j＝23.9hz，6h).

按照實(shí)施例1的程序，只是將對(duì)二甲胺基苯甲醛替換為等當(dāng)量的各種苯甲醛衍生物，得到相對(duì)應(yīng)的以下化合物。

實(shí)施例5、(e)-4-(2-(喹啉-2-基)乙烯基)苯胺(i-2062)，產(chǎn)率76％。

¹hnmr(400mhz，dmso)δ8.26(d，j＝8.6hz，1h)，7.91(dd，j＝13.5，8.2hz，2h)，7.77(d，j＝8.6hz，1h)，7.69(dd，j＝17.9，11.6hz，2h)，7.50(t，j＝7.4hz，1h)，7.42(d，j＝8.4hz，2h)，7.13(d，j＝16.2hz，1h)，6.61(d，j＝8.4hz，2h)，5.54(s，2h).

實(shí)施例6、(e)-n，n-二甲基-4-(2-(喹啉-2-基)乙烯基)苯胺的合成(i-2060)

¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ8.05(dd，j＝8.2，5.8hz，2h)，7.74(d，j＝7.9hz，1h)，7.71-7.57(m，3h)，7.54(d，j＝8.8hz，2h)，7.45(t，j＝7.4hz，1h)，7.22(d，j＝16.3hz，1h)，6.73(d，j＝8.8hz，2h)，3.01(s，6h)

實(shí)施例7、(e)-2-(4-溴苯乙烯基)喹啉(i-2027)，產(chǎn)率94％。

¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ8.14(d，j＝8.6hz，1h)，8.08(d，j＝8.5hz，1h)，7.79(d，j＝8.0hz，1h)，7.72(t，j＝7.7hz，1h)，7.68-7.60(m，2h)，7.56-7.47(m，5h)，7.38(d，j＝16.3hz，1h).

實(shí)施例8、(e)-2-(4-甲基苯乙烯基)喹啉(i-2028)

¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ8.12(d，j＝8.6hz，1h)，8.07(d，j＝8.4hz，1h)，7.81-7.75(m，1h)，7.73-7.67(m，2h)，7.65(d，j＝7.7hz，1h)，7.54(d，j＝8.0hz，2h)，7.49(dd，j＝11.0，3.9hz，1h)，7.37(d，j＝16.3hz，1h)，7.21(d，j＝7.9hz，2h)，2.39(s，3h).

實(shí)施例9、(e)-甲基4-(2-(喹啉-2-基)乙烯基)苯酸酯(i-2029)，產(chǎn)率79％。

¹hnmr(400mhz，丙酮)δ8.35(d，j＝8.5hz，1h)，8.07(d，j＝8.3hz，3h)，7.96(d，j＝5.0hz，1h)，7.93(d，j＝2.3hz，1h)，7.89(dd，j＝8.4，3.2hz，3h)，7.77(dd，j＝11.2，4.1hz，1h)，7.64(d，j＝16.3hz，1h)，7.58(t，j＝7.5hz，1h)，3.93(d，j＝11.8hz，3h).

實(shí)施例10、(e)-2，2′-((4-(2-(喹啉-2-基)乙烯基)苯基)氮烷二基)二乙醇(i-2064)，產(chǎn)率81％。

¹hnmr(400mhz，dmso)δ8.26(d，j＝8.6hz，1h)，7.93(d，j＝8.3hz，1h)，7.89(d，j＝8.0hz，1h)，7.79(d，j＝8.7hz，1h)，7.75-7.66(m，2h)，7.51(dd，j＝15.8，8.0hz，3h)，7.17(d，j＝16.2hz，1h)，6.75(d，j＝8.8hz，2h)，4.82(s，2h)，3.58(t，j＝6.1hz，4h)，3.48(t，j＝6.1hz，4h).

實(shí)施例11、(e)-2，6-二溴-4-(2-(喹啉-2-基)乙烯基)苯基乙酸酯(i-2033)，產(chǎn)率86％。

¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ8.17(d，j＝8.5hz，1h)，8.09(d，j＝8.4hz，1h)，7.81(d，j＝9.0hz，3h)，7.74(dd，j＝11.2，4.2hz，1h)，7.65-7.50(m，3h)，7.35(d，j＝16.2hz，1h)，2.42(s，3h).

實(shí)施例12、(e)-2-(4-(戊氧基)苯乙烯基)喹啉(i-2035)，產(chǎn)率94％。

¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ8.12(d，j＝8.5hz，1h)，8.10-8.03(m，1h)，7.78(d，j＝8.0hz，1h)，7.74-7.62(m，3h)，7.58(d，j＝8.6hz，2h)，7.50(dd，j＝13.3，6.0hz，1h)，7.31(s，1h)，6.93(d，j＝8.6hz，2h)，4.00(t，j＝6.6hz，2h)，1.86-1.74(m，2h)，1.51-1.35(m，4h)，0.94(t，j＝7.0hz，3h).

實(shí)施例13、(e)-2-(4-(癸氧基)苯乙烯基)喹啉(i-2036)，產(chǎn)率93％。

¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ8.11(d，j＝8.6hz，1h)，8.07(d，j＝8.4hz，1h)，7.78(d，j＝8.1hz，1h)，7.72-7.61(m，3h)，7.58(d，j＝8.7hz，2h)，7.48(t，j＝7.4hz，1h)，7.30(d，j＝7.1hz，1h)，6.93(d，j＝8.7hz，2h)，4.00(dd，j＝14.7，8.1hz，2h)，1.85-1.74(m，2h)，1.51-1.41(m，2h)，1.30(d，j＝18.5hz，12h)，0.89(t，j＝6.3hz，3h).

實(shí)施例14、(e)-2-(4-硝基苯乙烯基)喹啉(i-2044)，產(chǎn)率89％。

¹hnmr(400mhz，dmso)δ8.43(d，j＝8.6hz，1h)，8.29(d，j＝8.6hz，2h)，8.07-7.92(m，6h)，7.77(dd，j＝20.6，12.2hz，2h)，7.61(t，j＝7.4hz，1h).

實(shí)施例15、(e)-2-(4-(甲磺酰)苯乙烯基)喹啉(i-2045)，產(chǎn)率91％。

¹hnmr(400mhz，dmso)δ8.42(d，j＝8.6hz，1h)，8.07-7.89(m，8h)，7.79(ddd，j＝8.4，6.9，1.4hz，1h)，7.71(d，j＝16.4hz，1h)，7.63-7.58(m，1h)，3.27(s，3h).

實(shí)施例16、(e)-4-(2-(喹啉-2-基)乙烯基)苯甲腈(i-2046)，產(chǎn)率96％。

¹hnmr(400mhz，dmso)δ8.41(d，j＝8.5hz，1h)，8.05-7.86(m，8h)，7.78(ddd，j＝8.4，6.9，1.4hz，1h)，7.69(d，j＝16.4hz，1h)，7.60(ddd，j＝8.0，6.9，1.1hz，1h).

實(shí)施例17、n，n-二甲基-4-((1e，3e)-4-(喹啉-2-基)丁-1，3-二烯-1-基)苯胺(i-2067)，產(chǎn)率92％。

¹hnmr(400mhz，dmso)δ8.27(d，j＝8.6hz，1h)，7.91(t，j＝9.3hz，2h)，7.77-7.67(m，2h)，7.60(dd，j＝15.5，10.6hz，1h)，7.54-7.48(m，1h)，7.41(d，j＝8.8hz，2h)，6.98(dd，j＝15.3，10.7hz，1h)，6.86(d，j＝6.0hz，1h)，6.82(d，j＝6.1hz，1h)，6.72(d，j＝8.9hz，2h)，2.09(s，6h).

實(shí)施例18、2-((1e，3e)-4-(4-甲氧苯基)丁-1，3-二烯-1-基)喹啉(i-2048)，產(chǎn)率81％。

¹hnmr(400mhz，dmso)δ8.30(d，j＝8.6hz，1h)，7.94(dd，j＝11.5，8.3hz，2h)，7.80-7.70(m，2h)，7.62(dd，j＝15.4，10.8hz，1h)，7.54(dd，j＝7.5，4.7hz，3h)，7.11(dd，j＝15.5，10.8hz，1h)，6.94(dd，j＝18.6，12.0hz，4h)，3.82-3.76(m，3h).

實(shí)施例19、(e)-2-(4-氯苯乙烯基)喹啉(i-2049)，產(chǎn)率92％。

¹hnmr(400mhz，dmso)δ8.37(d，j＝8.6hz，1h)，8.00(d，j＝8.5hz，1h)，7.98-7.93(m，1h)，7.90-7.81(m，2h)，7.81-7.73(m，3h)，7.61-7.47(m，4h).

實(shí)施例20、(e)-2-(2-(萘-2-基)乙烯基)喹啉(i-2050)，產(chǎn)率91％。

¹hnmr(400mhz，dmso)δ8.39(d，j＝8.6hz，1h)，8.20(s，1h)，8.06-7.91(m，8h)，7.77(ddd，j＝8.4，6.9，1.4hz，1h)，7.65(d，j＝16.3hz，1h)，7.61-7.51(m，3h).

實(shí)施例21、(e)-2-(2-(1h-吲哚-5-基)乙烯基)喹啉(i-2051)，產(chǎn)率89％。

¹hnmr(400mhz，dmso)δ11.26(s，1h)，8.32(d，j＝8.6hz，1h)，8.01-7.84(m，5h)，7.73(ddd，j＝8.4，6.9，1.4hz，1h)，7.59-7.50(m，2h)，7.45(d，j＝8.5hz，1h)，7.38(dd，j＝10.7，7.3hz，2h)，6.53-6.44(m，1h).

實(shí)施例22、(e)-2-(甲基(4-(2-(喹啉-2-基)乙烯基)苯基)氨基)乙醇(i-2052)，產(chǎn)率88％。

¹hnmr(400mhz，dmso)δ8.27(d，j＝8.6hz，1h)，7.91(dd，j＝12.6，8.0hz，2h)，7.79(d，j＝8.7hz，1h)，7.76-7.68(m，2h)，7.58-7.46(m，3h)，7.18(d，j＝16.3hz，1h)，6.74(d，j＝8.9hz，2h)，4.73(t，j＝5.4hz，1h)，3.57(q，j＝6.0hz，2h)，3.45(t，j＝6.1hz，2h)，3.00(s，3h).

實(shí)施例23、(e)-2-(2-(1h-吲哚-4-基)乙烯基)喹啉(i-2053)，產(chǎn)率87％。

¹hnmr(400mhz，dmso)δ11.34(s，1h)，8.36(d，j＝8.6hz，1h)，8.19(d，j＝16.4hz，1h)，8.02(dd，j＝8.5，5.0hz，2h)，7.95(d，j＝8.0hz，1h)，7.75(t，j＝7.5hz，1h)，7.61-7.42(m，5h)，7.17(t，j＝7.7hz，1h)，6.97(s，1h).

實(shí)施例24、(e)-2-(2-(芘-1-基)乙烯基)喹啉(i-2054)，產(chǎn)率96％。

¹hnmr(400mhz，dmso)δ8.98(d，j＝16.1hz，1h)，8.83(d，j＝9.4hz，1h)，8.66(d，j＝8.2hz，1h)，8.45(d，j＝8.6hz，1h)，8.40-8.31(m，4h)，8.25(d，j＝9.5hz，3h)，8.11(dd，j＝15.2，7.7hz，2h)，8.01(d，j＝7.6hz，1h)，7.84-7.76(m，2h)，7.64-7.57(m，1h).

實(shí)施例25、(e)-4-(2-(喹啉-2-基)乙烯基)苯酚的合成(i-2026)

將0.78g對(duì)羥基苯甲醛(1當(dāng)量)、0.7毫升3，4-二氫-2h-吡喃(1.2當(dāng)量)和6.1mg對(duì)甲基苯磺酸(0.005當(dāng)量)混合溶于10ml甲苯中，升溫至120度，再加入0.91g2-甲基喹啉(1當(dāng)量)和1.10g對(duì)甲苯磺酰胺(1當(dāng)量)，在120℃下反應(yīng)一天，用薄板層析tlc監(jiān)控反應(yīng)直至反應(yīng)完全。停止反應(yīng)，冷卻至室溫，加入30ml水、30ml四氫呋喃(thf)和3ml醋酸，析出黃色沉淀，抽濾得到固體，乙醇洗，再用乙醇重結(jié)晶，得到目標(biāo)產(chǎn)物為黃色固體，產(chǎn)率76％。

¹hnmr(400mhz，丙酮)δ8.28(d，j＝8.6hz，1h)，8.02(d，j＝8.4hz，1h)，7.90(d，j＝8.1hz，1h)，7.85-7.76(m，2h)，7.76-7.70(m，1h)，7.60(d，j＝8.5hz，2h)，7.53(dd，j＝11.0，4.0hz，1h)，7.31(d，j＝16.3hz，1h)，6.92(d，j＝8.6hz，2h).

實(shí)施例26、(e)-2，6-二溴-4-(2-(喹啉-2-基)乙烯基)苯酚的合成

將2.00g3，5-二溴-4-羥基苯甲醛溶于10ml乙酸酐，加熱到回流，反應(yīng)兩個(gè)小時(shí)，停止反應(yīng)，旋去殘留的乙酸酐和乙酸，然后加入0.96ml2-甲基喹啉(1當(dāng)量)和1.22g對(duì)甲苯磺酰胺(1當(dāng)量)，再加入10ml甲苯中，升溫至120度反應(yīng)三天，用薄板層析tlc監(jiān)控反應(yīng)直至反應(yīng)完全。停止反應(yīng)，冷卻至室溫，旋干溶劑，過(guò)柱，將得到的固體用乙醇重結(jié)晶，得到產(chǎn)物q。

取分子q0.58g溶于5ml乙醇，加入氫氧化鈉1.00g、5ml水，加熱回流反應(yīng)兩個(gè)小時(shí)，停止反應(yīng)，用冰醋酸調(diào)ph到7，得到深紫色沉淀，抽濾出沉淀，水洗，真空干燥，得到產(chǎn)物k。

(e)-2，6-二溴-4-(2-(喹啉-2-基)乙烯基)苯基乙酸酯(i-2033)，產(chǎn)率76％。

¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ8.17(d，j＝8.5hz，1h)，8.09(d，j＝8.4hz，1h)，7.81(d，j＝9.0hz，3h)，7.74(dd，j＝11.2，4.2hz，1h)，7.65-7.50(m，3h)，7.35(d，j＝16.2hz，1h)，2.42(s，3h).

(e)-2，6-二溴-4-(2-(喹啉-2-基)乙烯基)苯酚(i-2031)，產(chǎn)率92％。

¹hnmr(400mhz，dmso)δ8.33(d，j＝8.6hz，1h)，7.95(dd，j＝9.8，6.6hz，4h)，7.80-7.65(m，3h)，7.55(t，j＝7.1hz，1h)，7.38(d，j＝16.2hz，1h).

實(shí)施例27、按照實(shí)施例5的程序，只是將3，5-二溴-4-羥基苯甲醛替換為等當(dāng)量的3-溴-4-羥基苯甲醛或丁香醛或3，4-二羥基苯甲醛或香蘭素或3-羥基-4-甲氧基苯甲醛，得到相對(duì)應(yīng)的以下化合物。

(e)-2-溴-4-(2-(喹啉-2-基)乙烯基)苯酚(i-2032)，產(chǎn)率86％。

¹hnmr(400mhz，dmso)δ8.23(d，j＝8.6hz，1h)，7.89(dd，j＝12.3，8.1hz，2h)，7.70(dt，j＝8.6，7.8hz，3h)，7.62(d，j＝16.1hz，1h)，7.48(t，j＝7.4hz，1h)，7.36(d，j＝8.5hz，1h)，7.03(d，j＝16.1hz，1h)，6.69(d，j＝8.0hz，1h).

實(shí)施例28、(e)-2，6-二甲氧基-4-(2-(喹啉-2-基)乙烯基)苯酚(i-2037)，產(chǎn)率93％。

¹hnmr(400mhz，dmso)δ8.74(s，1h)，8.32(d，j＝8.6hz，1h)，7.94(t，j＝8.8hz，2h)，7.82(d，j＝8.6hz，1h)，7.75(dd，j＝15.6，5.5hz，2h)，7.54(t，j＝7.1hz，1h)，7.37(d，j＝16.3hz，1h)，7.05(s，2h)，3.85(s，6h).

實(shí)施例29、(e)-4-(2-(喹啉-2-基)乙烯基)苯-1，2-二酚(i-2039)，產(chǎn)率84％。

¹hnmr(400mhz，dmso)δ9.34(s，1h)，9.10(s，1h)，8.30(d，j＝8.6hz，1h)，7.94(dd，j＝15.2，8.1hz，2h)，7.83(d，j＝8.6hz，1h)，7.76-7.63(m，2h)，7.53(t，j＝7.4hz，1h)，7.14(dd，j＝12.4，9.1hz，2h)，7.02(dd，j＝8.2，1.8hz，1h)，6.79(d，j＝8.1hz，1h).

實(shí)施例30、(e)-2-甲氧基-4-(2-(喹啉-2-基)乙烯基)苯基乙酸酯(i-2041)，產(chǎn)率89％。

¹hnmr(300mhz，dmso)δ8.37(d，j＝8.6hz，1h)，8.03-7.93(m，2h)，7.86(dd，j＝12.5，10.1hz，2h)，7.80-7.72(m，1h)，7.61-7.49(m，3h)，7.32(dd，j＝8.2，1.7hz，1h)，7.14(d，j＝8.1hz，1h)，3.89(s，3h)，2.28(s，3h).

實(shí)施例31、(e)-2-甲氧基-4-(2-(喹啉-2-基)乙烯基)苯酚(i-2040)，產(chǎn)率86％。

¹hnmr(400mhz，dmso)δ8.31(d，j＝8.6hz，1h)，7.94(dd，j＝12.8，8.2hz，2h)，7.82(d，j＝8.6hz，1h)，7.78-7.69(m，2h)，7.53(t，j＝7.0hz，1h)，7.33(dd，j＝14.3，9.0hz，2h)，7.13(dd，j＝8.2，1.7hz，1h)，6.83(d，j＝8.1hz，1h)，3.87(s，3h).

實(shí)施例32、(e)-2-甲氧基-5-(2-(喹啉-2-基)乙烯基)苯基乙酸酯(i-2042)，產(chǎn)率85％。

¹hnmr(400mhz，dmso)δ8.37(d，j＝8.6hz，1h)，7.98(dd，j＝16.3，7.9hz，2h)，7.91-7.81(m，2h)，7.76(ddd，j＝8.4，6.9，1.4hz，1h)，7.61-7.50(m，3h)，7.32(dd，j＝8.2，1.8hz，1h)，7.16(dd，j＝7.6，4.3hz，1h)，3.89(s，3h)，2.29(d，j＝6.8hz，3h).

實(shí)施例33、(e)-2-甲氧基-5-(2-(喹啉-2-基)乙烯基)苯酚(i-2043)，產(chǎn)率79％。

¹hnmr(400mhz，dmso)δ9.37(s，1h)，8.31(d，j＝8.6hz，1h)，7.94(dd，j＝12.5，7.9hz，2h)，7.82(d，j＝8.6hz，1h)，7.73(ddd，j＝8.4，5.9，3.2hz，2h)，7.56-7.50(m，1h)，7.34(dd，j＝14.6，9.1hz，2h)，7.14(dd，j＝8.2，1.9hz，1h)，6.82(d，j＝8.1hz，1h)，3.87(s，3h).

實(shí)施例34、按照實(shí)施例5的第二部分的類(lèi)似程序，將0.5g分子h溶于5ml乙醇，然后加入氫氧化鈉1.00g、5ml水，加熱回流反應(yīng)兩個(gè)小時(shí)，停止反應(yīng)，用冰醋酸調(diào)ph到7，得到沉淀，抽濾出沉淀，水洗，真空干燥，得到產(chǎn)物i。

(e)-4-(2-(喹啉-2-基)乙烯基)苯甲酸(i-2030)，產(chǎn)率75％。

¹hnmr(400mhz，dmso)δ13.03(s，1h)，8.40(d，j＝8.5hz，1h)，8.05-7.84(m，8h)，7.77(t，j＝7.3hz，1h)，7.61(dd，j＝21.4，11.9hz，2h).

實(shí)施例35、(e)-2-(4-(吖丁啶-1-基)苯乙烯基)喹啉的合成(i-2059)

將1.24g對(duì)氟苯甲醛(0.01mol)、0.57g雜氮環(huán)丁烷(0.01mol)和1.38g碳酸鉀(0.01mol)混合均勻，加入10ml二甲基亞砜，水浴下超聲30分鐘，傾倒入400ml水，用100ml乙醚萃取三次，合并乙醚相，飽和食鹽水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干，投入下一步反應(yīng)。

按照實(shí)施例1的程序，只是將對(duì)二甲胺基苯甲醛替換為等當(dāng)量的對(duì)吖丁啶基苯甲醛，得到(e)-2-(4-(吖丁啶-1-基)苯乙烯基)喹啉，產(chǎn)率54％。

¹hnmr(400mhz，cd3od_spe)δ8.23(d，j＝8.6hz，1h)，7.95(d，j＝8.5hz，1h)，7.85(d，j＝8.5hz，2h)，7.71(t，j＝7.2hz，1h)，7.63(d，j＝16.3hz，1h)，7.51(t，j＝7.9hz，3h)，7.18(d，j＝16.4hz，1h)，6.48(d，j＝8.4hz，2h)，3.93(t，j＝7.2hz，4h)，2.46-2.33(m，2h).

實(shí)施例36、2，2′-((4-((1e，3e)-4-(喹啉-2-基)丁-1，3-二烯-1-基)苯基)氮烷二基)二乙醇的合成(i-2068)

將0.89g4-(二(2-羥基乙基)氨基)苯甲醛溶于10ml四氫呋喃，加入2.58g(1，3-二氧環(huán)戊基-2-甲基)三苯基溴化膦、0.24g氫化鈉和0.13g18-冠-6醚。冰浴下反應(yīng)30分鐘，升至室溫反應(yīng)24小時(shí)，加入4ml濃鹽酸淬滅，碳酸鉀中和，乙酸乙酯萃取，硫酸鈉干燥，旋干過(guò)柱層析。

按照實(shí)施例1的程序，只是對(duì)二甲胺基苯甲醛替換為等當(dāng)量的(e)-3-(4-(二(2-羥基乙基)氨基)苯基)丙烯?；?，反應(yīng)得到2，2′-((4-((1e，3e)-4-(喹啉-2-基)丁-1，3-二烯-1-基)苯基)氮烷二基)二乙醇，產(chǎn)率33％。

¹hnmr(400mhz，dmso)δ8.26(d，j＝8.6hz，1h)，7.91(dd，j＝13.8，8.3hz，2h)，7.78(d，j＝8.6hz，1h)，7.71(dd，j＝16.2，8.3hz，2h)，7.51(dd，j＝16.3，7.9hz，3h)，7.17(d，j＝16.2hz，1h)，6.72(dd，j＝17.1，8.7hz，2h)，4.80(t，j＝5.1hz，2h)，3.57(dd，j＝11.6，5.8hz，4h)，3.48(t，j＝6.2hz，4h).

實(shí)施例37、(e)-1，2-二(喹啉-2-基)乙烯的合成(i-2003)

將0.78g2-甲醛喹啉和0.71g2-甲基喹啉中加入4ml乙酸酐，150℃回流反應(yīng)24小時(shí)，旋去殘留乙酸酐和乙酸，加入30ml水，用氫氧化鈉調(diào)中性，乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干后過(guò)柱，得到(e)-1，2-二(喹啉-2-基)乙烯，產(chǎn)率51％。

¹hnmr(200mhz，cdcl3)-δppm：7.51(dd，j＝7.6，7.2hz，2h，h-3)，7.71(dd，j＝7.9，7.1hz，2h，h-7)，7.81(d，j＝9.6，4h，h-3，5)，7.87(s，2h，h-1′)，8.08(d，j＝8.4hz，2h，h-8)，8.19(d，j＝8.6hz，2h，h-4)；

實(shí)施例38、(e)-n，n-二甲基-4-(2-(吡嗪-2-基)乙烯基)苯胺的合成(ii-2070)

將2-甲基吡嗪0.47g(5mmol)與0.17g四丁基硫酸氫銨(0.5mmol)混合，加入5摩爾每升的氫氧化鈉水溶液25ml，升溫至回流，加入5mmol對(duì)二甲胺基苯甲醛，回流反應(yīng)。反應(yīng)完成后冷至室溫，抽濾得到粗產(chǎn)物，再用乙醇重結(jié)晶提純得到產(chǎn)物，產(chǎn)率56％。

¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ8.81(s，1h)，7.84(d，j＝8.1hz，2h)，7.76(d，j＝8.5hz，2h)，7.29(d，j＝8.0hz，2h)，6.66(d，j＝8.8hz，2h)，3.09(s，6h).

實(shí)施例39、4，4′-((1e，1′e)-吡啶-2，6-二基二(乙烯-2，1-二基))二(n，n-二甲基苯胺)的合成(ii-2071)

將2，6-二甲基吡啶(1mmol)、對(duì)二甲胺基苯甲醛(2mmol)、三氟甲磺酸鈣(5mol％)和四丁基六氟磷酸胺(2mol％)溶于甲苯中，加熱至130度回流反應(yīng)，用薄板層析tlc監(jiān)控反應(yīng)直至分子1與分子2反應(yīng)完全。停止反應(yīng)加熱與攪拌，旋干溶劑。粗產(chǎn)物溶于二氯甲烷，吸附于硅膠通過(guò)硅膠柱色譜法提純，產(chǎn)率51％。

¹hnmr(dmso-d6)：δ3.02(12h，s)，6.78(4h，d，j＝8.8hz)，7.32(2h，d，³j＝16.0hz)，7.65-7.71(6h，m)，8.08(2h，d，j＝8.1hz)，8.00(1h，tj＝8.1hz)

實(shí)施例40、(e)-4-(2-(異喹啉-1-基)乙烯基)-n，n-二甲基苯胺的合成(i-2098)

按照實(shí)施例1的程序，只是將2-甲基喹啉替換為等當(dāng)量的甲基異喹啉，得到(e)-4-(2-(異喹啉-1-基)乙烯基)-n，n-二甲基苯胺，產(chǎn)率83％。

¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ8.52(d，j＝5.6hz，1h)，8.39(d，j＝8.4hz，1h)，7.97(d，j＝15.4hz，1h)，7.86-7.77(m，2h)，7.67(t，j＝7.4hz，1h)，7.62(d，j＝8.5hz，3h)，7.50(d，j＝5.6hz，1h)，6.75(d，j＝8.6hz，2h)，3.03(s，6h).

實(shí)施例41、按照實(shí)施例11的程序，只是將對(duì)二甲胺基苯甲醛替換為4-(二(2-羥基乙基)氨基)苯甲醛，得到(e)-2，2′-((4-(2-(異喹啉-1-基)乙烯基)苯基)氮烷二基)二乙醇(i-2099)，產(chǎn)率80％。

¹hnmr(400mhz，dmso)δ8.65(d，j＝8.5hz，1h)，8.46(d，j＝5.5hz，1h)，8.00-7.85(m，3h)，7.76(t，j＝7.5hz，1h)，7.71-7.60(m，4h)，6.75(d，j＝8.4hz，2h)，4.81(t，j＝5.3hz，2h)，3.67-3.53(m，4h)，3.49(d，j＝5.9hz，4h).

以下化合物通過(guò)如下的一般合成方法制備：

該分子一般合成步驟為：

將1.44g2-甲基喹喔啉和5mmol的相應(yīng)的醛加入含有0.215g甲基三辛基氯化銨的70ml氫氧化鈉溶液中(5m)，加熱攪拌回流15小時(shí)，冷卻，沉淀過(guò)濾，并用水洗滌，重結(jié)晶或硅膠柱色譜法提純產(chǎn)物。

實(shí)施例42、(e)-2-苯乙烯基喹喔啉(i-2100)

硅膠柱色譜提純(洗脫液大致為乙酸乙酯∶石油醚＝1∶50)，得到目標(biāo)產(chǎn)物為白色固體。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ9.03(s，1h)，8.07(d，j＝8.0hz，2h)，7.87(d，j＝16.0hz，1h)，7.77-7.69(m，2h)，7.66(d，j＝7.2hz，2h)，7.44-7.34(m，4h)

實(shí)施例43、(e)-2-[2-(4-甲硫基苯基)-乙烯基]-喹喔啉(i-2101)

硅膠柱色譜提純(洗脫液大致為二氯甲烷∶乙酸乙酯＝8∶2)得到目標(biāo)產(chǎn)物為淺紅色固體，產(chǎn)率24％。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ2.53(s，3h)，7.27(d，2h，j＝8hz)，7.33(d，1h，j＝16hz)，7.58(d，2h，j＝8hz)，7.72-7.68(m，1h)，7.77-7.74(m，1h)，7.83(d，1h，j＝16hz)，8.08-8.05(m，2h)，9.02(s，1h)

實(shí)施例44、(e)-2-[2-(4-氯-苯基)-乙烯基]-喹喔啉(i-2102)

硅膠柱色譜提純(洗脫液大致為二氯甲烷∶乙酸乙酯＝8∶2)得到目標(biāo)產(chǎn)物為淺紅色固體，產(chǎn)率56％。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.35(d，1h，j＝16hz)，7.40(d，2h，j＝8hz)，7.60(d，2h，j＝8hz)，7.74-7.71(m，1h)，7.79-7.76(m，1h)，7.84(d，1h，j＝16hz)，8.10-8.06(m，2h)，9.03(s，1h)

實(shí)施例45、2-[2-(4-n，n-二甲基氨基-苯基)-乙烯基]-喹喔啉(i-2103)

在二氯甲烷和庚烷的混合液中重結(jié)晶得到目標(biāo)產(chǎn)物為淺黃色固體，產(chǎn)率78％。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ3.04(s，6h)，6.74(d，2h，j＝8hz)，7.18(d，1h，j＝16hz)，7.56(d，2h，j＝8hz)，7.67-7.63(m，1h)，7.74-7.71(m，1h)，7.81(d，1h，j＝16hz)，8.04-8.01(m，2h)，9.01(s，1h)

實(shí)施例46、2-[2-(4-哌啶-1-基-苯基)-乙烯基]-喹喔啉(i-2104)

硅膠柱色譜提純(洗脫液大致為乙酸乙酯∶石油醚＝5∶5)得到目標(biāo)產(chǎn)物為黃色固體，產(chǎn)率50％。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ1.64-1.60(m，2h)，1.71-1.70(m，4h)，3.30-3.28(m，4h)，6.93(d，2h，j＝8hz)，7.20(d，1h，j＝16hz)，7.55(d，2h，j＝8hz)，7.68-7.65(m，1h)，7.75-7.71(m，1h)，7.80(d，1h，j＝16hz)，8.05-8.02(m，2h)，9.01(s，1h)

實(shí)施例47、2-[2-(4-n，n-二苯基氨基-苯基)-乙烯基]-喹喔啉(i-2105)

硅膠柱色譜提純(洗脫液大致為乙酸乙酯∶石油醚＝6∶2)得到目標(biāo)產(chǎn)物為橘黃色固體，產(chǎn)率45％。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.11-7.07(m，4h)，7.15(dd，4h，j1＝8.5hz，j2＝1.5hz)，7.27(d，1h，j＝16hz)，7.30(dd，4h，j1＝8hz，j2＝8.5hz)，7.52(d，2h，j＝8hz)，7.70-7.67(m，1h)，7.76-7.73(m，1h)，7.81(d，1h，j＝16hz)，8.05-8.03(m，2h)，9.02(s，1h)。

以下化合物通過(guò)如下的一般合成方法制備：

該分子一般合成步驟為：

將1.3g鹽酸胍、36ml甲醇鈉加入90ml無(wú)水甲醇中，過(guò)濾掉沉淀，向?yàn)V液中加入1.5g相應(yīng)的2-氨基-3-氰基-6-取代的吡啶，加熱回流18h，冷卻至室溫，過(guò)濾，用甲醇洗滌沉淀，在dmf中重結(jié)晶。

實(shí)施例48、2.4二氨基-7-苯乙烯基蝶啶(i-2106)

產(chǎn)率89％。相對(duì)分子量：264mp(fromdmf)303℃。

實(shí)施例49、2，4-二氨基-7-(3，4-二氯苯乙烯基)蝶啶(i-2107)

產(chǎn)率79％。相對(duì)分子量：333mp(fromdmf)338℃。

實(shí)施例50、2，4-二氨基-7-(3，4-亞甲二氧基苯乙烯基)蝶啶(i-2108)

產(chǎn)率91％。相對(duì)分子量：308.mp(fromdmf)335℃。

以下化合物通過(guò)如下的一般合成方法制備：

該分子一般合成步驟為：

將0.5mmol和0.7mmol的tes-烯醚烯酮溶解在2ml甲苯中，加入高壓管中，除氣10min，加入0.025mmol的pd(oac)2，0.05dtbpf，0.7mmolcsf，0.7mmolbu3snf，在氬氣氛圍下加熱至120℃反應(yīng)2-4h，冷卻至室溫，加入10ml乙醚，所得漿液通過(guò)硅藻土過(guò)濾，濾液用乙醚萃取并用1m氫氧化鈉溶液洗滌，濃縮有機(jī)層，粗產(chǎn)物用硅膠柱色譜提純(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶18)。

實(shí)施例51、(e)--2-苯乙烯基-1h-吲哚(iv-2042)

白色固體，產(chǎn)率：72％。¹hnmr(400mhz，cdcl3)：δ8.23(bs，1h)，7.57(d，j＝7.8hz，1h)，7.49(d，j＝7.8hz，2h)，7.42-7.30(m，3h)，7.26(d，j＝7.4hz，1h)，7.18(t，j＝7.48hz，1h)，7.14-7.04(m，2h)，6.89(d，j＝16.0hz，1h)，6.60(s，1h)。

實(shí)施例52、(e)--6-甲氧基-2-苯乙烯基-1h-吲哚(iv-2043)

白色固體，產(chǎn)率：74％。¹hnmr(400mhz，cdcl3)：δ8.12(bs，1h)，7.55-7.40(m，3h)，7.34(t，j＝7.8hz，2h)，7.27-7.23(m，2h)，7.06(d，j＝16.5hz，1h)，6.86-6.80(m，1h)，6.79-6.72(m，1h)，6.52(s，1h)，3.85(s，3h)。

實(shí)施例53、(e)-6-(叔丁基)-2-苯乙烯基-1h-吲哚(iv-2044)

白色固體，產(chǎn)率：73％。¹hnmr(400mhz，cdcl3)：δ8.15(bs，1h)，7.54-7.43(m，3h)，7.40-7.31(m，3h)，7.27-7.21(m，1h)，7.17(dd，j＝8.3hz，1.5hz，1h)，7.10(d，j＝16.5hz，1h)，6.84(d，j＝16.5hz，1h)，6.55(s，1h)，1.37(s，9h)。

實(shí)施例54、(e)-2-苯乙烯基-6-(三氟甲基)-1h-吲哚(iv-2045)

白色固體，產(chǎn)率：68％。¹hnmr(400mhz，cdcl3)：δ8.42(bs，1h)，7.72-7.57(m，2h)，7.50(d，j＝7.5hz，2h)，7.44-7.26(m，4h)，7.11(d，j＝16.5hz，1h)，6.98(d，j＝16.5hz，1h)，6.65(s，1h)。

實(shí)施例55、(e)-5-硝基-2-苯乙烯基-1h-吲哚(iv-2046)

橘黃色固體，產(chǎn)率：68％。¹hnmr(400mhz，cdcl3)：δ8.76(bs，1h)，8.30(s，1h)，8.00(dt，j＝8.7hz，1.7hz，1h)，7.52(d，j＝7.8hz，2h)，7.45-7.37(m，2h)，7.33-7.30(m，1h)，7.25(d，j＝1.4hz，1h)，7.10(s，2h)，6.70(s，1h)

以下化合物通過(guò)如下的一般合成方法制備：

該分子一般合成步驟為：

將1.88g4-甲基嘧啶和1.8mmol相應(yīng)的醛加入含有0.86g甲基三辛基氯化銨的200ml氫氧化鈉溶液中(5m)，加熱攪拌回流2h，冷卻，沉淀過(guò)濾，并用水洗滌。硅膠柱色譜提純或者重結(jié)晶方式提純。

實(shí)施例56、4-[2-(4-氯-苯基)-乙烯基]-嘧啶(ii-2072)

在二氯甲烷和庚烷的混合液中重結(jié)晶得到目標(biāo)產(chǎn)物為淺紅色固體，產(chǎn)率77％。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.00(d，1h，j＝16hz)，7.28(d，1h，j＝5hz)，7.35(d，2h，j＝8hz)，7.50(d，2h，j＝8hz)，7.83(d，1h，j＝16hz)，8.66(d，1h，j＝5hz)，9.15(s，1h)

實(shí)施例57、4-[2-(4-溴-苯基)-乙烯基]-嘧啶(ii-2073)

在二氯甲烷和庚烷的混合液中重結(jié)晶得到目標(biāo)產(chǎn)物為淺紅色固體，產(chǎn)率78％。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.02(d，1h，j＝16hz)，7.28(d，1h，j＝5hz)，7.44(d，2h，j＝8hz)，7.52(d，2h，j＝8hz)，7.81(d，1h，j＝16hz)，8.67(d，1h，j＝5hz)，9.16(s，1h)

實(shí)施例58、4-[2-(4-甲硫基苯基)-乙烯基]-嘧啶(ii-2074)

在二氯甲烷和庚烷的混合液中重結(jié)晶得到目標(biāo)產(chǎn)物為奶油狀固體，產(chǎn)率59％。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ2.51(s，3h)，7.00(d，1h，j＝16hz)，7.26(d，1h，j＝5hz)，7.27(d，2h，j＝8hz)，7.50(d，2h，j＝8hz)，7.83(d，1h，j＝16hz)，8.65(d，1h，j＝5hz)，9.14(s，1h)

實(shí)施例59、4-[2-(4-n，n-二甲基氨基-苯基)-乙烯基]-嘧啶(ii-2075)

在二氯甲烷和庚烷的混合液中重結(jié)晶得到目標(biāo)產(chǎn)物為黃紅色固體，產(chǎn)率78％。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ3.03(s，6h)，6.71(d，2h，j＝8hz)，6.84(d，1h，j＝16hz)，7.24(d，1h，j＝5hz)，7.50(d，2h，j＝8hz)，7.81(d，1h，j＝16hz)，8.58(d，1h，j＝5hz)，9.09(s，1h)

實(shí)施例60、4-[2-(4-哌啶-1-基-苯基)-乙烯基]-嘧啶(ii-2076)

在二氯甲烷和庚烷的混合液中重結(jié)晶得到目標(biāo)產(chǎn)物為黃紅色固體，產(chǎn)率67％。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ1.64-1.62(m，2h)，1.72-1.67(m，4h)，3.29-3.27(m，4h)，6.87(d，1h，j＝16hz)，6.90(d，2h，j＝8hz)，7.27(d，1h，j＝5hz)，7.49(d，2h，j＝8hz)，7.80(d，1h，j＝16hz)，8.59(d，1h，j＝5hz)，9.10(s，1h)

實(shí)施例61、4-[2-(4-n，n-二苯基氨基-苯基)-乙烯基]-嘧啶(ii-2077)

硅膠柱色譜提純(洗脫液大致為乙酸乙酯∶二氯甲烷＝3∶7)得到目標(biāo)產(chǎn)物為黃色固體，產(chǎn)率46％。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ6.91(d，1h，j＝16hz)，7.04(d，2h，j＝8hz)，7.08(t，2h，j＝7hz)，7.13(d，4h，j＝7.5hz)，7.30-7.26(m，5h)，7.45(d，2h，j＝8hz)，7.82(d，1h，j＝16hz)，8.62(d，1h，j＝5hz)，9.13(s，1h)

以下化合物通過(guò)如下的一般合成方法制備：

該分子一般合成步驟為：

稱(chēng)取均三嗪1.8g(15mmol)、相應(yīng)的醛2.23g(15mmol)和氫氧化鉀0.34g溶于60ml甲醇中，回流攪拌反應(yīng)14h.過(guò)濾得到淡黃色固體，以v(乙酸乙酯)∶v(石油醚)＝1∶2的混合物為洗脫劑，進(jìn)行柱色譜分離，得到目標(biāo)產(chǎn)物。

實(shí)施例62、2，4-二甲基-6-(4′-n，n-二甲氨基苯乙烯基)-1，3，5-均三嗪(ii-2078)

淡黃色固體，產(chǎn)率36％。¹hnmr(cdcl3，600mhz)δ：8.16(d，j＝15.6hz，1h)，7.55(d，j＝8.40hz，2h)，6.86(d，j＝15.6hz，1h)，6.72(d，j＝8.40hz，2h)，3.04(s，6h)，2.62(s，6h)

實(shí)施例63、2-苯乙烯基-4，6-二甲基-1，3，5-均三嗪(ii-2079)

白色固體，產(chǎn)率35％。¹hnmr(cdcl3，600mhz)δ：8.21(d，j＝15.6hz，1h)，7.64(d，j＝7.2hz，2h)，7.38～7.43(m，3h)，7.07(d，j＝15.6hz，1h)，2.65(s，6h)

實(shí)施例64、2，4-二甲基-6-(pn，n-二甲基氨基苯乙烯基)-s-三嗪(ii-2080)

黃色固體，產(chǎn)率：59％。¹hnmr(cdcl3)δ：8.13(d，1h，j＝15.60hz)，7.50(d，2h，j＝9.26hz)，6.80(d，1h，j＝15.60hz)，6.65(d，2h，j＝9.26hz)，3.41(q，4h，j＝6.99hz)，2.59(s，6h)，1.20(t，6h，6.83hz)

實(shí)施例65、2，4-二甲基-6-(m羥基苯乙烯基)-s-三嗪(ii-2081)

黃色固體，產(chǎn)率：30％。¹hnmr(400mhz，dmso)：8.47(d，j＝16hz，1h)，7.70(d，j＝7.6，1h)，7.28(dd，j＝7.6，j＝7.2，1h)，7.19(d，j＝16，1h)，6.87(dd，j＝7.6，j＝7.2，1h)，2.56(s，6h)

以下化合物通過(guò)如下的一般合成方法制備：

該分子一般合成步驟為：

將1.83ml3-甲基噠嗪、4.07ml相應(yīng)的醛、0.545g氯化鋅混合，150℃下攪拌2小時(shí)。冷卻至室溫，加入氫氧化鈉水溶液使其分相，分出有機(jī)相，用飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑，用硅膠柱色譜提純(洗脫液為氯仿∶甲醇＝20∶1)得到目標(biāo)產(chǎn)物

實(shí)施例66、3-[2-(4-n，n-二甲基氨基-苯基)-乙烯基]-噠嗪(ii-2082)

產(chǎn)率49％。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ3.02(s，6h)，6.72(d，2h，j＝8hz)，7.15(d，1h，j＝16hz)，7.37(dd，1h，j1＝8hz，j2＝5hz)，7.50(d，2h，j＝8hz)，7.57(dd，1h，j1＝8hz，j2＝2hz)，7.60(d，1h，j＝16hz)，8.97(dd，1h，j1＝5hz，j2＝2hz)

實(shí)施例67、3-(2-苯基乙烯基)噠嗪(ii-2083)

產(chǎn)率：81％。¹hnmr(400mhz，cdcl3)d7.32-7.47(5h，m)，7.59-7.73(4h，m)，9.06(1h，dd，j＝4.8，1.6hz)

實(shí)施例68、1.3-(2-對(duì)甲苯基-乙烯基)噠嗪(ii-2084)

產(chǎn)率：60％。¹hnmr(cdcl3)d9.03(dd，1h，j1z4.8hzandj2z1.6hz)，7.72-7.58(m，2h)，7.51(s，1h)，7.48(s，1h)，7.44(dd，1h，j1z8.6hz，j2z4.9hz)，7.31(d，1h，jz10.7hz)，7.19(s，1h)，7.14(s，1h)，2.38(s，3h)

實(shí)施例69、3-(2-聯(lián)苯-4-基-苯基)噠嗪(ii-2085)

產(chǎn)率50％。¹hnmr(cdcl3)d9.05(dd，1h，j1z4.8hzandj2z1.5hz)，7.74(d，1h，jz16.5hz)，7.61-7.66(m，7h)，7.36-7.49(m，4h)，7.13(d，1h，jz16.5hz)

以下化合物通過(guò)如下的一般合成方法制備：

該分子一般合成步驟為：

氬氣氛圍下，向火焰干燥的微波瓶中加入加入10mmol的芐醇，10mmol的三乙膦氫溴酸，用封口膜將瓶密封，100℃下攪拌8h。除去密封膜，加入4ml水和11mol的氫氧化鈉粉末，攪拌3分鐘后再超聲5分鐘。加入10mmol的吡咯-2-甲醛，小瓶加蓋后在100℃下微波中照射25min，粗產(chǎn)物用二氯甲烷萃取后用無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮后粗產(chǎn)物用硅膠柱色譜提純(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶4)

實(shí)施例70、(e-2-苯基乙烯基-1(h)-吡咯(iii-2069)

產(chǎn)率：98％。¹hnmr(200mhz，cdcl3)：d6.33(s，1h)，6.43(s，1h)，6.69(d，jhh＝16.5hz，1h)，6.83(s，1h)，7.02(d，jhh＝16.5hz，1h)，7.38(m，5h)，8.31(s，1h).

實(shí)施例71、(e)-2-(4′-甲氧基苯基)乙烯基-1-(h)-吡咯(iii-2070)

產(chǎn)率：83％。¹hnmr(200mhz，cdcl3)：d3.82(s，3h)，6.26(m，2h)，6.62(d，jhh＝16.4hz，1h)，6.85(m，4h，)，7.34(m，2h)，8.3(s，1h)

實(shí)施例72、(e)-2-(4′-甲基苯基)乙烯基-1-(h)-吡咯(iii-2071)

產(chǎn)率：93％。¹hnmr(200mhz，cdcl3)：d2.36(s，3h)，6.26(t，jhh＝5.6hz，1h)，6.35(m，1h)，6.65(d，jhh＝16.4hz，1h)，6.82(m，1h)，6.95(d，jhh＝16.4hz，1h)，7.15(d，jhh＝8.0hz，2h)，7.34(d，jhh＝8.2hz，2h)，8.34(s，1h)

實(shí)施例73、(e)-2-(2′-溴苯基)乙烯基-1-(h)-吡咯(iii-2072)

產(chǎn)率：92％。¹hnmr(cdcl3，600mhz)：d6.26(d，jhh＝6.0hz，1h)，6.39(s，1h)，6.86(s，1h)，6.93(d，jhh＝16.2hz，1h)，6.99(d，jhh＝16.8hz，1h)，7.07(t，jhh＝7.2hz，1h)，7.28(t，jhh＝7.8hz，1h)，7.56(d，jhh＝8.4hz，1h)，7.60(d，jhh＝7.8hz，1h)，8.44(s，1h)

實(shí)施例74、(e)-2-(2′-氟苯基)乙烯基-1-(h)-吡咯(iii-2073)

產(chǎn)率：95％。¹hnmr(cdcl3，200mhz)：d6.29(d，jhh＝8.4hz，1h)，6.77(m，1h)，6.82(d，jhh＝16.6hz，2h)，7.16(m，4h)，7.54(t，jhh＝7.8hz，1h)，8.43(s，1h)

以下化合物通過(guò)如下的一般合成方法制備：

該分子一般合成步驟為：

將1.04gn，n-二甲基硫代脲溶解在50ml乙醇中，再將1.79g的n，n-二甲基甲酰胺二甲縮醛(dmf-dma)加入其中。加熱攪拌4h，旋蒸掉溶劑，剩余物質(zhì)溶解在50ml乙腈中，再加入15mmol相應(yīng)的肉桂基溴，加熱回流6h，加入10ml三乙胺后再攪拌30分鐘，旋干溶劑，加入30ml水，用二氯甲烷萃取(3×30ml)，合并有幾層，無(wú)水硫酸鎂干燥，粗產(chǎn)物用硅膠柱色譜法提純。

實(shí)施例75、2-二甲基-5-[(e)-2-苯基乙烯基]噻唑(iii-2074)

洗脫液：石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1，產(chǎn)率50％。¹hnmr(cdcl3，300.10mhz)：δ＝3.13(s，6h，nme2)，6.47(d，j＝15.9hz，1h)，7.08(d，j＝15.9hz，1h)，7.16(s，1h，h4)，7.17-7.21(m，1h)，7.27-7.33(m，2h)，7.37-7.40(m，2h)ppm

實(shí)施例76、2-二甲基-5-[(e)-2-(4-硝基苯基)乙烯基]噻唑(iii-2075)

洗脫液：石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1，產(chǎn)率80％。¹hnmr(cdcl3，400.91mhz)：δ＝3.17(s，6h，nme2)，6.45(d，j＝15.8hz，1h)，7.24-7.28(m，2h)，7.48(d，j＝8.8hz，2h)，8.16(d，j＝8.8hz，2h)ppm.

實(shí)施例77、2-二甲基-5-[(e)-2-(4-甲氧基苯基)乙烯基]噻唑(iii-2076)

洗脫液：石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1，產(chǎn)率13％。¹hnmr(cdcl3，400.91mhz)：δ＝3.13(s，6h，nme2)，3.81(s，3h，ome)，6.44(d，j＝15.9hz，1h)，6.86(d，j＝8.8hz，2h)，6.94(d，j＝15.9hz，1h)，7.12(s，1h，h4)，7.32(d，j＝8.8hz，2h)ppm

實(shí)施例78、(e)-5-(4-氯苯乙烯基)-4-甲基噻唑(iii-2077)

洗脫液：石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1，產(chǎn)率43％.。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ8.57(s，1h)，7.39(d，j＝8.5hz，2h)，7.31(d，j＝8.5hz，2h)，7.14(d，j＝15.9hz，1h)，6.75(d，j＝16.0hz，1h)，2.54(s，3h)。

以下化合物通過(guò)如下的一般合成方法制備：

該分子一般合成步驟為：

1.66g鹽酸羥胺和1.97ml吡啶和1g的a加到10ml乙醇中，回流6h，冷卻至室溫，旋掉溶劑，粗產(chǎn)物導(dǎo)入冰水中攪拌1h，沉淀過(guò)濾，干燥，并在甲醇和二氯甲烷的混合液中重結(jié)晶得到目標(biāo)產(chǎn)物。

實(shí)施例79、(e)-4-(2-(甲基異唑-5-基)乙烯基)苯酚(iii-2078)

淺棕色固體，產(chǎn)率：61％。¹hnmr(400mhz，cdcl3)d：7.42(m，2h)，7.39(d，1h，j＝16hz)，6.84(d，1h，j＝16hz)，6.86(m，2h)，6.0(s，1h)，5.6(s，1h)，2.3(s，3h)

實(shí)施例80、(e)-5-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)-3-甲基異噁唑(iii-2079)

半白色固體，產(chǎn)率61％。¹hnmr(400mhz，cdcl3)d：7.26(s，1h)，7.06(m，1h)，6.88(d，1h)，7.2(d，1h，j＝16hz)，6.76(d，1h，j＝16hz)，6.0(s，1h)，3.93(s，6h)，2.31(s，3h)

實(shí)施例81、(e)-5-(4-甲氧基苯乙烯基)-3-甲基異噁唑(iii-2080)

半白色固體，產(chǎn)率61％。¹hnmr(400mhz，cdcl3)d：7.45(m，2h)，7.22(d，1h，j＝16hz)，6.75(d，1h，j＝16hz)，6.9(m，2h)，6.0(s，1h)，3.8(s，3h)，2.3(s，3h)

以下化合物通過(guò)如下的一般合成方法制備：

該分子一般合成步驟為：

將0.5g水合肼、濃鹽酸、1.0g的a加入10ml乙醇中，回流6h，冷卻至室溫，旋掉溶劑，粗產(chǎn)物導(dǎo)入冰水中攪拌1h，沉淀過(guò)濾，干燥，并在甲醇和二氯甲烷的混合液中重結(jié)晶得到目標(biāo)產(chǎn)物。

實(shí)施例82、(e)-4-(2-(3-甲基-1h-吡唑-5-基)乙烯基)苯-1，2-二醇(iii-2081)

淺棕色固體，產(chǎn)率90％。¹hnmr(400mhz，dmso)d；12.38(s，1h)，9.0(s，2h)，6.9(m，2h)，6.7(m，3h)，6.2(s，1h)，2.1(s，3h)

實(shí)施例83、(e)-4-(2-(3-甲基-1h-吡唑-5-基)乙烯基)苯酚(iii-2082)

淺棕色固體，產(chǎn)率79％。¹hnmr(400mhz，dmso-d6)dppm：12.37(s，1h)，9.5(s，1h)，7.3(d，2h)，6.8(d，1h)，6.7(m，1h)，6.6(d，2h)，6.1(s，1h)，2.2(s，3h)

實(shí)施例84、(e)-5-(4-甲氧基)-3-甲基-1h-吡唑(iii-2083)

淺棕色固體，產(chǎn)率61％。¹hnmr(400mhz，dmso-d6)dppm2.53(s，1h)，7.47(d，2h)，6.9(m，4h)，6.2(s，1h)，3.7(s，3h)，2.2(s，3h)

實(shí)施例85、(iii-2084)

將0.3mmol硝基烯烴，0.45mmolnan3加入3mldmf中，攪拌之后加入0.15mmol對(duì)甲苯磺酸，60℃下攪拌一個(gè)小時(shí)，冷卻至室溫，加入水淬滅反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取(3×10ml)，合并有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑，用硅膠柱色譜法提純產(chǎn)物(洗脫液為乙酸乙酯∶石油醚＝1∶5)產(chǎn)率：74％。1hnmr(dmso-d6，400mhz)，1droptfa：δ8.09(s，1h)，7.57(s，2h)，7.35-7.26(m，5h).

實(shí)施例86、2，4-二甲基-5-[(e)-苯乙烯基]噁唑(iii-2085)

產(chǎn)率：89％。¹hnmr(400mhz，cdcl3)2.21(s，3h)，2.45(s，3h)，6.81(d，j＝16.5hz，1h)，6.90(d，j＝16.5hz，1h)，7.22-7.26(m，1h)，7.32-7.36(m，2h)，7.45(d，j＝7.3hz，2h)

實(shí)施例87、(e)-2-(甲基(4-(2-(喹啉-2-基)乙烯基)苯基)氨基)乙醇-halo標(biāo)簽的合成(此處的halo指的是一種蛋白質(zhì)標(biāo)簽技術(shù)，通過(guò)halo配體可以是熒光染料和蛋白質(zhì)特異性地結(jié)合，最早的詳細(xì)描述見(jiàn)acschembiol.2008jun20；3(6)：373-82.)

分子1、2、3、4的合成

將2.1g分子1(20mmol)、2-(2-氨基乙氧基)乙醇)溶于50ml乙醇中，降溫至0度，加入4.36g二碳酸二叔丁酯，室溫下反應(yīng)5小時(shí)，旋去乙醇，加入20ml二氯甲烷和20ml水，再用二氯甲烷萃取兩次，合并有機(jī)相，飽和食鹽水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，抽濾，旋干，再過(guò)硅膠柱得到分子2，產(chǎn)率90％。

分子2核磁數(shù)據(jù)：¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ3.77-3.72(m，2h)，3.61-3.52(m，4h)，3.33(t，j＝5.1hz，2h)，1.53(s，1h)，1.45(s，9h).

將2.15g分子2(10.5mmol)溶于20ml四氫呋喃和10mldmf，冷至0度，加入氫化鈉(14mmol)，反應(yīng)半小時(shí)，再加入6-氯-1-碘己烷(16mmol)，0度反應(yīng)半小時(shí)，室溫反應(yīng)一天，加入飽和氯化銨淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，飽和食鹽水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，抽濾，旋干，再過(guò)硅膠柱得到分子3，產(chǎn)率65％。

分子3核磁數(shù)據(jù)：¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ3.63-3.59(m，2h)，3.59-3.51(m，6h)，3.47(t，j＝6.7hz，2h)，3.32(t，j＝5.1hz，2h)，1.77(dd，j＝14.6，6.8hz，2h)，1.66-1.56(m，2h)，1.50-1.42(m，11h)，1.38(ddd，j＝9.1，5.8，2.8hz，2h).

將1.2g分子3(4.1mmol)溶于30ml二氯甲烷，冷至0度，加入5ml三氟乙酸，反應(yīng)4小時(shí)，旋去溶劑和多余的三氟乙酸，加入30ml甲醇，冷至5度，加入1.65g碳酸鉀，反應(yīng)半小時(shí)，抽濾，旋干，加入20ml水，乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，飽和食鹽水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，抽濾，旋干，再過(guò)硅膠柱得到分子4，產(chǎn)率72％。

分子4核磁數(shù)據(jù)：¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ6.50(s，3h)，3.80-3.61(m，4h)，3.61-3.50(m，4h)，3.46(dd，j＝8.6，4.8hz，2h)，3.02(t，j＝4.7hz，2h)，1.84-1.71(m，2h)，1.65-1.54(m，2h)，1.50-1.30(m，4h).

0.3g分子5溶于5ml干燥dmf，冷至0度，加入40mg氫化鈉，反應(yīng)15分鐘，加入一當(dāng)量的3-溴丙酸叔丁酯，反應(yīng)半小時(shí)，升溫至50度反應(yīng)24小時(shí)，旋去dmf，加入20ml水，乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，飽和食鹽水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，抽濾，旋干，再過(guò)硅膠柱得到分子6，產(chǎn)率45％。

分子6核磁數(shù)據(jù)¹hnmr(400mhz，dmso)δ8.27(d，j＝8.6hz，1h)，7.91(dd，j＝12.9，8.2hz，2h)，7.80(d，j＝8.6hz，1h)，7.75-7.68(m，2h)，7.55(d，j＝8.8hz，2h)，7.50(t，j＝7.5hz，1h)，7.19(d，j＝16.3hz，1h)，6.76(d，j＝8.8hz，2h)，3.63(d，j＝4.7hz，2h)，3.59(d，j＝4.8hz，2h)，3.00(s，3h)，1.42-1.38(m，9h)，1.36(d，j＝6.0hz，2h)，0.91(t，j＝7.4hz，2h).

0.1g分子6溶于2ml乙醇，加入一當(dāng)量分子4，回流反應(yīng)8小時(shí)，旋干，再過(guò)硅膠柱得到分子7，產(chǎn)率67％。

分子7核磁數(shù)據(jù)¹hnmr(400mhz，dmso)δ8.27(d，j＝8.6hz，1h)，7.91(dd，j＝12.9，8.2hz，2h)，7.80(d，j＝8.6hz，1h)，7.75-7.68(m，2h)，7.55(d，j＝8.8hz，2h)，7.50(t，j＝7.5hz，1h)，7.19(d，j＝16.3hz，1h)，6.76(d，j＝8.8hz，2h)，6.50(s，3h)，3.80-3.61(m，4h)，3.61-3.50(m，4h)，3.59(d，j＝4.8hz，2h)，3.46(dd，j＝8.6，4.8hz，2h)，3.02(t，j＝4.7hz，2h)，3.00(s，3h)，1.36(d，j＝6.0hz，2h)，1.84-1.71(m，2h)，1.65-1.54(m，2h)，1.50-1.30(m，4h)，0.91(t，j＝7.4hz，2h).

以下將描述利用本發(fā)明的化合物作為染料用于生物成像用途的應(yīng)用方面，先描述一下不同成像操作的步驟，方便在實(shí)施例中不再每次重復(fù)寫(xiě)操作步驟。

應(yīng)用方面1：本發(fā)明的化合物作為染料在海拉細(xì)胞中活細(xì)胞成像

成像方法1：將染料化合物以0.06mmol/l的濃度溶解于乙醇溶液中，室溫儲(chǔ)存。

細(xì)胞染色和成像步驟如下：

1.將傳代的海拉細(xì)胞(源自海瑞塔拉克斯(henriettalacks)的宮頸癌細(xì)胞的細(xì)胞系，是生物醫(yī)學(xué)研究中廣泛應(yīng)用的細(xì)胞。)培養(yǎng)在鋪有0.17um的玻璃片的培養(yǎng)皿中。培養(yǎng)基的組份為：水2.75毫升、f12溶液2.5毫升、dmem溶液20毫升、1mhepes緩沖液0.625毫升、生長(zhǎng)因子0.5ml、血清2.5毫升)

2.取10ul染料的儲(chǔ)存液，用移液器加入到含有1ml細(xì)胞培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)皿中。

3.將細(xì)胞置于37度，5％的co2的培養(yǎng)箱中，染色20min。

4.用鑷子將玻璃片移至含有胞外液的培養(yǎng)皿中，胞外液的具體組份是：150mmnacl、3mmkcl、3mmcacl2、10mmhepes緩沖液、5mmglucose。

5.用蔡司(zeiss)710共聚焦顯微鏡成像，成像物鏡為20倍水鏡，該物鏡的數(shù)值孔徑為1.0。

6.利用該共聚焦顯微鏡掃描成像，激發(fā)光波長(zhǎng)為488nm，接受的發(fā)射譜段分別為462nm-538nm、490nm-535nm和555nm-675nm，掃描范圍約150umx150um；掃描時(shí)間為0.5-1min每幀，獲得細(xì)胞成像圖像。

應(yīng)用方面2：染料在海拉細(xì)胞中固定細(xì)胞成像

成像方法2：染料以以0.06mmol/l的濃度溶解于乙醇溶液中，室溫儲(chǔ)存。

細(xì)胞染色和成像步驟

1.用3％多聚甲醛固定傳代的海拉細(xì)胞十分鐘，將細(xì)胞置于37度，5％的co2的培養(yǎng)箱中，染色20min。

2.用鑷子將玻璃片移至含有胞外液的培養(yǎng)皿中，胞外液的具體組份是：150mmnacl、3mmkcl、3mmcacl2、10mmhepes緩沖液、5mmglucose。

3.用蔡司(zeiss)710共聚焦顯微鏡成像，成像物鏡為20倍水鏡，該物鏡的數(shù)值孔徑為1.0。

4.利用共聚焦顯微鏡掃描成像，激發(fā)光波長(zhǎng)為488nm，接受的發(fā)射譜段分別為462nm-538nm、490nm-535nm和555nm-675nm，掃描范圍約150umxl50um。掃描時(shí)間為0.5-1min每幀，獲得細(xì)胞成像圖像。

應(yīng)用方面3：染料在神經(jīng)元細(xì)胞中進(jìn)行活細(xì)胞成像。

成像成像方法3：將染料化合物以0.06mmol/l的濃度溶解于乙醇溶液中，室溫儲(chǔ)存。

細(xì)胞染色和成像步驟如下：

1.將懷孕18天的孕鼠采用頸椎脫臼的方法致死，取出胎鼠腦袋的海馬神經(jīng)元培養(yǎng)在鋪有0.17um的玻璃片的培養(yǎng)皿中。培養(yǎng)基的組份為：水2.75毫升、f12溶液2.5毫升、dmem溶液20毫升、1mhepes緩沖液0.625毫升、生長(zhǎng)因子0.5ml、血清2.5毫升)，將神經(jīng)元體外培養(yǎng)14-18天

2.取10ul染料的儲(chǔ)存液，用移液器加入到含有1ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)有神經(jīng)元培養(yǎng)皿中。

3.將細(xì)胞置于37度，5％的co2的培養(yǎng)箱中，染色20min。

4.用鑷子將玻璃片移至含有胞外液的培養(yǎng)皿中，胞外液的具體組份是：150mmnacl、3mmkcl、3mmcacl2、10mmhepes緩沖液、5mmglucose。

5.用蔡司(zeiss)710共聚焦顯微鏡成像，成像物鏡為20倍水鏡，該物鏡的數(shù)值孔徑為1.0。

6.利用該共聚焦顯微鏡掃描成像，激發(fā)光波長(zhǎng)為488nm，接受的發(fā)射譜段分別為490nm-535nm和555nm-675nm，掃描范圍約150umx150um；掃描時(shí)間為0.5-1min每幀，獲得細(xì)胞成像圖像。

應(yīng)用方面4：染料在神經(jīng)元細(xì)胞中進(jìn)行固定細(xì)胞成像

成像方法4：將染料化合物以0.06mmol/l的濃度溶解于乙醇溶液中，室溫儲(chǔ)存。

細(xì)胞染色和成像步驟如下：

1.將懷孕18天的孕鼠采用頸椎脫臼的方法致死，取出胎鼠腦袋的海馬神經(jīng)元培養(yǎng)在鋪有0.17um的玻璃片的培養(yǎng)皿中。培養(yǎng)基的組份為：水2.75毫升、f12溶液2.5毫升、dmem溶液20毫升、1mhepes緩沖液0.625毫升、生長(zhǎng)因子0.5ml、血清2.5毫升)，將神經(jīng)元體外培養(yǎng)14-18天

2.用3％多聚甲醛固定神經(jīng)元十分鐘，將細(xì)胞置于37度，5％的co2的培養(yǎng)箱中，染色20min。

3.用鑷子將玻璃片移至含有胞外液的培養(yǎng)皿中，胞外液的具體組份是：150mmnacl、3mmkcl、3mmcacl2、10mmhepes緩沖液、5mmglucose。

4.用蔡司(zeiss)710共聚焦顯微鏡成像，成像物鏡為20倍水鏡，該物鏡的數(shù)值孔徑為1.0。

5.利用共聚焦顯微鏡掃描成像，激發(fā)光波長(zhǎng)為488nm，接受的發(fā)射譜段分別為490nm-535nm和555nm-675nm，掃描范圍約150umx150um。掃描時(shí)間為0.5-1min每幀，獲得細(xì)胞成像圖像。

應(yīng)用方面5：染料在組織學(xué)切片染色與成像

成像方法5：將染料化合物以0.06mmol/l的濃度溶解于乙醇溶液中，室溫儲(chǔ)存。

成像方法與步驟

1.利用冷凍切片機(jī)將大鼠腦袋樣品切片，得到20um厚度的大鼠腦組織切片，并貼于載玻片上。

2.將0.06mmol/l的染料儲(chǔ)存液與磷酸鹽緩沖液(pbs)等體積混合。

3.取30ul混合液加入至10mmx10mm的組織學(xué)樣品上，在常溫下染色10min

4.將混合液移除，滴加1mlpbs于玻璃片上，置于蔡司(zeiss)710下觀察。

5.用蔡司(zeiss)710共聚焦顯微鏡成像，成像物鏡為20倍水鏡，該物鏡的數(shù)值孔徑1.0。

6.利用共聚焦顯微鏡掃描成像，激發(fā)光波長(zhǎng)為488nm，接受的發(fā)射譜段分別為490nm-535nm和555nm-675nm，掃描范圍約0.8mmx0.8mm。掃描時(shí)間為0.5-1min每幀，獲取成像圖像。

應(yīng)用方面6：染料在斑馬魚(yú)活體染色和成像

成像方法6：將染料化合物以0.06mmol/l的濃度溶解于乙醇溶液中，室溫儲(chǔ)存。

成像方法與步驟

1.取200ul的0.06mmol/l的染料的儲(chǔ)存液，滴入到養(yǎng)有斑馬魚(yú)的20ml的溶液中。

2.常溫下染色20min-120min。

3.用16.8ug/ml的ms-222麻醉斑馬魚(yú)，約3min。

4.將斑馬魚(yú)包埋在1.5％瓊脂糖的pbs中，約10min至瓊脂糖凝固。

5.用蔡司(zeiss)710共聚焦顯微鏡成像，成像物鏡為20倍水鏡，該物鏡的數(shù)值孔徑1.0。

6.利用共聚焦顯微鏡掃描成像，激發(fā)光波長(zhǎng)為488nm，接受的發(fā)射譜段分別為490nm-535nm和555nm-675nm，掃描范圍約3mmx3mm。掃描時(shí)間為2min每幀。

應(yīng)用方面7：染料對(duì)病理切片染色和成像

成像方法7：將染料化合物以0.06mmol/l的濃度溶解于乙醇溶液中，室溫儲(chǔ)存。

成像方法與步驟

1.利用冰凍切片機(jī)將病理組織切為5um的冰凍切片，置于載玻片上。

2.用10％的福爾馬林固定切片，5min。

3.將0.06mmol/l的染料儲(chǔ)存液與磷酸鹽緩沖液(pbs)等體積混合。

4.將貼有病理切片的載玻片置于混合液中，染色3-5s。

5.用蔡司(zeiss)710共聚焦顯微鏡成像，成像物鏡為20倍水鏡，數(shù)值孔徑1.0。

6.利用共聚焦顯微鏡掃描成像，激發(fā)光波長(zhǎng)為488nm，接受的發(fā)射譜段分別為490nm-535nm和555nm-675nm，掃描范圍約0.8mmx0.8mm。掃描時(shí)間為0.5-1min每幀。

應(yīng)用方面8：染料對(duì)活體動(dòng)物的腫瘤成像

成像方法8：將染料化合物以0.06mmol/l的濃度溶解于乙醇溶液中，室溫儲(chǔ)存。

成像方法與步驟

1.將g1乳腺腫瘤細(xì)胞與基質(zhì)膠按照3∶1混合，

2.將混合液注射至5-8周的nod/scid小鼠的乳腺附近

3.培養(yǎng)注射有腫瘤的小鼠1-2周

4.從腹腔對(duì)小鼠注射質(zhì)量比重80mg/kg的戊巴比妥鈉，麻醉小鼠20分鐘

5.用手術(shù)刀切開(kāi)小鼠的皮膚，使腫瘤組織和部分正常組織暴露于空氣中

6.將染料f2與pbs采用1∶1混合，取1ml混合液滴在小鼠暴露的腫瘤和正常組織上，染色2-5分鐘

7.利用olympus公司的mvx10體式顯微鏡觀察活體小鼠的熒光信號(hào)，成像視野為2cmx1.5cm。

以下將描述本發(fā)明化合物的熒光性質(zhì)與成像應(yīng)用例，其中的成像方法用上面描述的成像方法1-8指代，可以使描述簡(jiǎn)單。

本發(fā)明中的含氮雜環(huán)基取代的烯類(lèi)化合物之所以對(duì)環(huán)境非常敏感，有單組分多色成像性質(zhì)，原因在于結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)中同時(shí)引入了分子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移(ict)和ph響應(yīng)，以分子i-2064為例，烯基一端的4-[n，n-雙(2-羥乙基)氨基]苯基是一個(gè)供電子基團(tuán)(donor)，另一端的喹啉基是受電子集團(tuán)(acceptor)，通過(guò)中間的雙鍵形成一個(gè)共軛的給-受共軛體系(簡(jiǎn)稱(chēng)d-a體系)，這樣的體系由于電子基態(tài)與激發(fā)態(tài)分離，激發(fā)態(tài)偶極矩增大，被周?chē)h(huán)境的分子穩(wěn)定的程度不同，使得能極差不同，發(fā)光也會(huì)不同，穩(wěn)定激發(fā)態(tài)的分子可以是溶劑分子，也可以是與染料結(jié)合的生物分子，比如蛋白質(zhì)、脂類(lèi)等，周?chē)h(huán)境分子極性不同，使得染料分子的發(fā)光也不同，當(dāng)染料與不同的生物分子結(jié)合時(shí)，變現(xiàn)的就是不同區(qū)域發(fā)光不同；同時(shí)喹啉基上的n原子能接受質(zhì)子或失去質(zhì)子，接受質(zhì)子后，分子的偶極矩進(jìn)一步增大，使得分子對(duì)環(huán)境更為敏感，宏觀上變現(xiàn)為分子不僅能區(qū)分不同極性，還能區(qū)分不同的ph；我們把這類(lèi)同時(shí)結(jié)合分子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移(ict)和ph響應(yīng)的分子稱(chēng)為ict-ph染料。這類(lèi)染料的特點(diǎn)是含氮雜環(huán)基取代的烯類(lèi)化合物，根據(jù)含氮雜環(huán)上n的pka不同，表現(xiàn)出對(duì)不同ph范圍的敏感，同時(shí)調(diào)整分子上的取代基，使得染料的激發(fā)和發(fā)射峰值變化，根據(jù)這一理念我們?cè)O(shè)計(jì)出一整個(gè)系列的染料。

下面為不同結(jié)構(gòu)的染料利用上述不同成像方法進(jìn)行成像的應(yīng)用實(shí)例，本發(fā)明中的染料符合ict-ph結(jié)構(gòu)的染料都能展現(xiàn)下列實(shí)例變現(xiàn)的性質(zhì)，不同分子差別在于激發(fā)光和發(fā)射光的不同，對(duì)ph的響應(yīng)范圍不同，下面只舉出部分非限制性實(shí)例，通過(guò)對(duì)這些非限制性實(shí)例具體而詳細(xì)地描述，對(duì)染料性質(zhì)的公開(kāi)，對(duì)染料利用不同方法對(duì)不同樣品的成像描述以及對(duì)成像圖像的分析，展現(xiàn)本發(fā)明中染料的優(yōu)異成像性質(zhì)以及染料表現(xiàn)出的單組分多色成像性質(zhì)。

應(yīng)用例1：分子i-2060

分子i-2060在不同溶劑中的熒光性質(zhì)見(jiàn)圖1(紫外吸收譜)和圖2(熒光發(fā)射譜)，由這兩個(gè)圖譜可以看出分子i-2060對(duì)環(huán)境極性非常敏感，隨著溶劑極性增大(正己烷，二氯甲烷，四氫呋喃，乙酸乙酯，丙酮，乙醇，甲醇)，光譜峰值紅移，這是由于分子i-2060特有的供電子基-共軛-吸電子基結(jié)構(gòu)具有分子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移的性質(zhì)，不同的極性對(duì)電子激發(fā)態(tài)的穩(wěn)定性不一樣，極性溶劑穩(wěn)定能力更強(qiáng)，使得能極差更小，所以光譜紅移。

分子i-2025、i-2061、i-2063、i-2069、i-2062、i-2027、i-2036、i-2044、i-2045、i-2046、i-2048、i-2051、i-2052、i-2026、i-2030、i-2059、i-2098、i-2099、i-2103、i-2104、i-2106；ii-2070、ii-2074、ii-2075、ii-2076、ii-2078、ii-2079、ii-2080、ii-2081、ii-2082、ii-2083、ii-2084、ii-2085；iii-2069、iii-2070、iii-2071、iii-2074、iii-2075、iii-2076、iii-2077、iii-2078、iii-2080、iii-2082、iii-2083、iii-2084、iii-2085；iv-2042、iv-2043、iv-2044、iv-2045、iv-2046等都能表現(xiàn)出相似的性質(zhì)。

本發(fā)明公開(kāi)的這一類(lèi)染料都帶有分子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移性質(zhì)，對(duì)表現(xiàn)出對(duì)環(huán)境極性非常敏感的特點(diǎn)，這一特點(diǎn)可從下面的更多實(shí)例看出。

將分子i-2060配成大約60mmol/l的濃度，吸附到濾紙上，得到熒光濾紙，具體效果見(jiàn)圖3(藍(lán)色為i-2025，玫紅色為i-2064，青色為i-2061，土黃色為i-2062，紫色為i-2029，青紫色為i-2027，紅色為i-2060，米色為i-2045)，該種濾紙?jiān)诓煌琾h的水溶液中發(fā)光不同(見(jiàn)圖4)，表現(xiàn)出對(duì)ph的響應(yīng)性，定量地測(cè)定其發(fā)射譜發(fā)現(xiàn)其對(duì)ph有很好的響應(yīng)性(見(jiàn)圖5)，下面可進(jìn)一步看到該類(lèi)染料能區(qū)分ph值相差0.2精度的不同溶液，非常靈敏。

用分子i-2060進(jìn)行海拉細(xì)胞成像，方法為染料成像方法1的方法，得到圖像為圖6，在488nm的激發(fā)光下，接受的發(fā)射譜段分別為490nm-535nm(左上圖)、555nm-675nm(右上圖)和462nm-538nm(左下圖)三個(gè)不同波長(zhǎng)區(qū)間均可以收集到發(fā)射光，展現(xiàn)出一張非常漂亮的多組分多色成像的圖片(右下圖)，暫時(shí)并不清楚不同顏色的發(fā)光對(duì)應(yīng)細(xì)胞的什么區(qū)域或分子，這個(gè)需要更進(jìn)一步的研究，但是該類(lèi)染料顯然揭示了細(xì)胞中許多新的現(xiàn)象，為生物成像打開(kāi)了一扇新的大門(mén)。

用分子i-2060進(jìn)行神經(jīng)元活細(xì)胞成像，方法為染料成像方法3的方法，得到圖像為圖7，在488nm的激發(fā)光下，接受的發(fā)射譜段分別為490nm-535nm(左上圖)、555nm-675nm(右上圖)和462nm-538nm(左下圖)三個(gè)不同波長(zhǎng)區(qū)間均可以收集到發(fā)射光，展現(xiàn)出一張非常漂亮的多組分多色成像的圖片(右下圖)，可見(jiàn)染料在不同種類(lèi)的細(xì)胞均能實(shí)現(xiàn)單組分多色成像。

用分子i-2060進(jìn)行固定神經(jīng)元細(xì)胞成像，方法為染料成像方法4的方法，得到圖像為圖8，明顯可以看到神經(jīng)元細(xì)胞的細(xì)胞核與神經(jīng)元樹(shù)突發(fā)光的差異，對(duì)比圖7與圖8，在進(jìn)行活細(xì)胞成像時(shí)，細(xì)胞核幾乎沒(méi)有染色，但固定的細(xì)胞染成明顯的黃色，可以明顯地區(qū)分活細(xì)胞和固定的細(xì)胞。

通過(guò)對(duì)分子i-2060在不同類(lèi)型細(xì)胞的成像可以看出，作為一種全新的熒光染料，在本發(fā)明公開(kāi)的各種生物成像中展現(xiàn)出優(yōu)異的性質(zhì)，發(fā)光量子產(chǎn)率高，成像穩(wěn)定，沒(méi)有觀察到光漂白現(xiàn)象和光毒性，成像清晰，和傳統(tǒng)染料相比性能絲毫不差。同時(shí)本款染料還具有其他染料不具有的一些優(yōu)異特點(diǎn)：成像速度快而且穩(wěn)定，大部分成像時(shí)間只需要幾秒鐘就實(shí)現(xiàn)成像；染料在水中不發(fā)光，因此成像不需要清洗，而且完全無(wú)背景，得到高對(duì)比度的圖像；染料性質(zhì)穩(wěn)定，保存簡(jiǎn)單，并且在生物體內(nèi)耐受性好，因此成像操作簡(jiǎn)單，避免太多的準(zhǔn)備工作浪費(fèi)時(shí)間，也給研究帶來(lái)過(guò)多不確定因素，引入誤差，延誤研究機(jī)會(huì)；最重要的，該染料表現(xiàn)出單組分多色成像的性質(zhì)，此類(lèi)染料極度敏感，與生物組織結(jié)合后，在不同的環(huán)境下(比如ph、不同組分、離子濃度等)中表現(xiàn)發(fā)出不同顏色光，呈現(xiàn)單組分多色成像；因此這款染料在各類(lèi)生物成像、細(xì)胞內(nèi)ph檢測(cè)和腫瘤細(xì)胞檢測(cè)具有巨大潛在應(yīng)用。

分子i-2025、i-2061、i-2063、i-2069、i-2062、i-2027、i-2036、i-2044、i-2045、i-2046、i-2048、i-2051、i-2052、i-2026、i-2030、i-2059、i-2098、i-2099、i-2i03、i-2104、i-2106；ii-2070、ii-2074、ii-2075、ii-2076、ii-2078、ii-2079、ii-2080、ii-2081、ii-2082、ii-2083、ii-2084、ii-2085；iii-2069、iii-2070、iii-2071、iii-2074、iii-2075、iii-2076、iii-2077、iii-2078、iii-2080、iii-2082、iii-2083、iii-2084、iii-2085；iv-2042、iv-2043、iv-2044、iv-2045、iv-2046都能變現(xiàn)出與分子i-2060相似的成像和ph響應(yīng)性質(zhì)，不同之處在于發(fā)光顏色不一樣，ph的響應(yīng)范圍不一樣。

應(yīng)用例2：分子i-2064

分子i-2064在不同溶劑中的熒光性質(zhì)見(jiàn)圖9(紫外吸收譜)和圖10(熒光發(fā)射譜)，由這兩個(gè)圖譜可以看出分子i-2064同樣對(duì)環(huán)境極性非常敏感，保持這一類(lèi)染料的優(yōu)異性質(zhì)，相對(duì)于分子i-2060，分子i-2064的發(fā)光更紅移，對(duì)組織的穿透力相好一點(diǎn)，也說(shuō)明可以通過(guò)調(diào)節(jié)分子取代基，把這類(lèi)染料做成發(fā)光覆蓋整個(gè)可見(jiàn)光譜的染料，具有很大的商用價(jià)值。

將分子i-2064配成大約60mmol/l的濃度，吸附到濾紙上，得到熒光濾紙，具體效果見(jiàn)圖3(藍(lán)色為i-2025，玫紅色為i-2064，青色為i-2061，土黃色為i-2062，紫色為i-2029，青紫色為i-2027，紅色為i-2060，米色為i-2045)，分子i-2064制成的濾紙能區(qū)分ph值相差0.2精度的不同溶液，非常靈敏，見(jiàn)圖11，該圖顯示隨著ph從4.4增加到7.2，500nm的峰值增加，能區(qū)分0.2精度的不同ph溶液。。

用分子i-2064進(jìn)行海拉細(xì)胞成像，方法為染料成像方法1的方法，得到圖像為圖12，在只有i-2064一種分子的情況下得到的細(xì)胞圖像在兩個(gè)區(qū)域分別顯示藍(lán)色和綠色，顯示能區(qū)分細(xì)胞內(nèi)不同物質(zhì)。

用分子i-2064進(jìn)行固定海拉細(xì)胞成像，方法為染料成像方法2的方法，得到圖像為圖13，對(duì)比活細(xì)胞成像和固定細(xì)胞成像，可以明顯看出固定后細(xì)胞能對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行染色，而且固定后細(xì)胞成像顏色紅移，展現(xiàn)了細(xì)胞死后的細(xì)胞變化。

用分子i-2064進(jìn)行神經(jīng)元活細(xì)胞成像，方法為染料成像方法3的方法，得到圖像為圖14，圖像顯示神經(jīng)元的軸突和樹(shù)突被染成綠色，而胞體為黃色，細(xì)胞核為紅色，顯示出這三處不同的細(xì)胞環(huán)境，還需要進(jìn)一步研究這三處的差異。

用分子i-2064進(jìn)行固定神經(jīng)元細(xì)胞成像，方法為染料成像方法4的方法，得到圖像為圖15，圖像顯示固定的神經(jīng)元細(xì)胞樹(shù)突和軸突為黃色，細(xì)胞核為紅色，對(duì)比圖14，說(shuō)明固定后細(xì)胞環(huán)境發(fā)生了變化使得染色變化，說(shuō)明i-2064可以區(qū)分活的神經(jīng)元細(xì)胞和死亡的神經(jīng)元細(xì)胞。

用分子i-2064進(jìn)行組織學(xué)切片成像，方法為染料成像方法5的方法，得到圖像為圖16((a)是nissl染色，(b)為i-2064染色)。該圖所用組織學(xué)切片為小鼠腦冰凍切片，現(xiàn)有的成像用的是nissl染色的方法，本發(fā)明用分子i-2064進(jìn)行染色成像與nissl成像對(duì)比，可以看出nissl成像能展現(xiàn)的細(xì)節(jié)，分子i-2064都能展現(xiàn)，但分子i-2064得到的是單組分多色成像的彩圖，還展現(xiàn)了許多前所未見(jiàn)的細(xì)節(jié)，表明了小鼠腦不同區(qū)域的可能存在的不同性質(zhì)，這些性質(zhì)很可能與腦功能分區(qū)有關(guān)。

用分子i-2064進(jìn)行染料對(duì)人的病理切片染色和成像，方法為染料成像方法7的方法，得到圖像為圖17，用分子i-2064對(duì)取自人體的胃組織成像，(a)為正常組織，(b)為癌變組織，圖17顯示正常組織的染色偏綠偏黃，而癌癥組織的染色偏紅，這是因?yàn)榘┌Y組織與正常組織相比，生理環(huán)境差別很大，癌癥組織ph比正常組織低，而這款染料又對(duì)環(huán)境尤其是ph非常敏感，因此此染料可用于癌癥組織和癌癥細(xì)胞的檢測(cè)之中，具有非常大的實(shí)際應(yīng)用意義。

進(jìn)一步將分子i-2064與不同生物分子和蛋白質(zhì)結(jié)合來(lái)考察發(fā)光性質(zhì)，圖18表明分子i-2064在同樣ph的pbs溶液中與不同生物分子或硬脂酸(bsa為牛血清白蛋白，fbs為胎牛血清，trypsin為胰蛋白酶，lipase為脂肪酶，stearicacid為硬脂酸，硬脂酸用來(lái)模擬細(xì)胞膜的脂類(lèi))結(jié)合的發(fā)光不同，蛋白質(zhì)的微環(huán)境決定了染料的發(fā)光，說(shuō)明該染料可用于不同蛋白質(zhì)和生物分子的檢測(cè)與區(qū)分。

應(yīng)用例3：分子i-2067

分子i-2067在不同溶劑中的熒光性質(zhì)見(jiàn)圖19(紫外吸收譜)和圖20(熒光發(fā)射譜)，由這兩個(gè)圖譜可以看出分子i-2067相對(duì)分子i-2060光譜更紅移，這是由于增加了一個(gè)雙鍵，共軛變大所致。

用分子i-2067在斑馬魚(yú)活體染色和成像，方法為染料成像方法6的方法，得到圖像21，得到斑馬魚(yú)在活體時(shí)的實(shí)時(shí)單組分多色成像，圖21由上到下分別為斑馬魚(yú)的頭部((a))、軀干((b))和尾部((c))，由圖可看出單一一種分子i-2067把斑馬魚(yú)不同部位分別染成黃綠色、黃色和偏紅色。

應(yīng)用例4：分子i-2084

用分子i-2084進(jìn)行海拉細(xì)胞成像，方法為染料成像方法1的方法，得到圖像為圖22，在488nm的激發(fā)光下，接受的發(fā)射譜段分別為490nm-535nm(左上圖)、555nm-675nm(右上圖)和462nm-538nm(左下圖)三個(gè)不同波長(zhǎng)區(qū)間均可以收集到發(fā)射光，展現(xiàn)出一張非常漂亮的多組分多色成像的圖片(右下圖)，在只有i-2084一種分子的情況下得到的細(xì)胞圖像顯示藍(lán)色、綠色和紅色的多色圖像。

分子i-2069、i-2052、i-2055、i-2058、i-2059、i-2070、i-2071、i-2098、i-2099、i-2109、ii-2070、i-2110等都有與上述分子i-2084相似的性質(zhì)。

應(yīng)用例5：分子i-2110

用分子i-2110進(jìn)行活體動(dòng)物(nod/scid小鼠)的腫瘤成像，方法為染料成像方法8的方法，得到圖像為圖23，圖像顯示，種有腫瘤的小鼠被該染料染色后，腫瘤組織有明亮綠色熒光，而正常組織沒(méi)有熒光或只有很低的背景熒光。

以上所述，僅為本發(fā)明的示例性實(shí)施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何不經(jīng)過(guò)創(chuàng)造性勞動(dòng)想到的變化或替換，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。因此，本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)該以權(quán)利要求書(shū)所限定的保護(hù)范圍為準(zhǔn)。