一種異喹啉生物堿類(lèi)化合物及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于民族特色藥用植物有效成分提取、分離和結(jié)構(gòu)鑒定技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè) 及一種異哇嘟生物堿類(lèi)化合物及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 豆科決明屬植物臘腸樹(shù)（Cassia巧別?/知)，是泰國(guó)的國(guó)花，原產(chǎn)于南亞南部，分布 在細(xì)甸、斯里蘭卡、印度W及中國(guó)大陸的南部、西南部等地，生長(zhǎng)于海拔1，000米的地區(qū)。在 中國(guó)俸族民間廣泛用于皮膚感染、肥胖癥、周期性發(fā)熱W及腫瘤病等的治療。而臘腸樹(shù)在俸 語(yǔ)中又叫"鍋猶良"，在云南省西雙版納州主治止血，通便，退熱。據(jù)報(bào)道，該植物的不同部位 具有抗糖尿病、抗腫瘤、抗炎、抗病毒、抗菌、抗氧化的活性。本發(fā)明從臘腸樹(shù)中分離得到一 個(gè)異哇嘟生物堿類(lèi)化合物，且該化合物具有顯著的細(xì)胞毒活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的第一目的在于提供一種異哇嘟生物堿類(lèi)化合物；第二目的在于提供所述 異哇嘟生物堿類(lèi)化合物的制備方法；第Ξ目的在于提供所述異哇嘟生物堿類(lèi)化合物在制備 抗癌藥物中的應(yīng)用。
[0004] 本發(fā)明的第一目的是運(yùn)樣實(shí)現(xiàn)的，所述的異哇嘟生物堿類(lèi)化合物是從豆科植物臘 腸樹(shù)（Cassia巧別?/知）的干燥樹(shù)皮中分離得到，其分子式為C14H15NO4,具有下述結(jié)構(gòu)：
該化合物為黃色膠狀物，命名為臘腸樹(shù)堿A，英文名為fistulalkaloidA。
[0005] 本發(fā)明的第二目的是運(yùn)樣實(shí)現(xiàn)的，所述異哇嘟生物堿類(lèi)化合物的制備方法，是W 豆科植物臘腸樹(shù)（Cassiafistula)的干燥樹(shù)皮為原料，經(jīng)浸膏提取、有機(jī)溶劑萃取、MCI脫 色、硅膠柱層析、高效液相色譜制備分離步驟，具體為： A、 浸膏提?。簩⒍箍浦参锱D腸樹(shù)（Cassia巧別y知）的樹(shù)皮粉碎到20~40目，用有機(jī)溶 劑超聲提取2~5次，每次30~60分鐘，合并提取液、過(guò)濾，減壓濃縮提取液，靜置，濾除沉淀 物，濃縮成浸膏a; B、 有機(jī)溶劑萃?。涸诮郺中加入重量比1~2倍量的水，然后用與水等體積的有機(jī)溶劑 萃取3~5次，合并有機(jī)溶劑萃取相，減壓濃縮成浸膏b; C、MCI脫色：在浸膏b加入重量比3~5倍量的甲醇水溶解，上MCI柱，用80%-90%甲醇 水洗脫，合并有機(jī)相，減壓濃縮成浸膏C; D、 硅膠柱層析：浸膏C上硅膠柱層析，裝柱硅膠為160~200目，用量為浸膏C重量6~10 倍量；W體積配比為1:0~0:1的氯仿和丙酬混合有機(jī)溶劑梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃 縮，經(jīng)TLC監(jiān)測(cè)，合并相同的部分； E、高效液相色譜分離：將W體積含量為50~90%石油酸一丙酬溶液洗脫得到的洗脫液 經(jīng)高效液相色譜分離純化，即得所述的異哇嘟生物堿類(lèi)化合物。
[0006] W上述方法制備的異哇嘟生物堿類(lèi)化合物的結(jié)構(gòu)是通過(guò)W下方法鑒定出來(lái)的： 本發(fā)明化合物為黃色膠狀物；紫外光譜(溶劑為甲醇)，JmeyQoge):215 (4.28)、 262 (3. 58)、298 (3. 13)、336 (3. 42)nm;紅外光譜(漠化鐘壓片）Vmax: 3418、3126、2953、 1657、1622、1568、1455、1372、1236、1150、1046、858cm-1;高分辨質(zhì)譜（HRESIMS)顯示本發(fā) 明化合物準(zhǔn)分子離子峰W/么284. 0889 [M+Na]+ (計(jì)算值284. 0899)，結(jié)合古和"CNMR譜 (表-1)確定分子式為C14H15NO4。其紅外光譜顯示化合物中有徑基（3418cm1)、幾基（1657 畑11)，和芳環(huán)（1622、1568、1455畑11)信號(hào)，紫外光譜在215、262、298、336皿有最大吸 收也證實(shí)化合物中存在芳環(huán)結(jié)構(gòu)?；衔锏碾姾?C-NMR譜（表-1)顯示其含有14個(gè) 碳和15個(gè)氨，包括，一個(gè)1，6,7-取代的異哇嘟母核（C-1~C-10;H-3，H-4，H-5，和 H-8)，一個(gè) 3-徑基丙酬基（-CO-CH2-CH2-OH;C-1'~C-3' ; &-2'和 &-3')和兩個(gè)甲 氧基（56. 0q和 56. 2q;3. 78S和 3. 83S)。化合物中H-3 和C-1、C-4、C-10 ; 護(hù)4和03、(：-9、(：-10巧-5和（：-4、(：-9、(：-10;^及護(hù)8和（：-1、(：-9、(：-10的歷8(：相 關(guān)（圖3)也證實(shí)了異哇嘟母核的存在。化合物的母核確定后，剩余的取代基，3-徑基丙酬 基、兩個(gè)甲氧基的位置也可W通過(guò)進(jìn)一步分析其HMBC相關(guān)譜確定。3-徑基丙酬基取代在 C-1位可由&-2'(3. 24)和C-1 (156.8)的HMBC相關(guān)確定；兩個(gè)甲氧基取代 在C-6和C-7位可由甲氧基氨（《H3. 78,3. 83)與C-6(《c152. 3)和C-7(《c154.6) 的HMBC相關(guān)確定。至此化合物的結(jié)構(gòu)得到確認(rèn)，該化合物命名為：臘腸樹(shù)堿A，英文名為 fistulalkaloidA〇
[0007] 本發(fā)明的第蘭目的是這樣實(shí)現(xiàn)的，所述的異唾嘟生物堿類(lèi)化合物在制備抗癌藥物 中的應(yīng)用。
[0008] 本發(fā)明化合物是首次從臘腸樹(shù)樹(shù)皮中分離出來(lái)的，通過(guò)核磁共振和質(zhì)譜測(cè)定方 法確定為異哇嘟生物堿類(lèi)化合物，并表征了其具體結(jié)構(gòu)。W本發(fā)明化合物為原料，對(duì)NB4、 A549、S服Y5Y、PC3和MC巧細(xì)胞株具有較好的細(xì)胞毒活性，ICs。值分別達(dá)0. 61、0. 52、1. 2、 0.83、0. 47 本發(fā)明化合物結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單活性較好，可作為抗癌藥物研發(fā)的先導(dǎo)性化合物。
【附圖說(shuō)明】
[0009] 圖1為化合物臘腸樹(shù)堿A的核磁共振碳譜（"CNMR); 圖2為化合物臘腸樹(shù)堿A的核磁共振氨譜（?NMR); 圖3化合物臘腸樹(shù)堿A的關(guān)鍵HMBC相關(guān)。
【具體實(shí)施方式】
[0010] 下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，但不W任何方式對(duì)本發(fā)明加W限制，基 于本發(fā)明教導(dǎo)所作的任何變換或改進(jìn)，均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0011] 本發(fā)明所述的異哇嘟生物堿類(lèi)化合物，是從豆科植物臘腸樹(shù)（仍ssia巧別y知）的 干燥樹(shù)皮中分離得到，其分子式為C14H15NO4，
命名為臘腸樹(shù)堿A，英文名為fistulalkaloidA。
[0012] 本發(fā)明所述異哇嘟生物堿類(lèi)化合物的制備方法，是W豆科植物臘腸樹(shù)（Cassia fistula)的干燥樹(shù)皮為原料，經(jīng)浸膏提取、有機(jī)溶劑萃取、MCI脫色、硅膠柱層析、高效液相 色譜制備分離步驟，具體為： A、 浸膏提?。簩⒍箍浦参锱D腸樹(shù)（Cassia巧別y知）的樹(shù)皮粉碎到20~40目，用有機(jī)溶 劑超聲提取2~5次，每次30~60分鐘，合并提取液、過(guò)濾，減壓濃縮提取液，靜置，濾除沉淀 物，濃縮成浸膏a; B、 有機(jī)溶劑萃?。涸诮郺中加入重量比1~2倍量的水，然后用與水等體積的有機(jī)溶劑 萃取3~5次，合并有機(jī)溶劑萃取相，減壓濃縮成浸膏b; C、MCI脫色：在浸膏b加入重量比3~5倍量的甲醇水溶解，上MCI柱，用80%-90%甲醇 水洗脫，合并有機(jī)相，減壓濃縮成浸膏C; D、 硅膠柱層析：浸膏C上硅膠柱層析，裝柱硅膠為160~200目，用量為浸膏C重量6~10 倍量；W體積配比為1:0~0:1的氯仿和丙酬混合有機(jī)溶劑梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃 縮，經(jīng)TLC監(jiān)測(cè)，合并相同的部分； E、 高效液相色譜分離：將W體積含量為50~90%石油酸一丙酬溶液洗脫得到的洗脫液 經(jīng)高效液相色譜分離純化，即得所述的異哇嘟生物堿類(lèi)化合物。
[001引所述A步驟的有機(jī)溶劑為70~100%的丙酬、90~100%的乙醇或90~100%的甲醇。
[0014] 所述B步驟的有機(jī)溶劑為二氯甲燒、氯仿、乙酸乙醋乙酸或石油酸。
[0015] 所述D步驟中浸膏C在經(jīng)硅膠柱層析前，用重量比1.5~3倍量的丙酬或者甲醇溶 解，然后用浸膏重0.8~1. 2倍的80~100目硅膠拌樣。
[0016] 所述D步驟的氯仿和丙酬混合有機(jī)溶劑的體積配比為20:1，9:1，8:2，7:3， 6:4 和 1:1。
[0017] 所述E步驟的高效液相色譜分離純化是W30~60%的甲醇為流動(dòng)相，流速10~14ml/ min，W21.2X250mm，5ym的ZorbaxPr巧HTGF反相制備柱為固定相，紫外檢測(cè)器檢測(cè) 波長(zhǎng)為254皿，每次進(jìn)樣10~100μL，收集10~40min的色譜峰，多次累加后蒸干。
[001引本發(fā)明異哇嘟生物堿類(lèi)化合物在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。
[0019] 本發(fā)明所述的決明屬植物不受地區(qū)和品種限制，均可W實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。
[0020] 實(shí)施例1 取干燥豆科植物決明屬臘腸樹(shù)（Cassia巧別?/知）的樹(shù)皮4. 4kg，粗粉碎至30目，用 70%的丙酬超聲提取4次，每次60分鐘，提取液合并；提取液過(guò)濾，減壓濃縮至體積的1/4 ; 靜置，濾除沉淀物，濃縮成120g的浸膏a;在浸膏a中加入250g水，用與水等體積的氯仿萃 取5次，合并萃取相，減壓濃縮成80g浸膏b;浸膏b用MCI裝柱，在浸膏b中加入240g的 80%甲醇水溶解，然后上柱，用90%甲醇水2至6升洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮得到62g浸 膏C;浸膏C在浸膏C中加入120g的丙酬溶解，然后加入100目硅膠62g拌樣，拌樣后，用 200目硅膠400g裝柱；用體積比分別為20:1，9:1，8:2，7:3，6:4和1:1的氯仿-丙酬混 合有機(jī)溶劑梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃縮，經(jīng)TLC監(jiān)測(cè)，合并相同的部分，得到6個(gè)部分 A-F，其中，對(duì)收集到的樣品B部分12g，再重復(fù)硅膠柱層析，用體積比9:1-1:2的石油酸-丙 酬混合有機(jī)溶劑梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃縮，經(jīng)TLC監(jiān)測(cè)，合并相同的部分，得到6個(gè) 部分B1-B6,其中第B4部分，即6:4部分約1. 2g，再W48%的甲醇為流動(dòng)相，流速15ml/ min，21.2X250mm，5μπι的ZorbaxPr巧HTGF反相制備柱為固定相，紫外檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng) 為化4nm，每次進(jìn)樣50μL收集22.6min的色譜峰，多次累加后蒸干，即得所述新化合物。 [00川 實(shí)施例2 取干燥豆科植物決明屬臘腸樹(shù)（Cassia巧別?/知）的樹(shù)皮10kg，粗粉碎至40目，用80% 的甲醇冷浸提取4次，每次3天，提取液合并；提取液過(guò)濾，減壓濃縮至體積的1/4 ;靜置，濾 除沉淀物，濃縮成300g浸膏a;在浸膏a中加入350g水，用與水等體積的乙酸乙醋萃取5 次，合并萃取相，減壓濃縮成210g浸膏b;浸膏b用MCI裝柱，在浸膏b中加入600g的80% 甲醇水溶解，然后上柱，用90%甲醇水5至15升洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮得到150g浸膏 C;浸膏C中加入300g的丙酬溶解，然后加入100目硅膠150g拌樣，用200目硅膠化g裝 柱，拌樣后上柱；用體積比分別為20:1，9:1，8:2，7:3，6:4和1:1的氯仿-丙酬混合有 機(jī)溶劑梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃縮，經(jīng)TLC監(jiān)測(cè)，合并相同的部分，得到6個(gè)部分A-F， 其中，對(duì)收集到的樣品B部分32g，再重復(fù)硅膠柱層析，用體積比9:1-1:2的石油酸-丙酬混 合有機(jī)溶劑梯度洗