八肽修飾的地塞米松,其制備,納米結構和應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及八膚Lys (AA-Asp-Gly-Arg) -His-Gly-Lys修飾的地塞米松，八膚中的 AA為kVal或kPhe殘基。涉及它們的制備方法，涉及它們的納米結構，涉及它們對小鼠耳 后必肌移植免疫排斥反應的抑制作用，涉及它們對二甲苯導致炎癥反應的抑制作用，進一 步涉及它們不像地塞米松郝樣會產生骨質疏松及血栓副作用。因而本發(fā)明涉及下式的八膚 修飾的地塞米松在制備免疫抑制和抗炎藥物的應用前景。本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領域。
【背景技術】
[0002] 通過器官移植替換廢舊器官，已經成為臨床外科的常規(guī)治療手段。器官移植中免 疫排斥反應是器官移植失敗的最主要因素。接受器官移植的患者，術后服用地塞米松類糖 皮質激素免疫抑制劑，是避免排斥反應和延長移植器官存活時間的重要措施之一。地塞米 松類糖皮質激素在臨床的另外的重要應用是，治療風濕性疾病，自身免疫病和嚴重感染或 炎性疾病?；颊唛L期使用地塞米松類糖皮質激素，不可避免地誘發(fā)骨質疏松和血栓性疾病。 目前，降低地塞米松類糖皮質激素副作用風險的唯一辦法，就是停藥。停藥的后果是，降低 療效。改造地塞米松類糖皮質激素的結構，降低或規(guī)避副作用，是地塞米松類糖皮質激素研 究的熱點。
[000引發(fā)明人曾經用RGD四膚修飾皮質激素，制備了結構A的化合物。它們在1. 43 μ mol/ kg劑量下，可延長移植的乳鼠必肌存活時間。它們在25. 5 μ mol/kg劑量下，可抑制小鼠炎 癥。它們在1. 43 μ mol/kg劑量下，不會誘發(fā)小鼠患骨質疏松癥。它們在1. 43 μ mol/kg劑 量下，是否不存在血栓形成風險，當時沒有定論。
[0004]
[0005] 發(fā)明人還曾經用尿毒素 Η膚修飾氨化可的松和潑尼松龍，制備了結構B的化合 物。它們分別在7. 5mmol/kg和2. Ommol/kg劑量下，可延長移植的乳鼠必肌存活時間。沒 有發(fā)現它們的抗炎活性。它們在7. 5mmol/kg和2. Ommol/kg劑量下，是否不存在骨質疏松 和血栓形成風險，當時沒有定論。
[0006]
[0007] 采用新方法改造地塞米松的結構，進一步降低用藥劑量，不僅消除骨質疏松副作 用，而且消除血栓形成副作用，是發(fā)明人一直努力發(fā)展的新技術。經過各種組合，發(fā)明人認 識到膚與醬體五元環(huán)被五個W上原子隔離是問題之一。于是發(fā)明人用己醜基代替了二醜 基，制備了下式的化合物。療效沒有明顯改進。
[0008]
[0009] 接著，發(fā)明人采取RGD四膚逆轉連接到心1^73的側鏈氨基上的策略，制備了下式的 化合物。雖然療效沒有明顯改進，但是骨質疏松和血栓形成副作用都不再發(fā)生。
[0010]
[0011] 最后，發(fā)明人采取尿毒素 Η膚His-Gly-Lys逆轉連接到上面化合物的kLys的 α-氨基上的策略，制備了本發(fā)明的化合物，達到了降低用藥劑量，消除骨質疏松副作用和 消除血栓形成副作用Η重目標。根據送些研究，發(fā)明人提出了本發(fā)明。

【發(fā)明內容】

[0012] 本發(fā)明要解決的第一個技術問題是，提出下式的八膚修飾的地塞米松結構。式中 ΑΑ為kVal和kPhe殘基。
[0013]
[0014] 本發(fā)明要解決的第二個技術問題是，提供制備八膚 Lys (AA-Asp-Gly-Arg) -His-Gly-Lys 修飾的地塞米松（式中 AA 為 kVal 或 kPhe 殘基）的 方法，該化合物包括Η大步驟：
[001引 1)在DMS0中，Ν址催化地塞米松17位居己醜基的居基與漠己酸己醋脫皿r，將17 位居己醜基轉化為己氧撰基甲氧己醜基。再在化0H溶液中將17位己氧撰基甲氧己醜基轉 化為17位駿甲氧己醜基；
[0016] 2)按照標準的液相接膚法，逐步接膚，將kBoc-Lys的側鏈氨基與駿端游離的全 保護的RGDV或RGDF的駿端偶聯，將kLys的駿端與α -氨基游離的全保護的化s-Gly-Lys 的 N 端偶聯，制備全保護的八膚 Fmoc-Lys [AA-Asp (OMe) -Gly-Arg (Tos) -Boc) ] -His-Gly-Ly s狂)-OBz 1，然后在20 %脈巧的DMF溶液中脫Fmoc制備N游離的全保護八膚Lys [AA-Asp (0 Me) -Gly-Arg 燈os) -Boc) ] -His-Gly-Lys 狂)-OBzl，式中 AA 為 kVal 或 kPhe 殘基；
[0017] 扣在HATU，冊化和NMM存在下，在無水DMF中，先將步驟1得到的地塞米 松-17-駿酸與步驟 2 得到的 Lys [AA-Asp (OMe)-Gly-Arg (Tos)-Boc)]-His-Gly-Lys( 幻-OBzl偶聯，再在H氣己酸中用H氣甲礙酸脫去全部保護基，制得權利要求1的八膚 Lys (AA-Asp-Gly-Arg) -His-Gly-Lys 修飾的地塞米松（式中 AA 為 kVal 或 kPhe 殘基）。 [001引本發(fā)明要解決的第Η個技術問題是，評價八膚 Lys (AA-Asp-Gly-Arg) -His-Gly-Lys 修飾的地塞米松（式中 ΑΑ 為 kVal 或 kPhe 殘基）延 長小鼠耳后移植必肌存活時間。
[0019] 本發(fā)明要解決的第四個技術問題是，評價八膚 Lys (AA-Asp-Gly-Arg) -His-Gly-Lys 修飾的地塞米松（式中 AA 為 kVal 或 kPhe 殘基）抑 制小鼠炎癥的活性。
[0020] 本發(fā)明要解決的第五個技術問題是，評價八膚 Lys (AA-Asp-Gly-Arg) -His-Gly-Lys 修飾的地塞米松（式中 AA 為 kVal 或 kPhe 殘基）抑 制大鼠血栓形成的活性。
[0021] 本發(fā)明要解決的第六個技術問題是，評價八膚 Lys (AA-Asp-Gly-Arg) -His-Gly-Lys 修飾的地塞米松（式中 AA 為 kVal 或 kPhe 殘基）抑 制小鼠骨質疏松的活性。
【附圖說明】
[0022] 圖 1 八膚 Lys (AA-Asp-Gly-Arg) -His-Gly-Lys 修飾的地塞米松（式中 AA 為 kVal 或レPhe殘基）的合成路線.i)DMS0，BrCH2C02C2H5，N址；ii)Me0H，化0H;iii)DCC，冊Bt，NMM; iv)4N 肥l/^tOAc，v/v)H2，Pt/C ^UHATU，H0Bt，NMM ;vU)20%脈巧/DMF ;viii)TFMSA，TFA。
[0023] 圖 2 濃度為 1. 43 X 10 6M 的八膚 Lys (AA-Asp-Gly-Arg) -His-Gly-Lys 修飾的地塞 米松（式中AA為L-Val或L-Phe殘基）在水溶液中的透射電鏡照片。
[0024] 圖3化合物對小鼠耳后必肌移植必肌存活的影響，η = 10, 口服給藥，0.1 pmol/kg/ day,連續(xù)給藥15天。
【具體實施方式】
[00巧]為了進一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實施例。送些實施例完全是例證性的，它 們僅用來對本發(fā)明進行具體描述，不應當理解為對本發(fā)明的限制。
[0026] 實施例 1 制備肥1 · Gly-Lys 狂)-OBzl
[0027] 稱取 1. 154g化.6mmol)Boc-Gly，0. 938g化.9mmol)H0Bt，干燥四氨巧喃燈HF)溶 解，冰浴下攬拌，向其中滴加 THF溶解的1. 614g(7. 8mmol)DCC，攬拌活化30分鐘后加入 3. 000g(7. 4mmol)肥1 · Lys 狂)-〇Bzl，NMM 調抑=8,室溫反應 12 小時，TLCKHzClz/MeOH =20/1)，顯示原料點消失。過濾除去DCU，濾液減壓濃縮，殘留物用100血己酸己醋溶 解，得到的己酸己醋溶液依次用20mL飽和碳酸氨鋼水溶液，20mL飽和氯化鋼水溶液，20mL 飽和硫酸氨鐘水溶液，20mL飽和氯化鋼水溶液，20mL飽和碳酸氨鋼水溶液，20mL飽和氯 化鋼水溶液各洗3次，己酸己醋層用無水硫酸鋼干燥，過濾，濾液減壓濃縮，脫除Boc，得 2. 767g(78.9% )標題化合物。
[0028] 實施例 2 制備 Boc-His 度OC) -Gly-Lys 狂）-0化1
[0029] 稱取 4. 894g(13. 8mmol)Boc-His 度 OC)，1. 960g(14. 7mmol)H0Bt，干燥四氨巧喃 燈Η巧溶解，冰浴下攬拌，向其中滴加 THF溶解的3. 408g(16. 5mmol)DCC，攬拌活化30分 鐘后加入8. 200g(16. 4臟〇^肥1 · Gly-Lys狂)-〇Bzl，NMM調抑=8,室溫反應12小時， 化C(CH2Cl2/MeOH= 20/1)，顯示原料點消失。過濾除去DCU，濾液減壓濃縮，殘留物用200mL 己酸己醋溶解，得到的己酸己醋溶液依次用50mL飽和碳酸氨鋼水溶液，50mL飽和氯化鋼 水溶液，50mL飽和硫酸氨鐘水溶液，50mL飽和氯化鋼水溶液，50mL飽和碳酸氨鋼水溶液， 50mL飽和氯化鋼水溶液各洗3次，己酸己醋層用無水硫酸鋼干燥，過濾，濾液減壓濃縮，得 10.0 g(90. 0% )標題化合物。
[0030] 實施例 3 制備肥1 · His-Gly-Lys 狂)-OBzl
[0031] 冰浴下向 10.0 g (12. 5mmol) Boc-His (Boc)-Gly-Lys 狂）-OBzl 加入 100血 4M 的氯 化氨的己酸己醋溶液，反應2小時后，化C(CH2Cl2/MeOH= 20/1)顯示原料點消失。減壓濃 縮。殘留物用無水己酸己醋溶解，減壓濃縮。該操作重復3次。殘留物用無水己離溶解，減 壓濃縮。該操作也重復3次。得7. 5g巧4. 9% )標題化合物。
[0032] 實施例 4 制備 Fmoc-Lys (Boc) -His-Gly-Lys 狂）-OBzl
[0033] 稱取 22g(47. 0mmol)Fmoc-Lys 度 oc)，6. 4g(47. 2mmol)H0Bt，干燥四氨巧喃燈 Η巧 溶解，冰浴下攬拌，向其中滴加 THF溶解的12g(58. 3mmol)DCC，攬拌活化30分鐘后加入 32g(47. 4mmol)肥 1 狂)-〇Bzl，NMM調抑=8,室溫反應 12 小時，TLC (CH2CI2/ MeOH = 10/1)顯示原料點消