3. 5。
[0056] 有益效果：
[0057] 本發(fā)明皮革軟化復合酶可實現(xiàn)脫灰后裸皮酶軟化和微生物軟化同時進行，復合酶 酶系全、活力穩(wěn)定、效力高、滲透和脫脂能力強，作用溫和、適度，可顯著提高坯革的柔軟性 能（手感）、皮重和物理機械性能，與對照組相比，不同動物的藍濕革原料皮其坯革收縮溫 度提高9-14°C ;孔率提高7. 85-10. 96% ;透氣性增加41. 0-50. lmL/cm2hr ;抗張強度提高 6. 51-7. 47N/mm2 ;撕裂強度提高5. 28-20N/mm ;伸長率提高4. 8-8. 7%。大大提高了產(chǎn)品質(zhì) 量，降低了生產(chǎn)成本，具體表現(xiàn)在：
[0058] 1.本發(fā)明霉菌培養(yǎng)物含有較強的微生物活性，在皮革軟化過程中通過發(fā)酵一方面 可產(chǎn)生高活力酸性蛋白酶，最主要的是通過發(fā)酵的動態(tài)反應可使霉菌孢子均勻、充分地分 散到皮革的表面及非膠原細胞間質(zhì)，充分分解皮革剩余的非膠原成分，根據(jù)成革的品質(zhì)要 求適度消解皮膠原纖維，有效提高軟化效果和增加得皮率。
[0059] 2.本發(fā)明植物提取物以含植物酶豐富、酶系全面的啤酒大麥芽、小麥芽、木瓜、菠 蘿、無花果為原料，采用超聲清洗、微波輔助超聲提取和高壓脈沖電場提取、超濾濃縮等低 溫提取技術，有效提高了原料利用率、植物酶活性和產(chǎn)率。其含有豐富的植物蛋白酶、淀粉 酶、半纖維素酶、酯酶、氧化還原酶等多種植物酶；還含有植物多糖和單糖、植物淀粉、植物 蛋白等營養(yǎng)物質(zhì)，不僅可為皮革軟化復合酶提供全面、豐富的植物酶，還可作為制備酸性蛋 白酶和霉菌培養(yǎng)物的發(fā)酵培養(yǎng)基成分，提高蛋白酶活力和微生物產(chǎn)酶能力；同時與非離子 表面活性劑協(xié)同作用，更加有利于酸性蛋白酶和酸性脂肪酶緩慢酶解和快速滲透，溫和、適 度軟化皮革，提高成革的豐滿性、柔軟性、彈性、粒面的光滑性和手感等性能。
[0060] 3.本發(fā)明的酸性蛋白酶以高產(chǎn)酸性蛋白酶的菌株宇佐美曲霉CCTCC Ν0:Μ 2013601為出發(fā)菌株，根據(jù)其最適生長溫度和最適產(chǎn)酶溫度，細化了孢子增殖和發(fā)酵產(chǎn)酶階 段的工藝參數(shù)，采用梯度降溫和梯度升溫的發(fā)酵工藝，同時予以追加接種，尤其是梯度降溫 和梯度升溫的發(fā)酵工藝顯著提高了出發(fā)菌株的抗應激能力，致使菌種的產(chǎn)酶能力最大限度 地顯現(xiàn)。并且本發(fā)明對培養(yǎng)基組成實施全程優(yōu)化，添加了具有抗熱應激原作用的黃芩、柴 胡，添加了具有調(diào)整和修復機體功能、增強機體的免疫功能、具有微生態(tài)調(diào)節(jié)功能的黃芪、 黨參等，進一步增強了微生物在同一發(fā)酵環(huán)境下的機體功能性、傳代適應性和共同協(xié)作性， 進而增強了微生物的代謝功能，使得本發(fā)明所產(chǎn)酸性蛋白酶活力高、耐受溫度較高、穩(wěn)定性 強、適于工業(yè)化生產(chǎn)。
[0061] 4.本發(fā)明酸性蛋白酶制備過程中發(fā)酵培養(yǎng)基植物提取物的添加，使得發(fā)酵液酸性 蛋白酶酶活力大幅度提高，由13000_14000U/mL提高至19000-22000U/mL，增幅57. 14% ; 發(fā)酵液粗酶液可耐受較高溫度，401：、451：、501：下，60分鐘酶活沒有下降。551：與601：下， 30分鐘降到原有酶活的95%，60分鐘降到90%。65°C下，30分鐘降到原有酶活的85%， 60分鐘降到80%。70°C下，30分鐘降到原有酶活的80%，60分鐘降到原有酶活的75%。 酸性蛋白酶適應反應溫度30-55°C，最適反應溫度40-50°C，適應pH值范圍2-6,最適pH值 2. 5-3. 5。更加適合皮革酶軟化工藝。
[0062] 5.本發(fā)明非離子表面活性劑主要科學復配了環(huán)保型性能優(yōu)越的非離子表面活性 劑，容易生物降解，無殘留，對人體、生物及環(huán)境無任何毒副作用；可在酶軟化過程中幫助滲 透、脫脂和除垢，促進和延長酸性蛋白酶、霉菌孢子、酸性脂肪酶與皮坯不同部位作用底物 (膠原蛋白、膠原纖維、脂肪細胞）的接觸和反應時間，充分、有效降解毛皮脂肪，幫助酸性 蛋白酶均勻擴散、滲透，提高皮革軟化的軟化性和均勻度。
[0063] 6.本發(fā)明皮革軟化復合酶抗氧化劑的科學復配，可有效防止復合酶酶分子結構氧 化而造成酶活性損失，提高酶活力穩(wěn)定性。在〇°C和40°C條件下儲存12個月，復合酶中單 酶酶活損失分別為〇. 41 %和0. 55%，比對比例分別降低18. 0 %和65. 6%，有效防止在包 裝、儲存、運輸、使用等環(huán)節(jié)因環(huán)境改變、操作方法不當而造成酶的失活，尤其可防止高溫造 成的酶失活。
[0064] 7.本發(fā)明皮革軟化復合酶中保護劑科學復配，有效減緩了復合酶制劑的回潮；同 時可增強復合酶的耐凍、耐熱性能，保持相同的酶活力，其耐熱溫度可提高20_30°C，耐冷凍 溫度可降低10-15攝氏度，有效防止了復合酶在運輸、保存和使用過程中酶活力的損失，延 長了復合酶的保質(zhì)期，達到同樣的酶活力，比同類產(chǎn)品保質(zhì)期可延長2-3年。
[0065] 8.本發(fā)明皮革軟化復合酶添加無機鹽作為激活劑，創(chuàng)造了酶催化作用的最佳條 件，充分發(fā)揮了植物酶和微生物酶的活力，提高了復合酶作用效力。
【具體實施方式】
[0066] 下面通過具體的實施方案敘述本發(fā)明。除非特別說明，本發(fā)明中所用的技術手段 均為本領域技術人員所公知的方法。另外，實施方案應理解為說明性的，而非限制本發(fā)明的 范圍，本發(fā)明的實質(zhì)和范圍僅由權利要求書所限定。對于本領域技術人員而言，在不背離本 發(fā)明實質(zhì)和范圍的前提下，對這些實施方案中的物料成分和用量進行的各種改變或改動也 屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0067] 實施例1原料制備
[0068] 1.植物提取物的制備：將大麥芽、小麥芽按質(zhì)量比6:4均勻混合，粉碎至粒度 0. 8mm，得粉碎麥芽；然后將木瓜、菠蘿、無花果分別于盛有0. 4%的碳酸氫鈉溶液的超聲波 清洗機中在功率200W、頻率30KHz條件下超聲清洗8min，浙干，室溫下破碎至粒度0. 8mm，并 按質(zhì)量比6:3:2均勻混合，加入混合物質(zhì)量4倍的粉碎麥芽得原料混合物，加入原料混合物 質(zhì)量2倍的水，用檸檬酸調(diào)節(jié)pH值為3. 5,在功率200W、頻率2000Hz條件下進行微波提取， 其中，每次微波輻照總時間70s，進行間隔式輻照：輻照10s，間隔10s，控制溫度30°C，如此 輻照10次，同時在功率250W，頻率35KHz條件下進行超聲波輔助提??；保溫2h，然后，在功 率300W、頻率2000Hz條件下進行微波提取，其中，每次微波輻照總時間105s，進行間隔式輻 照：福照15s，間隔10s，控制溫度50°C，如此輻照10次，同時在功率400W，頻率45KHz條件 下進行超聲波輔助提取，最后自然降溫至室溫，于電場強度30kV/cm，脈沖時間500 μ s，脈 沖頻率250Hz條件下進行高壓脈沖電場提取18min ;提取液過濾得第一濾液，加濾渣2倍的 水漂洗、過濾得第二濾液，將第一濾液和第二濾液按質(zhì)量比1:1. 5均勻混合，混合液超濾濃 縮、冷凍干燥、低溫粉碎即得植物提取物；
[0069] 2.酸性蛋白酶的制備
[0070] 所述酸性蛋白酶的制備方法包括如下步驟：
[0071] ⑴菌種活化
[0072] 將保存完好的宇佐美曲霉CCTCC NO :M 2013601的斜面菌種接種于斜面培養(yǎng)基， 32°C培養(yǎng)40h進行菌種活化，如此活化3次；
[0073] (2)液體種子擴大培養(yǎng)
[0074] ①一級種子培養(yǎng)：將步驟（1)活化后斜面菌種以無菌水洗下孢子，接入500毫升搖 瓶中，液體種子培養(yǎng)基裝量100毫升，32°C、lOOrpm搖床培養(yǎng)40h ;
[0075] ②二級種子培養(yǎng)：將一級種子按照10%的接種量接入500毫升二級種子搖瓶中， 培養(yǎng)條件與一級種子相同；
[0076] ③三級種子培養(yǎng)：將二級種子以8%接種量接入5000毫升三級種子搖瓶中，液體 培養(yǎng)基裝量1000毫升，32°C、lOOrpm搖床培養(yǎng)40h ;
[0077] ④種子罐培養(yǎng)：將三級種子以8%接種量接入總容積為150L的一級種子罐，種子 罐培養(yǎng)基裝量100L，控制pH值為6,培養(yǎng)溫度31°C，攪拌速度300rpm，通風量（V/V) 1: 1，培 養(yǎng)時間40h ;
[0078] 所述種子罐發(fā)酵液菌體濃度為8. 0x10s個/ml ;
[0079] ⑶發(fā)酵罐發(fā)酵
[0080] 將步驟（2)中種子罐液體種子以5%接種量接入發(fā)酵罐培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度32°C， 攪拌速度300r/m，通風量（V/V) 1:1. 5,培養(yǎng)時間llh ;然后以2°C /h降溫速率緩慢降溫至 28°C，攪拌速度500r/m，通風量（V/V) 1:2,恒溫培養(yǎng)9h ;繼續(xù)以2°C /h降溫速率緩慢降溫至 24°C，攪拌速度600r/m，通風量（V/V)l:3,培養(yǎng)時間27h，然后，將步驟（2)中種子罐液體種 子以3%接種量追加接入發(fā)酵罐，最后以2°C /h升溫速率緩慢升溫至32°C，攪拌速度300r/ m，通風量（V/V)l:l. 5,恒溫培養(yǎng)llh ;接著以2°C/h降溫速率緩慢降溫至24°C，攪拌速度 600r/m，通風量（V/V) 1:3,恒溫培養(yǎng)27h ;
[0081] (4)發(fā)酵液經(jīng)過濾、濃縮、調(diào)配、精濾、干燥得固體酸性蛋白酶。
[0082] 經(jīng)上述方法制備的酸性蛋白酶在室溫下保存12個月后酶活損失為1. 8%，發(fā)酵液 酸性蛋白酶酶活力可達22000U/mL。
[0083] 所述斜面培養(yǎng)基組