專利名稱：一類尼羅藍(lán)熒光染料，其制備方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類熒光探針化合物及其制備方法和用途，該化合物適用于精細(xì)化工領(lǐng)域中細(xì)胞溶酶體的標(biāo)記。
背景技術(shù)：
溶酶體是細(xì)胞內(nèi)的一種非常重要的亞細(xì)胞器，其內(nèi)包含能夠分解廢棄材料和細(xì)胞碎片的酸性水解酶，他們能夠消化過量的或磨損的細(xì)胞器、食物粒子，并且能夠吞沒病毒或細(xì)菌。溶酶體的主要作用是消化作用，是細(xì)胞內(nèi)的消化器官，細(xì)胞自溶，防御以及對某些物質(zhì)的利用均與溶酶體的消化作用有關(guān)。同時，越來越多的事實證明，溶酶體在許多生理、藥理及病理過程中均起重要作用。隨著溶酶體的研究日益受到基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究工作者及臨床學(xué)家的重視，因此，開發(fā)出摩爾吸光系數(shù)大，熒光量子產(chǎn)率高；熒光發(fā)射波長處于長波且有較大的斯托克斯位移的熒光探針，在對溶酶體進行標(biāo)記、監(jiān)測的應(yīng)用過程中有著重要意義。熒光探針具有非侵入性、易操作、能夠?qū)崿F(xiàn)可視化檢測等特點，受到普遍的重視。目前許多溶酶體的定位染料都包含一條弱堿性鏈，可以使探針向酸性的溶酶體細(xì)胞器聚集。近年來，研究者開發(fā)出了多種溶酶體的標(biāo)記性染料，一部分已經(jīng)商業(yè)化?？墒沁@些染料共有的一個缺點是激發(fā)、發(fā)射波長都較短Γ350-550ηπι)，在進行活細(xì)胞共聚焦成像時，對活細(xì)胞造成很大的損傷，同時，此類熒光染料容易發(fā)生光漂白，并易受到自發(fā)熒光的干擾，這一系列的不足都嚴(yán)重的影響了染料的應(yīng)用性能。因此開發(fā)一種激發(fā)、發(fā)射波長長，光穩(wěn)定性好，對細(xì)胞具有低毒性的溶酶體探針具有重要意義。

尼羅藍(lán)類熒光染料具有優(yōu)異的光化學(xué)物理性質(zhì)，例如高的摩爾消光系數(shù)、良好的光穩(wěn)定性、高的熒光量子產(chǎn)率等優(yōu)點。對細(xì)胞的內(nèi)環(huán)境不敏感，具有良好的化學(xué)穩(wěn)定性和光穩(wěn)定性，而且可以解決通常溶酶體探針對細(xì)胞高毒性和光漂白嚴(yán)重等的弊端。目前公開報道的幾類尼羅藍(lán)染料包括lSBP0、2SBP0、Bonall、Bonal2等(USPatentNumber:6, 140, 500,2000 年 10 月 31 日！Development of water-soluble far-redf luorogenic dyes for enzyme sensing, Tetrahedron62 (2006) 578-585),但這些已公開的化合物不易透過細(xì)胞膜進入活細(xì)胞內(nèi)部，并且無法實現(xiàn)溶酶體定位染色。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一類具有優(yōu)良性能的溶酶體標(biāo)記性探針的合成及應(yīng)用。本發(fā)明首先公開一類尼羅藍(lán)熒光染料，具有如下結(jié)構(gòu)通式1:
權(quán)利要求
1.一類尼羅藍(lán)熒光染料，具有如下結(jié)構(gòu)通式1:1\
2.權(quán)利要求1所述的熒光染料，其特征在于，所述的R1和R2各自獨立地選自H或CV9燒基。
3.權(quán)利要求2所述的熒光染料，其特征在于，所述的R1和R2各自獨立地選自H或甲基。
4.權(quán)利要求3所述的熒光染料，其特征在于，所述的R1和R2均為甲基。
5.權(quán)利要求1所述的熒光染料，其特征在于，所述的R3和R4各自獨立地選自H、(CH2)2NHjP 2-嗎啉乙基。
6.權(quán)利要求5所述的熒光染料，其特征在于，所述的R3和R4至少有一個是H。
7.權(quán)利要求1所述的尼羅藍(lán)熒光染料的制備方法，是以乙醇為反應(yīng)溶劑、在酸存在條件下式II的化合物與式III的化合物按照摩爾比1:廣2反應(yīng)所得
8.權(quán)利要求1所述的尼羅藍(lán)熒光染料在制備溶酶體熒光特異性標(biāo)記試劑中的應(yīng)用。
全文摘要
一類尼羅藍(lán)熒光染料，其制備方法及應(yīng)用。所述的尼羅藍(lán)熒光染料具有如下結(jié)構(gòu)通式I。本發(fā)明所述的尼羅藍(lán)類熒光染料具有優(yōu)異的光化學(xué)物理性質(zhì)，例如高的摩爾消光系數(shù)、良好的光穩(wěn)定性、高的熒光量子產(chǎn)率等優(yōu)點。對細(xì)胞的內(nèi)環(huán)境不敏感，具有良好的化學(xué)穩(wěn)定性和光穩(wěn)定性，而且可以解決通常溶酶體探針對細(xì)胞高毒性和光漂白嚴(yán)重等的弊端?？蓱?yīng)用于溶酶體熒光特異性標(biāo)記。
文檔編號C09K11/06GK103044947SQ201310007599
公開日2013年4月17日 申請日期2013年1月9日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月9日
發(fā)明者樊江莉, 董惠娟, 彭孝軍, 胡明明 申請人:大連理工大學(xué)