iDesi即eroflNV口R0GEN(winner ofthe2004Frost&Sul1ivanExcellenceinResearchAward,https://rnaidesigner. invitrogen.com/sirna/)。為了進一步提高siRNA片斷的有效性，綜合兩個在線設(shè)計工具 的優(yōu)點來設(shè)計用于篩選的SiRNA片斷。最后，通過同源性比對（NCBIBLAST)來過濾SiRNA 序列，W提高SiRNA片斷的特異性并減少RNAi干擾的脫祀效應(yīng)。
[0024] 本發(fā)明的藥物還包括藥學(xué)上可接受的載體，運類載體包括但并不限于：稀釋劑、賦 形劑如水等、填充劑如淀粉、薦糖等；粘合劑如纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠和聚乙締化咯 燒酬；濕潤劑如甘油；崩解劑如瓊脂、碳酸巧和碳酸氨鋼；吸收促進劑季錠化合物；表面活 性劑如十六燒醇；吸附載體如高嶺±和皂粘± ;潤滑劑如滑石粉、硬脂酸巧和儀、聚乙二醇 等。
[0025] 本發(fā)明的藥物還可與其他治療帕金森的藥物聯(lián)用，多種藥物聯(lián)合使用可W大大提 到治療的成功率。
[0026] 在本發(fā)明的上下文中，"EPB41L4B基因"包括人EPB41L4B基因W及與人EPB41L4B 基因的任何功能等同的多核巧酸。EPB41L4B基因包括與目前國際公共核酸序列數(shù)據(jù)庫 GeneBank中EPB41L4B基因（NC_000009. 12)DNA序列具有70%W上同源性，且編碼相同功 能蛋白質(zhì)的DNA序列；
[0027] 優(yōu)選地，EPB41L4B基因的編碼序列包括W下任一一種DNA分子：
[0028] (1)序列表中沈Q ID NO. 1所示的DNA序列；
[0029] 似在嚴(yán)格條件下與（1)限定的DNA序列雜交且編碼相同功能蛋白質(zhì)的DNA序列；
[0030] 做與（1)或似限定的DNA序列具有70%、優(yōu)選地，90%W上同源性，且編碼相 同功能蛋白質(zhì)的DNA分子。
[0031] 在本發(fā)明的具體實施方案中，所述EPB41L4B基因的編碼序列是SEQIDNO. 1所示 的DM序列。 W32] 在本發(fā)明的上下文中，EPB41L4B基因表達產(chǎn)物包括人EPB41L4B蛋白W及人EPB41L4B蛋白的部分膚。所述EPB41L4B蛋白的部分膚含有與帕金森病相關(guān)的功能域。 [0033] "EPB41L4B蛋白"包括人EPB41L4B蛋白W及人EPB41L4B蛋白的任何功能等同物。 所述功能等同物包括人EPB41L4B蛋白保守性變異蛋白質(zhì)、或其活性片段，或其活性衍生 物，等位變異體、天然突變體、誘導(dǎo)突變體、在高或低的嚴(yán)謹(jǐn)條件下能與人EPB41L4B的DNA 雜義的DM所編碼的蛋白質(zhì)。
[0034] 優(yōu)選地，EPB41L4B蛋白是具有下列氨基酸序列的蛋白質(zhì)：
[0035] (1)由序列表中SEQ ID NO. 2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；
[0036] (2)將SEQ ID NO. 2所示的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或 缺失和/或添加且與SEQ ID NO. 2所示的氨基酸序列具有相同功能的由SEQ ID NO. 2所示 的氨基酸序列衍生的蛋白質(zhì)。取代、缺失或者添加的氨基酸的個數(shù)通常為1-50個，較佳地 1-30個，更佳地1-20個，最佳地1-10個。 陽037] (3)與SEQ ID NO. 2所示的氨基酸序列具有至少80%同源性（又稱為序列同一 性），更優(yōu)選地，與SEQ ID NO. 2所示的氨基酸序列至少約90%至95%的同源性，常為96%、97%、98%、99%同源性的氨基酸序列構(gòu)成的多膚。
[0038] 在本發(fā)明的具體實施方案中，所述EPB41L4B蛋白是具有SEQ ID NO. 2所示的氨基 酸序列的蛋白質(zhì)。
[0039] 通常，已知的是，一個蛋白質(zhì)中一個或多個氨基酸的修飾不會影響蛋白質(zhì)的功能。 本領(lǐng)域技術(shù)人員會認(rèn)可改變單個氨基酸或小百分比的氨基酸或?qū)Π被嵝蛄械膫€別添加、 缺失、插入、替換是保守修飾，其中氨基酸的改變產(chǎn)生具有相似功能的蛋白質(zhì)。提供功能相 似的氨基酸的保守替換表是本領(lǐng)域公知的。
[0040] 通過添加一個氨基酸或多個氨基酸殘基修飾的蛋白質(zhì)的例子是EPB41L4B蛋白的 融合蛋白。對于與EPB41L4B蛋白融合的膚或者蛋白質(zhì)沒有限制，只要所得的融合蛋白保留 EPB41L4B蛋白的生物學(xué)活性即可。
[0041] 本發(fā)明的EPB41L4B蛋白也包括對SEQ ID NO. 2所示的氨基酸序列的非保守修飾， 只要經(jīng)過修飾的蛋白質(zhì)仍然能夠保留EPB41L4B蛋白的生物學(xué)活性即可。在此類修飾蛋白 質(zhì)中突變的氨基酸數(shù)目通常是10個或者更少，例如6個或者更少，例如3個或者更少。
[0042] 在本發(fā)明的上下文中，"診斷帕金森病"既包括判斷受試者是否已經(jīng)患有帕金森 病、也包括判斷受試者是否存在患有帕金森病的風(fēng)險。
[0043] 在本發(fā)明的上下文中治療帕金森病"從疾病的狀態(tài)變化來分，可W包括疾病的 緩解、疾病的完全治愈；從藥物發(fā)揮的作用不同，可W包括提高多己胺效應(yīng)、促進多己胺的 合成和釋放、阻斷多己胺的降解。 W44] 本發(fā)明的優(yōu)點和有益效果：
[0045] 本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)了EPB41L4B基因的表達水平與帕金森病相關(guān)，通過檢測受試者 血液中EPB41L4B的表達情況，可W判斷受試者是否患有帕金森病、或者判斷受試者是否存 在患有帕金森病的風(fēng)險，從而指導(dǎo)臨床醫(yī)師給受試者提供預(yù)防方案或者治療方案。
[0046] 本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了一種新的分子標(biāo)記物EPB41L4B基因，相比傳統(tǒng)的檢測手段，基因診 斷更及時、更特異、更靈敏，能夠?qū)崿F(xiàn)帕金森病的早期診斷，從而降低帕金森病的死亡率。
【附圖說明】
[0047] 圖1顯示利用QPCR檢測EPB41L4B基因在帕金森病患者血液中的表達情況； W4引圖2顯示利用QPCR檢測siRNA對EPB41L4B基因表達的影響； W例圖3顯示利用MTT檢測EPB41L4B基因表達對帕金森神經(jīng)細(xì)胞生長的影響。
[0050] 具體的實施方式
[0051] 下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明作進一步詳細(xì)的說明。W下實施例僅用于說明本 發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條 件，例如Sambrook等人，分子克?。簩嶒炇沂謨裕∟ew化rk:Cold Spring HarborL油oratory Press, 1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。
[0052] 實施例1篩選與帕金森病相關(guān)的基因標(biāo)志物 陽〇5引1. 1樣品收集
[0054]各收集10例正常人血液和帕金森病患者血液樣本，上述所有標(biāo)本的取得均通過 倫理委員會的同意。 陽055] 1. 2RNA樣品的制備及質(zhì)量分析
[0056] 1. 2. 1RNA樣品的制備
[0057] 使用Promega公司的RNA提取試劑盒提取總RNA。具體步驟如下：
[0058] 1)取1ml收集在肝素或邸TA處理過的試管中的全血，放進無菌離屯、管中；
[0059]。收集血細(xì)胞：300化pm(400g)離屯、5min，小屯、地從樣品頂部吸走上清；
[0060] 3)加1ml血細(xì)胞裂解液，小屯、吸放4-5次，重懸沉淀物；
[0061] 4)3000巧m離屯、5min;
[00創(chuàng) W重復(fù)步驟如、4)兩次（共立次）； 陽06引 6)避開細(xì)胞沉淀物，小屯、吸走幾乎所有上清，只保留100μ1上清液；確認(rèn)一下BME 已經(jīng)加到RNA裂解液中，然后加175μ1RNA裂解液到細(xì)胞中，吸放重懸并裂解細(xì)胞； W64] 7)加350μ1RNA稀釋液，顛倒混合3-4次； 陽0化]8)置于70°C水浴中3min ;
[0066] 9)室溫下13000g離屯、lOmin;
[0067] 10)將清亮裂解物轉(zhuǎn)移到一支無菌離屯、管中； W側(cè)11)向澄清裂解液中加入200μ1 95%乙醇，用移液槍吸放3-4次W混合；將此混 合物轉(zhuǎn)移到離屯、柱裝配體中，13000g離屯、Imin;
[0069] 12)從離屯、柱裝配體上拿下離